專利名稱：具有抗癲癇作用的活蝎活性蛋白、制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由活蝎體內(nèi)提取的用于抗癲癇的藥物，特別是一種活蝎體內(nèi)提取的一種可以作為抗癲癇藥物使用的活性蛋白。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的用于抗癲癇的藥物，一般都是化合物，服用后會有很大的毒副作用。而傳統(tǒng)的中草藥因毒副作用小已經(jīng)被醫(yī)療界所公認，但傳統(tǒng)的中草藥在抗癲癇領(lǐng)域尚未得到開發(fā)。如蝎子這種中藥材，全蝎可以作為名貴中藥在各種領(lǐng)域應(yīng)用，但還不能將其有效成分提取出來作為藥物治療某種疾病。而蝎子治療疾病的主要有效成分是蝎子體內(nèi)的活性蛋白，研究發(fā)現(xiàn)，這種活性蛋白提取出來以后可以明顯延長小鼠的癲癇發(fā)作潛伏期，具有抗癲癇的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開發(fā)活蝎在抗癲癇領(lǐng)域的應(yīng)用，提供一種切實有效的抗癲癇藥物蛋白。
研究發(fā)現(xiàn)PTZ的毒性可以誘發(fā)癲癇，而腦組織的PKC(磷酸激酶C)本身具有抗癲癇的作用。其原理為PKC是G蛋白偶聯(lián)受體的胞內(nèi)重要信息物質(zhì)，它主要使大量底物磷酸化而參與機體內(nèi)廣泛的生理效應(yīng)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，蝎子活性蛋白本身雖無PKC活性，但其能夠進入腦內(nèi)起作用，能促進腦組織PKC活性的激活。經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)，蝎蛋白酒和蝎蛋白粉均能使小鼠腦內(nèi)興奮性氨基酸NMDA受體的結(jié)合減少，使磷酸激酶C(PKC)活性增強。
根據(jù)上述的研究，蝎子的藥用有效成分活性蛋白具有抗癲癇作用，蝎子活性蛋白提取物均可以用作抗癲癇的藥物。而且，其毒副作用小，不會對人體產(chǎn)生其它危害。
本發(fā)明提供一種具有抗癲癇的活蝎活性蛋白，其是用注射器直接從消毒后的活蝎體內(nèi)的蛋白囊內(nèi)抽取蛋白原液，并將上述提取的蛋白原液經(jīng)分離后得到的具有抗癲癇作用的活性蛋白。
上述的該蛋白原液是從位于活蝎腹部第三腹節(jié)的中間位置的體內(nèi)蛋白囊內(nèi)提取的。也可以從位于活蝎后腹部第五節(jié)的中間位置的體內(nèi)蛋白囊抽取，該兩處均具有存放蛋白原液的蛋白囊。
上述的該提取的蛋白原液的分離方法是在蛋白原液中加少量的無菌蒸餾水和10％無菌葡萄糖液體，充分搖允，在0～3攝氏度冷藏靜止2小時，抽取上清液并冷凍干燥，得到凍干活性蛋白粉。也可以是在蛋白原液中加入提取的活蝎自體、體內(nèi)、體外消化液，充分搖勻，在0～3攝氏度冷藏靜止2小時，抽取上清液并冷凍干燥，得到凍干活性蛋白粉。
上述取得的活蝎活性蛋白可以用于人體抗癲癇癥狀的治療，可以口服，其中口服為每人每天1.2～3.3克，分兩次服用。
用上述方法得到的活蝎活性蛋白可以作為抗癲癇藥物使用，其具有無毒性、安全的優(yōu)點。


圖1為本發(fā)明的動物試驗白鼠癲癇潛伏期方差分析圖；圖2為本發(fā)明的動物試驗白鼠癲癇發(fā)作等級方差分析圖具體實施方式
實施例一蝎蛋白粉在抗癲癇中的作用試驗(1)蝎蛋白粉的制備取蝎子活體成蟲，準(zhǔn)備1毫升微型注射器一只、含酒精55％的白酒、消毒棉簽、150毫升透明容器和冰箱。
用蘸取55％的白酒的棉簽取在蝎子腹部擦拭消毒，找準(zhǔn)蝎子腹部第三腹節(jié)的中間位置，然后將1毫升的微型注射器的針頭插入該位置內(nèi)適當(dāng)深度，插入時注意觀察位于蝎子腹部的生殖器，當(dāng)發(fā)現(xiàn)蝎子腹部的生殖器發(fā)生顫動時，說明針頭已插入蛋白囊，這時開始抽取蛋白囊內(nèi)的蛋白原液，抽出的蛋白原液呈天藍色。
完成一只蝎子的蛋白液抽取后，按上述的步驟進行第二只蝎子的蛋白液抽取。
注射器容積抽滿后將蛋白液放入透明容器內(nèi)，并將該透明容器放入冰箱內(nèi)冷藏，抽滿注射器后再次將蛋白液放入透明容器內(nèi)，逐個完成蛋白液抽取后，得到天藍色的蛋白原液。
在該100毫升的蛋白原液中加入1毫升的無菌蒸餾水和0.5毫升的10％的無菌葡萄糖水溶液；充分的搖勻后在0～3攝氏度下冷藏靜止2小時，這時容器中的蛋白液便分為兩部分，上部分為澄清的透明液體，提取上部分的澄清液體，冷凍干燥得到凍干粉。
上述的蝎蛋白粉也可以用下述方法制得取蝎子活體成蟲，準(zhǔn)備1毫升微型注射器一只、含酒精55％的白酒、消毒棉簽、150毫升透明容器和冰箱。
用55％的白酒對活蝎噴霧消毒，然后用同樣的白酒對活蝎的后腹部進行擦拭消毒，找準(zhǔn)蝎子后腹部第五節(jié)的中間位置，然后將1毫升的微型注射器的針頭插入該位置內(nèi)適當(dāng)深度，插入時注意觀察位于蝎子尾部的尾針的反應(yīng)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)蝎子的尾針快速顫動時，說明針頭已插入蛋白囊。這時開始抽取蛋白囊內(nèi)的蛋白原液，在抽取活蝎活性蛋白分泌囊的原液時，要由輕到重壓迫活蝎的前腹部，而后再從前至后按壓活蝎腹部，邊抽取邊按壓。抽出的蛋白原液呈天藍色。
完成一只蝎子的蛋白原液抽取后，按上述的步驟進行第二只蝎子的蛋白分液的抽取，直至抽取完畢。
注射器容積抽滿后將蛋白原液放入透明容器內(nèi)，并將該透明容器放入冰箱內(nèi)冷藏，抽滿注射器后再次將蛋白原液放入透明容器內(nèi)，逐個完成蛋白分液的抽取，上述的過程得到天藍色蛋白原液。
將上述的蛋白分液進行分離，首先在蛋白原液中加入提取的活蝎自體、體內(nèi)、體外消化分泌液，這種消化分泌液是這樣提取的從活蝎生殖孔前的第三節(jié)中間位置，用注射器直接進針，向后平行插入抽取內(nèi)部的自體、體內(nèi)、體外消化分泌液，抽取時邊抽取邊從后向前有規(guī)律按壓。加入上述消化分泌液后搖勻，在0～3攝氏度下冷藏靜止2小時，這時容器中的蛋白原液便分為兩層，上層為澄清的透明液體，提取上部分的澄清液體，冷凍干燥得到凍干粉。
(2)試驗藥液配制將上述的制備的蝎粉用蒸餾水溶解，分別制成高劑量蝎粉水溶液，每毫升含蝎粉55毫克；蝎粉中劑量水溶液，每毫升含蝎粉27.5毫克；蝎粉低劑量水溶液，每毫升含蝎粉13.75毫克。制作對比試驗藥液，空白對照組為蒸餾水；丙戊酸鈉對照組使用每毫升9.25毫克的丙戊酸鈉。
(3)選雄性小鼠40只，適應(yīng)環(huán)境喂養(yǎng)3天后，隨機分成5組，每組8只。用PTZ誘導(dǎo)癲癇，誘導(dǎo)時間定為上午9:00～12:00，腹部注射PTZ，每1千克重量用PTZ50毫克，觀察發(fā)作潛伏期和發(fā)作等狀況，發(fā)現(xiàn)各組小鼠潛伏期和發(fā)作情況無明顯的差異。
(4)第二天上午8:00分別給各組小鼠喂藥，第一組為服用蒸餾水的對照組，第二組為服用丙戊酸鈉的對照組，第三組為服用蝎粉高劑量的實驗組，第四組為服用蝎粉中劑量的實驗組，第五組為服用蝎粉低劑量的實驗組。其中第一組每只服用蒸餾水0.4毫升，第二組服用上述的丙戊酸鈉水溶液0.4毫升，相當(dāng)于每千克服用185毫克；第三組服用上述的蝎粉高劑量蒸餾水溶液0.4毫升，相當(dāng)于每千克服用1000毫克；第四組服用上述的蝎粉中劑量蒸餾水溶液0.4毫升，相當(dāng)于每千克服用500毫克；第五組服用上述的蝎粉低劑量水溶液0.4毫升，相當(dāng)于每千克服用250毫克。連續(xù)喂服3天，于最后一次給藥后的1小時，腹腔注射PTZ每千克50毫克，觀察小鼠驚厥的潛伏期并按等級進行評分。結(jié)果見下表1、表2。
表1

表2

經(jīng)雙因素方差分析見圖1和圖2(方差分析圖)所示，明顯可以得出抗癲癇作用的比較結(jié)果。
丙戊酸鈉＞蝎粉中劑量＞蝎粉低劑量＞蝎粉高劑量＞蒸餾水。
因此可以得出蝎粉具有較好的抗癲癇作用，蝎蛋白粉可以用作抗癲癇的藥物使用。
根據(jù)動物試驗和人類藥物用量的相關(guān)性和對應(yīng)關(guān)系，可以初步確定人類在使用蝎蛋白粉制做抗癲癇藥物時，其口服用量可以掌握干粉劑量為，每人每天1.2～3.3克之間，分兩次服用，服用該劑量的該抗癲癇活蝎蛋白不會對人體產(chǎn)生任何毒副作用。
權(quán)利要求
1.一種抗癲癇的活蝎活性蛋白，其特征在于其是用注射器直接從消毒后的活蝎體內(nèi)的蛋白囊內(nèi)抽取蛋白原液，并將上述提取的蛋白原液經(jīng)分離后得到的具有抗癲癇作用的活性蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白，其特征在于該蛋白原液是從位于活蝎腹部第三腹節(jié)的中間位置的體內(nèi)蛋白囊內(nèi)提取的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白，其特征在于該蛋白原液是從位于活蝎后腹部第五節(jié)的中間位置的體內(nèi)蛋白囊抽取的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白，其特征在于該提取的蛋白原液的分離方法是在蛋白原液中加少量的無菌蒸餾水和10％無菌葡萄糖液體，充分搖允，在0～3攝氏度冷藏靜止2小時，抽取上清液并冷凍干燥，得到凍干活性蛋白粉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白，其特征在于該提取的蛋白原液的分離方法是在蛋白原液中加入提取的活蝎自體、體內(nèi)、體外消化液，充分搖勻，在0～3攝氏度冷藏靜止2小時，抽取上清液并冷凍干燥，得到凍干活性蛋白粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白的應(yīng)用，其特征在于用于制造治療人體癲癇癥狀的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗癲癇的活蝎活性蛋白的應(yīng)用，其特征在于該抗癲癇活蝎蛋白口服為干粉劑量，每人每天1.2～3.3克，分兩次服用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗癲癇作用的活蝎活性蛋白，其是用注射器直接從消毒后的活蝎體內(nèi)的蛋白囊內(nèi)抽取蛋白原液，并將上述提取的蛋白原液經(jīng)分離后得到的具有抗癲癇作用的活性蛋白。該活蝎活性蛋白可以用來制造治療人體癲癇癥狀的藥物，用于口服，其中口服為每人每天1.2～3.3克干粉劑量，分兩次服用。本發(fā)明的抗癲癇蛋白無毒副作用。
文檔編號A61P25/08GK1491963SQ0312645
公開日2004年4月28日 申請日期2003年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月28日
發(fā)明者尹栩穎 申請人:北京紫竹藥業(yè)有限公司