專利名稱：注射用雙黃連在制備用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
專利說明注射用雙黃連在制備用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥 的藥物中的應(yīng)用 本發(fā)明涉及注射用雙黃連的藥物新用途，具體涉及注射用雙黃連在制備用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)的藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。SARS是指流行的一種呼吸道傳染病，傳染途徑主要通過短距離飛沫傳播、接觸病人呼吸道分泌物及密切接觸傳播。人群普遍易感，醫(yī)護(hù)人員是本病的高危人群。臨床主要表現(xiàn)為肺炎，典型癥狀為發(fā)高燒(＞38℃)、干咳、呼吸急促或呼吸困難。世界衛(wèi)生組織于2003年3月15日取名為嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥，2003年4月16日正式宣布SARS的致病原為一種新的冠狀病毒，命名為SARS病毒。冠狀病毒，是一種ssRNA(+)病毒，在電鏡下，病毒顆粒呈不規(guī)則形，直徑約為60～220nm，有包膜，其表面有梅花形的膜粒，狀如皇冠，故稱為冠狀病毒(coronavirus)。顆粒中心在負(fù)染電鏡下呈不定形態(tài)，核殼體呈疏松狀態(tài)。包膜上有兩種糖蛋白S蛋白刺突糖蛋白，是主要的抗原，與受體結(jié)合，使細(xì)胞融合。M蛋白跨膜，參與包膜形成。在一些亞類中，還有第三種糖蛋白，HE——紅細(xì)胞凝集素酯酶?；蚪MRNA與堿性磷酸蛋白N結(jié)合。SARS病毒為正鏈的單鏈RNA病毒，復(fù)制不經(jīng)過DNA中間體，使用標(biāo)準(zhǔn)密碼子。
人冠狀病毒分別屬于OC43和229E兩個抗原型，它是引起人類上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒。兒童的冠狀病毒感染并不常見。
注射用雙黃連是由金銀花、連翹、黃芩三味中藥組成，經(jīng)過提取、濃縮、醇沉、水沉等方法的處理后，又經(jīng)過噴霧干燥或冷凍干燥而制成的中藥粉針劑。注射用雙黃連是《中國藥典》2000年版收載的藥物，具有成熟穩(wěn)定的工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。注射用雙黃連的主要用途是用于外感風(fēng)熱，邪在肺衛(wèi)，熱毒內(nèi)盛，證見發(fā)熱，微惡風(fēng)寒或不惡寒，咳嗽氣促，咳痰色黃，咽紅腫痛；急性上呼吸道感染、急性支氣管炎、急性扁桃體炎、輕型肺炎見上述證侯者。但到目前為止尚未見有關(guān)注射用雙黃連對由冠狀病毒引起的嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)具有治療作用的報道。針對嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS)，目前尚無特效治療藥物，而且，其嚴(yán)重的傳染性，廣泛的流行性，發(fā)病的急速性，較高的死亡率，給人類健康帶來了極大的威脅，給社會安定帶來了極大震動，所以，尋找一種能夠預(yù)防和治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS)的特效藥物成為當(dāng)務(wù)之急。本發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)認(rèn)真篩選和研究，通過科學(xué)試驗，終于找到了有較好療效的治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS)的注射用雙黃連，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的就是提供一種注射用雙黃連的新的藥物用途，即注射用雙黃連在制備用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)的藥物中的應(yīng)用。
注射用雙黃連的臨床應(yīng)用非常廣泛，其抗菌、抗病毒的作用十分明顯。尤其是在抗病毒方面，對于流行性感冒病毒、柯薩奇病毒B3，A16、呼吸道合胞病毒、腺病毒III型、單純皰疹病毒I及II型、新型腸道病毒71型的抑制作用十分明顯。對脊髓灰質(zhì)炎病毒III型、?？刹《?型、麻疹病毒、水泡性口炎病毒也有抑制作用，另外，注射用雙黃連對細(xì)菌也有廣泛的抑制作用，對金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、鏈球菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等均有一定的抑制作用，所以臨床上經(jīng)常用于流行性感冒、肺炎、支氣管炎、心肌炎、流行性腮腺炎等病的治療。
注射用雙黃連體外抗冠狀病毒的藥效學(xué)試驗，在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)，采用病毒CPE法，觀察不同濃度的注射用雙黃連藥物對冠狀病毒的抑制效果，試驗結(jié)果表明注射用雙黃連藥物具有抗冠狀病毒的作用。注射用雙黃連藥物體外抗冠狀病毒的藥效學(xué)試驗試驗材料試驗藥物注射用雙黃連(批準(zhǔn)文號國藥準(zhǔn)字Z10960058)，批號0303009，600mg/支，由哈藥集團(tuán)中藥二廠提供。
陽性對照藥物注射用更昔洛韋批號020802，由湖北科益藥業(yè)股份有限公司提供。
細(xì)胞人宮頸癌傳代細(xì)胞(HELA)由中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所病毒資源中心提供。
病毒冠狀病毒9號(SARS病人咽拭子分離株9號)由中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所病毒資源中心提供。
CO2培養(yǎng)箱由NUAIR US AUTO FLOW提供。試驗方法預(yù)備試驗1、注射用雙黃連對HELA細(xì)胞的毒性測定HELA細(xì)胞以40萬/ml濃度接種96孔培養(yǎng)板，37℃、5％CO2培養(yǎng)24小時，加入驗證藥物，驗證藥物注射用雙黃連倍比稀釋為6000μg/ml-11.7μg/ml，陽性對照藥物更昔洛韋倍比稀釋為6000μg/ml-11.7μg/ml，每濃度接種3孔，每孔100μl，同時設(shè)正常細(xì)胞對照，37℃、5％CO2培養(yǎng)6天，每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化(CPE)，以25％以下形態(tài)變化為“+”，26％-50％形態(tài)變化為“++”，51％-75％形態(tài)變化為“+++”，76％-100％形態(tài)變化為“++++”，用Reed-Muench法，計算藥物半數(shù)中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。2、在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對冠狀病毒9號的毒力測定病毒CPE法HELA細(xì)胞以40萬/ml濃度接種96孔培養(yǎng)板，37℃、5％CO2培養(yǎng)24小時，加入病毒液，病毒稀釋10-1-10-8，8個濃度，每濃度3孔，每孔100μl，同時設(shè)正常細(xì)胞對照，37℃、5％CO2培養(yǎng)5-7天，每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化(CPE)，以25％以下形態(tài)變化為“+”，26％-50％形態(tài)變化為“++”，51％-75％形態(tài)變化為“+++”，76％-100％形態(tài)變化為“++++”，用Reed-Muench法，計算病毒半數(shù)感染濃度TCID50。正式試驗注射用雙黃連在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對冠狀病毒9號的抑制作用試驗?zāi)康?br> 觀察不同濃度的注射用雙黃連在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對冠狀病毒9號的抑制作用，試驗采用病毒細(xì)胞(CPE)法，計算藥物半數(shù)有效濃度(IC50)和最小有效濃度(MIC)及治療指數(shù)(TI)，判斷藥效。
HELA細(xì)胞以40萬/ml濃度接種96孔培養(yǎng)板，37℃、5％CO2培養(yǎng)24小時，細(xì)胞培養(yǎng)至單層，棄掉培養(yǎng)液，加入100 TCID50的冠狀病毒液，同時設(shè)正常細(xì)胞對照，37℃、5％CO2吸附2小時后，棄掉病毒液，加入不同濃度的注射用雙黃連藥液，藥物選用對細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)2倍稀釋10個濃度即1500μg/ml-3.9μg/ml，陽性對照藥物更昔洛韋為2倍稀釋10個濃度即375μg/ml-0.75μg/ml，將稀釋的藥物分別加入細(xì)胞孔內(nèi)，每濃度3孔，同時設(shè)正常細(xì)胞對照，37℃、5％CO2培養(yǎng)5-7天，每天在倒置顯微鏡下觀察病毒CPE，用Reed-Muench法，計算藥物半數(shù)有效濃度(IC50)和最小有效濃度(MIC)及治療指數(shù)(TI)，判斷藥效。試驗結(jié)果1.注射用雙黃連對HELA細(xì)胞的毒性試驗結(jié)果驗證藥物注射用雙黃連最大無毒濃度(TD0)為750±0μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為1500±0μg/ml。陽性對照藥物注射用更昔洛韋最大無毒濃度(TD0)為＞6000±0μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為＞6000±0μg/ml。2.在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對冠狀病毒9號的毒力測定結(jié)果TCID50冠狀病毒9號半數(shù)感染濃度TCID50為10-6正式試驗結(jié)果注射用雙黃連在HELA細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對冠狀病毒9號的抑制作用驗證藥物注射用雙黃連CPE法，藥物半數(shù)有效濃度(IC50)為6.8±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為11.7±0μg/ml，治療指數(shù)(TI)為64。陽性對照藥物注射用更昔洛韋CPE法，藥物半數(shù)有效濃度(IC50)為11.7±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為23.44±0μg/ml，治療指數(shù)(TI)為256。
由于本發(fā)明首次公開了注射用雙黃連對嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)的治療作用，所以，該藥物在其包裝或說明書等標(biāo)識上或者在其它任何宣傳品上只要注明或提示對嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥或急性傳染性非典型肺炎或SARS具有治療作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。[討論]通過以上嚴(yán)格的科學(xué)試驗，我們得出一個很好的結(jié)論，注射用雙黃連具有很強(qiáng)的抗冠狀病毒的療效，而冠狀病毒正是引起嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)的病原體，因此，注射用雙黃連該用途的發(fā)現(xiàn)，將會為我國乃至世界各地嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)疫情的控制起到積極作用，為廣大患者解除病痛提供治病良藥。
權(quán)利要求
1.注射用雙黃連在制備用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用雙黃連藥物新用途，即注射用雙黃連對由冠狀病毒引起的嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(急性傳染性非典型肺炎即SARS)具有明確的治療效果，可用于該病的治療。
文檔編號A61P31/00GK1448179SQ0312872
公開日2003年10月15日 申請日期2003年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月6日
發(fā)明者賈繼明, 李大平, 彭可讓, 王英新, 段淑敏, 趙新生, 溫瑞福, 黃晶晶 申請人:哈藥集團(tuán)中藥二廠