專利名稱：一種治療心血管病癥的香丹滴注液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療心腦血管病的含中藥丹參、降香的有效部位的藥物組合物，具體為制備方法改進(jìn)的含丹參、降香有效部位的滴注液即香丹滴注液。
背景技術(shù)：
丹參是具有活血化瘀功效的傳統(tǒng)中藥，藥理研究表明水溶性酚酸類成份為丹參活血化瘀的有效成分。降香具有抗凝、抗血栓形成的作用?，F(xiàn)市售香丹注射液(小針劑)及復(fù)方丹參注射液(大輸液)中含水溶性酚酸類成分和降香水溶性成分，其藥效為擴(kuò)張血管，增進(jìn)冠狀動(dòng)脈血流量，用于防治心絞痛，亦可用于心肌梗塞等心血管疾病。
衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中，香丹注射液(WS3-B-3289-98)(小針劑)采用濃度為75％、85％二步醇沉方法。對(duì)于水溶性酚酸類成分，以水為溶媒提取較好，不過(guò)，水提取液中雜質(zhì)非常多。按常法用兩次醇沉法去除雜質(zhì)，但是用此法有效成分損失較多，導(dǎo)致有效成分的含量低于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
大輸液對(duì)制劑質(zhì)量尤其是有效成份含量、穩(wěn)定性、澄清度、雜質(zhì)的要求與小針劑相比更為嚴(yán)格，且一旦產(chǎn)生不良反應(yīng)，其后果更為嚴(yán)重。然而，目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的復(fù)方丹參注射液(大輸液)，工藝上沿用了小針劑兩步醇沉的方法。對(duì)市售香丹注射液(小針劑)與復(fù)方丹參注射液(大輸液)進(jìn)行檢測(cè)，其有效成分即水溶性酚酸類成分丹參酚和原兒茶醛的百分比僅為11-13％，只占國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于二類中藥規(guī)定值的50％，而且穩(wěn)定性差，雜質(zhì)量偏高，并由此多次造成臨床不良反應(yīng)，如過(guò)敏反應(yīng)(“復(fù)方丹參注射液致過(guò)敏性休克1例”，鐘松才，《中國(guó)中藥雜志》1994；19(10)631)。
為了達(dá)到大輸液所要求的穩(wěn)定性、澄清度以及雜質(zhì)控制，有人在兩次醇沉?xí)r，采用高濃度乙醇，如兩次使用95％乙醇沉淀雜質(zhì)(參見(jiàn)CN1190006A，說(shuō)明書(shū)第3頁(yè))。但是，這會(huì)使有效成份的含量更低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，對(duì)丹參、降香復(fù)方注射液的制備工藝進(jìn)行改進(jìn)，尤其是對(duì)丹參中酚酸類有效成份的提取工藝進(jìn)行改進(jìn)，使其有效成分的百分比達(dá)到國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于二類中藥的規(guī)定值，增加穩(wěn)定性，降低雜質(zhì)，從而盡可能地減少臨床不良反應(yīng)，以達(dá)到理想的治療效果。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)解決方案一種治心血管病癥的香丹滴注液，按體積比，基本上由丹參的酚酸類提取物精制液0.2～4.0％、降香的蒸餾液0.2～4.0％，滴注液常規(guī)輔料92.0～99.2％滴注液常規(guī)輔料組成，其特征在于用如下方法制備取丹參水煎煮，濃縮水液至相對(duì)密度為1.04-1.06，冷卻至40-50℃時(shí)，加5％明膠溶液至不產(chǎn)生沉淀為止，上清液濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.17時(shí)，加乙醇使含醇量達(dá)50-60％，于0-10℃條件下靜置后過(guò)濾，濾液回收乙醇后的濃縮液，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥1～3g，過(guò)濾，調(diào)節(jié)濾液pH至1-2，用等量的醋酸乙酯萃取4～7次，合并醋酸乙醋萃取液，回收醋酸乙醋，得丹參酚酸提取物浸膏，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參酚酸提取物精制液，1ml相當(dāng)于含丹參生藥2.5g；蒸餾降香，蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，低溫靜置后除去油層，水層重蒸餾，收集重蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g；取丹參酚酸類提取物精制液、降香重蒸餾液，與滴注液常規(guī)輔料混合，按常規(guī)調(diào)節(jié)等滲，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0。
所述的香丹滴注液，其特征在于滴注液輔料為等滲劑、抗氧劑與水。
所述的香丹滴注液，其特征在于其中等滲劑可以為氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或/和大分子量的右旋糖酐、中分子量的右旋糖酐或小分子量的右旋糖酐?？寡鮿┛梢詾閬喠蛩徕c、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉或/和硫代硫酸鈉。
本發(fā)明香丹滴注液較詳細(xì)的制備方法如下丹參酚酸類有效成份精制液的制備取丹參藥材，去除雜質(zhì)后，加8倍量的純化水浸泡1小時(shí)后，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第一次煎液。
藥渣再用6倍量的純化水煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第二次煎液，藥渣再用5倍量的純化水煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第三次煎液，去除藥渣，然后合并三次煎煮液，加熱濃縮至相對(duì)密度為1.04-1.06(70-80℃熱測(cè))。
將上述丹參濃縮液冷卻至約40-50℃，加5％明膠溶液至不產(chǎn)生沉淀為止，調(diào)整藥液濃度至相對(duì)密度為1.15-1.17(70-80℃熱測(cè))，加乙醇使沉淀，使含醇量達(dá)50-60％，于0-10℃條件下放置12-36小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，濾液減壓回收乙醇，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，過(guò)濾，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1-2，用等量的醋酸乙酯萃取5次，合并醋酸乙醋萃取液，減壓回收醋酸乙醋，得丹參提取液浸膏，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下放置48-72小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下放置48-72小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參酚酸類有效成份精制液。
降香提取液的制備取降香，刨成薄片，用純化水10倍量，蒸餾，收集蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，冷藏12-36小時(shí)后，除去油層，水層重蒸餾，收集蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g，制得降香提取液。
制備等滲濃配液取等滲劑加3倍量注射用水，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，加入活性炭，煮沸15分鐘，經(jīng)砂棒過(guò)濾制得濃配液。
制備香丹滴注液取上述丹參精制液、降香提取液與等滲劑的濃配液按處方配比量進(jìn)行合并，加8倍量注射用水，加活性炭煮沸15分鐘，經(jīng)砂棒過(guò)濾，濾液以氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，加注射用水至全量，測(cè)試中間體含量，經(jīng)0.45μm微孔濾膜精濾后，用超濾器超濾，灌裝于洗凈的玻璃輸液瓶或輸液袋中，經(jīng)滅菌、燈檢、質(zhì)檢后得香丹滴注液成品。
本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在通過(guò)對(duì)香丹滴注液制備工藝的改進(jìn)，尤其是丹參中酚酸類有效成份提取分離工藝的改進(jìn)，經(jīng)明膠除鞣、低濃度醇沉、醋酸乙酯萃取及兩次加水沉淀雜質(zhì)，既獲得符合標(biāo)準(zhǔn)含量要求的丹參酚酸提取物，又降低了雜質(zhì)，保證了制劑的穩(wěn)定性以及大輸液所要求的澄明度。
本發(fā)明研究了影響丹參萃取的各因素，試驗(yàn)結(jié)果表明以藥液pH偏酸性、藥液濃度適中(每1ml相當(dāng)于含生藥1-3g)、萃取5-7次、每次醋酸乙醋用量為1倍最佳。可以使丹參有效成分提取利用率達(dá)到90-95％。由于本發(fā)明采用低醇沉濃度，與傳統(tǒng)工藝兩次醇沉法(75％、85％)比較，丹參素鈉與原兒茶醛有效成分的含量可提高60％，有效成分占總固體物的比例由原來(lái)的13％提高至37％。測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3、表4。作為對(duì)比的市售香丹注射液(小針劑)有效成分百分比檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的復(fù)方丹參注射液(大輸液)，工藝上沿用了小針劑兩步醇沉的方法，其有效成分百分比的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。
表1 香丹注射液(小針劑)有效成分百分比批號(hào)上海小針 廣東小針001208 001268 001273 0011056 0012324 0012531丹參素鈉含量(mg/g) 3.1486 3.2022 3.1517 2.9694 2.8859 2.8886原兒茶醛含量(mg/g) 0.4105 0.4108 0.4226 0.3726 0.3771 0.3735總固體(mg/g)32.2090 32.2214 32.5528 27.1046 27.0083 27.1123有效成分百分比(％) 11.0511.2111.9812.3312.0812.03表2 市售復(fù)方丹參注射液(大輸液)有效成分百分比批號(hào) 貴州輸液 貴州輸液 貴州輸液00111512 00112810 00112912丹參素鈉含量(mg/g)4.3283 4.5741 4.2918原兒茶醛含量(mg/g)0.7214 0.7321 0.7210總固體(mg/g) 46.3247.6546.21實(shí)際總固體(mg/g) 38.4940.0239.17有效成分百分比(％)13.1213.2612.80從香丹注射液(小針劑)與復(fù)方丹參注射液(大輸液)的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，其有效成分百分比約為11-13％，只占國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于二類中藥規(guī)定值的50％，雜質(zhì)量偏高，易導(dǎo)致臨床不良反應(yīng)。
表3 萃取法與二次醇沉法制備丹參精制液有效成分百分比樣品 丹參素鈉含量 原兒茶醛含量 總固體量有效成分百分比(mg/g) (mg/g)(mg/g)萃取法樣品 8.32451.5859 26.612237.24二次醇沉法樣品 5.26821.6666 54.051412.83由上述丹參精制液制得香丹滴注液測(cè)試有效成分百分比，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 香丹滴注液有效成分百分比樣品 安徽天洋安徽天洋 安徽天洋2000061720000619 20000713丹參素鈉含量(mg/g) 8.0807 8.1131 8.0918原兒茶醛含量(mg/g) 0.9007 0.9213 0.9056總固體(mg/ml) 30.64 30.3730.59實(shí)際總固體(mg/g)24.29 24.2024.27有效成分百分比(％) 36.98 37.3337.07測(cè)試結(jié)果表明，采用一次醇沉后醋酸乙酯萃取方法制備的香丹滴注液，有效成分占總固體量的比例提高到2.8-3.0，達(dá)到中藥二類要求。
本發(fā)明涉及對(duì)香丹滴注液制備工藝的改進(jìn)。在丹參酚酸類提取物精制時(shí)，用一次低濃度醇沉后醋酸乙醋提取提取法，代替?zhèn)鹘y(tǒng)工藝兩次醇沉除雜質(zhì)方法，尤其是革除了用高濃度乙醇沉淀雜質(zhì)的步驟，即有效去除了雜質(zhì)，又提高了有效成份的含量。從而使采用本發(fā)明方法制備的香丹滴注液，不但穩(wěn)定性增加，雜質(zhì)降低，而且其有效成分的百分比達(dá)到國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于二類中藥的規(guī)定值，如下藥理試驗(yàn)證明該制備方法制備的產(chǎn)品具有理想的治療效果。
用本發(fā)明方法制得的香丹滴注液的檢驗(yàn)報(bào)告如下品名香丹滴注液制備單位安徽天洋藥業(yè)有限公司檢測(cè)單位安徽省藥品檢驗(yàn)所檢測(cè)項(xiàng)目與結(jié)果性狀本品為黃棕色的澄明液體鑒別呈正反應(yīng)pH5.0-7.0其他符合注射劑項(xiàng)下要求無(wú)菌合格熱原合格丹參素鈉與原兒茶醛含量(HPLC法)合格等滲劑含量為標(biāo)示量％ 95-105％對(duì)上述三個(gè)批次的香丹滴注液進(jìn)行一年半的穩(wěn)定性考察，試驗(yàn)結(jié)果表明，在香丹滴注液產(chǎn)品有效期內(nèi)，色澤達(dá)到規(guī)定要求，澄明度合格。
根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于二類中藥注射液要求，對(duì)工藝改進(jìn)后香丹滴注液進(jìn)行了刺激試驗(yàn)、過(guò)敏試驗(yàn)及溶血試驗(yàn)報(bào)告如下樣品香丹滴注液。
檢測(cè)單位國(guó)家沈陽(yáng)新藥安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。
試驗(yàn)一香丹滴注液靜脈注射血管刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)動(dòng)物試驗(yàn)觀察香丹滴注液對(duì)家兔血管的刺激性，為臨床應(yīng)用提供安全性評(píng)價(jià)依據(jù)。
試驗(yàn)材料受試藥物香丹滴注液，規(guī)格40g生藥(丹參20克，降香20克)/250mL。由安徽天洋藥業(yè)有限公司提供。
受試動(dòng)物白色家兔，雌雄不限(雌未孕)6只，體重2.0-2.5kg，外耳殼正常。沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。合格證號(hào)遼實(shí)合字033號(hào)。
試驗(yàn)方法白色家兔，雌雄不限(雌未孕)6只，體重2.0-2.5kg，均分成2組，每組3只。將家兔固定于固定箱內(nèi)。給藥組將香丹滴注液用一次性來(lái)菌輸液裝置經(jīng)左側(cè)耳緣靜脈6ml/kg、1mL/min靜注給藥，對(duì)照組經(jīng)左側(cè)耳緣靜脈以6ml/kg、1mL/min靜注給5％葡萄糖注射液，連續(xù)給藥三天。給藥期間每日觀察血管注射液部位及整個(gè)外耳殼無(wú)變化。在末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，取給藥處血管及周?chē)M織，以10％甲醛液固定，切片染色，切片部位為進(jìn)針部位。
試驗(yàn)結(jié)果肉眼觀察結(jié)果給藥組未見(jiàn)血管充血、出血、組織水腫、壞死。5％葡萄糖注射液對(duì)照組也未見(jiàn)異常病理改變。
病理組織檢查結(jié)果給藥組、5％葡萄糖注射液對(duì)照組動(dòng)物耳緣靜脈血管內(nèi)無(wú)血栓形成，血管內(nèi)皮細(xì)胞及周?chē)M織未見(jiàn)水腫、炎性浸潤(rùn)或壞死等異常改變。表明香丹滴注液對(duì)家兔靜脈血管無(wú)刺激作用。
結(jié)論香丹滴注液對(duì)家兔靜脈血管無(wú)明顯刺激作用。
試驗(yàn)二香丹滴注液被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)。
試驗(yàn)?zāi)康目疾煜愕さ巫⒁菏欠窬哂蠭gE樣抗原作用，為臨床安全用藥提供參考。
試驗(yàn)材料受試藥物香丹滴注液，規(guī)格40g生藥(丹參20克，降香20克)/250mL，批號(hào)20000619。由安徽天洋藥業(yè)有限公司提供。
卵蛋白(AlbuminEgg)北京邦定泰克生物技術(shù)公司，SigmaA 5253。
吸附百日咳、白喉、破傷風(fēng)類毒素混合制劑衛(wèi)生部長(zhǎng)春生物制品研究所，批號(hào)991008-1-3；伊文思藍(lán)(0589-60)Koch-Light進(jìn)口分裝。
試驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，150-200g體重，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)033。
試驗(yàn)方法1、致敏血清的制備Wistar大鼠(雌雄各半)12只，體重150-200g，隨機(jī)分成卵蛋白組和香丹滴注液組。卵蛋白組大鼠于后腿兩側(cè)肌注1％孵蛋白生理鹽水0.05ml，香丹滴注液組肌注香丹滴注液0.1ml/只大鼠(0.2g/只)，同時(shí)分別腹腔注射百白破疫苗(內(nèi)含百日咳2×1010)，以第一次致敏時(shí)間為第1天，分別于第5、10天再致敏2次。14天后頸動(dòng)脈采血，分離血清，各組分別合并后，置冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> 2、被動(dòng)皮膚致敏另取大鼠16只，雌雄各半，體重160-180g，隨機(jī)分成2組，即卵蛋白組和香丹滴注液組。大鼠用乙醚淺麻后，在腹部?jī)蓚?cè)剪毛，每側(cè)兩點(diǎn)。取上述兩組抗血清用生理鹽水稀釋成1∶5和1∶10兩種濃度。兩組動(dòng)物于剪毛處分別皮內(nèi)注射相應(yīng)的兩種濃度的抗血清各0.1ml。致敏后48小時(shí)后，卵蛋白組用1％孵蛋白生理鹽水(含0.5％伊文思藍(lán))尾靜脈注射1ml/只，進(jìn)行抗原攻擊；香丹滴注液組尾靜脈注射香丹滴注液(含0.5％伊文思藍(lán))1ml/只，進(jìn)行抗原攻擊。攻擊后30min處死大鼠，翻轉(zhuǎn)腹部皮膚，觀察有無(wú)藍(lán)斑形成。
試驗(yàn)結(jié)果孵蛋白組皮注射1∶5和1∶10抗血清后均形成藍(lán)斑，香丹滴注液組兩種血清濃度下均藍(lán)斑形成。結(jié)果見(jiàn)表5、表6。
表5 1∶5血清濃度下兩組動(dòng)物藍(lán)斑形成情況組別 陽(yáng)性(有藍(lán)斑) 陰性(無(wú)藍(lán)斑)孵蛋白組 16 0香丹滴注液組 0 16
表6 1∶10血清濃度下兩組動(dòng)物藍(lán)斑形成情況組別 陽(yáng)性(有藍(lán)斑) 陰性(無(wú)藍(lán)斑)孵蛋白組 16 0香丹滴注液組 016注X2檢驗(yàn)，p＜0.01與對(duì)照組比較結(jié)論香丹滴注液無(wú)IgE樣抗原作用。
參考文獻(xiàn)藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第二版)，徐叔云主編，人民衛(wèi)生出版社，1196。
試驗(yàn)三香丹滴注液的過(guò)敏試驗(yàn)。
試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)動(dòng)物試驗(yàn)觀察香丹滴注液是否有致敏作用。
試驗(yàn)材料受試藥物香丹滴注液，規(guī)格40g生藥(丹參20克，降香20克)/250mL，批號(hào)20000619。由安徽天洋藥業(yè)有限公司提供。
受試動(dòng)物白色豚鼠，雄性，體重250-350g，隨機(jī)均分成3組。按無(wú)菌操作，給藥組隔日腹腔注射香丹滴注液0.5ml/只，5％葡萄糖注射液組、陽(yáng)性致敏組隔日分別腹腔注射5％葡萄糖注射液、2％新鮮雞蛋清各0.5ml/只，共3次。首次注射后的第14日，每組分別取3只豚鼠，給藥組靜脈注射藥物2ml/只，5％葡萄糖注射液組靜脈注射5％葡萄糖注射液2ml/只，陽(yáng)性致敏組靜脈注射2％新鮮雞蛋清2ml/只攻擊。每組作下3只動(dòng)物于首次注射后的第21日按以上方法進(jìn)行攻擊，觀察過(guò)敏反應(yīng)現(xiàn)象，按表7進(jìn)行過(guò)敏反應(yīng)分級(jí)。
方法進(jìn)行攻擊，觀察過(guò)敏反應(yīng)現(xiàn)象，按表7進(jìn)行過(guò)敏反應(yīng)分級(jí)。
表7 豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)反應(yīng)級(jí)數(shù) 反應(yīng)癥狀0無(wú)明顯反應(yīng)1只有輕微抓鼻、顫抖或豎毛2有幾次咳嗽、有抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續(xù)咳嗽、伴有呼吸困難或痙攣、抽搐4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡反應(yīng)級(jí)數(shù)2級(jí)以上(包括2級(jí))時(shí)，可認(rèn)為過(guò)敏試驗(yàn)不合格。
試驗(yàn)結(jié)果示重復(fù)使用香丹滴注液，未引起受試動(dòng)物出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。
表8 豚鼠過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)組別 動(dòng)物數(shù)過(guò)敏反應(yīng)級(jí)數(shù)(只)14天(n＝3) 21天(n＝3)香丹滴注液 6 0 05％葡萄糖注射液6 0 02％蛋清6 4 4結(jié)論香丹滴注液對(duì)豚鼠無(wú)致敏作用。
試驗(yàn)四香丹滴注液的溶血試驗(yàn)。
試驗(yàn)?zāi)康? 觀察香丹滴注液在體外溶血試驗(yàn)中對(duì)家兔紅細(xì)胞是否有溶血作用，為臨床應(yīng)用提供安全性評(píng)價(jià)依據(jù)。
試驗(yàn)材料 受試藥物香丹滴注液，規(guī)格40g生藥(丹參20克，降香20克)/250mL，批號(hào)20000619。由安徽天洋藥業(yè)有限公司提供。
受試動(dòng)物白色家兔，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)遼實(shí)合字033號(hào)。
試驗(yàn)方法取家兔1只，耳緣靜脈取血10ml，用竹簽攪拌去除纖維蛋白，然后將血移入該度離心管內(nèi)，2000rpm離心5分鐘，去除上清液，加生理鹽水注射液5ml混勻后2000rpm離心5分鐘，反復(fù)4次，將所得紅細(xì)胞按體積用生理鹽水稀釋成2％混懸液備用。再取試管7支，按表11加入各種溶液，其中第6、7管分別為5％葡萄糖注射液對(duì)照管和溶血的陽(yáng)性對(duì)照管。將各管搖勻后，37℃水浴內(nèi)溫育3小時(shí)，按標(biāo)準(zhǔn)判斷各管在0.5-3小時(shí)內(nèi)是否出現(xiàn)溶血或凝集。
表9 體外溶血試驗(yàn)加樣表試管編號(hào)1234567香丹滴注液 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 005％葡萄糖注射液 2.3 2.1 1.9 1.7 1.5 2.5 0
蒸餾水 0 0 0 0 0 0 2.52％紅細(xì)胞混懸液 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5試驗(yàn)結(jié)果表明香丹滴注液各濃度0.5-3小時(shí)內(nèi)對(duì)家兔紅細(xì)胞均無(wú)溶血或凝集反應(yīng)；蒸餾水組在各時(shí)間點(diǎn)全溶血。
試驗(yàn)五香丹滴注液肌肉刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康? 通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)觀察香丹滴注液對(duì)家兔肌肉的刺激性，為臨床應(yīng)用提供安全性評(píng)價(jià)依據(jù)。
試驗(yàn)材料 受試藥物香丹滴注液，規(guī)格40g生藥(丹參20克，降香20克)/250mL。由安徽天洋藥業(yè)有限公司提供。
受試動(dòng)物白色家兔，雌雄不限(雌未孕)3只，體重2.0-2.5kg。沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。合格證號(hào)遼實(shí)合字033號(hào)。
試驗(yàn)方法 白色家兔，雌雄不限(雌未孕)6只，體重2.0-2.5kg。將家兔固定于固定箱內(nèi)。各例于左側(cè)股四頭肌以無(wú)菌操作方法注入藥液2mL；右側(cè)股四頭肌以無(wú)菌操作方法注入葡萄糖輸液2mL。給藥后48小時(shí)放血處死動(dòng)物，解剖后取股四頭肌，縱向切開(kāi)，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，并且取注射部位肌肉組織制作病理切片，觀察有無(wú)病理改變。
肉眼觀察結(jié)果表明給藥后各只家兔健康如常。給藥側(cè)和對(duì)照組側(cè)未見(jiàn)異常病理改變。
病理組織檢查結(jié)果表明對(duì)照側(cè)未見(jiàn)異常，香丹滴注液側(cè)高倍鏡下給藥部位肌肉組織強(qiáng)見(jiàn)輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)變性、壞死等異常改變。刺激反應(yīng)結(jié)果表明香丹滴注液對(duì)肌肉無(wú)明顯刺激作用。
從上述五個(gè)試驗(yàn)可以表明，本發(fā)明的香丹滴注液的安全性試驗(yàn)符合規(guī)定要求。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例取丹參10kg，去除雜質(zhì)后，加8倍量的純化水浸泡1小時(shí)后，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第一次煎液。藥渣再用6倍量的純化水煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第二次煎液，藥渣再用5倍量的純化水煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，保留第三次煎液，去除藥渣，然后合并三次煎煮液，加熱濃縮至相對(duì)密度為1.04-1.06(70-80℃熱測(cè))。待冷卻至約40-50℃，加5％明膠溶液至不產(chǎn)生沉淀為止，調(diào)整藥液濃度至相對(duì)密度為1.15-1.17(70-80℃熱測(cè))，加乙醇使沉淀，使含醇量達(dá)55％，于0℃條件下放置24小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，濾液減壓回收乙醇，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，過(guò)濾，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1-2，用等量的醋酸乙酯萃取5次，合并醋酸乙醋萃取液，減壓回收醋酸乙醋，得丹參提取液浸膏，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入4倍量的注射用水于0℃條件下放置48小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，加入4倍量的注射用水于5℃條件下放置72小時(shí)后，過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參酚酸類有效成份精制液4000ml，1ml相當(dāng)于含丹參生藥2.5克。
取降香10kg，刨成薄片，用純化水10倍量，蒸餾，收集蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，冷藏24小時(shí)后，除去油層，水層重蒸餾，收集蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g，制得降香提取液即重蒸餾液4000ml。
取葡萄糖6250克，按重量比，加3倍量注射用水，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，加入活性炭，煮沸15分鐘，經(jīng)砂棒過(guò)濾制得等滲劑濃配液。
取上述丹參精制液、降香提取液與等滲劑的濃配液按體積比4∶5∶19進(jìn)行合并，加8倍量注射用水，加活性炭煮沸15分鐘，經(jīng)砂棒過(guò)濾，濾液以氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，加注射用水至全量，測(cè)試中間體含量，經(jīng)0.45μm微孔濾膜精濾后，用超濾器超濾，灌裝于洗凈的250毫升玻璃輸液瓶或輸液袋中，經(jīng)滅菌、燈檢、質(zhì)檢后得香丹滴注液成品。
使用劑量靜脈滴注250ml/天。
權(quán)利要求
1.一種治心血管病癥的香丹滴注液，按體積比，基本上由丹參的酚酸類提取物精制液0.2～4.0％、降香的蒸餾液0.2～4.0％，滴注液常規(guī)輔料92.0～99.2％組成，其特征在于用如下方法制備取丹參水煎煮，濃縮水液至相對(duì)密度為1.04-1.06，冷卻至40-50℃時(shí)，加5％明膠溶液至不產(chǎn)生沉淀為止，上清液濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.17時(shí)，加乙醇使含醇量達(dá)50-60％，于0-10℃條件下靜置后過(guò)濾，濾液回收乙醇后的濃縮液，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥1～3g，過(guò)濾，調(diào)節(jié)濾液pH至1-2，用等量的醋酸乙酯萃取4～7次，合并醋酸乙醋萃取液，回收醋酸乙醋，得丹參酚酸提取物浸膏，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，加入4倍量的注射用水于0-10℃條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參酚酸提取物精制液，1ml相當(dāng)于含丹參生藥2.5g；蒸餾降香，蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，低溫靜置后除去油層，水層重蒸餾，收集重蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g；取丹參酚酸類提取物精制液、降香重蒸餾液，與滴注液常規(guī)輔料混合，按常規(guī)調(diào)節(jié)等滲，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香丹滴注液，其特征在于滴注液輔料為等滲劑、抗氧劑與水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的香丹滴注液，其特征在于其中等滲劑可以為氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或/和大分子量的右旋糖酐、中分子量的右旋糖酐或小分子量的右旋糖酐。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的香丹滴注液，其特征在于其中抗氧劑可以為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉或/和硫代硫酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種香丹滴注液及其制備方法，其基本上由中藥降香中提取的揮發(fā)油水飽和液、丹參中提取的酚酸類有效成分等滲劑、抗氧劑與水組成，其制備方法包括水提、除鞣、醇沉、用醋酸乙酯提取、得丹參酚酸提取物；取降香，蒸餾提取得降香揮發(fā)油水飽和液；將丹參提取物、降香提取物加等滲劑、抗氧劑與水混合，得香丹滴注液，該制劑穩(wěn)定性好、雜質(zhì)少、無(wú)臨床不良反應(yīng)，療效確切，有效成分占總固體量的比例提高到2.8－3.0倍，有利于工業(yè)化生產(chǎn)和臨床的進(jìn)一步推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1430992SQ03112650
公開(kāi)日2003年7月23日 申請(qǐng)日期2003年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月10日
發(fā)明者侯俊英, 倪文山 申請(qǐng)人:安徽天洋藥業(yè)有限公司