專利名稱：冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物活性多維強(qiáng)化劑。具體地說是以冬蟲夏草菌液態(tài)發(fā)酵制成的多維強(qiáng)化劑的制備方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采用以下解決方案藥用菌冬蟲夏草為名貴中藥材，其保健功能和藥物治療作用早被中醫(yī)開發(fā)利用，現(xiàn)代科學(xué)的研究證實(shí)冬蟲夏草確有十分廣泛的藥理活性，特別是冬蟲夏草具有免疫調(diào)節(jié)作用，即通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，起到抑制腫瘤、抗病毒感染、保護(hù)呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)等重要作用。由于遺傳、發(fā)育、生理等多種因素，在兒童、婦女、老人人群中經(jīng)常發(fā)生免疫力低下、內(nèi)分泌系統(tǒng)機(jī)能衰退之類的疾病。本發(fā)明選用冬蟲夏草菌為生物活性強(qiáng)化劑的載體，使產(chǎn)品具備了調(diào)節(jié)免疫力的重要功能。
現(xiàn)有強(qiáng)化劑缺陷的解決方案在于采用微生物轉(zhuǎn)化的方法，將化學(xué)物質(zhì)吸收轉(zhuǎn)化為生物大分子螯合態(tài)的生物活性強(qiáng)化劑，使其具有生物同源性、平衡性，且冬蟲夏草菌富含多種維生素如維生素D，有促進(jìn)吸收作用，有利于提高其生物利用度。
同時(shí)，由于免疫系統(tǒng)功能差會(huì)影響消化系統(tǒng)對(duì)營養(yǎng)素的消化吸收，通過研究證明本發(fā)明具有增強(qiáng)免疫力，調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)的功能。
冬蟲夏草菌具有富集、轉(zhuǎn)化礦質(zhì)元素的能力，能將鐵、鋅、鈣、硒、鉻等化學(xué)元素轉(zhuǎn)化為生物活性強(qiáng)化劑。
本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)冬蟲夏草菌對(duì)礦物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)化a、配制如下培養(yǎng)基蛋白胨 1.5g葡萄糖 4.5gKH2PO40.1gMgSO40.02gVB10.001g以FeSO4添加鐵 0.01g以ZnSO4添加鋅 0.008g以CaCl2添加鈣 0.4g以NaSeO3添加硒 0.00092g以CrCl3添加鉻 0.00002g添加水溶化后定容至100ml；以每瓶100ml分裝300ml三角瓶，120℃滅菌30分鐘后冷卻至30℃以下；b、向上述培養(yǎng)基中接種2％體積的液體冬蟲夏草菌種，在26-30℃條件下?lián)u瓶培養(yǎng)80小時(shí)，取出發(fā)酵液，以10000g高速離心30分鐘，分別收集上清夜和菌體沉淀；c、菌體沉淀加1ml濃硝酸和10ml水，加熱硝化，定容至100ml，以原子吸收法測定鐵、鋅、鈣、硒、鉻的含量；將上清液超濾(超濾膜截留2000以上大分子)，用同樣方法測定濾液的鈣含量；d、結(jié)果冬蟲夏草菌體中上述五種礦質(zhì)元素的含量占添加量的百分比分別為鐵99.9％；鋅99.6％；硒99.3％；鉻99.2％；鈣78.2％。
超濾液中鈣元素的含量為添加量的6.03％。
上述結(jié)果說明對(duì)于低添加量的鐵、鋅、硒、鉻等離子，冬蟲夏草菌體幾乎可以全部吸收至細(xì)胞內(nèi)，根據(jù)生物學(xué)知識(shí)，它們是可以與維生素一起構(gòu)成多種輔酸和激素的重要成分的；對(duì)于添加量較高的鈣離子，有約80％吸收至細(xì)胞內(nèi)，其余主要與胞外生物大分子物質(zhì)螯合，只有百分之幾為游離鈣離子。根據(jù)微生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)知識(shí)，真核細(xì)胞膜上有Ca-泵，這種跨膜蛋白主要存在于細(xì)胞質(zhì)膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，它將鈣離子泵入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中有4種以上鈣結(jié)合蛋白，每個(gè)鈣結(jié)合蛋白分子可與30個(gè)左右鈣離子螯合。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的這些鈣結(jié)合蛋白濃度可達(dá)30-100mg/ml，能結(jié)合、貯存大量鈣離子。細(xì)胞外的發(fā)酵液中含有大量多糖、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)等生物大分子，它們同樣可以與鈣離子螯合。
根據(jù)上述構(gòu)思及實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的采用如下技術(shù)方案使用的微生物生產(chǎn)藥用成分的子囊菌綱麥角菌科蟲草屬(Cordyceps(Fr.)Link)的各種菌種，它們既不是約束性的也不是排它性的。
具體的菌株可以是在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號(hào)為CCTCC AF99009的冬蟲夏草(Cordyceps Sinensis)菌株。上述菌種的有關(guān)性質(zhì)可以參閱中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)菌種目錄，本發(fā)明不再贅述。任何人可直接向該保藏中心購得該菌種。
生物活性多維強(qiáng)化劑是由冬蟲夏草菌經(jīng)液態(tài)發(fā)酵、濃縮干燥制備而成，其步驟是a、培養(yǎng)基制配以碳源、氮源、礦質(zhì)元素制備液體培養(yǎng)基，每100ml培養(yǎng)基中添加下列成分(重量份)鐵0.001～0.1鋅0.001～0.1鈣0.1～1.0硒0.000001～0.0001鉻0.000001～0.0001；b、將配制好的培養(yǎng)基滅菌，120℃滅菌30分鐘后冷卻至30℃以下；c、在培養(yǎng)基中加入2～10％的冬蟲夏草菌液體菌種；d、將上述培養(yǎng)液在20℃～30℃下通氣攪拌培養(yǎng)50～100小時(shí)，獲得液態(tài)產(chǎn)品；e、將液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品經(jīng)濃縮、干燥，破壁粉碎成粉末狀產(chǎn)品。
所述培養(yǎng)基中的碳源包含2～8％的糖類如葡萄糖、蔗糖、糖蜜，或是淀粉類如谷類淀粉、玉米粉、紅薯粉的一種或六種以下組成；氮源包括1～4％酵母粉、黃豆粉、花生餅粉、玉米漿的一種或四種以下組成；
碳、氮比為10∶1～40∶1；礦質(zhì)元素為鉀、鎂、磷、鈉、硫等物質(zhì)適量；所述的生物活性多維強(qiáng)化劑，可以以飲料、口服液、咀嚼片、糖果、膠囊或其它劑型用于制備治療和預(yù)防兒童免疫力低下，兒童缺鈣、缺鐵性貧血；婦女體弱、生理性貧血；老人免疫力衰退、骨質(zhì)疏松等各種病癥的藥品或保健食品中的應(yīng)用。
每100g強(qiáng)化劑產(chǎn)品中含有下列組分(重量份)菌體蛋白質(zhì)25.0～45.0總糖(包括菌體多糖)2.0～10.0碳水化合物20.0～40.0總脂 2.0～10.0礦物質(zhì)15.0～25.0水分 4.0～10.0鐵0.1～1.0鋅0.1～1.0鈣2.0～20.0硒0.0005～0.005鉻0.0005～0.005維生素A 0.001～0.04維生素B1 0.02～0.1維生素B2 0.02～0.1維生素B5 0.2～1.5維生素B6 0.01～0.2維生素B12 0.0005～0.001維生素C 1.0～5.0維生素D 0.0005～0.005維生素E 0.00001～0.0001葉酸 0.0001～0.005本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果生產(chǎn)工藝簡單，采用微生物轉(zhuǎn)化的方法，將人體不易吸收利用的化學(xué)元素吸收轉(zhuǎn)化為生物大分子整合態(tài)的生物活性強(qiáng)化劑，使其具有生物同源性，平衡性，有利于提高產(chǎn)品的生物利用度。同時(shí)利用冬蟲夏草菌能生物合成多種維生素的特性，使產(chǎn)品兼具補(bǔ)充多種維生素，促進(jìn)營養(yǎng)吸收的功能。再加上冬蟲夏草特有的免疫調(diào)節(jié)藥理活性，使產(chǎn)品具備了多重功效，可廣泛用于制備治療和預(yù)防兒童免疫力低下，兒童缺鈣、缺鐵性貧血；婦女體弱、生理性貧血；老年人免疫力衰退、內(nèi)分泌失調(diào)引起的骨質(zhì)疏松等各種病癥的藥品或保健食品中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1采用的菌種CCTCC AF99009a、配制液體培養(yǎng)基蔗糖 4.0g黃豆粉2.0g玉米粉4.0gKH2PO40.15gMgSO40.02g豆油 0.1g以FeSO4添加鐵0.010g以ZnSO4添加鋅0.008g以CaCl2添加鈣0.400g以NaSeO3添加硒 0.00002g以CrCl3添加鉻0.00002g添加水溶化后定容至100ml；120℃滅菌30分鐘后冷卻至30℃；b、向上述培養(yǎng)基中加入2體積％的液體菌種；c、將上述物質(zhì)在28℃條件下通氣攪拌培養(yǎng)80小時(shí)，獲得冬蟲夏草發(fā)酵液；d、用薄膜蒸發(fā)器將上述發(fā)酵液濃縮至原體積的20％左右，將濃縮發(fā)酵液用組織破碎機(jī)破碎菌絲，再以真空噴霧干燥方法干燥，最后用超微粉碎機(jī)破壁粉碎成粉末，獲得冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑。
測定產(chǎn)品中各物質(zhì)含量，每100g強(qiáng)化劑中含有下列組分(重量份組成)表1.一般分析成分 ±％蛋白質(zhì)32 15總糖(包括菌體多糖)8 15總脂 4 10碳水化合物30 10礦物質(zhì)20 20水分 6.0010表2.礦物質(zhì)成分 (±25％)
鐵 0.5鋅 0.4鈣 20.
硒 0.001鉻 0.001表3.維生素成分 (±25％)維生素A 0.02維生素B1 0.075維生素B2 0.08維生素B5 1.0維生素B6 0.1維生素B120.0008維生素C 4.0維生素D 0.002維生素E 0.00008葉酸 0.00權(quán)利要求
1.一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，包括下列步驟a、培養(yǎng)基制配以碳源、氮源、礦質(zhì)元素制備液體培養(yǎng)基，每100ml培養(yǎng)基中添加下列重量份成分鐵0.001～0.1鋅0.001～0.1鈣0.1～1.0硒0.000001～0.0001鉻0.000001～0.0001；b、將配制好的培養(yǎng)基滅菌，120℃滅菌30分鐘后冷卻至30℃以下；c、在培養(yǎng)基中加入2～10％的冬蟲夏草菌液體菌種；d、將上述培養(yǎng)液在20℃～30℃下通氣攪拌培養(yǎng)50～100小時(shí)，獲得液態(tài)產(chǎn)品；e、將液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品經(jīng)濃縮、干燥，破壁粉碎成粉末狀產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，其特征在于培養(yǎng)基中的碳源包含2～8％的糖類如葡萄糖、蔗糖、糖蜜，或是淀粉類如谷類淀粉、玉米粉、紅薯粉的一種或六種以下組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，其特征在于氮源包括1～4％酵母粉、黃豆粉、花生餅粉、玉米漿的一種或四種以下組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，其特征在于碳、氮比為10∶1～40∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，其特征在于礦質(zhì)元素為鉀、鎂、磷、鈉、硫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種冬蟲夏草生物活性多維強(qiáng)化劑的制備方法，以冬蟲夏草菌為生物載體，首先是配制培養(yǎng)基，以碳源、氮源、砂質(zhì)元素制備培養(yǎng)基；其次是將配制好的培養(yǎng)基滅菌；第三是在培養(yǎng)基中加入冬蟲夏草液體菌種；第四是在一定溫度條件下通氣培養(yǎng)一定時(shí)間，獲得液態(tài)產(chǎn)品；第五是將液態(tài)產(chǎn)品濃縮、干燥、破壁粉碎成粉末狀產(chǎn)品。本發(fā)明工藝簡單，操作方便，可廣泛用于兒童免疫力低下，兒童缺鈣、缺鐵性貧血；婦女體弱、生理性貧血；老年人免疫機(jī)能衰退、內(nèi)分泌失調(diào)引起的骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1443569SQ0310629
公開日2003年9月24日 申請(qǐng)日期2003年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月8日
發(fā)明者胡征 申請(qǐng)人:胡征