專利名稱：一種重樓提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中草藥制劑，更具體地說，本發(fā)明涉及一種重樓的提取物，同時，本發(fā)明還涉及所述的重樓提取物在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
自19世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)煙草花葉病毒，人們認識到病毒是一種比細菌更小的微生物，隨后又發(fā)現(xiàn)動物及人類皆可受類似的可濾過性病毒感染。臨床發(fā)現(xiàn)，越來越多的疾病與病毒有關(guān)，統(tǒng)計資料證實，幾乎有3/4的傳染病由病毒引起。病毒與臨床不僅關(guān)系十分密切，而且關(guān)系相當(dāng)復(fù)雜。一種病毒可以引起多種疾病，而一種病癥又可由多種病毒引起。從某種意義上來說，一部人類進化史，也就是人類與各種病毒較量的歷史。
單純皰癥病毒(herpes simplex virus，HSV)屬皰癥病毒科，病毒直徑約180nm。電鏡下可見顆粒由同心的多層組成。內(nèi)層為核心，內(nèi)有雙鏈的DNA和蛋白。其外層是一個20面體的蛋白質(zhì)殼體，此20面體由162個柱狀殼微粒所組成。最外層為包膜，由脂肪和糖蛋白所組成。糖蛋白決定HSV的抗原特異性，有包膜的病毒顆粒更易吸附于細胞上，從而更具有感染性。
HSV有二種抗原型，即HSV-I和HSV-II型，兩型病毒的生物學(xué)特性和流行病學(xué)意義是不相同的。I型是唇皰疹和較大兒童及成人HSVE的主要病原；而II型則主要引起生殖道皰癥和新生兒全身播散性感染，亦可引起腦炎或腦膜炎，且與宮頸癌的發(fā)病有關(guān)。95％以上的HSVE病例由I型所致。感染單純皰疹的人是該病毒唯一的貯存宿主。傳播途徑主要通過人群間的直接密切接觸，HSV-I型尚可通過空氣飛沫傳播，HSV-II型主要通過性生活傳播，在分娩時可通過直接接觸感染新生兒。皰疹病毒嚴重危害人類的身體健康。
但是，現(xiàn)有技術(shù)中，尚無抗皰疹病毒的特效藥物，尤其是缺少服用方便，毒副作用小，而治療效果顯著的中藥制劑。對皰疹病毒病的有效治療仍是一個急待解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種重樓提取物。它以天然植物為原料，成本低廉，抗皰疹病毒效果顯著，毒副作用低，預(yù)示著很好的藥用前景。本發(fā)明還提供了所述的重樓提取物的用途。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實現(xiàn)。
除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
本發(fā)明提供了一種重樓提取物，該重樓提取物可由下述方法制備獲得以重樓屬(Paris)植物全草粉為原料，加入為原料重量3份～30份的30％～100％的乙醇，在0℃～90℃溫度下回流提取三次；合并提取液，減壓回收乙醇液并經(jīng)活性炭脫脂，得到濕浸膏，其比重為1.05，即為所需要的重樓提取物。
有益效果1.中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)院病毒學(xué)研究所將本發(fā)明的提取物對單純皰疹病毒(HSV-I)進行實驗，實驗情況詳述如下。
實驗材料①驗證藥物本發(fā)明的提取物粉劑，②非洲綠猴腎細胞(VERO)、單純皰疹病毒(HSV-I)和Eagle｀s維持液均由該所提供。
實驗方法A.單純皰疹病毒毒力測定(細胞病變法CPE)①病毒用Eagle｀s維持液10倍連續(xù)稀釋即10-1～10-7；
②將稀釋好的病毒接種到已培養(yǎng)成片的VERO細胞96孔培養(yǎng)板中，每濃度4孔，每孔0.1毫升，置37℃5％CO2培養(yǎng)24～48小時，觀察細胞病變，同時設(shè)正常細胞對照。倒置顯微鏡下觀察細胞病變，記錄結(jié)果。實驗結(jié)果單純皰疹病毒(HSV-I)TCID50為10-5。
B.所述的提取物對細胞的毒力測定①將提取物分別用Eagle｀s維持液稀釋成不同的濃度，分別接種到已生長成片的VERO細胞(每孔細胞約2萬個)96孔培養(yǎng)板，每濃度4孔，每孔0.1ml，置37℃5％CO2培養(yǎng)7天，顯微鏡下觀察細胞病變，以每孔細胞25％為+，25％～50％破壞為++，50％～75％破壞為+++，75％～100％破壞為++++。記錄每孔細胞的中毒情況，計算TD0藥物對細胞的最大無毒濃度。
②實驗結(jié)果如表1所示。
表1.本發(fā)明提取物對VERO細胞毒性實驗結(jié)果

C.體外抗病毒藥效試驗(細胞病變法CPE)將VERO細胞接種到96孔培養(yǎng)板(每孔細胞約2萬個)37℃培養(yǎng)至單層，棄掉生長液。②將單純皰疹病毒(HSV-1)稀釋成10-5，每孔0.1ml接種VERO細胞中吸附2小時，棄掉病毒液。③加入兩批實驗的藥物對細胞的最大無毒濃度。2倍稀釋成不同的濃度，每濃度接種受感染細胞4孔，每孔0.1ml。同時設(shè)病毒對照、正常細胞對照。置37℃5％CO2培養(yǎng)24～48小時，觀察細胞病變7天。記錄CPE。④實驗結(jié)果如表2所示。
表2.本發(fā)明的提取物對單純皰疹病毒(HSV-I)病變的抑制作用

上述試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的提取物對單純皰疹病毒(HSV-I)具有抗病毒作用，最小有效濃度為0.29～0.58μg/ml。
2.本發(fā)明制備的重樓提取物經(jīng)復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)研究所檢測，檢測情況詳述如下。
檢測項目重樓提取物體外藥效觀察材料與方法①體外細胞模型Vero，②病毒株HSV-II333株，③MTT法檢測樣品對細胞的毒性，④觀察細胞病變(CPE)確定藥物對HSV-II的抑制作用。
抗病毒試驗①Vero細胞在96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)2天后，加入不同濃度的藥物，繼續(xù)培養(yǎng)3天，用MTT法檢測藥物對Vero。②Vero細胞在96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)2天后，用10TCTD50量HSV-II感染細胞，在加入最大無毒濃度的藥液，培養(yǎng)3天，觀察細胞病變(CPE)情況。
檢測結(jié)果如表3所示。
表3.本發(fā)明藥物對Vero細胞的毒性及抗皰疹病毒(HSV-II)作用情況

上述試驗結(jié)果清楚地顯示，本發(fā)明的提取物在濃度為0.6μg/ml時能有效地抑制皰疹病毒HSV-II。
上述試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的提取物具有抗皰疹病毒的功能，藥理作用強，適應(yīng)癥廣，預(yù)示著很好的藥用前景。原料來源豐富、價廉，制備工藝簡單，為云南特有的植物資源開拓了新的應(yīng)用領(lǐng)域。
具體實施例方式
通過下面給出的具體實施例，可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對本發(fā)明的限定。
實施例1將重樓全草粉1000克，加入30％的乙醇5000克，在80℃溫度下回流提取三次；合并提取液，減壓回收乙醇液并經(jīng)活性炭脫脂，得到濕浸膏，其比重為1.05，即為所需的提取物。
實施例2除取重樓全草粉1000克，加入60％的乙醇5000克，在60℃溫度下回流外，其它過程與實施例1相同。
實施例3除取重樓全草粉1000克，加入90％的乙醇5000克，在0℃溫度下回流外，其它過程與實施例1相同。
權(quán)利要求
1.一種重樓提取物，該重樓提取物可由下述方法制備獲得以重樓屬植物為原料，加入為原料重量3份～30份的30％～100％的乙醇，在0℃～90℃溫度下回流提取三次；合并提取液，減壓回收乙醇液并經(jīng)活性炭脫脂，得到濕浸膏，其比重為1.05，即為所需要的重樓提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重樓提取物，其中所述的原料為重樓屬植物的全草粉，所述加入乙醇的重量為所述原料重量的5份。
3.重樓提取物在制備治療或預(yù)防單純皰疹病毒引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
4.重樓提取物在制備治療或預(yù)防單純皰疹I(lǐng)型病毒引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
5.重樓提取物在制備治療或預(yù)防單純皰疹I(lǐng)I型病毒引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種重樓提取物及其應(yīng)用。該重樓提取物可由下述方法制備獲得以重樓屬(Paris)植物全草粉為原料，加入為原料重量3份～30份的30％～100％的乙醇，在0℃～90℃溫度下回流提取三次；合并提取液，減壓回收乙醇液并經(jīng)活性炭脫脂，得到濕浸膏，其比重為1.05，即為所需要的重樓提取物。經(jīng)體外抗病毒藥效試驗表明，所述的提取物具有抗皰疹病毒的功能，藥理作用強，適應(yīng)癥廣，預(yù)示著很好的藥用前景。
文檔編號A61P31/00GK1481857SQ03117809
公開日2004年3月17日 申請日期2003年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月30日
發(fā)明者李健吾, 趙守仁 申請人:云南白藥集團天然藥物研究院