專利名稱：柚皮苷在制備支持性治療非典型性肺炎藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及柚皮苷用于制備支持性治療非典型性肺炎(SARS)藥物的用途。
前一段時間在我國內(nèi)流行了非典是由冠狀病毒引起的。對于非典型性肺炎，如不及時治療，將會發(fā)展到呼吸衰竭的程度。常用抗病毒藥物、類固醇藥物治療和一般支持治療，療程20天以上，96-97％預(yù)后良好。預(yù)后差者最短在5天之內(nèi)病情惡化，出現(xiàn)嚴重的肺炎癥狀，死亡率在5-10％。
目前治療非典型性肺炎暫時沒有特效藥，采取的主要是“支持療法”和“對癥治療”。首先是讓病人休息，補充液體，增加營養(yǎng)，密切觀察病情發(fā)展，提高病人自身的免疫力和抵抗力。如果病人出現(xiàn)了進行性呼吸困難、低血氧癥、X光片照出肺部有陰影等情況的話，醫(yī)生還會對其進行三個方面的治療。首先，給病人戴上可以支持通氣的面罩或鼻罩，提供一定壓力的氧氣，以防止肺泡的進一步萎陷。如果病人肺部感染持續(xù)增大，除了消炎外，可能還會加用皮質(zhì)激素。最后，病人一旦出現(xiàn)繼發(fā)性的細菌感染，還要采用積極的抗生素治療。就目前治療來講，醫(yī)生在采取上述方法后，可以支持病人增強自身免疫力，渡過發(fā)病高峰期，之后病毒就會自然回落，病人也就會逐漸痊愈了。已經(jīng)痊愈出院的病人大多數(shù)屬于這種情況，因此目前的治療方法可以說還是有效的。”“支持療法”在非典型性肺炎的治療中有著重要的作用，尋找新的對非典型性肺炎有效的支持性治療藥物，對有效控制和治療非典型性肺炎將具有重要的意義。柚皮苷的結(jié)構(gòu)式
本發(fā)明經(jīng)實驗證實，柚皮苷對急、慢性支氣管炎，咳嗽痰多等病癥具有明顯的療效。
我們通過藥理藥效實驗，對柚皮苷進行實驗動物小白鼠的止咳實驗。結(jié)果表明柚皮苷對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間，與空白對照組比較，均有顯著的延長，在統(tǒng)計學上有顯著差異；與陽性對照藥物氫溴酸右美沙芬片比較，耐受時間延長，療效較陽性對照藥物氫溴酸右美沙芬片顯著。
本發(fā)明的實驗證明，柚皮苷不僅具有很好的治療急、慢性支氣管炎，咳嗽痰多的療效，而且在小鼠動物實驗中幾乎沒有表現(xiàn)出毒性。動物實驗表明，當900mg/kg劑量的柚皮苷口服給藥動物時，動物未見毒性反應(yīng)，該劑量相當于人服用劑量為3-8g柚皮苷/kg體重。
綜上所述，說明柚皮苷具有很好的止咳、化痰效果，未見毒副作用，能減輕非典病人的癥狀，因此，可用于制備支持性治療非典型性肺炎的藥物(柚皮苷藥物)。
本發(fā)明上述所說的以柚皮苷為有效成分制備的用于支持性治療非典型性肺炎的柚皮苷藥物，其成分中可以含有0.1-100％wt.柚皮苷。所說的柚皮苷藥物可以單純由柚皮苷單體組成，或者由作為有效成分的柚皮苷與其他有效成分或/和常規(guī)的制藥輔料組成。
上述所說的柚皮苷藥物可通過選擇適合相應(yīng)劑型的常規(guī)輔料或者不加輔料，用常規(guī)方法制備成所需的不同劑型的藥物制劑。加入的輔料可以為固體、半固體或者液體物質(zhì)，作為柚皮苷的載體、賦型劑或者介質(zhì)。因此，所說的柚皮苷藥物制劑可以為片劑、粉劑、小藥囊劑、甘香酒劑、混懸劑、乳劑、溶液、糖漿、氣霧劑、軟或硬膠囊、無菌注射液等各種劑型。
上述所說的柚皮苷藥物的膠囊劑，其內(nèi)含物含有0.5-100％wt.的柚皮苷；通常可由不少于0.5％wt.的柚皮苷與其他有效成分或/和各種常規(guī)輔料組成。所說的柚皮苷藥物的片劑，其成分中含有不少于0.1％wt.的柚皮苷；可以由不少于0.1％wt.的柚皮苷與其他有效成分或/和各種常規(guī)輔料組成。
本發(fā)明的柚皮苷藥物在0.1-500mg柚皮苷/kg體重/天對治療氣管炎，咳嗽痰多具有很好的療效，優(yōu)選的日劑量約為1-100mg柚皮苷/kg體重。
本發(fā)明的柚皮苷藥物，具有良好的止咳效果，能有效對非典型性肺炎患者進行支持治療。并且具有質(zhì)量穩(wěn)定、服用量小、療效迅速等特點。
本發(fā)明所說的柚皮苷可以是從含柚皮苷的各種藥材，例如枳殼，化橘紅，枳實，柑橘，檸檬，葡萄柚，橘紅，橙等各種藥材中提取獲得的柚皮苷粗品或柚皮苷單體(純品)。提取的方法可以依照以下步驟進行藥材粉碎，經(jīng)過水提取一至多次，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進行柱分離，有機溶劑洗脫；洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品，多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體(純品)。
本發(fā)明所說的柚皮苷也可以根據(jù)Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化學方法進行合成得到。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
各實施例中所涉及的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt，vol/vol，wt/vol計算，除非另有說明。實施例1. 柚皮苷藥物的止咳藥理學實驗1.實驗動物NIH小鼠，雄性，體重18.2-21.7g，普通級標準，共60只。先將動物稱重，編號，選擇健康，體重在18.5-21.0g克的小鼠共45只。按體重大小排序，用隨機分組法分成三組，每組15只。設(shè)陰性對照組，陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。
2.樣品來源與處理1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9％。
2)陽性對照組取氫溴酸右美沙芬兩片溶解于20毫升生理鹽水中，即得陽性對照氫溴酸右美沙芬溶液，氫溴酸右美沙芬濃度為1.5mg/ml。
3)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品為按照前面所述方法從中藥材提取的柚皮苷單體，純度為95％以上。
3.實驗方法(濃氨水噴霧法)小鼠灌胃1小時后，開始接受噴霧。按一定時間噴入濃氨水氣霧，噴霧結(jié)束，立即取出小鼠，觀察有無咳嗽反應(yīng)。觀察一分鐘內(nèi)咳嗽次數(shù)，若1分鐘內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動作(腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。
4.實驗過程用序貫法(上下法)求出引起半數(shù)小鼠咳嗽的噴霧時間(EDT50)。計算R值，若R值大于130％，說明藥物有止咳作用。若R值大于150％，則表明有顯著的止咳作用。計算公式如下

EDT50＝log-1c/n，式中n為動物數(shù)，c為rx值的總和，r為每劑量組的動物數(shù)，x為劑量(即噴霧時間)的對數(shù)。
5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組半數(shù)咳嗽時間及止咳效果見表1。
表1.各樣品的止咳效果

從柚皮苷樣品和陽性對照藥物氫溴酸右美沙芬，經(jīng)口給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間比較，柚皮苷對小鼠耐受時間有顯著的延長，比陽性對照藥品氫溴酸右美沙芬的耐受時間長，在統(tǒng)計學上有顯著差異。說明柚皮苷對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與氫溴酸右美沙芬比較，耐受時間延長，療效顯著。實施例2. 柚皮苷藥物的化痰藥理學實驗1.動物NIH小鼠，雄性，體重17.9-22.1g，清潔級標準，合格證號粵檢證字第2000A037號，2003年1月8日由第一軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。共60只。先將動物稱重，編號，選擇健康，體重在17.9-22.1克的小鼠共50只。按體重大小排序，用隨機區(qū)組分組法分成五組，每組10只。設(shè)陰性對照，陽性對照和柚皮苷藥物高、中、低三個劑量組。均按10ml/kg體重的灌胃量一次經(jīng)口給藥。
2.樣品來源與處理(1)柚皮苷樣品高劑量組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為14.4mg/ml。所用柚皮苷樣品為按照前面所述方法從中藥材提取的柚皮苷單體，純度為95％以上。經(jīng)口給藥。
(2)柚皮苷樣品中劑量組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為4.8mg/ml。所用柚皮苷樣品為按照前面所述方法從中藥材提取的柚皮苷單體，純度為95％以上。經(jīng)口給藥。
(3)柚皮苷樣品低劑量組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品為按照前面所述方法從中藥材提取的柚皮苷單體，純度為95％以上。
(4)陽性藥物采用痰咳凈散劑，取0.2克溶解于10毫升生理鹽水中，即得陽性對照痰咳凈溶液，濃度為20mg/ml。給藥劑量為200mg/kg。
(5)陰性對照組生理鹽水，NaCL含量為0.9％。
3.實驗方法(酚紅法)(1)小鼠禁食不禁水12h。
(2)灌胃給藥。按動物號順序，每只小鼠灌胃后停3分鐘，再灌另外一只，時間間隔為3分鐘，每組10只總共灌胃時間為30分鐘。
(3)各鼠灌胃后半小時，經(jīng)腹腔注射5％酚紅生理鹽水溶液0.2ml。按順序，即每一只小鼠腹腔注射酚紅后3分鐘，再注射另外一只，10只小鼠共30分鐘。
(4)各鼠腹腔注射后半小時，按順序脫頸椎處死小鼠，處死時間間隔3分鐘。動物處死后，仰位固定于手術(shù)板上，剪開頸正中皮膚，分離氣管，用小鑷子支起氣管。
(5)用大注射器吸取生理鹽水沖洗氣管外壁，洗去血液和氣管外壁中的酚紅，濾紙吸干洗液。
(6)先于氣管分支處剪下氣管，再于另一端甲狀軟骨上端剪下氣管(環(huán)狀甲狀軟骨包括在內(nèi))。
(7)將各氣管段放入預(yù)先盛有1.5ml的5％ NaHCO3溶液試管中。
(8)在3分鐘內(nèi)完成上述氣管分離剪切工作。再用同樣方法處理第二只小鼠。方法如上。
(9)將各試管置渦流混合器上震蕩2分鐘，使氣管段中的酚紅釋放出來。
(10)將各試管中溶液于721型分光光度計546nm處測OD值。
(11)將各試管含氣管段放置過夜，24h后重測OD值。
(12)根據(jù)回歸方程計算出酚紅的含量。計算公式Y(jié)＝-0.135302794+14.19137583X。X為OD值，Y為酚紅含量。
(13)根據(jù)酚紅含量和動物體重計算出校正酚紅含量，用SPSS8.0統(tǒng)計軟件進行方差分析。
校正酚紅含量＝酚紅含量(ng)/小鼠體重(kg)4.結(jié)果判斷將各組結(jié)果進行方差分析，當總體有差異時，如果陽性藥物與對照組比較，酚紅含量升高，且有顯著性差異(P＜0.05)，確定實驗可靠。再將各劑量組與對照組比較，酚紅含量明顯升高，且有顯著性差異(P＜0.05)時，認為該劑量組有效。
5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各劑量組酚紅排出量見表2。
表2.柚皮苷藥物的化痰效果(X±S)

a校正酚紅含量＝酚紅含量/動物體重b化痰率＝給藥組/空白對照組×100％酚紅含量計算方法(ng)OD值×14.19137583-0.135302794本發(fā)明的柚皮苷藥物對實驗動物小鼠的化痰實驗表明，本發(fā)明的柚皮苷藥物高，中，低劑量組灌胃給藥對小鼠支氣管分泌液增加與空白對照比較，均顯著增加，在統(tǒng)計學上有顯著差異。與陽性藥物痰咳凈組比較，柚皮苷藥物高，中劑量組對小鼠支氣管分泌液有顯著增加，在統(tǒng)計學上有顯著差異。表明本發(fā)明的柚皮苷藥物化痰效果優(yōu)于陽性藥物痰咳凈。實施例3. 柚皮苷藥物的毒理學實驗在24±1℃的溫度，65±5％的濕度條件下，選取7-8周齡，健康的清潔級NIH小鼠20只，雌雄各半，體重在20-22g。將飼料和水消毒，試驗前和試驗的觀察期內(nèi)，均按正常飼料條件飼養(yǎng)。
將柚皮苷溶解在0.5％Tween80中，濃度為900mg/ml，將該液體經(jīng)口給藥小鼠，給藥劑量為0.2ml/20g小鼠體重。給藥后觀察1，4，8，12小時，以后每12小時觀察一次。觀察死亡情況，每天記錄小鼠體重變化以及其它的癥狀。第10天，斷頸處死小鼠，取各器官進行病理檢查。
在第10天，全部小鼠存活，900mg/kg劑量的柚皮苷未見毒性反應(yīng)。小鼠各器官病理檢查正常，沒有發(fā)現(xiàn)病變，10天內(nèi)小鼠體重未見減輕。因此，說明本發(fā)明的柚皮苷藥物在口服給藥動物時未見毒性。實施例4.柚皮苷膠囊制劑按以下成分配比制備成明膠膠囊柚皮苷 100g干燥淀粉 40g微粉硅膠 10g將輔料與柚皮苷混合均勻，裝入透明膠囊中，即得。裝量150mg/膠囊。實施例5.柚皮苷片劑按以下成分配比制備成片劑柚皮苷750g淀粉722.5g淀粉漿(14％) 25.0g硬脂酸鎂 2.5g總計 1500g將柚皮苷與淀粉均勻混合，加淀粉漿繼續(xù)攪拌使成軟材，用10目尼龍篩制粒，80-90℃通風干燥，干粒加入硬脂酸鎂，經(jīng)過12目篩整粒，混勻，壓成片劑。共得5000片，每片片重約為0.3g。
權(quán)利要求
1.柚皮苷在制備用于支持性治療非典型性肺炎藥物中的應(yīng)用。
2.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷是從含柚皮苷的藥材中提取獲得的柚皮苷粗品或柚皮苷單體。
3.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷的提取方法為將藥材粉碎，經(jīng)過水提取一至多次，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進行柱分離，有機溶劑洗脫；洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體。
4.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷是通過化學方法合成得到的。
5.按照權(quán)利要求1，2，3或4所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物是成分中含有0.1-100％wt.柚皮苷的藥物。
6.按照權(quán)利要求1，2，3或4所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物由單純的柚皮苷組成，或者由作為有效成分的柚皮苷與其他有效成分或/和常規(guī)的制藥輔料組成。
7.按照權(quán)利要求1，2，3或4所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物為膠囊劑，其內(nèi)含物含有0.5-100％wt.的柚皮苷。
8.按照權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物膠囊劑的內(nèi)含物由不少于0.5％wt.的柚皮苷與其他有效成分或/和常規(guī)輔料組成。
9.按照權(quán)利要求1，2，3或4所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物為片劑，其成分中含有不少于0.1％wt.的柚皮苷。
10.按照權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征是所說的柚皮苷藥物片劑的成分由不少于0.1％wt.的柚皮苷與其他有效成分或/和常規(guī)輔料組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及柚皮苷在制備用于支持性治療非典型性肺炎的藥物中的應(yīng)用。以柚皮苷作為有效成分的柚皮苷藥物具有良好的止咳化痰作用，對急、慢性支氣管炎，急、慢性阻塞性肺氣腫，重癥呼吸衰竭綜合癥等，療效顯著，并且未見毒副作用；因此可用于制備支持性治療非典型性肺炎的藥物。
文檔編號A61K9/48GK1468602SQ03126908
公開日2004年1月21日 申請日期2003年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月18日
發(fā)明者蘇薇薇, 王永剛, 方鐵錚, 彭維, 吳忠 申請人:中山大學