專利名稱：抗皰疹病毒藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物組合物領(lǐng)域，更具體地說是涉及一種抗EB病毒藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
EB病毒是一種普遍存在于人類的皰疹病毒，屬DNA腫瘤類。EB病毒是由Epstein(愛潑斯坦)與其助手Barr(巴爾)發(fā)現(xiàn)，國(guó)際上把這種人類皰疹病毒命名為EB病毒。EB病毒與鼻咽癌等癌癥和腫瘤的關(guān)系非常密切，血清EB病毒抗體滴度升高已成為鼻咽癌篩查的主要指標(biāo)。從EB病毒追蹤和捕捉鼻咽癌，是早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌的有效途徑之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織粗估，80％的鼻咽癌病人發(fā)生在中國(guó)。有資料表明，中國(guó)南方居民EB病毒VCA/IgA陽性率為5.9-6.25％，北方居民為5.78％，按此推算中國(guó)人口有EB病毒VCA/IgA陽性的居民約7000萬人，至今國(guó)內(nèi)外尚無抑制EB病毒的藥物用于臨床。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能提高免疫功能，抑制EB病毒和腫瘤生長(zhǎng)，增強(qiáng)放、化療效果，減輕放、化療毒副反應(yīng)的抗EB病毒的藥物組合物。
本發(fā)明的目的還在于提供該藥物組合物在制備治療EB病毒抗體陽性藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的還在于提供該藥物組合物在制備治療鼻咽癌、惡性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌、肝癌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的抗EB病毒藥物組合物，含有以下重量份數(shù)的組分斑蝥 0.005-1份黃芪 5-89份優(yōu)選方案為斑蝥 0.01-0.5份黃芪 10-60份本發(fā)明的抗EB病毒藥物組合物，還可以含有如下重量份數(shù)的組分黨參2-86份敗醬草 2-86份女貞子 2-86份優(yōu)選方案為黨參10-60份敗醬草 10-60份女貞子 10-60份本發(fā)明的抗EB病毒藥物組合物，還可以再含有如下重量份數(shù)的組分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份優(yōu)選方案為夏枯草 10-60份山豆根 5-40份本發(fā)明的抗EB病毒藥物組合物可采用常規(guī)的制備工藝，制備成不同的藥物劑型供患者使用，如制成口服液、膠囊、粉劑等。
本發(fā)明的藥物組合物的急性毒性、長(zhǎng)期毒性均表明安全有效，對(duì)Raji細(xì)胞EB病毒EA抗原的表達(dá)有強(qiáng)烈的抑制作用；對(duì)B95-8細(xì)胞EB病毒VCA抗原表達(dá)有強(qiáng)烈的抑制作用；對(duì)正丁酸激發(fā)的B95-8細(xì)胞EB病毒VCA抗原表達(dá)也有強(qiáng)烈的抑制作用；對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化臍血B淋巴細(xì)胞有抑制作用；對(duì)小鼠肉瘤S180、小鼠U14宮頸癌有一定抑制作用，對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的生長(zhǎng)有抑制作用；對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫有較好的促進(jìn)作用；對(duì)放、化療有一定的增效、減毒作用。
本發(fā)明的藥物組合物可用于制備治療EB病毒抗體陽性、鼻咽癌、惡性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌、肝癌藥物。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1稱取斑蝥3g，黃芪5000g，黨參5000g，敗醬草5000g，女貞子5000g，夏枯草4000g，山豆根3000g，按如下工藝生產(chǎn)口服液將斑蝥用足量堿液提取后，濾過、濾液濃縮成A液，將黃芪、黨參、山豆根用水提取后，濾過，濃縮，65％乙醇沉淀，回收乙醇，離心，濃縮為相對(duì)密度為1.2的溶液B液；將敗醬草、女貞子、夏枯草用50％乙醇提取后，離心、濃縮至相對(duì)密度為1.2的溶液，靜置，濾過為C液；合并BC兩液，靜置、濾過后與A液合并，灌裝，滅菌，得口服液，每毫升含生藥材1.63g。
用法口服，一次20ml，一日3次，飯后服用，服前搖勻，一個(gè)月1療程。
實(shí)施例2毒理測(cè)試取實(shí)施例1所得的口服液進(jìn)行常規(guī)毒理測(cè)試小白鼠的急性毒性試驗(yàn)得出半致死量LD50為236.80g/kg；大白鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)表明，本發(fā)明的口服液以110.0g生藥/kg.55.0g生藥/kg和27.5g生藥/kg連續(xù)給藥6個(gè)月中，除中、高劑量組(55.0g生藥/kg、110.0g生藥/kg)血小板(PLT)計(jì)數(shù)較空白對(duì)照組高(p＜0.05、p＜0.01)外，大鼠的行為體征、外觀形態(tài)、血液學(xué)及血液生化學(xué)檢測(cè)、系統(tǒng)尸解、臟器指數(shù)、病理組織學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)異常改變；停藥2周恢復(fù)后，各劑量組上述各項(xiàng)檢測(cè)亦未見異常改變，無延遲性不良影響，提示本發(fā)明的口服液以110.0g生藥/kg，相當(dāng)于成人每日口服量的67.5倍條件下，對(duì)大鼠的一般狀態(tài)、血液學(xué)、血液生化學(xué)、系統(tǒng)尸解、主要臟器重量指數(shù)及組織病理學(xué)檢查均無不良影響和改變，停藥后亦未發(fā)現(xiàn)有延遲性毒性，可以認(rèn)為本發(fā)明長(zhǎng)期連續(xù)使用毒性甚低，推測(cè)臨床用藥的安全性較好，對(duì)大鼠經(jīng)口給藥的無毒劑量為110.0g生藥/kg；Beagle狗長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)表明本發(fā)明對(duì)狗的無毒反應(yīng)的劑量為8.49g/kg。
實(shí)施例3對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化能力的抑制作用方法1.單個(gè)核細(xì)胞的分離按常規(guī)用淋巴細(xì)胞分離液臍帶血單個(gè)核細(xì)胞。
2.EB病毒的制備將含有EB病毒的B95-8猴淋巴母細(xì)胞接種在含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，置5％CO237℃孵箱中培養(yǎng)48h，使細(xì)胞增倍。然后，置33℃孵箱中培養(yǎng)14天，使B95-8絨猴淋巴母細(xì)胞緩慢增殖，使EB病毒大量擴(kuò)增。離心取上清，再用0.45μM濾膜過濾，收集濾液(內(nèi)含EB病毒)，分裝成小管，貯藏在-70℃冰箱備用。
3.對(duì)細(xì)胞無毒濃度的測(cè)定用臺(tái)盼藍(lán)拒染法測(cè)定受試藥物對(duì)B淋巴細(xì)胞的無毒濃度。
4.藥物抑制B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的試驗(yàn)方案(1)藥物預(yù)處理EB病毒1小時(shí)，再與B淋巴細(xì)胞共同孵育2小時(shí)，離心去上清(含藥物和殘存病毒)后，加入含有0.1μg/ml CSA和20％FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個(gè)/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，設(shè)10個(gè)復(fù)孔。未用藥預(yù)處理的EB病毒組為空白對(duì)照。
(2)取實(shí)施例1的口服液與EB病毒一起與B淋巴細(xì)胞同時(shí)孵育2小時(shí)，離心去上清(含藥物和殘存病毒)后，加入含有0.1％CSA和20％FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個(gè)/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，設(shè)10個(gè)復(fù)孔。未用藥處理組為空白對(duì)照。
將上述裝有經(jīng)藥物和EB病毒處理的B淋巴細(xì)胞的96孔板放入5％CO237℃培養(yǎng)，每周換液2次，3-4周后置于倒置顯微鏡下計(jì)算每組的細(xì)胞轉(zhuǎn)化團(tuán)數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)為大于等于25個(gè)細(xì)胞/1轉(zhuǎn)化團(tuán)，計(jì)算10個(gè)復(fù)孔的平均轉(zhuǎn)化團(tuán)數(shù)。按下列公式計(jì)算轉(zhuǎn)化抑制率(％)。 5.結(jié)果見表1和表2表1藥物預(yù)處理對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化力的影響組別 藥物濃度(mg/ml)00.625 1.25 2.50 5.00 10.00平均轉(zhuǎn)化團(tuán)數(shù) 127.490.1 63.8 44.2 40.5 24.0轉(zhuǎn)化抑制率(％) -- 29.3 49.9 65.3 68.2 81.2方差分析F＝10.42，p＜0.01表2藥物和EB病毒與B淋巴細(xì)胞同時(shí)孵育對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化力的影響批號(hào)與組別 藥物濃度(mg/ml)0 0.625 1.25 2.50 5.00 10.00一、平均轉(zhuǎn)化團(tuán)數(shù)127.4 90.1 63.8 44.2 40.5 24.0轉(zhuǎn)化抑制率(％) --29.3 49.9 65.3 68.2 81.2二、平均轉(zhuǎn)化團(tuán)數(shù)135.6 108.7 99.5 83.8 74.7 52.0轉(zhuǎn)化抑制率(％) --29.1 35.1 45.5 51.3 66.1方差分析p＜0.01結(jié)果顯示，EB病毒能使臍血B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，而本發(fā)明藥物對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化臍血B淋巴細(xì)胞有抑制作用。
實(shí)施例4體外MTT法測(cè)定對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞CNE2生長(zhǎng)抑制作用，結(jié)果見表3表3對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞CNE2的細(xì)胞毒作用組別藥物濃度(mg/ml)3.6 4.86.3 8.4 11.3 15.0 20.0IR(％)12.621.8± 40.1±58.7±79.9± 85.3±88.8±±4.7 12.2 14.7 16.0 7.0 6.0 4.0IR(％)為生長(zhǎng)抑制率 實(shí)施例5 對(duì)EB病毒VCA/IgA OD陽性患者的療效EB病毒VCA/IgA OD陽性患者70例，其中治療組、對(duì)照組各35例。
治療組服用實(shí)施例1的口服液，每日口服3次，每次20毫升，30天為一個(gè)療程。
對(duì)照組服用安慰劑，安慰劑對(duì)EB病毒無療效，顏色、味感、外包裝與實(shí)施例1的口服液相似，每日口服3次，每次20毫升，30天為一個(gè)療程。
按雙盲法給藥。
結(jié)果治療組患者33例降低或轉(zhuǎn)陰，有效率94.3％。對(duì)照組7例降低或轉(zhuǎn)陰，有效率20％。治療組治療前VCA/IgA OD為0.696±0.101(α±s)，治療后為0.136±0.029(α±s)，治療前后有顯著差異(P＜0.01)，對(duì)照組無顯著意義。
結(jié)論本發(fā)明藥物能使EB病毒VCA/IgA OD陽性患者降低或轉(zhuǎn)陰，增強(qiáng)免疫功能，具有抑制EB病毒作用。
實(shí)施例6 對(duì)鼻咽癌患者的療效鼻咽癌患者60例，病理為鼻咽低分化鱗癌。放療+藥物組、放療組各30例。放療+藥物組放療開始，同時(shí)服用實(shí)施例1的口服液，一日3次，每次20毫升。放療組單純放療。
結(jié)果放療4000rad時(shí)，放療+藥物組25例的癌灶明顯消退，15例全消退；放療組18例癌灶明顯消退，8例全消退。
結(jié)論本發(fā)明藥物對(duì)鼻咽癌部癌灶有顯著消退作用，具有祛邪、扶正固本、增效減毒作用。
權(quán)利要求
1.一種抗EB病毒藥物組合物，其特征在于含有以下重量份數(shù)的組分斑蝥 0.005-1份黃芪 5-89份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗EB病毒藥物組合物，其特征在于各組分的重量份數(shù)為斑蝥 0.01-0.5份黃芪 10-60份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗EB病毒藥物組合物，其特征在于還含有如下重量份數(shù)的組分黨參2-86份敗醬草 2-86份女貞子 2-86份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗EB病毒藥物組合物，其特征在于還含有如下重量份數(shù)的組分黨參10-60份敗醬草 10-60份女貞子 10-60份。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗EB病毒藥物組合物，其特征在于還含有如下重量份數(shù)的組分夏枯草 2-86份山豆根 2-60份。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗EB病毒藥物組合物，其特征在于還含有如下重量份數(shù)的組分夏枯草 10-60份山豆根 5-40份。
7.權(quán)利要求1至6所述的抗EB病毒藥物組合物在制備治療EB病毒抗體陽性藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1至6所述的抗EB病毒藥物組合物在制備治療鼻咽癌、惡性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌、肝癌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗皰疹病毒藥物組合物，該藥物組合物主要包括斑蝥、黃芪組成，還可以輔以黨參、敗醬草、女貞子、夏枯草、山豆根，該藥物組合物具有提高免疫功能，抑制皰疹病毒和腫瘤生長(zhǎng)，增強(qiáng)放、化療效果，減輕放、化療毒副反應(yīng)等作用，可用于治療皰疹病毒抗體陽性、鼻咽癌、惡性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌、肝癌等。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1480178SQ0312670
公開日2004年3月10日 申請(qǐng)日期2003年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月29日
發(fā)明者李華忠 申請(qǐng)人:廣東省一七七醫(yī)院