專利名稱：5－羥甲基糠醛類用于制備神經(jīng)系統(tǒng)用藥的用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及5-羥甲基糠醛及其衍生物在制備用于預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和疾病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
5-羥甲基糠醛全名5-羥甲基-2-糠醛(5-HMF)，其結(jié)構(gòu)式如下 該化合物可以化學合成，也可直接在市場上購得，如可從Fluka試劑公司購得。5-HMF的原用途多為應用于含糖類飲料、腹膜透析液質(zhì)量監(jiān)控，可通過高效液相色譜法對其進行含量分析。
神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和疾病包括腦、脊髓和外周神經(jīng)的功能和結(jié)構(gòu)異常改變，常見血循環(huán)障礙引起的腦血管病、腦缺氧、機械性損傷引起的腦震蕩、腦水腫、神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)損傷、神經(jīng)壓迫癥或神經(jīng)炎癥等。這些疾病的主要病理機制是神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)自由基產(chǎn)生過多、細胞內(nèi)鈣離子含量過高等因素造成神經(jīng)細胞水腫或死亡的病理過程。針對這些機制研制有效的防治神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物。
本發(fā)明人經(jīng)過細胞和動物試驗發(fā)現(xiàn)，5-羥甲基糠醛(5-HMF)在減輕神經(jīng)缺血缺氧以及神經(jīng)損傷導致的功能障礙及組織水腫，提高自由基清除能力，減少自由基損傷，以及減輕神經(jīng)細胞鈣超載等方面具有良好的效果，在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病，預防神經(jīng)細胞損傷等方面有良好的開發(fā)利用前景，從而完成了本發(fā)明。
由此，本發(fā)明涉及5-羥甲基糠醛及其衍生物用于制備預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物的用途。其中術(shù)語“神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀”包括但不限于腦血管病、腦缺氧、機械性損傷引起的腦震蕩、腦水腫、神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)損傷、腦或脊髓腫瘤、營養(yǎng)與代謝性神經(jīng)疾病(如糖尿病性腦病及周圍神經(jīng)病)、神經(jīng)放射性損傷、中樞及外周神經(jīng)壓迫或炎癥及其引起的頭暈、頭痛、睡眠障礙、神經(jīng)衰弱、疼痛、麻木、肌肉萎縮等癥狀。
本發(fā)明中所用術(shù)語“衍生物”是指5-羥甲基糠醛在3或4位被C1-6烷基或鹵素取代的衍生物以及其與可藥用有機酸如乙酸或無機酸如鹽酸等形成的酯。
本發(fā)明還涉及一種用于預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物組合物，其包含有效量的5-羥甲基糠醛或其衍生物作為活性成分。所述藥物組合物還可包含一種或多種可藥用載體，所述載體可以是現(xiàn)有技術(shù)中廣泛使用的各種載體，如賦形劑，例如水。本發(fā)明的藥物組合物還可以包含一種或多種其它組分，如香味劑、著色劑、甜味劑等。
本發(fā)明的藥物組合物可以按現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法如混合、制粒、壓片等來制備，以多種劑型施用，如口服劑型，例如片劑、膠囊等；也可以制成注射制劑。
本發(fā)明進一步涉及預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的方法，包括對需要治療的患者施用有效量的5-羥甲基糠醛或其衍生物。5-HMF或其衍生物的口服劑量一般為0.5-50mg/Kg體重/日，注射劑量一般為0.1-10mg/Kg體重/日。
具體實施例方式
以下結(jié)合實施例來說明本發(fā)明。
實施例制備實施例15-HMF 50mg，羧甲基纖維素240mg，乳糖100mg，硬脂酸鎂10mg。將上述組分粉碎，混合，壓片，制成片劑。
制備實施例25-HMF 25mg和生理鹽水100mL，混合，制成針劑。
藥效學試驗(一)5-羥甲基糠醛(5-HMF)防治神經(jīng)缺血缺氧的作用實施例1.5-HMF提高腦缺血缺氧小鼠模型學習記憶能力(1)實驗目的雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通可以造成急性腦缺血以及缺氧損傷，引起神經(jīng)元缺血缺氧后功能減退，包括學習記憶功能降低。本實驗旨在觀察5-HMF對雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通小鼠模型學習記憶能力的影響。
(2)實驗方法昆明小鼠體重20±2g，連續(xù)灌胃給5-HMF 7天，末次給藥后1小時用雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通(夾閉2次，每次15min，中間再通10min)合并尾部放血的方法建立腦缺血再灌模型。術(shù)后第7天開始進行Morris水迷宮和小鼠跳臺測試，檢測其學習記憶能力。
Morris水迷宮測定Morris水迷宮主要由直徑1.4m的圓形水池和自動錄象及分析系統(tǒng)兩部分組成。水深15cm，水溫25℃±2℃，加適量奶粉使水呈乳白色，每只小鼠頭部涂以黑色，水池上方置一射像頭采集小鼠游泳軌跡，第一天訓練2次，入池位置為站臺所對象限及所鄰象限，于象限邊1/2弧度處將小鼠頭朝池壁入水，120S未找到站臺者，將其引致站臺，放置30S引導其學習與記憶。第2、3和4天重復測試；數(shù)據(jù)采集和處理均由圖像自動監(jiān)視和處理系統(tǒng)完成。
小鼠跳臺實驗測定小鼠被動回避反應。將各組小鼠分別放入反應箱中適應3min，通以36V交流電，訓練5min；24h后將小鼠放于銅柵上，通電，記錄小鼠第一次跳上跳臺的時間(反應期)、第一次跳下的時間(潛伏期)、5min內(nèi)跳下的次數(shù)(錯誤次數(shù))。
(3)實驗結(jié)果5-HMF對腦缺血缺氧模型小鼠Morris水迷宮的影響小鼠腦缺血缺氧后可出現(xiàn)明顯的空間學習記憶障礙，表現(xiàn)為第2天到第4天，游出時間增加及游出距離的延長，5-HMF有改善模型小鼠空間學習記憶能力的作用，表現(xiàn)為第2天到第4天，游出時間及游出距離的縮短。(表1-2)表1 5-HMF對腦缺血缺氧小鼠模型Morris水迷宮游出時間的影響(n＝10)組別游出時間(s)第二天 第三天 第四天正常組55.89±38.48**54.76±46.06**61.60±41.30**模型組(缺血缺氧) 98.25±30.82 94.84±36.1792.57±37.00缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg 67.19±45.65*74.85±45.8750.82±38.44**5-HMF 67.5mg/kg 66.16±42.40**68.62±44.60*70.21±39.80*5-HMF 202.5mg/kg 46.40±34.19**63.35±43.29*62.28±39.14*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01
表2 5-HMF對腦缺血缺氧小鼠模型Morris水迷宮(2-4天)游出距離的影響(n＝10)游出距離(cm)組別第二天 第三天 第四天正常組 835.73±500.32*827.03±728.75**972.35±755.23模型組(缺血缺氧)1159.34±660.39 1360.95±641.501466.65±824.83*缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg1059.16±764.12 1148.46±798.251085.63±798.585-HMF 67.5mg/kg 848.74±538.87939.65±717.43*1050.39±575.00*5-HMF 202.5mg/kg667.54±522.16*866.04±580.86*933.24±540.96*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.015-HMF對腦缺血缺氧模型小鼠跳臺實驗的影響結(jié)果表明，小鼠腦缺血缺氧后可出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙，表現(xiàn)為反應期延長，潛伏期縮短，錯誤次數(shù)及電擊時間增加；5-HMF有改善模型小鼠學習記憶能力的作用，表現(xiàn)為反應期縮短，潛伏期延長(表3)。
表3 跳臺法觀察5-HMF對腦缺血缺氧小鼠模型的影響(n＝10)組別 反應期 潛伏期正常組 12.00±11.29*288.00±11.29**模型組(缺血缺氧)51.92±57.84 234.92±58.05缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg17.38±7.98 282.63±7.985-HMF 67.5mg/kg 14.09±13.37*285.91±13.37*5-HMF 202.5mg/kg11.83±14.12*288.17±14.12**M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01實施例2.5-HMF抑制缺血缺氧注小鼠模型腦組織脂質(zhì)過氧化
(1)實驗目的神經(jīng)細胞缺血缺氧后產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化增高，過氧化脂質(zhì)是生物膜和細胞中磷質(zhì)所含多元不飽和脂肪酸被自由基損傷、氧化而成的過氧化產(chǎn)物。它可以引起膜損傷、酶抑制、溶酶體釋放、蛋白交聯(lián)、DNA和RNA結(jié)構(gòu)破壞等生化毒性，最終可導致細胞死亡。本實驗旨觀察5-HMF對腦缺血缺氧小鼠模型腦組織脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量增高的影響。
(2)實驗方法昆明小鼠20±2g，隨機分組后，連續(xù)灌胃給5-HMF 7天，末次給藥后1小時用雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通(夾閉2次，每次15min，中間再通10min)合并尾部放血的方法建立腦缺血缺氧模型。14天后，迅速斷頭取腦，分離腦皮層組織，用硫代巴比妥(TAB)法測定腦組織中MDA含量。
(3)實驗結(jié)果5-HMF灌服可降低雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通致缺血缺氧小鼠腦組織MDA含量，表明該藥可以抑制脂質(zhì)過氧化(表4)，具有抗氧化作用。
表4 5-HMF對腦缺血缺氧小鼠腦組織MDA含量的影響(n＝10)組別 MDA(Nmol/mg蛋白)正常組 2.49±0.48**模型組(缺血缺氧) 3.32±0.59缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg 2.44±0.83*5-HMF 67.5mg/kg2.43±0.89*5-HMF 202.5mg/kg 2.51±0.51*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01實施例3.5-HMF增強缺血缺氧小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性(1)實驗目的超氧化物歧化酶(SOD)是機體重要的抗氧化酶，此酶能清除超氧陰離子自由基，保護細胞免受損傷。本實驗旨在觀察5-HMF對缺血缺氧小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性的影響。
(2)實驗方法昆明小鼠20±2g，隨機分組后，連續(xù)灌胃給5-HMF 7天，末次給藥后1小時用雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通(夾閉2次，每次15min，中間再通10min)合并尾部放血的方法建立腦缺血缺氧模型。14天后，迅速斷頭取腦，分離腦皮層組織，用亞硝酸鹽法測定腦組織中SOD活性。
(3)實驗結(jié)果5-HMF灌胃可以有效增強缺血缺氧小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性，表明該藥具有增強機體清除自由基作用，有利于減輕炎癥和保護神經(jīng)細胞。
表5 5-HMF對缺血缺氧小鼠腦組織SOD活性的影響(n＝10)組別 SOD(NU/mg蛋白)正常組 137.23±28.76**模型組(缺血缺氧) 102.32±14.92缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg 104.00±37.415-HMF 67.5mg/kg117.80±22.08*5-HMF 202.5mg/kg 138.83±21.92*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01實施例4.5-HMF增高缺血缺氧小鼠腦還原型谷胱甘肽活性和谷胱甘肽過氧物酶含量(1)實驗目的還原型谷胱甘肽(GSH)是一種自由基清除劑，可清除O2-、H2O2，是衡量機體抗氧化能力大小的重要指標。谷胱甘肽過氧物酶(GSH-Px)是機體內(nèi)廣泛存在的一種催化過氧化氫分解的抗氧化酶，它特異地催化還原型谷胱甘肽對過氧化氫的還原反應，可以起到抗氧化、保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。本實驗旨在觀察5-HMF對缺氧缺血小鼠模型腦組織還原型谷胱甘肽和谷胱甘肽過氧物酶含量減低的影響。
(2)實驗方法昆明小鼠20±2g，隨機分組后，連續(xù)灌胃給5-HMF 7天，末次給藥后1小時用雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通(夾閉2次，每次15min，中間再通10min)合并尾部放血的方法建立腦缺血缺氧模型。14天后，迅速斷頭取腦，分離腦皮層組織，以南京建成試劑公司試劑盒測定GSH含量與GSH-PX活性。
(3)實驗結(jié)果5-HMF灌胃可以有效增高缺血缺氧小鼠模型腦皮層GSH-Px活性及GSH含量，提高機體清除自由基的能力，有利于保護神經(jīng)細胞，減輕炎癥反應。(表6、7)表6 5-HMF對缺血缺氧小鼠腦組織GSH含量的影響(n＝10)組別GSH(mg/L蛋白)正常組 31.81±16.20**模型組(缺血缺氧)16.14±6.98缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg23.63±11.45*5-HMF 67.5mg/kg 29.77±14.37*5-HMF 202.5mg/kg27.10±13.21*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01表7 5-HMF對缺血缺氧小鼠腦組織GSH-Px含量的影響(n＝10)組別 GSH-Px(酶活力單位)正常組 30.74±8.26**模型組(缺血缺氧)17.85±5.48缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg25.30±13.785-HMF 67.5mg/kg 29.91±8.12**5-HMF 202.5mg/kg35.66±14.26*M±SD，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01
實施例5.5-HMF對抗缺血缺氧小鼠模型神經(jīng)細胞鈣超載病理機制(1)實驗目的鈣超載是缺血缺氧后神經(jīng)細胞死亡的重要病理機制。本實驗旨在研究5-HMF對急性腦缺血缺氧導致小鼠海馬區(qū)的神經(jīng)細胞鈣超載的影響。
(2)實驗方法昆明小鼠，隨機分組后，連續(xù)灌胃給5-HMF 7天，末次給藥后1小時用雙側(cè)頸總動脈反復夾閉再通(夾閉2次，每次15min，中間再通10min)合并尾部放血的方法建立腦缺血缺氧模型。造模后2小時進行活體腦片制作與測定迅速處死取腦，放入通有95％的O2和5％CO2的預冷人工腦脊液中，在震動切片機上切出300μm厚的腦片，選2張通過腦損傷區(qū)域的腦片，移入含人工腦脊液的細胞培養(yǎng)皿，置CO2培養(yǎng)箱，37℃孵育30min，加入5μM的熒光劑Fluo-3AM400μl，在CO2培養(yǎng)箱負載1小時后，沖洗3次，再加入人工腦脊液孵育30min。然后放在激光共聚焦顯微鏡載物臺，倒置顯微鏡下調(diào)節(jié)載物臺，使海馬區(qū)在顯微鏡視野，進行活體細胞胞漿鈣離子熒光測定。以488nm氬離子激光激發(fā)，于530nm測熒光發(fā)射。以激光共聚焦顯微鏡40×采集海馬皮層熒光值，每個腦標本在出現(xiàn)海馬水平切取3張腦片。分析時選取每張切片上標本的海馬區(qū)域細胞熒光平均值作為統(tǒng)計數(shù)值，每張腦片紀錄1次。Fluo-3AM熒光值越高，表明細胞內(nèi)鈣水平越高。將各組腦片所選細胞的平均熒光值按組別進行組間差異比較。
(3)實驗結(jié)果各劑量5-HMF均有效降低缺血缺氧小鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞胞漿鈣離子水平，表明5-HMF可以有效對抗腦缺血缺氧引起的神經(jīng)元鈣超載。(表8)
表8 5-HMF對缺血缺氧小鼠海馬區(qū)的神經(jīng)細胞胞漿鈣離子水平的影響(n＝3)組別 熒光值正常對照組8.55±7.72**模型組(缺血缺氧) 24.37±4.84缺血缺氧+5-HMF 22.5mg/kg 18.15±5.24**5-HMF 67.5mg/kg 16.10±3.21**5-HMF 202.5mg/kg 13.01±7.92**M±SD；**P＜0.01，與缺血缺氧模型組比較。
(二)5-羥甲基糠醛防治神經(jīng)損傷的作用神經(jīng)組織在受到機械損傷或沖擊下引起神經(jīng)元水腫、甚至壞死的過程，藥物可以有效緩解該病理過程。以下系列實驗主要研究5-HMF對神經(jīng)損傷的防治作用及其機理。
實施例6.5-HMF對抗腦水腫(1)實驗目的腦水腫是神經(jīng)組織損傷的典型表現(xiàn)，本實驗過程觀察5-HMF對機械性損傷引起腦水腫的影響。
(2)實驗方法SD大鼠，體重200-250g，以5-HMF灌胃給藥7天，于第7天給藥后2小時，仿Feeney’s自由落體皮層挫傷模型制作方法，采用大鼠200g-250g，10％水合氯醛0.4ml/kg體重腹腔麻醉，剪去頂部皮毛，碘伏消毒。沿頂正中線左側(cè)切開頭皮，分離骨膜，以骨鉆在冠狀縫后1mm，正中縫左旁2mm鉆一直徑為5mm的圓形骨窗，術(shù)間注意保持硬腦膜完整。將一自制的硬塑打擊墊(由一小圓柱及其上底面更大的附件組成，圓柱底面直徑4.5mm，高2.5mm)放入骨窗，將砝碼沿玻璃導管在30cm高處垂直自由墜落在打擊墊上，取走砝碼，縫合頭皮。3小時后，大鼠過量麻醉后，迅速斷頭取腦，分離傷側(cè)與健側(cè)皮層各100mg左右腦組織，放在已稱重的小玻璃瓶中，置110℃干燥箱干燥48小時，稱量至恒重時取出。以(濕重-干重)/濕重×100％計算含水量，并以各組右側(cè)(健側(cè))含水量進行校正后，作組間比較。
(3)實驗結(jié)果5-HMF灌胃可有效降低神經(jīng)損傷大鼠腦含水量，說明該藥對腦水腫可能有良好治療作用。(表9)表9 藥物干預對神經(jīng)損傷SD大鼠腦含水量的影響(n＝6)組別 皮層含水百分率(％)正常對照 78.43426±0.33*模型(神經(jīng)損傷) 79.89756±0.43模型+5-HMF 15mg/kg 79.73444±0.565-HMF 45mg/kg 79.1718±0.37*M±SD；*P＜0.05，與神經(jīng)損傷模型組比較。
實施例7.5-HMF對抗神經(jīng)損傷后自由基生成增加(1)實驗目的神經(jīng)損傷后，組織缺氧和出血使神經(jīng)細胞線粒體傳遞鏈發(fā)生脫偶聯(lián)，產(chǎn)生并釋放大量的氧自由基。氧自由基含有不配對電子，性質(zhì)極不穩(wěn)定，易攻擊具有脂質(zhì)雙分子層的機體細胞和細胞器上多價不飽和脂肪酸和脂肪酸的丙烯鏈，形成鏈鎖式的脂質(zhì)過氧化反應，分解成一系列復雜產(chǎn)物，如丙二醛(MDA)對細胞有毒性作用，可與蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。本實驗研究5-HMF對神經(jīng)損傷后腦組織MDA含量的影響。
(2)實驗方法SD大鼠，體重200-250g，選分組后大鼠每組7只，先給藥6天，第7天在給藥2小時后，模型與給藥組均進行以上方法造模，正常對照組開骨窗后，未經(jīng)打擊即縫合頭皮。各組于24小時后過量麻醉處死，迅速斷頭取腦，在冰浴條件下分離患側(cè)大腦皮層，硫代巴比妥(TAB)法測定腦組織中MDA含量。
(3)實驗結(jié)果5-HMF灌胃可有效降低神經(jīng)損傷大鼠腦組織MDA含量，說明5-MHF對神經(jīng)損傷后自由基和脂質(zhì)過氧化增高有較好的干預作用。(表10)表10 5-HMF對神經(jīng)損傷大鼠腦皮層MDA含量的影響(n＝7)組別 MDA(nmol/mgprot)正常對照 3.01±0.30*模型(神經(jīng)損傷)3.43±0.37模型+5-HMF 15mg/kg2.91±0.48*5-HMF 135mg/kg2.90±0.42*M±SD；*P＜0.05，與神經(jīng)損傷模型組比較。
實施例8.5-HMF增強神經(jīng)損傷大鼠模型抗氧化酶活性(1)實驗目的超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)重要的抗氧化酶，對機體的氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基(O2-)，保護細胞免受損傷。本實驗旨在觀察5-HMF對神經(jīng)損傷大鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性降低的影響。
(2)實驗方法SD大鼠，體重200-250g，隨機分組后給藥7天，在第7天給藥后2小時，模型與給藥組均進行以上方法造模，正常對照組開骨窗后，未經(jīng)打擊即縫合頭皮。各組于24小時后過量麻醉處死，迅速斷頭取腦，在冰浴條件下分離患側(cè)大腦皮層，經(jīng)液氮罐存于-70℃保存。以Folin酚法測定蛋白后，按南京建成生物公司試劑盒(批號20021022)操作步驟，以黃嘌呤氧化酶法測定勻漿液中超氧化物歧化酶(SOD)活性。
(3)實驗結(jié)果5-HMF有增強神經(jīng)損傷后腦組織內(nèi)SOD活性的作用，有利于清除自由基、減輕炎癥反應和保護神經(jīng)細胞。(表11)
表11 5-HMF對神經(jīng)損傷大鼠皮層SOD活力的影響(n＝7)組別 SOD(NU/mgprot)正常對照30.08±4.34模型(神經(jīng)損傷) 26.92±4.86模型+5-HMF 15mg/kg 37.07±2.72**5-HMF 135mg/kg 38.02±5.26M±SD；**P＜0.01，與神經(jīng)損傷模型組比較。
實施例9.5-HMF減輕神經(jīng)損傷大鼠模型胞內(nèi)鈣超載(1)實驗目的細胞內(nèi)鈣超載是導致神經(jīng)細胞水腫或死亡的重要原因。本實驗旨在研究5-HMF對神經(jīng)機械性損傷后細胞內(nèi)鈣超載的抵抗作用。
(2)實驗方法SD大鼠，體重200-250g，隨機分組后大鼠每組7只，先給藥6天，第7天在給藥2小時后，模型與給藥組均進行以上方法造模，正常對照組開骨窗后，未經(jīng)打擊即縫合頭皮。造模后2小時進行活體腦片制作與測定迅速處死取腦，放入通有95％的O2和5％CO2的預冷人工腦脊液中，在震動切片機上切出300μm厚的腦片，選2張通過腦損傷區(qū)域的腦片，移入含人工腦脊液的細胞培養(yǎng)皿，置CO2培養(yǎng)箱，37℃孵育30min，加入5μM的熒光劑Fluo-3AM400μl，在CO2培養(yǎng)箱負載1小時后，沖洗3次，再加入人工腦脊液孵育30min。然后放在激光共聚焦顯微鏡載物臺，倒置顯微鏡下調(diào)節(jié)載物臺，使損傷側(cè)皮層細胞在顯微鏡視野，進行活體細胞胞漿鈣離子熒光測定。以488nm氬離子激光激發(fā)，于530nm測熒光發(fā)射。20倍物鏡下，Timecourse程序下預掃描，調(diào)節(jié)焦距，以取得最大熒光信號，并稍調(diào)節(jié)載物臺，暴露細胞形態(tài)典型的內(nèi)錐體細胞層，選定15個細胞，開始動態(tài)掃描，每10秒采集熒光強度一次，共紀錄120s，將每個細胞在此時間段的熒光平均值作為統(tǒng)計數(shù)值，每張腦片紀錄1次。Fluo-3AM熒光值越高，表明細胞內(nèi)鈣水平越高。將各組腦片所選細胞的平均熒光值按組別進行組間差異比較。
(3)實驗結(jié)果結(jié)果表明，5-HMF灌胃對神經(jīng)損傷模型皮層神經(jīng)元細胞鈣超載有很好的抑制作用，有利于保護神經(jīng)細胞，減少神經(jīng)元死亡。(表12)表12 5-HMF對神經(jīng)損傷大鼠模型皮層細胞胞漿鈣水平的影響(n＝3)組別 熒光值正常對照 7.52±5.18模型(神經(jīng)損傷) 84.07±30.40模型+5-HMF 15mg/kg 26.03±16.72**5-HMF 45mg/kg 37.58±23.96**5-HMF 135mg/kg 37.62±14.25**M±SD；**P＜0.01，與神經(jīng)損傷模型組比較。
權(quán)利要求
1.5-羥甲基糠醛及其衍生物用于制備預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀選自腦血管病、腦缺氧、機械性損傷引起的腦震蕩、腦水腫、神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)損傷、腦或脊髓腫瘤、營養(yǎng)與代謝性神經(jīng)病、神經(jīng)放射性損傷、中樞及外周神經(jīng)壓迫或炎癥及其引起的頭暈、頭痛、睡眠障礙、神經(jīng)衰弱、疼痛、麻木、肌肉萎縮。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中5-羥甲基糠醛或其衍生物的口服劑量為0.5-50mg/Kg體重/日，注射劑量為0.1-10mg/Kg體重/日。
4.用于預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物組合物，其包含有效量的5-羥甲基糠醛或其可藥用衍生物作為活性成分。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀選自腦血管病、腦缺氧、機械性損傷引起的腦震蕩、腦水腫、腦部手術(shù)損傷、腦或脊髓腫瘤、營養(yǎng)與代謝性神經(jīng)病、神經(jīng)放射性損傷、中樞及外周神經(jīng)壓迫或炎癥及其引起的頭暈、頭痛、睡眠障礙、神經(jīng)衰弱、疼痛、麻木、肌肉萎縮。
6.權(quán)利要求4或5的藥物組合物，其為口服劑型。
7.權(quán)利要求4或5的藥物組合物，其為注射劑型。
8.用于預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的方法，包括向患者施用有效量的5-羥甲基糠醛或其衍生物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀選自腦血管病、腦缺氧、機械性損傷引起的腦震蕩、腦部手術(shù)損傷、腦或脊髓腫瘤、營養(yǎng)與代謝性神經(jīng)病、神經(jīng)放射性損傷、中樞及外周神經(jīng)壓迫或炎癥及其引起的頭暈、頭痛、睡眠障礙、神經(jīng)衰弱、疼痛、麻木、肌肉萎縮。
10.權(quán)利要求8或9的方法，其中5-羥甲基糠醛或其衍生物的口服劑量為0.5-50mg/Kg體重/日，注射劑量為0.1-10mg/Kg體重/日。
全文摘要
本發(fā)明涉及5－羥甲基糠醛及其衍生物用于制備預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的藥物的用途，所述化合物在改善神經(jīng)缺血缺氧以及神經(jīng)損傷導致的功能障礙，減輕神經(jīng)細胞水腫，提高自由基清除能力，減少自由基損傷，以及減輕神經(jīng)細胞鈣超載等方面具有良好的效果。本發(fā)明還提供了包含5－羥甲基糠醛或其衍生物作為活性成分的藥物組合物，以及通過施用有效量的5－羥甲基糠醛或其衍生物預防和/或治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癥狀的方法。
文檔編號A61P25/04GK1565438SQ0314624
公開日2005年1月19日 申請日期2003年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月4日
發(fā)明者李林, 魏海峰, 張?zhí)m, 趙玲, 楚晉 申請人:首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院