專利名稱：3,7,3',4'-取代黃酮的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及3，7，3’，4’-取代黃酮的用途，特別涉及3，7，3’，4’-取代黃酮在制備治療癌癥惡病質(zhì)的藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥惡病質(zhì)(cachexia)是指中晚期癌癥病人出現(xiàn)的食欲不振、極度消瘦、全身代謝改變等表現(xiàn)的綜合征。癌癥一旦發(fā)展到惡病質(zhì)，將使患者失去手術(shù)、放療、化療的機(jī)會(huì)，而且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量及縮短患者的生存期。目前臨床上缺乏有效的治療藥物，因此，尋找有效抗腫瘤及改善癌癥惡病質(zhì)的藥物具有重要的意義。
本發(fā)明所述的3，7，3’，4’-取代黃酮，其結(jié)構(gòu)通式如下 式中R＝H，CH3，CH3CO或-C6H11O5(glucosyl，葡糖基)。
將上述取代黃酮應(yīng)用于制備抗腫瘤藥品中已有報(bào)道，但該類取代黃酮化合物在制備治療癌癥惡病質(zhì)的藥品中的應(yīng)用未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供3，7，3’，4’-取代黃酮化合物的一種新用途。
發(fā)明構(gòu)思導(dǎo)致癌癥惡病質(zhì)的原因，長(zhǎng)期以來(lái)大多認(rèn)為是因腫瘤細(xì)胞過度分裂增殖，增加了對(duì)人體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過度消耗，但是強(qiáng)迫性營(yíng)養(yǎng)攝入并不能逆轉(zhuǎn)癌癥惡病質(zhì)狀態(tài)。近年來(lái)大量研究表明，由機(jī)體免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分泌的腫瘤壞死因子(tumornecrosis factor，TNF)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)等細(xì)胞因子在癌癥惡病質(zhì)病理中起著重要的作用。臨床上腫瘤患者血清中存在高水平的TNF和IL-6，而且與腫瘤的發(fā)展呈緊密相關(guān)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物反復(fù)注射TNF或IL-6或接種細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞，均可誘導(dǎo)惡病質(zhì)；注射TNF或IL-6的抗體或可溶性受體也能緩解動(dòng)物的惡病質(zhì)。TNF I型受體(TNFRI)基因敲除小鼠以及可溶性TNFRI過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠荷瘤后，兩種模型的小鼠體重減輕和脂肪減少以及血液甘油三酯(TG)顯著低于正常荷瘤小鼠；核因子NFκB反義核苷酸在體內(nèi)外能抑制細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄激活，減少細(xì)胞因子的釋放，可顯著改善荷瘤小鼠體重、脂肪、腓腸肌和食物攝入減少等惡病質(zhì)狀態(tài)。上述臨床和實(shí)驗(yàn)結(jié)果強(qiáng)烈提示，藥物通過抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生和作用，可能為癌癥惡病質(zhì)的治療提供有效途徑。
本發(fā)明中所用3，7，3’，4’-取代黃酮是由中藥皂角刺、黃練芽、兒茶中提取或由提取物經(jīng)化學(xué)修飾獲得，具體提取和化學(xué)修飾的方法參見Biomed J，1957，67239；CA，1967，6751047；全國(guó)中草藥匯編(上)，北京人民衛(wèi)生出版社，1976，454，其中R＝CH3CO的取代物由3，7，3’，4’-四羥基黃酮與乙酰氯反應(yīng)，再經(jīng)硅膠柱sephadex LH-20分離制備。
為更好理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面以3，7，3’，4’-四羥基黃酮(漆樹黃酮，fisetin)為例，通過其調(diào)節(jié)細(xì)胞因子活性及改善荷瘤小鼠癌癥惡病質(zhì)的作用試驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果，來(lái)說明其在制備治療癌癥惡病質(zhì)的藥品中的應(yīng)用。但所舉例子并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
試驗(yàn)用小鼠黑色素瘤細(xì)胞系(B16)，購(gòu)自中科院上海細(xì)胞所細(xì)胞庫(kù)，L929細(xì)胞和B9.9細(xì)胞由第二軍醫(yī)大學(xué)免疫教研室提供。
試驗(yàn)方法(1)細(xì)胞因子的誘生和測(cè)定制備小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，加入24孔板中，然后同時(shí)加入漆樹黃酮和LPS(10μg/ml)共育24小時(shí)，收集細(xì)胞上清液，分別用小鼠胸腺細(xì)胞、B9.9細(xì)胞和L929細(xì)胞測(cè)定巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子IL-1，IL-6和TNF活性。
(2)小鼠惡病質(zhì)模型及藥物作用C57BL/6小鼠腹腔注射B16黑色素瘤細(xì)胞1.5×106，第二天起灌胃給予漆樹黃酮，11天后，小鼠心臟取血，測(cè)定血液甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid，NEFA)、葡萄糖和總膽固醇；測(cè)定小鼠尸體干重、附睪脂肪和全身脂肪。同時(shí)測(cè)定小鼠每日食物和水?dāng)z入情況。
試驗(yàn)結(jié)果(1)漆樹黃酮對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響TNF、IL-1和IL-6等炎癥細(xì)胞因子與癌癥惡病質(zhì)密切相關(guān)。我們?cè)囼?yàn)了漆樹黃酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1，TNF和IL-6的影響。結(jié)果表明，漆樹黃酮與小鼠腹腔巨噬細(xì)胞共育，能濃度依賴地抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞釋放炎癥細(xì)胞因子IL-1，IL-6和TNF，結(jié)果見表1。
表1漆樹黃酮對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放IL-1、TNF和IL-6的影響漆樹黃酮(μmol.L-1) IL-1活性(cpm) TNF活性(U.ml-1) IL-6活性(U.ml-1)0 9862±567 183±21 20.8±2.412.5 7425±297 98±12** 10.4±1.9*25 5894±825* 37±16** 6.8±1.4**50 4366±637**18±7** 3.2±2.1**n＝3，x±s，*P＜0.05，**P＜0.01 vs 0.
表2結(jié)果表明，與漆樹黃酮比較，取代物1，2抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放IL-1、TNF和IL-6的作用強(qiáng)于漆樹黃酮，取代物3的作用均弱于漆黃素。
表2漆樹黃酮及結(jié)構(gòu)類似物對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放IL-1、TNF和IL-6的影響組別 R1IL-1活性(cpm) TNF活性(U.ml-IL-6活性(U.ml-1)1)溶劑對(duì)照組 9936±238 189±32 21.6±2.2漆樹黃酮 H 5924±512**38±11**7.2±1.2**取代物1 CH34513±524**28±8** 5.6±2.1**取代物2 CH3CO4439±368**36±10**4.9±1.8**取代物3 glucosyl 7122±135* 65±22**10.1±3.8*漆樹黃酮及取代物1-3的濃度均為25μmol.L-1，與溶劑對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01(2)漆樹黃酮對(duì)荷瘤小鼠癌癥惡病質(zhì)的影響漆樹黃酮可顯著改善荷瘤小鼠體重、附睪脂肪和全身脂肪減少等惡病質(zhì)狀態(tài)(表3)，同時(shí)恢復(fù)血液生化指標(biāo)改變(表4)。
表3漆樹黃酮對(duì)B16荷瘤小鼠惡病質(zhì)的影響漆樹黃酮 附睪脂肪 全身脂肪 尸體干重/mg/kg(mg) (g/mouse) (g)正常對(duì)照347±53 1.62±0.10 5.5±0.3對(duì)照組 163±26## 1.10±0.13##4.2±0.1##10 170±34 0.98±0.28 4.5±0.225 268±65*1.25±0.34 4.7±0.963 318±58*1.38±0.13*4.8±0.8N＝10，##P＜0.01vs正常對(duì)照，*P＜0.05，**P＜0.01vs對(duì)照組。
表4漆樹黃酮對(duì)B16荷瘤小鼠血液參數(shù)的影響漆樹黃酮甘油三酯非酯化脂肪酸葡萄糖總膽固醇/mg/kg (mg/dL) (mEq/L)(mg/dL)(mg/dL)正常對(duì)照74±3 1.85±0.07 132±6 84±3對(duì)照組 214±46## 3.04±0.16## 86±10##106±5##10 116±20 2.41±0.18 112±4 104±425 100±30*2.55±0.21 121±7**123±5*63 98±21*2.25±0.23*139±9**97±4*N＝10，##P＜0.01vs 正常對(duì)照，*P＜0.05，**P＜0.01vs對(duì)照組。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，發(fā)現(xiàn)已知化合物3，7，3’，4’-取代黃酮能明顯抑制小鼠巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1和-6等細(xì)胞因子，對(duì)實(shí)驗(yàn)性癌癥惡病質(zhì)具有明顯的治療作用，從而拓寬已知化合物3，7，3’，4’-取代黃酮藥用范圍。
權(quán)利要求
1.3，7，3’，4’-取代黃酮，其結(jié)構(gòu)通式如下 式中R＝H，CH3，CH3CO或-C6H11O5在制備治療癌癥惡病質(zhì)的藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了3，7，3’，4’－取代黃酮的一種新用途，所述取代黃酮是由中草藥中提取、分離或由提取物制備而得，其能明顯抑制小鼠巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素－1和－6等細(xì)胞因子，對(duì)實(shí)驗(yàn)性癌癥惡病質(zhì)具有明顯的治療作用。因此，3，7，3’，4’－取代黃酮可應(yīng)用于制備治療癌癥惡病質(zhì)的藥品。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1526388SQ0311562
公開日2004年9月8日 申請(qǐng)日期2003年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月3日
發(fā)明者張俊平, 肖振宇, 謝天培 申請(qǐng)人:張俊平, 肖振宇, 謝天培