專利名稱：楤木總皂苷在制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成份的醫(yī)藥用途領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
痛經(jīng)是指凡在婦女經(jīng)期或行經(jīng)前后，周期性地出現(xiàn)腹疼痛、墜脹、伴腰酸或其他不適，或痛引腰骶，程度嚴(yán)重以至影響生活和工作質(zhì)量。這是一種臨床常見(jiàn)癥狀，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性二種。原發(fā)性痛經(jīng)常無(wú)盆腔器質(zhì)性病變；繼發(fā)性痛經(jīng)多為生殖器官的器質(zhì)性病變所致，如盆腔炎、子宮內(nèi)膜移位等。前者也稱功能性痛經(jīng)，主要受內(nèi)分泌、遺傳、子宮自身?xiàng)l件及精神、神經(jīng)等多種因素的影響?，F(xiàn)代研究表明，子宮內(nèi)膜前列腺素含量增高，可能是造成痛經(jīng)的一個(gè)重要因素。排卵后在孕激素的作用下，分泌期子宮內(nèi)膜能合成和釋放較多的前列腺素，同時(shí)月經(jīng)血中含量也增高，它作用于子宮肌層，通過(guò)降低鈣與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合能力，使細(xì)胞內(nèi)游離鈣增多，從而使其平滑肌收縮，甚至引起痙攣，子宮內(nèi)壓力增高，子宮不能放松以至子宮血流量減少導(dǎo)致子宮缺血、缺鈣而痛經(jīng)。西醫(yī)對(duì)于痛經(jīng)的治療常采用口服止痛藥或激素類藥物，這些藥物長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)形成成癮性或抑制排卵等副作用，因此患者常傾向于使用中藥來(lái)治療。
中醫(yī)早在漢代即對(duì)痛經(jīng)有明確的認(rèn)識(shí)，張仲景在《金匱要略》中認(rèn)為“帶下，經(jīng)水不利，少腹?jié)M痛，經(jīng)一月再見(jiàn)”。病因歸結(jié)為氣滯血瘀，寒凝胞中，濕熱下注或氣血虛弱等。根據(jù)不同的病因采取不同的藥物來(lái)對(duì)癥治療。
楤木是我國(guó)傳統(tǒng)藥材，其中龍牙楤木(Aralia etata)、虎刺楤木(Araliaarmata)、長(zhǎng)刺楤木(Aralia spinifolia)、黃毛楤木(Aralia delaisneana)、遠(yuǎn)東楤木(Aralia schmidtii)等系五加科楤木屬植物。這些植物的葉、莖皮、根皮均含有楤木總皂苷，具有明顯的生理活性，從楤木中提取總皂苷的方法，我們已在CN1355171A專利中公開(kāi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是應(yīng)用楤木總皂苷制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物，克服目前西藥治療副作用大，中藥復(fù)方治療服藥量大等缺點(diǎn)，提供一種副作用小，服用量小的單味中藥提取的有效成分作為治療痛經(jīng)的理想藥物。
當(dāng)本發(fā)明用于制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物時(shí)，其口服或非口服給藥均是安全的。在口服情況下，其可以是任何常規(guī)形式給藥，如散劑、粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、漂浮劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片等；當(dāng)該藥物非口服給藥時(shí)，可采用任何常規(guī)形式，例如栓劑、注射劑如靜脈內(nèi)注射、軟膏劑、經(jīng)皮給藥、吸入劑等。
本發(fā)明制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物是由有效部位或多種有效成分單體與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹(shù)脂、高級(jí)臘等組合成的疏水劑或親水劑。
有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴(yán)重程度和其它類似的因素而改變，口服量為50-1000mg/次·人，每日三次服用栓劑用量為1g/次·人，每日一次。
其治療作用效果是通過(guò)給動(dòng)物灌胃楤木提取物，劑量為25-280mg/kg，連續(xù)五天。結(jié)果顯示可明顯抑制痛經(jīng)的發(fā)生，并可拮抗小鼠二甲苯耳水腫，減少醋酸致扭體反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)，表現(xiàn)出明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛抑菌及活血化瘀作用。
本發(fā)明可通過(guò)下面的實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說(shuō)明。在藥理實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常通過(guò)整體的抗炎效果如抑制小鼠二甲苯耳水腫及體外抑菌效果來(lái)反映其對(duì)婦科盆腔炎，陰道炎等炎癥的治療作用，進(jìn)而達(dá)到對(duì)繼發(fā)性痛經(jīng)的治療作用。
實(shí)驗(yàn)例一、對(duì)催產(chǎn)素止痛經(jīng)反應(yīng)的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物昆明種小鼠，雌性，體重19-22g，購(gòu)自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心。
藥物楤木總皂苷，黃白色粉末，純度達(dá)95％。陽(yáng)性藥婦康寧片，河南同心堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。所有藥物用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度，供灌胃給藥，對(duì)照組同時(shí)給同體積蒸餾水。己烯雌酚注射液由廣州明興制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)950701-1；縮宮素注射液由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)020401。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取50只小鼠，隨機(jī)分為六組婦康寧片0.64g/kg劑量給藥組，楤木總皂苷200、100、50mg/kg三個(gè)劑量給藥組。動(dòng)物分組后，連續(xù)皮下注射己烯雌酚注射液四天，每天一次其中第一、四天給0.2mg/只，第二、三天0.1mg/只。第五天開(kāi)始按組別灌胃給藥，每天一次，連續(xù)給藥五天。末次給藥1小時(shí)后動(dòng)物腹腔注射縮宮素注射液2U/只，記錄30min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 楤木總皂苷對(duì)催產(chǎn)素所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(x±s)組別 動(dòng)物數(shù)(只)扭體次數(shù)(次)空白對(duì)照組 11 8.6±7.34婦康寧片組0.64g/kg 11 1.5±1.86**楤木總皂苷200mg/kg 11 2.6±2.54*楤木總皂苷100mg/kg 11 0.8±0.98**楤木總皂苷50mg/kg11 5.3±3.95注與空白對(duì)照組比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，以下各表均同。
由表1中結(jié)果可見(jiàn)，楤木總皂苷可明顯抑制催產(chǎn)素所致小鼠扭體反應(yīng)的發(fā)生，與空白對(duì)照組比具有明顯差異，即對(duì)痛經(jīng)具有明顯的緩解作用。
實(shí)驗(yàn)例二、對(duì)醋酸致扭體反應(yīng)的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄均可，所有動(dòng)物均購(gòu)于本院動(dòng)物室。
藥物楤木總皂苷，黃白色粉末，純度達(dá)95％。陽(yáng)性藥地奧心血康由中科院成都地奧制藥公司生產(chǎn)，用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度混懸液，供灌胃給藥。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取55只小鼠，隨機(jī)分為五組空白對(duì)照組，地奧心血康120mg/kg劑量給藥組，楤木總皂苷140、70、35mg/kg三個(gè)劑量給藥組。每天一次，連續(xù)給藥五天。末次給藥后1小時(shí)，于小鼠腹腔注射0.7％醋酸10ml/kg，5分鐘后觀察10分鐘內(nèi)小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 楤木總皂苷對(duì)小鼠醋酸致扭體反應(yīng)的影響(x±s)組別 動(dòng)物數(shù)(只) 扭體反應(yīng)次數(shù)(次)空白對(duì)照組11 25.5±11.46地奧心血康120mg/kg11 14.1±8.29*楤木總皂苷140mg/kg11 16.3±7.86*楤木總皂苷70mg/kg 11 19.5±7.67楤木總皂苷35mg/kg 11 18.3±6.57表2中結(jié)果顯示，楤木總皂苷140mg/kg劑量組可明顯抑制醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的發(fā)生。
實(shí)驗(yàn)例三、對(duì)小鼠二甲苯耳水腫的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物昆明種小鼠，體重18-21g，雄性，購(gòu)自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心。
藥物楤木總皂苷，黃白色粉末，純度達(dá)95％。陽(yáng)性藥婦康寧片，河南同心堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。所有藥物用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度，供灌胃給藥，對(duì)照組同時(shí)給同體積蒸餾水。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取55只小鼠，隨機(jī)分為五組空白對(duì)照組，婦康寧片0.64g/kg劑量給藥組，楤木提取物200、100、50mg/kg三個(gè)劑量給藥組。每天一次，連續(xù)給藥五天。末次給藥后1小時(shí)于小鼠右耳滴二甲苯0.03ml/只，2小時(shí)后將動(dòng)物脫臼處死后，以Φ9mm的打孔器打下左右兩耳片，稱重，計(jì)算兩耳片重量差。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 楤木總皂苷對(duì)小鼠二甲苯耳水腫的影響(x±s)組別 動(dòng)物數(shù)(只) 扭體次數(shù)(次)空白對(duì)照組 11 15.8±5.62婦康寧片組0.64g/kg 11 13.1±6.44楤木總皂苷200mg/kg 11 10.5±5.50*楤木總皂苷100mg/kg 11 12.6±3.64楤木總皂苷50mg/kg11 12.9±3.81由表3中結(jié)果可見(jiàn)，楤木總皂苷對(duì)小鼠二甲苯耳水腫具有明顯抑制作用，表現(xiàn)出明顯的抗炎作用。
實(shí)驗(yàn)例四、對(duì)血瘀大鼠血液流變性的影響(1)實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物Wistar大鼠，體重200-250g，雌雄均可，所有動(dòng)物均購(gòu)于本院動(dòng)物室。
藥物楤木總皂苷，黃白色粉末，純度達(dá)95％。陽(yáng)性藥銀杏葉片，由三九企業(yè)集團(tuán)寧波立華制藥有限公司生產(chǎn)。所有藥物用時(shí)均以蒸餾水配成所需濃度的混懸液，供灌胃給藥。鹽酸腎上腺素Adr注射液由北京永康制藥廠生產(chǎn)。
儀器LIANG-100微機(jī)顯示自動(dòng)記錄血液血漿粘度計(jì)由上海醫(yī)科大學(xué)醫(yī)療儀器研究中心出品。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取58只大鼠，隨機(jī)分為六組空白對(duì)照組，血瘀模型組，銀杏葉片182mg/kg劑量給藥組，楤木總皂苷100、50、25mg/kg劑量給藥組。每天一次，連續(xù)給藥五天。第二天給藥后0.5小時(shí)于動(dòng)物皮下注射0.1％Adr0.1ml/只，0.5小時(shí)后將動(dòng)物置于1.5℃水中冰浴5分鐘，24小時(shí)重復(fù)一次，隔24小時(shí)后再給一次Adr。末次注射Adr24小時(shí)后，灌胃楤木總皂苷。于給藥后1小時(shí)，動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg，麻醉，然后腹主動(dòng)脈采血，在血液血漿粘度計(jì)上測(cè)全血比粘度、血漿比粘度、紅細(xì)胞壓積及血沉。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4楤木總皂苷對(duì)血瘀大鼠血液流變學(xué)的影響(x±s)組別 動(dòng)物數(shù) 全血比粘度(s) 血漿比粘度 血沉 紅細(xì)胞壓積(只) 高切 低切 (s)(mm/h) (％)空白對(duì)照組8 5.0±0.72 6.3±1.291.5±0.07 6.0±0.8239.3±1.17模型對(duì)照組10 5.9±1.17 8.0±2.271.7±0.11***6.7±1.2541.4±1.43**銀杏葉片組182mg/kg10 5.4±0.52 6.7±0.841.7±0.14 6.3±0.7140.3±1.25楤木總皂苷100mg/kg10 4.5±0.43ΔΔ7.0±3.111.6±0.03ΔΔ6.0±1.1639.8±1.40Δ楤木總皂苷50mg/kg 10 5.6±1.15 7.7±2.361.6±0.11 6.0±1.2542.1±2.23楤木總皂苷25mg/kg 10 5.5±1.33 7.2±2.451.7±0.06 6.0±1.0540.7±0.95由表4中結(jié)果可見(jiàn)，動(dòng)物連續(xù)注射Adr，同時(shí)又受到寒冷刺激可行成血瘀癥狀，體內(nèi)積壓液流變性各項(xiàng)指標(biāo)發(fā)生明顯改變。而服用楤木總皂苷后，全血比粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積百分率均明顯降低，與模型組有明顯差異，表明其具有活血化瘀作用。
實(shí)施例五、體外抑菌作用菌種白色念珠菌[CMCC(B)98001]、生孢梭菌[CMCC(B)6491]、破傷風(fēng)桿菌[CMCC(B)6406]、淋病奈瑟菌[CMCC(B)98001]、滴蟲(chóng)活體。
培養(yǎng)基普通肉湯、普通肉湯瓊脂、甘露醇鹽瓊脂、血瓊脂、巧克力瓊脂、肝浸液、霉菌瓊脂、生理鹽水，以上培養(yǎng)基制備符合《中國(guó)藥典2000年版》微生物限度檢查法要求。
藥物楤木總皂苷，黃白色粉末，純度達(dá)95％。對(duì)照品青霉素鈉由石家莊制藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果菌液制備將淋病奈瑟菌、生孢梭菌、破傷風(fēng)桿菌、白色念珠菌分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)；淋病奈瑟菌置5％CO2孵箱培養(yǎng)，生孢梭菌、破傷風(fēng)桿菌封蠟蓋置厭氧罐中培養(yǎng)。白色念珠菌置35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，以無(wú)菌生理鹽水稀釋成最終濃度為1∶10000菌液，備用。將滴蟲(chóng)活體加入含滅活血清及半胱氨酸還原劑青霉素250-1000U/ml、鏈霉素0.5mg/ml、氯霉素0.5mg/ml，pH值為5.8-6.0肝浸液培養(yǎng)基中，經(jīng)35±2℃培養(yǎng)備用。
供試品制備用試管法將楤木總皂苷分別稀釋到最終濃度為50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625mg/ml，將稀釋各濃度的供試液分別加入備用的5種菌液中各0.1ml；另取2只盛有普通肉湯試管作空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)將青霉素鈉按上述濃度稀釋，同作空白和陽(yáng)性對(duì)照。各種含藥細(xì)菌按前述條件培養(yǎng)24小時(shí)后，記錄最小抑菌濃度MIC。另外將供試品和對(duì)照藥用肝浸液培養(yǎng)基稀釋成上述各濃度，分別加入滴蟲(chóng)培養(yǎng)物0.1ml，搖勻，同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照，同上方法培養(yǎng)，48小時(shí)后取出，10×40低倍鏡觀察結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照管可見(jiàn)許多運(yùn)動(dòng)活潑滴蟲(chóng)，供試品如有最小抑菌作用，則鏡下看不到滴蟲(chóng)活體。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5楤木總皂苷體外抑菌試驗(yàn)細(xì)菌名稱陰 陽(yáng)楤木總皂苷藥物濃度及MIC(mg/ml)性 性 50 25 12.5 6.25 3.125 1.5625白色念珠菌 - +---++ +生孢梭菌- +----+ +破傷風(fēng)桿菌 - +----+ +淋病奈瑟菌 - +--+++ +滴 蟲(chóng) - +---++ +細(xì)菌名稱陰 陽(yáng)青霉素藥物濃度及MIC(mg/ml)性 性 50 25 12.5 6.25 3.125 1.5625白色念珠菌 - +----- +生孢梭菌- +----- +破傷風(fēng)桿菌 - +----- +淋病奈瑟菌 - +----- +滴 蟲(chóng) - +----- +由表5中結(jié)果可見(jiàn)，楤木總皂苷對(duì)白色念珠、生孢梭菌、破傷風(fēng)桿菌及滴蟲(chóng)均有較強(qiáng)的抑制作用，其MIC分別為12.5mg/ml和6.25mg/kg；對(duì)淋病奈瑟菌輕度敏感。
實(shí)驗(yàn)例六、毒性實(shí)驗(yàn)(1)急性毒性通過(guò)對(duì)小鼠和大鼠灌胃及靜脈注射的LD50測(cè)定結(jié)果表明，小鼠灌胃楤木總皂苷LD50為2.34g/kg，95％可信限為1.919-2.g49g/kg；大鼠灌胃楤木總皂苷LD50為2.25g/kg，95％可信限為1.979-2.555g/kg；小鼠靜脈注射楤木總皂苷LD50為184.27g/kg，95％可信限為1.979-2.555g/kg；大鼠靜脈注射木總皂苷LD50為184.27g/kg，95％可信限為152.082-218.827g/kg。
(2)長(zhǎng)期毒性楤木總皂苷以800、470、235mg/kg劑量給大鼠灌胃60天，高劑量出現(xiàn)毒性反應(yīng)，并可能有胃腸刺激性。中、低劑量對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)狀態(tài)、血液學(xué)及血液生化學(xué)無(wú)明顯影響，主要臟器亦未見(jiàn)藥物引起的明顯的病理改變，其中高劑量為臨床用量的93.3倍。以161、96.8、48.8mg/kg劑量給犬口服60天，高劑量組有個(gè)別動(dòng)物體重下降，開(kāi)始有嘔吐、拒食藥物現(xiàn)象，而對(duì)所有動(dòng)物生長(zhǎng)狀態(tài)、臟器指數(shù)及血液學(xué)、血液生物學(xué)、尿常規(guī)無(wú)明顯影響，主要臟器亦無(wú)藥物引起的明顯病理改變。
上述結(jié)果證明楤木總皂苷具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、活血化瘀等作用，這為臨床治療婦科炎癥、痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛提供了理論依據(jù)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一膠囊劑楤木總皂苷350g，淀粉150g，混勻，裝入零號(hào)膠囊，制成1000粒，規(guī)格0.5g/粒。成人口服，1粒/次，一日三次，一個(gè)月為一療程。
實(shí)施例二口服液楤木總皂苷1.75g，加水700ml，加熱溶解，放冷，濾過(guò)，濾液加蔗糖200g，再加水至1000ml，分裝，規(guī)格10ml/支。成人口服，20ml/次。一日三次，一個(gè)月為一個(gè)療程。
實(shí)施例三栓劑楤木總皂苷1000g，甘油明膠2000g，制成1000顆，規(guī)格3g/顆。陰道給藥，每晚一次，每次一顆，七天為一療程。
權(quán)利要求
1.楤木總皂苷在制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及楤木總皂苷在制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物中的應(yīng)用。屬于中藥有效成份的醫(yī)藥用途領(lǐng)域。本發(fā)明應(yīng)用楤木總皂苷來(lái)制備治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的藥物，克服目前西藥治療副作用大，中藥復(fù)方治療服藥量大等缺點(diǎn)，提供一種副作用小，服用量小的單味中藥提取的有效成分作為治療痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛的理想藥物。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1481803SQ0312762
公開(kāi)日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2003年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月4日
發(fā)明者孫曉波, 徐惠波, 崔東濱, 溫富春, 丁濤, 王淑琴, 張偉, 紀(jì)鳳蘭, 張殿文 申請(qǐng)人:孫曉波, 徐惠波