專(zhuān)利名稱(chēng)：老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及一種抗病毒的藥物，具體涉及老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途。
1995年蘇州中醫(yī)學(xué)研究所報(bào)導(dǎo)直接采用老鸛草水煎劑治療慢性乙型肝炎，結(jié)果認(rèn)為老鸛草中含有的鞣質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化作用和抗過(guò)氧化脂質(zhì)體的作用，在抑制血清和肝臟中過(guò)氧化脂質(zhì)的上升中抑制了其對(duì)肝細(xì)胞的損害。但沒(méi)有涉及到對(duì)乙肝病毒的抑制。
綜觀國(guó)內(nèi)外的報(bào)導(dǎo)，均未見(jiàn)老鸛草(Gerancium carolinianum L)的干燥地上部分的總黃酮提取物其藥物及抗病毒藥效。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供老鸛草總黃酮提取物及其制備抗病毒藥物中的新用途。
本發(fā)明從我國(guó)產(chǎn)的pang牛兒苗科植物老鸛草(Gerancium carolinianumL)的干燥地上部分(藥材中文名稱(chēng)老鸛草，拉丁文名Herba Geranii)分離提取得到總黃酮提取物，其主要組分為皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。
所述老鸛草總黃酮提取物經(jīng)體外細(xì)胞模型和體內(nèi)動(dòng)物模型試驗(yàn)后，證實(shí)其具有很強(qiáng)的抗病毒活性。
本發(fā)明通過(guò)下述方法進(jìn)行，1、提取老鸛草總黃酮用50％酒精提取中藥材老鸛草，濃縮提取液至1/4-1/5體積，上D101大孔樹(shù)脂，用水和70％酒精洗脫，收集洗脫液，經(jīng)鎂粉/鹽酸檢測(cè)驗(yàn)證，收集黃酮含量高的部分，洗脫液濃縮至干得固形物即有效部位產(chǎn)物，稱(chēng)重且測(cè)定總黃酮，有效部位產(chǎn)物收率達(dá)1％以上，總黃酮含量超過(guò)50％。
2.老鸛草總黃酮提取物主要化學(xué)組分結(jié)構(gòu)鑒定經(jīng)質(zhì)譜和13C、1H測(cè)定，證實(shí)本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物的主要化學(xué)成分為槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
3，老鸛草總黃酮提取物用于抗乙型肝炎病毒、流行型感冒病毒、皰疹病毒和艾滋病毒試驗(yàn)。經(jīng)體外細(xì)胞試驗(yàn)，證實(shí)老鸛草總黃酮對(duì)皰疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制。
1)采用流感病毒MDCK細(xì)胞，A3毒株(購(gòu)于上海市衛(wèi)生防疫站)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果為Ic50＝200μg/ml Ec50＝50μg/ml TI＝42)采用單純皰疹病毒vero細(xì)胞HSV-1毒株Sm44，(由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)藥研究所提供)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果為Ic50＝200μg/ml Ec50＝25μg/ml TI＝83)抗乙肝病毒試驗(yàn)體外試驗(yàn)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定，采用HepG22.215細(xì)胞，對(duì)藥物的抗乙肝病毒作用進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果表明老鸛草總黃酮對(duì)HBsAg和HbeAg均有抑制。
表1是不同濃度老鸛草總黃酮對(duì)HBsAg和HBeAg的抑制。
表2是不同時(shí)間50μg/ml的老鸛草總黃酮對(duì)抗原的抑制。
表1100μg/ml50μg/ml25μg/ml抑制HBsAg(％)70 52 41抑制HBeAg(％)51 43 38表2天 3 6 9 12HBsAg(％)43.448.2 58.333.3HBeAg(％)48.454.35 41.525.6
抗乙肝病毒體內(nèi)試驗(yàn)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定，采用北京芙蓉鴨作為乙肝新藥的動(dòng)物模型，給藥10天，結(jié)果證明老鸛草總黃酮提取物對(duì)鴨乙肝病毒有抑制作用。
表3是老鸛草總黃酮提取物對(duì)鴨乙肝病毒抑制作用。
表3劑量(克/公斤) 天 DHBVsAg的抑制(％)3(以生藥計(jì)) 5 29.41051.01335.11.5(以生藥計(jì)) 5 22.01042.61321.7拉米呋定(50毫克/公斤) 5 52.21029.8134.2實(shí)驗(yàn)結(jié)束取出試驗(yàn)鴨肝臟，做電鏡檢測(cè)，未見(jiàn)因乙肝病毒感染而引起的肝壞死，結(jié)果證實(shí)口服老鸛草總黃酮后，對(duì)鴨乙肝病毒感染引起的肝損傷有明顯的保護(hù)作用。
4).艾滋病毒采用pBMC細(xì)胞，取50μg/ml的老鸛草總黃酮提取物對(duì)5株HIV毒株進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明老鸛草總黃酮提取物抑制HIV P24達(dá)85-96％。
本發(fā)明老鸛草總黃酮經(jīng)檢測(cè)表明其中含有槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的組分，由于在肝臟上有半乳糖的受體，因此采用野老鸛草總黃酮作為藥物，無(wú)疑會(huì)被肝臟很好吸收，達(dá)到良好的藥效。本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物及其提取物有效組分槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖加入輔料可制成膠囊，片劑，顆粒和針劑等劑型，用于臨床治療病毒性肝炎、病毒性流感、皰疹病毒和艾滋病毒感染。


圖1是鴨乙肝病毒感染后，鴨肝臟細(xì)胞的照片(鴨肝臟細(xì)胞核出現(xiàn)壞死)。
圖2是正常鴨肝細(xì)胞照片.。
圖3是老鸛草總黃酮給藥后鴨肝臟細(xì)胞的照片。
圖4是拉米呋定給藥后鴨肝臟細(xì)胞的照片表4批號(hào) 1 2 3 平均產(chǎn)物產(chǎn)量(克)3.363.614.303.76總黃酮量(克)2.281.953.302.51產(chǎn)物收率％ 1.121.201.431.25總黃酮含量％67.954.076.766.7實(shí)施例2取老鸛草總黃酮提取物50克，粉碎過(guò)100目篩，加入淀粉3克混合均勻，再加入10％淀粉漿適量制成軟材，20目篩網(wǎng)制粒，60-70℃干燥，過(guò)30目篩整粒，加入羥丙基纖維素3克和硬脂酸鎂1克充分混勻，壓片，薄膜包衣，即得片劑1000片。每片含總黃酮提取物50mg。
實(shí)施例3取老鸛草總黃酮提取物50克，粉碎過(guò)100目篩，加入淀粉3克，微晶纖維適量，用稀乙醇制粒，20目篩網(wǎng)制粒，60-70℃干燥，整粒，加入硬脂酸鎂適量，充分混勻，填入膠囊即得，1000粒，實(shí)施例4取老鸛草總黃酮提取物30克，粉碎過(guò)100目篩，加入淀粉300克加入10％淀粉漿適量制成顆粒，60-70℃干燥，分裝200袋。
實(shí)施例5取老鸛草總黃酮提取物50克，加適量注射用水，加熱溶解，再加入0.5％活性炭充分?jǐn)嚢?，煮?0分鐘，過(guò)濾，冷卻至室溫，冷庫(kù)過(guò)夜，加注射用水至1000ml，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH至7，過(guò)濾除菌，灌裝，封口，滅菌即得注射劑。規(guī)格調(diào)2ml，10ml，100ml。
權(quán)利要求
1.一種老鸛草總黃酮提取物，其特征是具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)。
2.按權(quán)利要求1的老鸛草總黃酮提取物，其特征是制成膠囊，片劑，顆粒和針劑劑型。
3.老鸛草總黃酮提取物在制備抗病毒藥物中的用途。
4.老鸛草總黃酮提取物在制備抗乙肝病毒藥物中的用途。
5.老鸛草總黃酮提取物在制備抗皰疹病毒藥物中的用途。
6.老鸛草總黃酮提取物在制備抗流感病毒藥物中的用途。
7.老鸛草總黃酮提取物在制備抗艾滋病毒藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及一種抗病毒的藥物，具體涉及老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途。經(jīng)體內(nèi)外試驗(yàn)，證實(shí)本發(fā)明對(duì)皰疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制作用。本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物及其提取物有效組分槲皮素－3－O－β－D－吡喃半乳糖加入輔料可制成膠囊，片劑，顆粒和針劑等劑型，用于臨床治療病毒性肝炎、病毒性流感、皰疹病毒和艾滋病毒感染。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1434052SQ03115358
公開(kāi)日2003年8月6日 申請(qǐng)日期2003年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月12日
發(fā)明者周珮, 李繼揚(yáng), 黃海, 鈕君健, 戴培興 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)