專利名稱：山楂葉總黃酮的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物總黃酮的提取方法，確切地說是山楂葉總黃酮的提取方法。
背景技術(shù)：
藥理活性研究表明山楂葉總黃酮提取物可降低高血壓大鼠的血壓，并將其降至正常血壓，對(duì)具有正常血壓大鼠的血壓幾乎沒有影響；山楂葉總黃酮提取物具有明顯降低大鼠血清總膽固醇和甘油三脂(TG)(P＜0.05)的作用，且呈一定的量效關(guān)系；對(duì)食餌性高血脂家兔的降血脂實(shí)驗(yàn)表明，山楂葉總黃酮提取物可顯著降低高血脂家兔血清中(TC)(P＜0.05)，同時(shí)山楂葉總黃酮提取物具有較好的預(yù)防高脂肪癥作用。作者對(duì)從山楂葉總黃酮提取物中分離得到的7個(gè)黃酮化合物進(jìn)行抗血小板聚集作用實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明無論C-苷化合物還是O-苷化合物都具有一定的抗血小板聚集作用。因此，山楂葉總黃酮提取物作為一種生理活性物質(zhì)，應(yīng)用十分廣泛，不僅可用作食品而且還可用作多種藥品、各種保健品的配制原料。由于山楂葉總黃酮提取物具有極高的應(yīng)用價(jià)值及前景。所以，近些年來，包括我國在內(nèi)的許多國家的專家、學(xué)者都對(duì)從山楂葉中提取山楂總黃酮的方法進(jìn)行了廣泛而深入的研究，取得可喜的成就。但歸納起來最常用的方法是將山楂葉的醇提取物或水提取物懸浮于水中，依次用不同極性的溶劑萃取，常用的溶劑有氯仿、乙酸乙酯和水飽和正丁醇。山楂總黃酮多集中于正丁醇層。減壓回收正丁醇；浸膏用濃度為95％的乙醇溶解，并使其通過活性碳柱；收集流出液并減壓回收乙醇，制得成品。利用這種方法制取山楂總黃酮存在的主要問題是(1)產(chǎn)品成本較高，(2)產(chǎn)品中的雜質(zhì)，特別是有害物質(zhì)的含量較高，其中重金屬含量超過5ppm，農(nóng)藥殘留量大于10ppb，超過規(guī)定限度，同時(shí)還不可避免地殘留毒性溶劑正丁醇等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為人們提供一種山楂葉總黃酮的提取方法，以便使利用該方法生產(chǎn)的山楂總黃酮成本低，雜質(zhì)含量少，并使其生產(chǎn)過程對(duì)環(huán)境無污染。
本發(fā)明提供的制備山楂總黃酮的方法包括以下工藝步驟A山楂葉浸泡及煎煮(A)按山楂葉與自來水的重量份數(shù)比為1∶8～16向山楂葉中加入水，常溫浸泡0.5～2小時(shí)，然后，將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～3小時(shí)，之后，濾渣取液；(B)按所述山楂葉與水的重量份數(shù)比為1∶6～10向工藝步驟(A)濾出的渣中加入水，并將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～2.5小時(shí)，之后，濾渣取液；(C)按所述山楂葉與水的重量份數(shù)比為1∶6～8向工藝步驟(B)濾出的渣中加入水，并將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～1.5小時(shí)，之后，濾渣取液；B液體濃縮將分別通過所述各工藝步驟(A)、(B)、(C)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其重量與所述山楂葉重量之比為1～3∶1止；C吸附洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔吸附樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再按蒸餾水與濃縮后液體的體積之比為0.1～1∶1的比例取用蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為50～70％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的總黃酮被完全洗脫止，并收集洗脫液；D脫色按藥用硅藻土與所述山楂葉的重量份數(shù)比為2～6∶100的比例取用藥用硅藻土并加入所述洗脫液中，加熱回流20～60分鐘，然后，使該混合物通過澄渣板過濾，并收集濾液；E去雜使所述濾液自彼此串聯(lián)的陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂中通過，使其中的離子與重金屬被濾除，并收集濾液；F成品回收、干燥回收工序E制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到山楂總黃酮成品。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)后與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)1.產(chǎn)品成本低；2.成品中的重金屬含量小于5ppm，農(nóng)藥殘留量小于10ppb，因而其雜質(zhì)含量低；3.消除毒性溶劑正丁醇的殘留；4.生產(chǎn)過程對(duì)環(huán)境無污染。
具體實(shí)施例實(shí)施例1A山楂葉浸泡及煎煮(A)取山楂葉1kg放入容器內(nèi)，再向容器中加入自來水8升，常溫浸泡1小時(shí)，然后，將兩者的混合物加熱至70℃，保溫3小時(shí)，之后，濾渣取液；(B)向工藝步驟(A)濾出的渣中加入自來水6升，并將兩者的混合物加熱至70℃，保溫2.5小時(shí)，之后，濾渣取液；(C)向工藝步驟(B)濾出的渣中加入自來水6升，并將兩者的混合物加熱至70℃，保溫1.5小時(shí)，之后，濾渣取液；B液體濃縮將分別通過所述各工藝步驟(A)、(B)、(C)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其濃縮至約3升為止；C吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔吸附樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用3升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為70％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的總黃酮被完全洗脫止，并收集洗脫液；D脫色將藥用硅藻土0.03kg加入所述洗脫液中，加熱至70℃，并在此溫度條件使兩者的混合物回流45分鐘，然后，使該混合物通過澄渣板過濾，并收集濾液；E去雜使所述濾液自彼此串聯(lián)的732型陽離子交換樹脂和717型陰離子交換樹脂中通過，使其中的離子與重金屬被濾除，并收集濾液；F成品回收、干燥回收工序E制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到山楂葉總黃酮成品。
實(shí)施例2
A山楂葉浸泡及煎煮(A)取山楂葉1kg放入容器內(nèi)，再向容器中加入水16升，常溫浸泡2小時(shí)，然后，將兩者的混合物加熱至80℃，保溫2小時(shí)，之后，濾渣取液；(B)向工藝步驟(A)濾出的渣中加入水10升，并將兩者的混合物加熱至80℃，保溫2小時(shí)，之后，濾渣取液；(C)向工藝步驟(B)濾出的渣中加入水8升，并將兩者的混合物加熱至80℃，保溫1.2小時(shí)，之后，濾渣取液；B液體濃縮將分別通過所述各工藝步驟(A)、(B)、(C)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其濃縮至約1升為止；C吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔吸附樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.5升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為50％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的總黃酮被完全洗脫止，并收集洗脫液；D脫色將藥用硅藻土0.06kg加入所述洗脫液中，加熱至80℃，并在此溫度條件使兩者的混合物回流60分鐘，然后，使該混合物通過澄渣板過濾，并收集濾液；E去雜使所述濾液自彼此串聯(lián)的732型陽離子交換樹脂和717型陰離子交換樹脂中通過，使其中的離子與重金屬被濾除，并收集濾液；F成品回收、干燥回收工序E制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到山楂葉總黃酮成品。
實(shí)施例3A山楂葉浸泡及煎煮(A)取山楂葉1kg放入容器內(nèi)，再向容器中加入水12升，常溫浸泡0.5小時(shí)，然后，將兩者的混合物加熱至100℃，保溫1小時(shí)，之后，濾渣取液；(B)向工藝步驟(A)濾出的渣中加入水8升，并將兩者的混合物加熱至100℃，保溫1小時(shí)，之后，濾渣取液；(C)向工藝步驟(B)濾出的渣中加入水7升，并將兩者的混合物加熱至100℃，保溫1小時(shí)，之后，濾渣取液；B液體濃縮將分別通過所述各工藝步驟(A)、(B)、(C)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其濃縮至約2升為止；C吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔吸附樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.2升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為70％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的總黃酮被完全洗脫止，并收集洗脫液；D脫色將藥用硅藻土0.02kg加入所述洗脫液中，加熱至75℃，并在此溫度條件使兩者的混合物回流20分鐘，然后，使該混合物通過澄渣板過濾，并收集濾液；E去雜使所述濾液自彼此串聯(lián)的732型陽離子交換樹脂和717型陰離子交換樹脂中通過，使其中的離子與重金屬被濾除，并收集濾液；F成品回收、干燥回收工序E制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到山楂葉總黃酮成品。
按本實(shí)施例方法制取的山楂葉總黃酮產(chǎn)品1.收率(重量百分比)為4.8～5.5％。
2.按比色法檢測(cè)，該產(chǎn)品的含量≥80％。
3.按HPLC法檢測(cè)(1)山楂葉提取物經(jīng)酸水解后，牡荊素的含量為5.44％(2)山楂葉提取物經(jīng)酸水解后，槲皮素的含量為2.30％4.成分分離鑒定了20種黃酮成分，分別為PinnatifidaA、PinnatifidaB、PinnatifidaC、PinnatifidaD、PinnatifidaE、PinnatifidaF、8-C-β-D-(2”-O-乙?；?呋喃葡萄糖芹菜素、3”-乙?；登G素、牡荊素、6”-O-乙酰基牡荊素、2”-O-乙?；登G素、2”-O-鼠李糖基牡荊素、槲皮素、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基槲皮素、3-O-β-D-吡喃半乳糖基槲皮素、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)1)-a-L-鼠李糖槲皮素、3-O-β-D-吡喃半乳糖(6→1)1)-a-L-鼠李糖槲皮素、山奈酚、7-O-a-L-鼠李糖-3-O-β-D-吡喃葡萄糖山奈酚、淫羊藿苷。
5.雜質(zhì)含量重金屬≤5ppm、農(nóng)藥殘留量，既“666”、“DDT”、“5氯硝基苯”的殘留量均≤10ppb本發(fā)明所述的比色法可參見宋學(xué)華等藥物分析雜志，1992；12(1)28。
本發(fā)明所述的HPLC法可參見張培成沈陽藥科大學(xué)博士學(xué)位論文山楂化學(xué)成分及其藥理活性的研究(1999年9月)。
權(quán)利要求
1.一種山楂葉總黃酮的提取方法，其特征在于它由以下工藝步驟組成A山楂葉浸泡及煎煮(A)山楂葉與水的重量份數(shù)比為1∶8～16，向山楂葉中加入水，常溫浸泡0.5～2小時(shí)，然后，將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～3小時(shí)，之后，濾渣取液；(B)所述山楂葉與水的重量份數(shù)比為1∶6～10向工藝步驟(A)濾出的渣中加入水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～2.5小時(shí)，之后，濾渣取液；(C)按所述山楂葉與水的重量份數(shù)比為1∶6～8向工藝步驟(B)濾出的渣中加入水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～1.5小時(shí)，之后，濾渣取液；B液體濃縮將分別通過所述各工藝步驟(A)、(B)、(C)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其重量與所述山楂葉重量之比為1～3∶1止；C吸附洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔吸附樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再按蒸餾水與濃縮后液體的體積之比為0.1～1∶1的比例取用蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為50～70％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的總黃酮被完全洗脫止，并收集洗脫液；D脫色按藥用硅藻土與所述山楂葉的重量份數(shù)比為2～6∶100的比例取用藥用硅藻土并加入所述洗脫液中，加熱回流20～60分鐘，然后，使該混合物通過澄渣板過濾，并收集濾液；E去雜使所述濾液自彼此串聯(lián)的陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂中通過，使其中的離子與重金屬被濾除，并收集濾液；F成品回收、干燥回收工序E制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到山楂總黃酮成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山楂葉總黃酮的提取方法，該方法包括以下工藝步驟采用水作起步溶劑，將山楂葉浸泡，煎煮后濾渣取液；將液體減壓濃縮；濃縮液體經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附，乙醇洗脫，得洗脫液；洗脫液中加入硅藻土，加熱回流脫色并收集濾液；使濾液通過交換樹脂去雜；最后回收濾液中的乙醇，并將余留物質(zhì)干燥，即得成品。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)后與現(xiàn)有技術(shù)相比具有成本低，雜質(zhì)含量少，生產(chǎn)過程對(duì)環(huán)境無污染等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P9/12GK1597678SQ0313395
公開日2005年3月23日 申請(qǐng)日期2003年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月15日
發(fā)明者徐綏緒, 張培成, 路金才, 宋少江, 李仁 , 陳照國, 李寶新, 楊樹清, 金秀芬 申請(qǐng)人:遼寧鑫泰天然藥物研究所