專(zhuān)利名稱(chēng)：含有p43蛋白和紫杉醇的治療癌癥的藥用性合成物以及應(yīng)用其的治療方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有藥用性合成物P43蛋白和紫杉醇的、治療癌癥的藥用性合成物，使用該合成物的治療方法及其應(yīng)用。特別是，本發(fā)明涉及藥用性合成物以及使用它的治療方法及其應(yīng)用，其中同時(shí)，或單獨(dú)或者順序使用P43蛋白和紫杉醇，以獲得一種增強(qiáng)的抗癌效果。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，癌癥的治療多采用外科手術(shù)、放射療法和化學(xué)療法。其中，化學(xué)療法是應(yīng)用一種抗癌藥物來(lái)治療癌癥。由于應(yīng)用氨甲喋呤治療絨毛膜癌的療效很理想，致使化學(xué)療法的應(yīng)用非常廣泛。目前，有大約60多種不同的抗癌藥物應(yīng)用于臨床。因?yàn)楂@得了致癌因素和癌細(xì)胞特征的大量信息，使得人們?cè)谘兄崎_(kāi)發(fā)抗癌新藥上進(jìn)行了積極的探索。
強(qiáng)力霉素和順鉑，均是在二十世紀(jì)七十年代開(kāi)發(fā)研制的兩種最常見(jiàn)的抗癌藥物。而近年來(lái)所出現(xiàn)的更多的抗癌藥物包括紫杉醇、泰索帝(docetaxel)、fludarabine、cladribine和異長(zhǎng)春花堿，并且已有報(bào)道，在抗癌的效果和應(yīng)用范圍上，這些抗癌藥物好于以前所應(yīng)用的抗癌藥物。
紫杉醇是目前研究最多的一種抗癌藥物，它包含有一個(gè)taxane的變型合成物，該合成物可從紫杉屬植株的莖干中分離出來(lái)。紫杉醇由于能夠在細(xì)胞分裂期抑制紡錘體的功能，而在治療白血病和癌癥上具有公認(rèn)的療效。更為眾所周知的是，紫杉醇在治療卵巢癌的患者上，有至少30％的治愈率；在治療乳腺癌的患者上，有至少50％的治愈率；并且在治療肺癌的患者上，有至少20％的治愈率(參見(jiàn)E.K.Rowinsky等.，J.Natl.Cancer Inst.，821247-1259，1990)。
然而，上述抗癌藥物都有一個(gè)缺陷，即當(dāng)這些藥物在一段時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)期反復(fù)應(yīng)用時(shí)，或在癌癥復(fù)發(fā)使得癌細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生了抵抗力時(shí)，它們的抗癌的治療效果便會(huì)消失。此外，大多數(shù)的抗癌藥物發(fā)揮其抗癌作用是通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)的核酸的合成，或者是通過(guò)直接粘附于核酸并對(duì)其功能造成損害來(lái)進(jìn)行的。如此，抗癌藥物不僅僅選擇性地對(duì)癌細(xì)胞造成損傷，而且還損傷到了正常的細(xì)胞，特別是那些進(jìn)行細(xì)胞分化的組織細(xì)胞。因此，應(yīng)用這些抗癌藥物有一定的危險(xiǎn)性，其存在的副作用諸如對(duì)骨髓功能的損害、對(duì)胃腸道粘膜的損傷、以及脫發(fā)等等。
為了克服上述與對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性相關(guān)的問(wèn)題，首選的方法是運(yùn)用單獨(dú)一種抗癌藥物的組合化學(xué)療法，該治療方法中包括應(yīng)用具有不同作用機(jī)制的、相互之間沒(méi)有交叉耐藥性的、不同種類(lèi)的藥物組合方案。另外的一種對(duì)抗抗癌藥物副作用的方法是，開(kāi)發(fā)研制一種不具有副作用的新的抗癌藥物，或者是以最小的有效劑量應(yīng)用那些現(xiàn)有的抗癌藥物。
國(guó)際專(zhuān)利第0152882號(hào)公開(kāi)了一種治療癌癥的方法，即聯(lián)合應(yīng)用temozolomide和α-干擾素于一個(gè)患者。國(guó)際專(zhuān)利第0234244號(hào)則公開(kāi)了一種藥用性合成物用于治療癌癥，該合成物包含有喜樹(shù)堿和1，2-二苯乙烯的衍生物。美國(guó)專(zhuān)利第0152882號(hào)公開(kāi)了一種治療癌癥的方法，該方法聯(lián)合應(yīng)用了眾所周知的抗癌藥物edatrexate和taxane。
在此其間，本發(fā)明人在國(guó)際專(zhuān)利第0195927號(hào)和韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第2001-112108號(hào)中描述了作為一種抗癌藥物和抗血管生成劑的P43蛋白的新用途。
與之相關(guān)的是，在開(kāi)發(fā)研制了新型的抗癌藥物同時(shí)，本專(zhuān)利的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，與分別應(yīng)用上述的P43蛋白或者紫杉醇相比較，P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合應(yīng)用，有著非常好的療效。結(jié)果，本發(fā)明完成了，因此得到了具有增強(qiáng)的抗癌活性、包含P43蛋白和紫杉醇的新的藥用性合成物，和應(yīng)用該合成物治療癌癥的方法。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明的目的是提供了一種包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物，它能應(yīng)用于癌癥的治療。
本發(fā)明中的另一個(gè)目的是提供一種治療癌癥的方法，它包括將包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物應(yīng)用于患者。
本發(fā)明的另一個(gè)更進(jìn)一步的目的是提供一種P43蛋白和紫杉醇的用途，它能用于制備藥用性合成物，以應(yīng)用于患者來(lái)治療癌癥。
附圖的簡(jiǎn)要描述

圖1所示的是移植以人肺癌細(xì)胞系NCI-H460的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的存活率的變化情況。
圖2所示的是移植以人肺癌細(xì)胞系NCI-H460的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的體重的變化情況(*表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.05；**表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.01)。
圖3所示的是移植以人肺癌細(xì)胞系NCI-H460的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的絕對(duì)腫瘤大小的變化情況(*表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.05；**表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.01)。
圖4所示的是移植以人肺癌細(xì)胞系NCI-H460的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的相對(duì)腫瘤大小的變化情況(*表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.05；**表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.01)。
圖5所示的是移植以人肺癌細(xì)胞系NCI-H460的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的腫瘤重量的變化情況(A陰性對(duì)照組；B應(yīng)用p43蛋白25毫克/千克體重組；C應(yīng)用p43蛋白50毫克/千克體重組；D聯(lián)合應(yīng)用p43蛋白25毫克/千克體重和紫杉酚5毫克/千克體重組；E聯(lián)合應(yīng)用p43蛋白50毫克/千克體重和紫杉酚5毫克/千克體重組)。
圖6所示的是移植以人胃癌細(xì)胞系NUGC-3的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的存活率的變化情況。
圖7所示的是移植以人胃癌細(xì)胞系NUGC-3的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的體重的變化情況(*表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.05；**表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.01)。
圖8所示的是移植以人胃癌細(xì)胞系NUGC-3的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的絕對(duì)腫瘤大小的變化情況(*表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.05；**表示所獲得的數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照組相比可見(jiàn)顯著性差異，p＜0.01；a在實(shí)驗(yàn)的第14天有5只陰性對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡)。
圖9所示的是移植以人胃癌細(xì)胞系NUGC-3的裸鼠，在單獨(dú)或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇之后的相對(duì)腫瘤大小的變化情況。
本發(fā)明的最佳實(shí)施例由此，本發(fā)明提供了一種包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物，它能應(yīng)用于癌癥的治療。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療癌癥的方法，它包括將包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物應(yīng)用于患者。
本發(fā)明的另一個(gè)更進(jìn)一步地提供一種P43蛋白和紫杉醇的用途，它能用于制備藥用性合成物，以應(yīng)用于患者來(lái)治療癌癥。
這里所用的專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)“有效劑量”意思是指所應(yīng)用的合成物的劑量，在治療哺乳動(dòng)物的癌癥時(shí)是有效的。這種包含有P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物，通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用上述的藥物，在治療癌癥時(shí)有協(xié)同作用效果。
在上述專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)“協(xié)同”的意思是，當(dāng)兩種合成物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)所產(chǎn)生的治療效果，比這兩種合成物分別分別應(yīng)用時(shí)的治療效果之和還要好(Chou和Talalay，Adv.Enzyme.Regul.，2227-55，1984)。
專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合應(yīng)用”(或者稱(chēng)“組合應(yīng)用”)的意思是一種合成物或者是一種成分與其它的成分一起應(yīng)用于同一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。共同應(yīng)用每一種藥物成分或者是合成物的意思是為了獲得想得到的治療效果，每一種成分可以同時(shí)，或者順序、以一定的時(shí)間間隔依次加以應(yīng)用。
以下是對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述。
該藥用性合成物，用于癌癥的治療，特征是它包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇。
在本發(fā)明中的藥用性合成物所含有的P43蛋白，已由本發(fā)明者此前所提出申請(qǐng)的國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)第0195927號(hào)和韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)第2001-112108號(hào)中加以公開(kāi)。上述兩份文件在此處由申請(qǐng)者合并成為一體。
本發(fā)明中的藥用性合成物所含有的P43蛋白，指的是天然的或者是重組的P43蛋白，或者是帶有充分地、同等生物活性的蛋白。該蛋白所具有的充分地、同等生物活性包括天然的或者是重組的P43蛋白的功能性的等價(jià)物和功能性的衍生物。
上述“功能性的等價(jià)物”代表的是P43蛋白的氨基酸序列的修飾突變，即天然的P43蛋白的全部或者是一部分的氨基酸序列被替換，或者是一部分的氨基酸序列被刪除或者出現(xiàn)了添加，但重組的P43蛋白的生物學(xué)效應(yīng)與天然的P43蛋白具有充分的等效性?！肮δ苄缘难苌铩贝淼氖蔷哂性鰪?qiáng)的或者降低的物理或者是化學(xué)蛋白質(zhì)特性的經(jīng)修飾的P43蛋白，并且與天然的P43蛋白具有充分的等效的生物學(xué)活性。
本發(fā)明中的P43蛋白可以從哺乳動(dòng)物，最好從人機(jī)體中獲得。更加適宜地是，這種蛋白質(zhì)帶有正如此前所描述的眾所周知的序列(國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)第0195927號(hào)和韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)第2001-112108號(hào)中)。
在本發(fā)明中所應(yīng)用的P43蛋白，可以運(yùn)用基因工程技術(shù)，依照上面所提及已知的氨基酸序列加以合成(參見(jiàn)Park等.，J.Biol.Chem..274166673-166676，1999)。例如，上述的P43蛋白可以根據(jù)國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)第0195927號(hào)和韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)第2001-112108號(hào)中所描述的基因工程技術(shù)加以制備。
本發(fā)明中的藥用性合成物所包含的紫杉醇，作為一種抗癌藥物是眾所周知的。本發(fā)明中的藥用性合成物所包含的紫杉醇，包括一種天然來(lái)源提取物，和根據(jù)美國(guó)專(zhuān)利第5,440,056號(hào)的化學(xué)合成的合成物，及其衍生物。紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式也是眾所周知的(Kingston等，Studies inorganic Chemistry，26219-235，1986).
紫杉醇可以通過(guò)已知的化學(xué)合成方法、提取方法以及通過(guò)采用可產(chǎn)生紫杉醇的細(xì)胞系的培養(yǎng)方法加以制備。另外，作為藥物的應(yīng)用方案，紫杉醇具有商業(yè)上的可利用性。作為包含有紫杉醇的一個(gè)藥物使用方案的實(shí)例，應(yīng)提及的是已制成的、并由美國(guó)Bristol-MyersSquibb公司經(jīng)銷(xiāo)的泰素(TXAOL)。在本發(fā)明中的例證中，我們應(yīng)用了韓國(guó)Samyang Genenx公司商業(yè)出品的GENEXOL。
對(duì)本發(fā)明的藥用性合成物，P43蛋白和紫杉醇可以按配方制造形成一種單一的合成物，或者一種各自的合成物。
對(duì)于本發(fā)明的包含有P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物，其中的每一種成分均可以同時(shí)、分別或按順序應(yīng)用。例如，當(dāng)本發(fā)明的藥用性合成物中的每一種成分存在于一個(gè)單一的合成物中時(shí)，其中所有的成分可能是同時(shí)加以應(yīng)用。另一方面，如果這些藥用性合成物并不是存在于一個(gè)單一的合成物中時(shí)，其中的一種成分可以先前或者隨后服用，也可以和/或者與另一種成分一起加以應(yīng)用。本發(fā)明的藥用性合成物的應(yīng)用順序，也就是說(shuō)，不管是誰(shuí)在前在后應(yīng)用、同時(shí)、分別或者按順序加以應(yīng)用，均由醫(yī)生或者是該領(lǐng)域的專(zhuān)家來(lái)決定。應(yīng)用順序的變化大多依賴(lài)于經(jīng)慎重考慮過(guò)的多種因素。
更適宜地是，因?yàn)闆](méi)有按照配方制入一個(gè)單獨(dú)應(yīng)用單位中的藥用性合成物，便會(huì)使得先行應(yīng)用了P43蛋白，事隔一段時(shí)間以后才應(yīng)用該合成物中的另一種成分，也就是紫杉醇。更為適宜地是，從開(kāi)始服藥的第一天起，每天應(yīng)用P43蛋白，而紫杉醇則在服藥的第一天隨即開(kāi)始應(yīng)用，并且在每隔2-3天之后才開(kāi)始連續(xù)應(yīng)用。例如，P43蛋白每天一次開(kāi)始應(yīng)用，而紫杉醇則應(yīng)用5次，即在開(kāi)始用藥后的第一天、2天、5天、8天和11天應(yīng)用。
本發(fā)明的藥用性合成物可以依照此前所描述的用藥順序，進(jìn)行全身性應(yīng)用或者是局部應(yīng)用。對(duì)于用藥途徑，可以考慮口服或者非腸道應(yīng)用。非腸道應(yīng)用的例子包括靜脈內(nèi)注射應(yīng)用、皮下注射應(yīng)用、腹膜內(nèi)注射應(yīng)用、體外應(yīng)用、直腸內(nèi)應(yīng)用、皮內(nèi)應(yīng)用、鼻腔內(nèi)應(yīng)用、氣管內(nèi)應(yīng)用或者支氣管內(nèi)應(yīng)用，以及肺內(nèi)吸入應(yīng)用。一種較理想的應(yīng)用方式是非腸道應(yīng)用，更為理想的方式為腹膜內(nèi)應(yīng)用或者是皮內(nèi)應(yīng)用。
另外，由于本發(fā)明的藥用性合成物是按照以上所描述的應(yīng)用方式加以服用的，因此，該合成物需要通過(guò)更進(jìn)一步地包含有一種藥用性的合適的載體，來(lái)達(dá)到按照一個(gè)適當(dāng)?shù)慕M成配制而成。這種藥用性的合適的載體包含有一種無(wú)活性的稀釋劑、一種填充劑、水、或者不同種類(lèi)的有機(jī)溶劑。如果需要的話(huà)，本發(fā)明中的藥用性合成物還可以包含有另外的成分，例如調(diào)味劑、粘合劑和賦形劑等等。
本發(fā)明的藥用性合成物可以包含有一種為口服應(yīng)用所需的載體，例如，乳糖、淀粉、纖維素的衍生物、硬脂酸鎂、和硬脂酸等等。為了口服應(yīng)用，其活性成分可以與賦形劑相混合，并且制備形成不同的樣式，例如小片劑、橫向片劑、錠形片劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿和糯米紙囊劑等等。
此外，本發(fā)明中的藥用性合成物可以包含有一種因?yàn)榉悄c道應(yīng)用所需的載體，例如，水、適當(dāng)?shù)挠蛣?、鹽水、葡萄糖溶液和乙二醇溶液等等。為了非腸道應(yīng)用所需的另外的載體，可以包括有一種穩(wěn)定劑和一種防腐劑。合適的穩(wěn)定劑包括有一種抗氧化劑，諸如亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或者是抗壞血酸。適當(dāng)?shù)姆栏瘎┌ㄓ新认峦殇@、甲基-或者丙烷基-對(duì)羥基苯甲酸酯、以及丙酮氯仿。以下所提供的是有關(guān)一種另外附加的藥用性載體的資料，它來(lái)自Remington PharmaceuticalScience，19thed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995。
更為適宜地是，本發(fā)明的藥用性合成物可以按配方制成非腸道應(yīng)用的合成物，例如，一種注射劑型。這種注射劑型可以依照已知的技術(shù)、使用合適的分散劑、濕潤(rùn)劑和乳化劑加以制備。例如，其中的每一種成分均可溶解于鹽水或者緩沖液中，并且可以按照配方制成注射用劑型。
更為特別地是，在本發(fā)明的藥用性合成物中所包含的紫杉醇，如同美國(guó)專(zhuān)利第5,478,860號(hào)中所描述的，可以被制成一種油狀的微滴乳狀液，這種乳狀液的液體中包含有橄欖油或者向日葵油，而且PEG-連接液與紫杉醇相混合。另外，如同國(guó)際專(zhuān)利第9318757號(hào)中所描述的，紫杉醇可以包裹入脂質(zhì)體中。進(jìn)一步而言，如同美國(guó)專(zhuān)利第5,424,073號(hào)中所描述的，紫杉醇還可以依照配方加入增溶劑，例如無(wú)水乙醇和聚乙氧基蓖麻油，或者制備成適合于口服應(yīng)用或者注射應(yīng)用的劑型。
在本發(fā)明中的藥用性合成物中所包含的P43蛋白，可以按照配方制成普通的蛋白劑型。例如，在P43蛋白被冷凍干燥以后，可以溶解入緩沖液中，從而獲得了依照液體形式的劑型。另外，這種液體形式的劑型又進(jìn)一步包含有上面所描述的穩(wěn)定劑而加以制備。然而，只要保留本發(fā)明的治療效果，藥物配方的形式、應(yīng)用的方式以及使用的方法，都應(yīng)不受限制。
應(yīng)用本發(fā)明的藥用性合成物，可以觀察到對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制效應(yīng)，即以每天25～50毫克/千克體重的劑量、每天一次應(yīng)用P43蛋白，并且在用藥的第一天即開(kāi)始應(yīng)用紫杉醇，以及此后的2天、5天、8天和11天，以5毫克/千克體重的劑量應(yīng)用紫杉醇，這是經(jīng)過(guò)仔細(xì)考慮的能夠抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的一個(gè)最小劑量。因此，P43蛋白的應(yīng)用可以是每天一次，或者是每天數(shù)次，所應(yīng)用劑量可以從大約10毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重；紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)可以是每天應(yīng)用一次，或者是每天應(yīng)用數(shù)次，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天，可以應(yīng)用一次或者數(shù)次，所應(yīng)用劑量大約為1毫克/千克體重。更為適宜地是，上述的P43蛋白的應(yīng)用是每天一次，所應(yīng)用劑量可以從大約25毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重，而紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)應(yīng)用一次，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天后，以一天應(yīng)用一次的方式，所應(yīng)用的劑量為5毫克/千克體重。
但是，藥物應(yīng)用的最終劑量和服藥的次數(shù)可以在一定的允許范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整，這是鑒于藥物劑型的特征、藥物應(yīng)用的方法和方式、患者的基本情況、患者的年齡、患者的體重、患者的性別、并發(fā)癥的屬性以及疾病的嚴(yán)重程度等等臨床因素所決定的。
與此同時(shí)，當(dāng)應(yīng)用兩種藥物成分聯(lián)合治療癌癥時(shí)，每一種藥物成分實(shí)際應(yīng)用的劑量，可以?xún)H僅是它們?cè)诟髯詰?yīng)用時(shí)的70％-80％，這是因?yàn)樗鼈冎g所存在的協(xié)同效應(yīng)。因此，通過(guò)應(yīng)用由存活有機(jī)體獲得的帶有P43蛋白的紫杉醇，在考慮到它常常所產(chǎn)生的副作用后，應(yīng)用的應(yīng)是紫杉醇的最小有效劑量，然而，它們的抗癌治療效果卻是協(xié)同增強(qiáng)的。
正如此前所描述的那樣，本發(fā)明的藥用性合成物在對(duì)付異常細(xì)胞，諸如癌細(xì)胞的生長(zhǎng)上是非常有效的。癌的例子包括實(shí)體性癌，例如肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、骨癌、脾癌、皮膚癌、胰頭(cephalic)癌、子宮頸癌、皮膚或者眼內(nèi)的惡性黑色素瘤、子宮肉瘤、卵巢癌、直腸癌、肛門(mén)區(qū)域的癌癥、結(jié)腸癌、乳腺癌、輸卵管腫瘤、子宮內(nèi)膜腫瘤、子宮頸腫瘤、陰道腫瘤、外陰腫瘤、何杰金氏淋巴瘤、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌腺癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、疏松結(jié)締組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或者急性的白血病、淋巴細(xì)胞性的淋巴瘤、膀胱癌、腎癌、輸尿管癌、腎細(xì)胞腎腫瘤、腎性骨肉瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、原發(fā)性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、骨髓腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、和腦垂體腺瘤，以及這些腫瘤中所并發(fā)的多于一種的癌癥。
為了證實(shí)本發(fā)明的藥用性合成物的抗癌活性，研究中運(yùn)用了異種移植腫瘤模型。如同一項(xiàng)在體實(shí)驗(yàn)中所顯示的，異種移植腫瘤模型通常應(yīng)用于新型的抗癌藥物的研制。而通常是采用裸鼠來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的。在本發(fā)明中，一種不帶有特殊病原體的裸鼠體內(nèi)，分別種植了人肺癌細(xì)胞系或者是人胃癌細(xì)胞系。在或者是分別應(yīng)用，或者是聯(lián)合應(yīng)用了P43蛋白和紫杉醇以后，測(cè)定了治療組裸鼠的存活率、體重以及腫瘤的大小，并且確定每一只鼠的抗癌活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于種植了人肺癌細(xì)胞系的裸鼠，通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用P43和紫杉醇的裸鼠，與單一應(yīng)用藥物的動(dòng)物相比較，其腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到很大程度地抑制。此外，對(duì)于種植了人胃癌細(xì)胞系的裸鼠，通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用P43和紫杉醇的裸鼠，與單一應(yīng)用藥物的動(dòng)物相比較，其腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到很大地抑制，并且通過(guò)采用聯(lián)合應(yīng)用治療，這些裸鼠的存活率出現(xiàn)了顯著意義上的增加。尤其是對(duì)于那些種植了人胃癌細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)說(shuō)，通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用P43和紫杉醇，與單一應(yīng)用藥物的動(dòng)物相比較，裸鼠的存活率出現(xiàn)四倍以上的增加。
本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法，該方法包括給需要這種治療的患者，應(yīng)用包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物。
應(yīng)特別指出地是，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法，該方法是指給一個(gè)患者應(yīng)用包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物，其中的藥用成分按一定的配方制成單一或分別的藥用性合成物。
更加應(yīng)特別指出地是，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法，該方法包括應(yīng)用包含有P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物的方法，它可以同時(shí)、分別，或者持續(xù)對(duì)一個(gè)患者應(yīng)用。
更加應(yīng)特別指出地還有，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法，該方法包括在藥物治療的第一天開(kāi)始，每天應(yīng)用P43蛋白，并且在第一天首次應(yīng)用紫杉醇，并自第一天起，每隔兩到三天保持加以應(yīng)用。
此外，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法還包括，P43蛋白的應(yīng)用可以是每天一次，或者是每天數(shù)次，所應(yīng)用劑量可以從大約10毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重；并且紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)可以是每天應(yīng)用一次，或者是應(yīng)用數(shù)次，所應(yīng)用劑量大約為1毫克/干克體重至10毫克/千克體重，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天，可以應(yīng)用一次或者數(shù)次。更為理想地是，上述的P43蛋白的應(yīng)用是每天一次，所應(yīng)用劑量可以從大約25毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重，而紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)首次應(yīng)用一次，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天后，以一天應(yīng)用一次的方式，所應(yīng)用的劑量為5毫克/千克體重。
另外，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法包括，患者可以通過(guò)口服或者是非腸道應(yīng)用這種藥用性合成物?？诜头悄c道應(yīng)用的實(shí)例與上面所描述的相同。
本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法還包括，應(yīng)用包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用合成物應(yīng)用于一個(gè)患者，以及作為一種附加的成分，應(yīng)用藥用性的適宜的載體。這種藥用性的適宜的載體與上面所描述的相同。
上述“患者”是指，一種被診斷為有著異常細(xì)胞生長(zhǎng)，例如癌細(xì)胞生長(zhǎng)的人。而癌的種類(lèi)與上面所描述的那些相同。在本發(fā)明中需要特別指出的是，術(shù)語(yǔ)“患者”是指診斷患有肺癌和胃癌的人。
在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的用途，其中這兩種成分是聯(lián)合加以應(yīng)用的。
較為特殊的是，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中上述的這兩種成分按照一定的配方制成單一的一種合成物或者是一種各自的合成物。
更為特殊的是，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中這兩種成分可以是同時(shí)、分別、或順序應(yīng)用的。
更為特殊的還有，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中P43蛋白在開(kāi)始用藥的第一天開(kāi)始每天一次加以應(yīng)用，而紫杉醇的應(yīng)用則是在用藥的第一天首次應(yīng)用，此后保持每隔兩到三天加以應(yīng)用。
此外，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中的P43蛋白的應(yīng)用可以是每天一次，或者是每天數(shù)次，所應(yīng)用劑量可以從大約10毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重；并且紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)可以是每天應(yīng)用一次，或者是應(yīng)用數(shù)次，所應(yīng)用劑量大約為1毫克/千克體重至10毫克/千克體重，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天，可以應(yīng)用一次或者數(shù)次。更為理想地是，上述的P43蛋白的應(yīng)用是每天一次，所應(yīng)用劑量可以從大約25毫克/千克體重至大約50毫克/千克體重，而紫杉醇的應(yīng)用在第一天時(shí)首次應(yīng)用一次，在第一天應(yīng)用以后，每隔兩到三天后，以一天應(yīng)用一次的方式，所應(yīng)用的劑量為5毫克/千克體重。
另外，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中的藥用性合成物可以通過(guò)口服應(yīng)用或者是非腸道應(yīng)用?？诜头悄c道應(yīng)用的實(shí)例與上面所描述的相同。
另外，在本發(fā)明中還提供了一種為制備用于治療癌癥的藥用性合成物中的P43蛋白和紫杉醇的應(yīng)用方法，其中的藥用性合成物包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇，并且進(jìn)一步包含有藥用性的適宜的載體。
癌癥的種類(lèi)與上面所描述的那些癌癥是相同的。在本發(fā)明中，需特別指出的是，癌癥可以是一種肺癌或者是一種胃癌。
以下的例證是本發(fā)明的最好體現(xiàn)，然而，我們決沒(méi)有限制本發(fā)明應(yīng)用范圍的意圖。
例證1在肺癌異種種植瘤小鼠模型中，通過(guò)單一應(yīng)用或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇，觀察其抗癌活性1-1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的檢疫、環(huán)境適應(yīng)以及飼養(yǎng)在本發(fā)明中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用的是源于BALB/C小鼠并且不帶有特殊病原體的裸鼠(5周齡，Daehan Biolink公司提供)。在獲得了上述這些動(dòng)物之后，肉眼檢查它們的外部特征。這些動(dòng)物被放置在動(dòng)物室7天，并在動(dòng)物室進(jìn)行了一系列的實(shí)驗(yàn)。在檢查了動(dòng)物的一般情況后，只有健康的動(dòng)物才被挑選出來(lái)用于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。上述的動(dòng)物放置在動(dòng)物飼養(yǎng)室，飼養(yǎng)室內(nèi)的環(huán)境維持在23±3℃的溫度、50±15％的相對(duì)濕度、12個(gè)小時(shí)的光照時(shí)間(從上午8時(shí)至下午8時(shí))、通風(fēng)次數(shù)為每小時(shí)10～20次、以及光照強(qiáng)度為150～300勒克斯。在環(huán)境適應(yīng)期間和檢疫期，10只動(dòng)物分別放置在各自的飼養(yǎng)盒中(寬260毫米×長(zhǎng)420毫米×高180毫米)。在應(yīng)用實(shí)驗(yàn)合成物以及其后的觀察期間，四只或者是更少的動(dòng)物放置于飼養(yǎng)盒中(寬200毫米×長(zhǎng)260毫米×高130毫米)。給動(dòng)物喂食固體飼料，該飼料經(jīng)射線(xiàn)加以消毒(DaehanBiolink)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為自由進(jìn)食。
1-2)給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種植癌細(xì)胞依照上述的1-1)步驟處理過(guò)的每一只裸鼠種植人肺癌細(xì)胞系NCI-H460，該NCI-H460細(xì)胞系韓國(guó)生物科學(xué)和生物學(xué)研究所的癌細(xì)胞系庫(kù)中獲得，在本發(fā)明中是作為人肺癌細(xì)胞系加以應(yīng)用的。
如同上面描述的所獲得的癌細(xì)胞系在二氧化碳培養(yǎng)箱(Forma，美國(guó)制造)中進(jìn)行孵育，其中的溫度為37℃，二氧化碳的濃度為5％。
RPMI-1640加入到胎牛血清(FBS，GibcoBRL公司，16000-044)中所形成的終濃度為10％，并且添加入10％的青霉素-鏈霉素溶液(GibcoBRL公司，15140-122)，制成所應(yīng)用的培養(yǎng)基。為了有利于上述癌細(xì)胞種植于小鼠體內(nèi)，從培養(yǎng)基中分離出來(lái)的癌細(xì)胞貯存于較冷的溫度下。在癌細(xì)胞培養(yǎng)的最后一天，收集所有的細(xì)胞并且進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后，應(yīng)用磷酸鹽緩沖液(PBS)將細(xì)胞的濃度調(diào)整到每毫升3×107個(gè)。經(jīng)過(guò)調(diào)整的細(xì)胞培養(yǎng)溶液行皮下注射給50只挑選出的健康小鼠，以每只小鼠3毫升的劑量注射到右側(cè)肩部和胸壁之間的腋窩區(qū)域。
1-3)單一應(yīng)用或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇通過(guò)測(cè)量種植了肺癌細(xì)胞的裸鼠的癌癥大小和體重，組成實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，其中的肺癌細(xì)胞如同上面的1-2)步驟中所描述的細(xì)胞系。首先，對(duì)種植癌細(xì)胞的裸鼠中所發(fā)現(xiàn)的腫瘤大小進(jìn)行測(cè)量并分成不同的等級(jí)。應(yīng)用游標(biāo)卡尺對(duì)癌細(xì)胞所致的腫瘤大小進(jìn)行準(zhǔn)確的寬度、長(zhǎng)度和厚度測(cè)量。同時(shí)測(cè)量動(dòng)物的體重。按上述測(cè)量的數(shù)據(jù)所估算的腫瘤大小，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排序。在這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，挑選出與腫瘤大小的平均值相近似的四十只動(dòng)物，并應(yīng)用計(jì)算機(jī)將其分配入一個(gè)獨(dú)立的組群，以致于腫瘤的大小在每一組中均能夠均勻地分布。
如同上面所描述的每一組動(dòng)物，或者是分別應(yīng)用P43蛋白治療，或者是與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行治療。應(yīng)特別指出的是，以25毫克/千克體重的劑量分別應(yīng)用P43蛋白治療組(低劑量p43蛋白治療組)、以50毫克/千克體重的劑量分別應(yīng)用P43蛋自治療組(高劑量p43蛋白治療組)、以25毫克/千克體重的劑量應(yīng)用P43蛋白并聯(lián)合5毫克/千克體重劑量的紫杉醇(GENEXOL，Samyang Genex公司)治療組(低劑量p43蛋白與紫杉醇聯(lián)合治療組)、或者是以50毫克/千克體重的劑量應(yīng)用P43蛋白并聯(lián)合5毫克/千克體重劑量的紫杉醇治療組(高劑量p43蛋白與紫杉醇聯(lián)合治療組)。在陰性對(duì)照組中，應(yīng)用了包含有20％丙三醇(Sigma公司)的磷酸鹽緩沖液(PBS)。藥物應(yīng)用的方法包括利用腹部皮膚固定的方法固定小鼠，并且采用腹膜腔內(nèi)注射的方式，給小鼠應(yīng)用實(shí)驗(yàn)合成物。至于藥物應(yīng)用的次數(shù)和周期，P43蛋白是每天應(yīng)用一次，一共應(yīng)用28天；紫杉醇則一共應(yīng)用5次，也就是在可是用藥的第一天、以及此后的2天、5天、8天和11天加以應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和藥物應(yīng)用劑量總結(jié)于下面的表中。
表1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組以及藥物應(yīng)用的劑量

V.C.1×包含有20％丙三醇的PBS溶液(磷酸鹽緩沖液)1-4)通過(guò)單一應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療后，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀和死亡率在應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療之前和之后，每天觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀和死亡率。觀察工作在應(yīng)用藥物終止后7天完成。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)與應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療有關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀的觀察，結(jié)果是沒(méi)有明顯的改變。然而，在這些動(dòng)物死亡之前，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康問(wèn)題，可出現(xiàn)腫瘤的壞死和動(dòng)物的體溫下降。此外，如同圖1所示，與應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇相關(guān)的死亡率沒(méi)有在顯著性意義上的明顯改變。
1-5)通過(guò)單一應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療后，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重、腫瘤大小和腫瘤重量變化的測(cè)量在治療開(kāi)始的當(dāng)天對(duì)上述的步驟1-3)的所有動(dòng)物進(jìn)行體重的測(cè)量，治療期間每周測(cè)量2次，治療后觀察期間每周測(cè)量一次。在治療開(kāi)始的當(dāng)天測(cè)量腫瘤大小，然后治療期間每隔一天測(cè)量一次。應(yīng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的寬度、長(zhǎng)度和厚度，應(yīng)用下面描述的公式計(jì)算腫瘤的體積。另外，通過(guò)在治療前用腫瘤大小區(qū)分每隔一天測(cè)量的腫瘤大小來(lái)計(jì)算相對(duì)的腫瘤大小中的變化，以百分?jǐn)?shù)表示。腫瘤的重量是在實(shí)驗(yàn)結(jié)束以后，在小鼠的尸體解剖時(shí)測(cè)量的。在計(jì)算得出每一組中動(dòng)物的體重、腫瘤的大小以及腫瘤重量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差以后，采用學(xué)生-t檢驗(yàn)來(lái)確定它們之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
{寬度(毫米)×長(zhǎng)度(毫米)×厚度(毫米)}/2＝腫瘤大小(毫米3)正如圖2所顯示的，除了陰性對(duì)照組的動(dòng)物以外，一直到用藥的第三天，這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重是以一種劑量依賴(lài)性方式下降的。與陰性對(duì)照組的動(dòng)物相比較，實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物體重下降率如下應(yīng)用低劑量P43蛋白的治療組，動(dòng)物體重的下降率為87％；應(yīng)用高劑量P43蛋白的治療組，動(dòng)物體重的下降率為84％；應(yīng)用低劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組，動(dòng)物體重的下降率為84％；以及應(yīng)用高劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組，動(dòng)物體重的下降率為81％。在開(kāi)始用藥的3天以后，則觀察到了正常的動(dòng)物體重增加。盡管如此，實(shí)驗(yàn)組的所有動(dòng)物的體重仍然低于陰性對(duì)照組的動(dòng)物體重。
同時(shí)，圖3和圖4顯示的是腫瘤大小的改變。在用藥結(jié)束時(shí)，也就是在第28天，陰性對(duì)照組和各個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)率如下陰性對(duì)照組的腫瘤生長(zhǎng)率為5192％；應(yīng)用低劑量P43蛋白的治療組，腫瘤的生長(zhǎng)率為4231％；應(yīng)用高劑量P43蛋白的治療組，腫瘤的生長(zhǎng)率為4947％；應(yīng)用低劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組，腫瘤的生長(zhǎng)率為3629％；以及應(yīng)用高劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組，腫瘤的生長(zhǎng)率為3301％。這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與陰性對(duì)照組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)率相比較，應(yīng)用低劑量P43蛋白的治療組、應(yīng)用高劑量P43蛋白的治療組、應(yīng)用低劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組、以及應(yīng)用高劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，分別為19％、5％、30％、36％。應(yīng)用下面的方程式，進(jìn)一步計(jì)算出與陰性對(duì)照組相比較的各個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)抑制率。
(陰性對(duì)照組的相對(duì)腫瘤生長(zhǎng)率-實(shí)驗(yàn)組的相對(duì)腫瘤生長(zhǎng)率)×100/陰性對(duì)照組的相對(duì)腫瘤生長(zhǎng)率因此，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與單一應(yīng)用P43蛋白治療相比較，應(yīng)用紫杉醇和P43蛋白的聯(lián)合治療可以更有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)。而且，從用藥的第8天到用藥結(jié)束時(shí)，單一應(yīng)用P43蛋白治療的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腫瘤大小，看上去小于對(duì)照組動(dòng)物的腫瘤大小。另一方面，對(duì)于應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇聯(lián)合治療的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，從開(kāi)始用藥的第4天或者第6天，腫瘤的大小便開(kāi)始下降，與對(duì)照組動(dòng)物的腫瘤大小相比較，具有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，在一段相對(duì)較短的時(shí)期內(nèi)，應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療，可以明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)是顯而易見(jiàn)的。即使是單純應(yīng)用P43蛋白治療的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，與對(duì)照組相比較，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，腫瘤的大小看上去也是減小的。
表2和圖5代表的是動(dòng)物腫瘤重量改變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與對(duì)照組相比較，按一種劑量依賴(lài)方式，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的腫瘤重量均是下降的，也就是，單純應(yīng)用P43蛋白治療組(G1應(yīng)用低劑量P43蛋白的治療組；G2應(yīng)用高劑量P43蛋白的治療組)和應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組(G3應(yīng)用低劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組；G4應(yīng)用高劑量P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組)。對(duì)于應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物而言，腫瘤的重量有著更加明顯的降低。
表2單一應(yīng)用P43蛋白組或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇組的種植瘤的重量變化

-動(dòng)物死亡V.C.1×包含有20％丙三醇的PBS溶液(磷酸鹽緩沖液)與單純應(yīng)用P43蛋白的治療組動(dòng)物相比較，應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物具有較小的體重增長(zhǎng)率，這種基于實(shí)際的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因，是由于在應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物的腫瘤重量有著較大的減少，使得總的體重增長(zhǎng)率與應(yīng)用單一藥物治療組相比較，變得較小了。
結(jié)論，與單純應(yīng)用P43蛋白的治療組動(dòng)物相比較，應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)可能更加明顯和更快地受到抑制。
例證2在胃癌異種種植瘤小鼠模型中，通過(guò)單一應(yīng)用或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇，觀察其抗癌活性2-1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的檢疫、環(huán)境適應(yīng)以及飼養(yǎng)依照上面例證1中所描述的方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)中所需要的裸鼠進(jìn)行檢疫和飼養(yǎng)。將胃癌細(xì)胞給55只上述的動(dòng)物進(jìn)行了種植。而這些胃癌細(xì)胞，是從韓國(guó)生物科學(xué)和生物學(xué)研究所的癌細(xì)胞系庫(kù)中獲得的人胃癌細(xì)胞系NUGC-3，并加以應(yīng)用。
2-2)單一應(yīng)用或者聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇用上面的2-1)步驟中所描述的人胃癌細(xì)胞接種裸鼠，通過(guò)測(cè)量種植瘤的大小和裸鼠的體重，組成實(shí)驗(yàn)組。因?yàn)榻臃N人胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組裸鼠之間的腫瘤生長(zhǎng)變化很大，所以每隔一天就對(duì)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行我們所說(shuō)的測(cè)量?？偣蔡暨x出腫瘤大小為50～100mm3的裸鼠24只，并應(yīng)用計(jì)算機(jī)將其分配入一個(gè)獨(dú)立的組群，以致于腫瘤的大小在每一組中均能夠均勻地分布。2天后，從余下的裸鼠中挑選出相似腫瘤大小的24只為另外一組，并應(yīng)用計(jì)算機(jī)分配到實(shí)驗(yàn)組中。對(duì)上面所描述的每一組動(dòng)物，應(yīng)用例證1中所描述的同樣的方法，進(jìn)行p43蛋白的單獨(dú)服用或與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和應(yīng)用的藥物劑量見(jiàn)下面的表3。應(yīng)用紫杉醇5ml/千克體重的動(dòng)物組為陽(yáng)性對(duì)照組。
表3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及其藥物的應(yīng)用劑量

V.C.1×包含有20％丙三醇的PBS溶液(磷酸鹽緩沖液)2-3)通過(guò)應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療后，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀和死亡率依照上面例證1中所描述的方法，給裸鼠種植人胃癌細(xì)胞，單獨(dú)應(yīng)用P43蛋白或者是與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用加以治療。然后，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀和死亡率。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)種植了胃癌細(xì)胞的裸鼠，在應(yīng)用了P43蛋白和紫杉醇治療以后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般癥狀沒(méi)有明顯的改變。僅僅是在這些動(dòng)物死亡之前，出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的零星的壞死和動(dòng)物的體溫的下降。
如圖6中顯示的是通過(guò)應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的存活率改變。應(yīng)特別指出的是，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)組中動(dòng)物的存活率如下陰性對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)的最后一天(第28天)應(yīng)用了賦形劑，其動(dòng)物的存活率為25％；應(yīng)用低劑量的P43治療組動(dòng)物的存活率為63％；應(yīng)用高劑量的P43治療組動(dòng)物的存活率為25％；應(yīng)用低劑量的P43與紫杉醇聯(lián)合治療組和應(yīng)用高劑量的P43蛋白與紫杉醇聯(lián)合治療組，這兩組動(dòng)物的存活率均為100％；以及僅僅應(yīng)用紫杉醇治療的陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物的存活率為63％。在動(dòng)物尸體解剖時(shí)，對(duì)于P43蛋白和紫杉醇聯(lián)合治療組的動(dòng)物，觀察了存活率大于50％的動(dòng)物狀況。對(duì)于其它的實(shí)驗(yàn)組，大多數(shù)的動(dòng)物均已死亡。另外，對(duì)于陰性對(duì)照組和僅僅應(yīng)用了P43蛋白的治療組，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在開(kāi)始用藥治療的第5天便開(kāi)始出現(xiàn)了死亡。即使是在僅僅應(yīng)用紫杉醇的治療組或者是在應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇聯(lián)合的治療組，從開(kāi)始用藥的第19天，或者是從第28天的用藥治療終止以后，均觀察到了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡情況。因此，與單純應(yīng)用紫杉醇治療或者是應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇聯(lián)合治療的動(dòng)物相比較，在陰性對(duì)照組和單純應(yīng)用P43蛋白的治療組動(dòng)物觀察到了特別早期的死亡。
2-4)通過(guò)單一應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇治療后，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重、腫瘤大小和腫瘤重量變化的測(cè)量依照例證1中所描述的同樣的方法，對(duì)單純應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇加以治療的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，測(cè)量了動(dòng)物體重、腫瘤大小和腫瘤重量的改變。
結(jié)果，圖7中顯示了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重改變。對(duì)于包括陰性對(duì)照組在內(nèi)的所有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，從單純應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇加以治療的兩天以后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重出現(xiàn)了臨時(shí)的下降。與種植了人肺癌細(xì)胞系的裸鼠相比較，這些觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是相同的。然而，對(duì)于聯(lián)合應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的治療組和單純應(yīng)用紫杉醇的陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物而言，從開(kāi)始用藥的第5天起，這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重即開(kāi)始緩慢地回升，并且在用藥的第10天左右，最終完全恢復(fù)到最初的體重水平。與此同時(shí)，對(duì)于陰性對(duì)照組的動(dòng)物，則沒(méi)有觀察到那種的體重增加，并且這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重出現(xiàn)了持續(xù)地下降。對(duì)于單純應(yīng)用P43治療的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，也沒(méi)有觀察到這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重的明顯改變，并且這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保持了暫時(shí)性地較輕體重。
圖8和圖9顯示的是腫瘤大小的改變。直到開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的第14天，陰性對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，有少于一半的已經(jīng)死亡，而與陰性對(duì)照組相比較，單純應(yīng)用P43蛋白的治療組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)，也沒(méi)有出現(xiàn)特殊的抑制現(xiàn)象。然而，對(duì)于應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組(也就是應(yīng)用低劑量的P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組和應(yīng)用高劑量的P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組)動(dòng)物而言，與對(duì)照組相比較，在用藥的第14天，腫瘤的生長(zhǎng)抑制分別為85％和94％，具有顯著的意義。因此，這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，從實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始之時(shí)，腫瘤就幾乎保持著相同的大小。同樣顯而易見(jiàn)地是，應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物，腫瘤完全停止了生長(zhǎng)，或者甚至開(kāi)始出現(xiàn)了消失。此外，對(duì)于單純應(yīng)用紫杉醇的實(shí)驗(yàn)組，在用藥的第14天，腫瘤的生長(zhǎng)抑制為58％，具有顯著的意義。與此同時(shí)，對(duì)于胃癌細(xì)胞的種植實(shí)驗(yàn)而言，在實(shí)驗(yàn)的后半程(即在開(kāi)始用藥的第14天以后)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的精確比較已是不可能的了，這是因?yàn)樵趯?duì)照組動(dòng)物中出現(xiàn)了高的死亡率。
結(jié)論，與單純應(yīng)用P43蛋白或者是紫杉醇的治療相比較，通過(guò)P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合應(yīng)用治療，能夠取得更加有效的抑制腫瘤的生長(zhǎng)。
對(duì)于胃癌的種植瘤實(shí)驗(yàn)而言，在對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的腫瘤重量之間不能進(jìn)行比較，這是由于在對(duì)照組和單純應(yīng)用P43蛋白的治療組動(dòng)物中出現(xiàn)了高的死亡率。
由于這種高的死亡率，種植了人胃癌細(xì)胞系的對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始階段，就出現(xiàn)了連續(xù)的體重下降和腫瘤生長(zhǎng)的高發(fā)，并認(rèn)為癌細(xì)胞的種植是造成動(dòng)物死亡的原因。而且，對(duì)于應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療組動(dòng)物而言，在實(shí)驗(yàn)的早期就出現(xiàn)了高的存活率和腫瘤的抑制現(xiàn)象，并認(rèn)為這些都是由于上述藥物的抗癌活性的作用結(jié)果。就針對(duì)胃癌的抗癌活性來(lái)說(shuō)，應(yīng)用P43蛋白和紫杉醇的聯(lián)合治療，比單純應(yīng)用P43蛋白或者是單純應(yīng)用紫杉醇的治療更加有效。
工業(yè)上的適用性含有P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物以及使用本發(fā)明中的合成物的治療方法的優(yōu)點(diǎn)是，與單純的應(yīng)用相比較，通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用這兩種成分，腫瘤的生長(zhǎng)可以出現(xiàn)更加明顯的抑制，并且可以出現(xiàn)協(xié)同增效的治療效果。另外，含有P43蛋白和紫杉醇的藥用性合成物以及使用本發(fā)明中的合成物的治療方法，使得應(yīng)用紫杉醇所造成的相關(guān)副作用降到了最低的程度，因此，這也就可以減少了抗癌藥物的不良作用。
權(quán)利要求
1.應(yīng)用于治療癌癥的藥用性合成物，包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用性合成物，其特征是所述的P43蛋白和紫杉醇是以單一或各自的形式制備的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用性合成物，其特征是所述的P43蛋白和紫杉醇是同時(shí)、分別或順序加以應(yīng)用的。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥用性合成物，其特征是，對(duì)于分別的合成物，P43蛋白的應(yīng)用是從第一天開(kāi)始每天加以應(yīng)用的，紫杉醇的應(yīng)用則是在用藥的第一天首次應(yīng)用，然后在開(kāi)始用藥之后，每隔二到三天持續(xù)加以應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥用性合成物，其特征是該合成物是P43蛋白以10毫克/千克到50毫克/千克的劑量，在一天中應(yīng)用一次或者是數(shù)次。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥用性合成物，其特征是，P43蛋白以25毫克/千克到50毫克/千克的劑量，在一天中應(yīng)用一次。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥用性合成物，其特征是，對(duì)于各別的合成物，紫杉醇的應(yīng)用是在用藥的第一天中應(yīng)用一次或數(shù)次、首次應(yīng)用的劑量為1毫克/千克到10毫克/千克，然后在開(kāi)始用藥之后，每隔二到三天持續(xù)加以應(yīng)用一次或數(shù)次。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥用性合成物，其特征是，對(duì)于分別的合成物，紫杉醇的應(yīng)用是在用藥的第一天中應(yīng)用一次、首次應(yīng)用的劑量為5毫克/千克到10毫克/千克，然后在開(kāi)始用藥之后，每隔二到三天連續(xù)加以應(yīng)用一次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用性合成物，其特征是，該合成物的應(yīng)用是口服或者是非腸道應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用性合成物，其特征是，該合成物進(jìn)一步包含藥用性的適宜載體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用性合成物，其中的癌癥是實(shí)體性腫瘤。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥用性合成物，其特征是，該合成物所治療的實(shí)體性腫瘤是從一組包括肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、骨癌、脾癌、皮膚癌、胰頭(cephalic)癌、子宮頸癌、皮膚或者眼內(nèi)的惡性黑色素瘤、子宮肉瘤、卵巢癌、直腸癌、肛門(mén)區(qū)域的癌癥、結(jié)腸癌、乳腺癌、輸卵管腫瘤、子宮內(nèi)膜腫瘤、子宮頸腫瘤、陰道腫瘤、外陰腫瘤、何杰金氏淋巴瘤、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌腺癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、疏松結(jié)締組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或者急性的白血病、淋巴細(xì)胞性的淋巴瘤、膀胱癌、腎癌、輸尿管癌、腎細(xì)胞腎腫瘤、腎性骨肉瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、原發(fā)性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、骨髓腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、和腦垂體腺瘤，以及這些腫瘤并發(fā)的組中選擇出的一種癌癥。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述藥用性合成物，其特性是，癌癥為肺癌或者是胃癌。
14.治療癌癥的方法，包括應(yīng)用包含有有效劑量的P43蛋白和紫杉醇的藥用合成物，對(duì)需要治療的患者進(jìn)行治療。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療癌癥的方法，其特性是，所述的是P43蛋白和紫杉醇是以單一或分別合成物的形式制備的。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療癌癥的方法，其特性是，所述的是P43蛋白和紫杉醇是同時(shí)、分別或順序應(yīng)用的。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的治療癌癥的方法，其特性是，對(duì)于分別的合成物，P43蛋白的應(yīng)用是從第一天開(kāi)始每天應(yīng)用的，紫杉醇是在用藥的第一天首次應(yīng)用，然后在開(kāi)始用藥之后，每隔二到三天連續(xù)應(yīng)用。
18.采用P43蛋白和紫杉醇，用于制備藥用合成物，是聯(lián)合應(yīng)用治療癌癥的。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的采用P43蛋白和紫杉醇用于制備藥用性合成物，其特征是，P43蛋白和紫杉醇以單一或分別合成物的形式制備的。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的采用P43蛋白和紫杉醇用于制備藥用性合成物，其特性是，P43蛋白和紫杉醇是同時(shí)、分別或順序加以應(yīng)用的。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的采用P43蛋白和紫杉醇用于制備藥用性合成物，其特性是，對(duì)于分別的合成物，P43蛋白的應(yīng)用是從第一天開(kāi)始每天加以應(yīng)用的，紫杉醇的應(yīng)用是在用藥的第一天首次應(yīng)用，然后在開(kāi)始用藥之后，每隔二到三天連續(xù)應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有P43蛋白和紫杉醇的用于治療癌癥的藥用性合成物，以及使用該合成物的治療方法和用途。特別是，本發(fā)明涉及藥用性合成物，其特征是P43蛋白聯(lián)合紫杉醇的同時(shí)、分別或順序應(yīng)用，以及采用該合成物的治療方法和用途。依據(jù)本發(fā)明的藥用性合成物及其治療方法，其中的P43蛋白聯(lián)合紫杉醇的應(yīng)用，在一段較短的時(shí)期內(nèi)，通過(guò)明顯地抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，增強(qiáng)了治療癌癥的有效性。此外，在本發(fā)明中通過(guò)最低限度地應(yīng)用紫杉醇的劑量，降低了藥物的毒性。
文檔編號(hào)A61K38/16GK1496269SQ03800008
公開(kāi)日2004年5月12日 申請(qǐng)日期2003年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月15日
發(fā)明者金圣勛, 姜太熙, 崔樹(shù)永 申請(qǐng)人:艾瑪基因有限公司