專利名稱：用作IgE抑制劑的苯基嘧啶取代的胺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有機(jī)化合物，如具有藥學(xué)活性(如抑制IgE合成)的取代的胺。
一方面，本發(fā)明提供了式I化合物 其中R1為鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R2為氫、鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R3為鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R4為氫、(C1-8)烷基、羥基(C1-6)烷基或下式基團(tuán)-CO-R5，-CO-(CH2)m-OR6，-CO-CO-R7，-CO-CO-OR8，-CO-N(R9R10)，-CO-(CH2)n-CO-R11，-CO-(CHR15)-O-(CH2)o-CO-R11，-CO-(CH2)p-O-(CH2)q-O-(CH2)r-R16，-CO-O-(CH2)s-O-CO-R17，-CO-O-(CH2)t-N(R18R19)，-CO-O-(CH2)u-NH-CO-CH(NH2)-R20，或
-CO-O-(CH2)w-NH-CO-R17，其中R5為氫、(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、氨基、(C1-4)烷基氨基、二(C1-4)烷基氨基、芳基或具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，R6為氫、(C1-4)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、被具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基取代的(C1-4)烷基、氨基(C1-6)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、二(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、羥基(C1-6)烷基、羥基(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基或氨基酸殘基，如-CH2-CH(NH2)-COOH，R7和R8互相獨(dú)立為(C1-4)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基或具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，R9和R10互相獨(dú)立為氫或(C1-4)烷基或R9和R10之一為氫且另一個(gè)為(C3-8)環(huán)烷基、(C1-4)烷基、芳基或雜環(huán)基，R11為(C1-4)烷基、-OR12、-NR13R14、氨基酸、它們的(C1-4)烷基酯或它們的二(C1-4)烷基酯，R12為氫或(C1-4)烷基，R13和R14互相獨(dú)立為氫、(C1-4)烷基、氨基(C1-6)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、二(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基，R15為氫或(C1-4)烷基，R16為氫、(C1-4)烷基、羧基或羧酸酯，R17為氨基(C1-4)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-4)烷基或二(C1-4)烷基氨基(C1-4)烷基，R18為氫或(C1-4)烷基，R19為羥基(C1-4)烷基，R20為(C1-4)烷基或羥基(C1-4)烷基，m為0-4，n為2-8，o為0-4，p為0-4，q為1-8，
r為0-4，s為1-4，t為1-4，u為1-6，且w為1-6。
另一方面，本發(fā)明提供了如下定義的式I化合物，其中-R1為氯或三氟甲基，-R2為氫或三氟甲基，-R3為氯、氟或三氟甲基，-R4為氫、(C1-4)烷基(如甲基)、羥基(C1-4)烷基(如羥基乙基)，或下式基團(tuán)-CO-R5，-CO-(CH2)m-OR6，-CO-CO-R7，-CO-CO-OR8，-CO-N(R9R10)，-CO-(CH2)n-CO-R11，-CO-(CHR15)-O-(CH2)o-CO-R11，-CO-(CH2)p-O-(CH2)q-O-(CH2)r-R16，-CO-O-(CH2)s-O-CO-R17，-CO-O-(CH2)t-N(R18R19)，-CO-O-(CH2)u-NH-CO-CH(NH2)-R20，或-CO-O-(CH2)w-NH-CO-R17，其中R5為氫、(C1-4)烷基、(C3-6)環(huán)烷基、二甲基氨基、苯基或?yàn)榫哂幸粋€(gè)O雜原子的的6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，如四氫吡喃基，R6為氫、(C1-4)烷基、被為具有1或2個(gè)選自N或O的雜原子的5或6元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基取代的(C1-2)烷基，例如包括未取代的吡咯烷、嗎啉和哌嗪以及被如(C1-2)烷基或(C1-2)羥基烷基取代的哌嗪；氨基(C1-4)烷基、(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、二(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、羥基(C1-3)烷基、羥基(C1-2)烷基氨基(C1-2)烷基或氨基酸殘基，如-CH2-CH(NH2)-COOH，R7和R8互相獨(dú)立為(C1-2)烷基或苯基，R9和R10互相獨(dú)立為氫或(C1-2)烷基，R11為(C1-2)烷基、-OR12、-NR13R14、氨基酸、它們的(C1-2)烷基酯或它們的二(C1-2)烷基酯，優(yōu)選選自下列的氨基酸丙氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和賴氨酸，其中連接通過(guò)α-氨基基團(tuán)進(jìn)行，或者在為如賴氨酸的情況下，則通過(guò)ε-氨基基團(tuán)連接，R12為氫或(C1-2)烷基，R13和R14互相獨(dú)立為氫、(C1-2)烷基、氨基(C1-4)烷基、(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、二(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基，R15為氫或(C1-2)烷基，R16為氫、(C1-2)烷基、羧基或羧酸酯，R17為氨基(C1-2)烷基，R18為氫或(C1-2)烷基，R19為羥基(C1-2)烷基，R20為(C1-2)烷基或羥基(C1-2)烷基，m為0或1，n為2-4，o為0或1，p為0-2，q為2-5，r為0-2，s為2，t為2，u為1-3，且w為1-3。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物，這些化合物選自下列化合物N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺，N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-胺，
N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺，N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，以及N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，其中氨基基團(tuán)進(jìn)一步被R4取代，其中R4如上文定義。
本發(fā)明進(jìn)一步的方面提供了式I化合物，其中-R1為氯，-R2為氫，-R3為三氟甲基且-R4為氫。
本發(fā)明進(jìn)一步的方面提供了式I化合物，其中-R1為氯，-R2為氫，-R3為三氟甲基且-R4為式-CO-O-(CH2)2-N[(C2H5OH)(CH3)]的基團(tuán)。
如果在此沒(méi)有特別指出，那么芳基包括苯基。鹵素包括氟、氯、溴。鹵代烷基包括鹵代(C1-4)烷基，其中鹵素可以為一個(gè)或多個(gè)鹵素，優(yōu)選三氟甲基。(C3-8)環(huán)烷基包括如(C3-6)環(huán)烷基。氨基包括氨基、(C1-4)烷基氨基和二(C1-4)烷基氨基。氨基烷基包括氨基(C1-6)烷基，如(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、二(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基，優(yōu)選二取代的氨基(C1-4)烷基氨基(C1-4)烷基，如二甲基-或二乙基氨基(C1-4)烷基。羥基烷基氨基包括羥基(C1-6)烷基、羥基(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基，優(yōu)選羥基(C1-3)烷基或羥基(C1-2)烷基氨基(C1-2)烷基。氨基酸包括所有天然和合成的氨基酸，優(yōu)選α-氨基酸，如丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸和賴氨酸。氨基酸包括一個(gè)或多個(gè)氨基酸，如二-或三肽。
雜環(huán)基包括具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5或6元雜環(huán)系。優(yōu)選的雜環(huán)基為具有1或2個(gè)選自N或O的雜原子的5或6元環(huán)系。優(yōu)選為吡咯烷、嗎啉和哌嗪。
任何基團(tuán)均可以是未取代的或取代的，如被有機(jī)化學(xué)的常規(guī)基團(tuán)取代，如包括選自下列的基團(tuán)鹵素、鹵代烷基、烷基羰基氧基、烷氧基、羥基、氨基、烷基羰基氨基、氨基烷基羰基氨基、羥基烷基氨基、氨基烷基氨基、烷基氨基、二烷基氨基、具有5或6個(gè)環(huán)原子并且1-4個(gè)為選自N、O、S的雜原子的雜環(huán)基；(C1-4)烷基雜環(huán)基，其中雜環(huán)基具有5或6個(gè)環(huán)原子并且1-4個(gè)為選自N、O、S的雜原子；羥基(C1-4)烷基雜環(huán)基，其中雜環(huán)基具有5或6個(gè)環(huán)原子并且1-4個(gè)為選自N、O、S的雜原子；羧基、(C1-4)烷基羰基氧基、氨基(C1-4)-烷基羰基氧基。
在下文中，將本發(fā)明提供的化合物稱為“本發(fā)明化合物”。本發(fā)明化合物包括任何形式的化合物，如游離形式、鹽形式、溶劑化物的形式以及鹽和溶劑的溶劑化物的形式。
本發(fā)明化合物的鹽包括藥學(xué)上可接受的鹽，如包括金屬鹽或酸加成鹽。金屬鹽包括例如堿金屬或堿土金屬鹽；酸加成鹽包括式I化合物與酸形成的鹽，所述酸如包括無(wú)機(jī)和有機(jī)酸，如包括藥學(xué)上可接受的酸，例如鹽酸、硫酸、甲磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸、酒石酸。
游離形式的本發(fā)明化合物可以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)鹽形式的化合物；反之亦然。游離形式或鹽形式或溶劑化物形式的本發(fā)明化合物可以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離形式或非溶劑化物的鹽形式的化合物；反之亦然。
本發(fā)明的化合物可以以它們的異構(gòu)體或混合物形式存在；如光學(xué)異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、順式-反式構(gòu)像異構(gòu)體。本發(fā)明化合物可以如包含不對(duì)稱碳原子，因此可以以對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體和它們的混合物(如外消旋物)的形式存在，如與本發(fā)明化合物的不對(duì)稱碳原子相連的取代基可以是R-或S-構(gòu)型，包括它們的混合物。本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的任何異構(gòu)形式和任何異構(gòu)混合物的形式。
此處所述任何化合物，如本發(fā)明化合物，可以如根據(jù)常規(guī)方法，或如此處所述方法適當(dāng)制備。
本發(fā)明化合物(其中胺基團(tuán)可以為被苯基-取代的嘧啶、苯基以及氫取代)可以如根據(jù)類似于常規(guī)方法的方法制備，優(yōu)選根據(jù)下述反應(yīng)流程1制備
流程1 如其中在式I、II和III中，R1、R2和R3如上文定義，且R4為H；且任選進(jìn)一步使得到的化合物與適當(dāng)?shù)脑噭┓磻?yīng)，得到本發(fā)明化合物，如式I化合物，其中，R4如上文定義，但不為氫；如使式I化合物(其中R4為H且其它取代基如上文定義)。
-在NaH存在下，與烷基碘化物反應(yīng)，得到式I化合物(其中R4為烷基)，-與溴代-羥基烷反應(yīng)得到式I化合物(其中R4為羥基烷基)，-與鹵化物或式R5COOH的羧酸酐(其中R5如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物(其中R4為基團(tuán)-CO-R5，其中R5如上文定義)，-與光氣反應(yīng)得到式I化合物(其中R4為-COCl)，進(jìn)一步使得到的化合物與下式化合物反應(yīng)a)R6-(CH2)m-OH，其中R6如上文定義且m為0，得到式I化合物，其中R4為式-CO-(CH2)m-OR6的基團(tuán)，其中R6為如上文定義且m為0，b)R17-CO-O-(CH2)s-OH(其中R17和s如上文定義)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-O-(CH2)s-O-CO-R17的基團(tuán)(其中R17和s如上文定義)，c)N(R18R19)-(CH2)t-OH(其中R18、R19和t如上文定義)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-O-(CH2)t-N(R18R19)的基團(tuán)，其中R18、R19和t如上文定義，d)R20-(NH2)CH-CO-NH-(CH2)u-OH(其中R20和u如上文定義)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-O-(CH2)u-NH-CO-CH(NH2)-R20的基團(tuán)，其中R20和u如上文定義，
e)R17-CO-NH-(CH2)w-OH(其中R17和w如上文定義)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-O-(CH2)w-NH-CO-R17的基團(tuán)，其中R17和w如上文定義，-與式R5-CO-Cl化合物(其中R5如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-R5的基團(tuán)，其中R5如上文定義，-與式R6-O-(CH2)m-CO-Cl化合物(其中R6如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-(CH2)m-OR6的基團(tuán)，其中R6如上文定義，-與式R7-CO-CO-Cl化合物(其中R7如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-CO-R7的基團(tuán)，其中R7如上文定義，-與式R8-O-CO-CO-Cl化合物(其中R8如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-CO-OR8的基團(tuán)，其中R8如上文定義，-與式(R9R10)N-CO-Cl化合物(R9和R10如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物，其中R4為式-CO-N(R9R10)的基團(tuán)，其中R9和R10如上文定義，-與式R11-CO-(CH2)n-CO-Cl化合物反應(yīng)(其中R11和n如上文定義)，得到式I化合物，其中R4為-CO-(CH2)n-CO-R11的基團(tuán)，其中R11和n如上文定義，-與式R11-CO-(CH2)o-O-(CHR16)-CO-Cl化合物反應(yīng)，其中R11、R16和o如上文定義，得到式I化合物，其中R4為式-CO-(CHR16)-O-(CH2)o-CO-R11的基團(tuán)，其中R11、R16和o如上文定義，-與式R16-(CH2)r-O-(CH2)q-O-(CH2)p-CO-Cl化合物反應(yīng)，其中R16、r、q和p如上文定義，得到式I化合物，其中R4為式-CO-(CH2)p-O-(CH2)q-O-(CH2)r-R16的基團(tuán)，其中R16、r、q和p如上文定義，-與式Cl-OC-(CH2)v-CO-Cl化合物反應(yīng)，得到式I化合物(其中R4為式-CO-(CH2)v-CO-Cl基團(tuán))，進(jìn)一步使得到的化合物與氨基酸、氨基酸單(C1-6)烷基酯、氨基酸二(C1-6)烷基酯或與伯或仲胺反應(yīng)，任選含有另外的胺基團(tuán)，得到式I化合物，其中R4為下式基團(tuán)-CO-(CH2)v-CO-氨基酸、-CO-(CH2)v-CO-氨基酸單(C1-6)烷基酯或-CO-(CH2)v-CO-氨基酸二(C1-6)烷基酯，且v為1-6，優(yōu)選1-5。
使式I化合物(其中R4為H且其它取代基如上文定義)，與適當(dāng)?shù)脑噭┓磻?yīng)得到式I化合物；其中R4如上文定義，但不為氫，該反應(yīng)為烷化或?；磻?yīng)，并且可以根據(jù)適當(dāng)?shù)?，如根?jù)例如類似于常規(guī)方法，或如上文描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。在此類反應(yīng)中，取代基，如羥基或胺基團(tuán)，可以于反應(yīng)前被保護(hù)并于反應(yīng)中或反應(yīng)后脫保護(hù)。
在另一方面，本發(fā)明提供了制備式I化合物的方法，包括使式II化合物(其中R1如上文定義且ALK意指烷基或環(huán)烷基)，與式III化合物(其中R2和R3如上文定義)反應(yīng)，得到式I化合物(其中R1、R2和R3如上文定義，且R4為氫)，任選將得到的化合物烷化或?；?，如果需要將基團(tuán)脫保護(hù)，得到式I化合物(其中R1、R2和R3如上文定義且R4如上文定義，但不為氫)，然后自反應(yīng)混合物中分離得到的式I化合物。
任何此處所述的化合物，如本發(fā)明化合物，可以根據(jù)適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ苽?，如根?jù)常規(guī)方法或此處所述方法制備。式II和式III化合物為已知的或可以根據(jù)常規(guī)方法或此處所述方法得到。
本發(fā)明化合物在體外和體內(nèi)均顯示出藥理活性，因此可以用作藥物在如氣管的過(guò)敏反應(yīng)中，在Th2細(xì)胞因子IL-4存在下，經(jīng)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)呈遞的過(guò)敏原刺激后，2型T-輔助細(xì)胞(Th2細(xì)胞)由原初T-細(xì)胞前體產(chǎn)生。這些Th2細(xì)胞在肺內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生復(fù)合型炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致過(guò)敏性哮喘的發(fā)作和惡化。由這些Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，包括例如IL-4、L-5、IL-10和IL-13，介導(dǎo)促炎效應(yīng)細(xì)胞例如積聚在肺內(nèi)的嗜曙紅細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞和肥大細(xì)胞的擴(kuò)張。
此外，IL-4和IL-13誘導(dǎo)B-細(xì)胞產(chǎn)生IgE。在促炎細(xì)胞的激活和過(guò)敏性炎癥介質(zhì)的釋放中，經(jīng)過(guò)敏原交聯(lián)后，產(chǎn)生IgE與肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞上的IgE受體(FcεRI)高親合結(jié)合。
基于這些觀測(cè)結(jié)果，發(fā)明人預(yù)期通過(guò)抑制Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性炎癥反應(yīng)和對(duì)IgE生成上的作用可以提供有效控制過(guò)敏性哮喘和其它過(guò)敏性疾病例如變應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎和過(guò)敏性鼻炎的一種新方法。
申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物可以作為人類DC功能調(diào)節(jié)劑。在用本發(fā)明化合物治療后，已知在原初T-細(xì)胞前體相互作用中起重要作用的DC細(xì)胞表面分子(例如CD86、CD83、CD25和HLAII類抗原)在人單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突狀細(xì)胞表面的數(shù)目減少。類似地，本發(fā)明化合物可抑制成熟DC分泌IL-6。經(jīng)化合物處理的樹(shù)突狀細(xì)胞顯示出對(duì)原初CD4-陽(yáng)性自體同源T-細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的生成的刺激能力受損。
此外，申請(qǐng)人還發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物可以作為IgE合成的特異性抑制劑。經(jīng)全身或口服給予本發(fā)明化合物，可以抑制免疫球蛋白合成，特別是抑制B-淋巴細(xì)胞中的免疫球蛋白E的合成，即本發(fā)明化合物可以顯示同型特異性。更進(jìn)一步地，申請(qǐng)人還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物在低于阻止IgE合成所需的濃度下可能不抑制B-細(xì)胞增殖。
在下列測(cè)定方法中證明了這些活性。溫度以攝氏度表示并且未經(jīng)校正。在本文中，使用的縮寫進(jìn)行下面的含義DC樹(shù)突狀細(xì)胞ELISA酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法FACS熒光激活細(xì)胞篩選法FCS胎牛血清GM-CSF粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子IgE免疫球蛋白EIL-4白介素-4IL-5白介素-5IL-6白介素-6IL-10白介素-10IMDM Iscove氏改良Dulbecco培養(yǎng)基KLH匙孔血藍(lán)蛋白Mo-DC單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突狀細(xì)胞PBMC外周血單核細(xì)胞SRBC綿羊紅細(xì)胞RT室溫Th輔助性T細(xì)胞Th2 2型輔助性T細(xì)胞
1.同型特異性經(jīng)細(xì)胞因子和抗-CD40抗體刺激后對(duì)原代人B-淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)的免疫球蛋白合成的抑制將正常人脾的單核細(xì)胞純化。產(chǎn)生的細(xì)胞懸浮液包含50-70％的B-淋巴細(xì)胞，經(jīng)在FACS分析中測(cè)定CD19表達(dá)確定的。采用96孔圓底微滴定板(Costar)進(jìn)行測(cè)定，將5×104個(gè)脾細(xì)胞置于終體積200μl/孔的IMDM中。與所試化合物預(yù)培養(yǎng)1小時(shí)后，于37℃下，在通入含有5％CO2的空氣的條件下，于50ng/ml的IL-4和500ng/ml的抗-CD40抗體存在下培養(yǎng)細(xì)胞9天以誘導(dǎo)IgE生成。收集培養(yǎng)細(xì)胞上清液并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)同型特異性?shī)A層ELISA測(cè)定IgE的含量。為誘導(dǎo)IgG合成，在經(jīng)同型特異性ELISA反應(yīng)對(duì)細(xì)胞上清液中的IgG水平測(cè)定前在，將細(xì)胞與100ng/ml的IL-10和500ng/ml的抗-CD40抗體培養(yǎng)相同的時(shí)間。
這些試驗(yàn)表明，本發(fā)明化合物抑制IgE生成優(yōu)于IgG(IgG1)。
2.B-細(xì)胞增殖根據(jù)M.S.Weiner等，Blood 42(1973)939中所述的方法，采用SRBC-玫瑰花法，去除雜質(zhì)T-細(xì)胞，自扁桃體中分離并純化正常人B-淋巴細(xì)胞。得到的B-細(xì)胞純度大于95％，經(jīng)在FACS分析中測(cè)定CD19表達(dá)確定。采用96孔圓底微滴定板(Costar)進(jìn)行，將1×105個(gè)脾細(xì)胞置于終體積為200μl/孔的IMDM中。與所試化合物預(yù)培育1小時(shí)后，用50ng/ml的IL-4和500ng/ml的抗-CD40抗體誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。于37℃下，在通入含有5％CO2的空氣的條件下經(jīng)4天培養(yǎng)后，加入1μCi的氚標(biāo)胸苷并培養(yǎng)細(xì)胞約16小時(shí)。在硝基纖維素濾膜上收集細(xì)胞并經(jīng)液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定結(jié)合的DNA的放射性。
這些試驗(yàn)表明，在高于阻止IgE合成所需濃度時(shí)，本發(fā)明化合物可以抑制IL-4和抗-CD40抗體介導(dǎo)的B-細(xì)胞增殖。
3.DC細(xì)胞表面標(biāo)記的調(diào)節(jié)用可經(jīng)商業(yè)獲得的試劑盒(Miltenyi)，經(jīng)淘析或經(jīng)PBMC陰性選擇制備人外周血單核細(xì)胞。得到的單核細(xì)胞密度通常為對(duì)CD14陽(yáng)性＞97％，經(jīng)FACS染色測(cè)定CD14的純度確定。在5ml添加了1％的FCS、鏈霉素和谷氨酰胺的IMDM培養(yǎng)基中，將單核細(xì)胞以3×106個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種于6孔培養(yǎng)板中。在所試化合物不存在或存在下，加入40ng/ml的IL-4和15ng/ml的GM-CSF后培養(yǎng)6天誘導(dǎo)不成熟的Mo-DC的產(chǎn)生。最初的2天后，用新培養(yǎng)基、細(xì)胞因子和化合物(適當(dāng)時(shí))替換一半量的培養(yǎng)基。培養(yǎng)的第6天，經(jīng)FACS染色，測(cè)定CD86和HLA-DR的細(xì)胞表面表達(dá)水平。
通過(guò)用100ng/ml的LPS(Sigma)活化不成熟的DC，或通過(guò)用包含20ng/ml的GM-CSF、100U/ml的IFN-γ、20U/ml的TNF-α和4μg/ml的交聯(lián)的抗-CD40單克隆抗體的混合物誘導(dǎo)24小時(shí)使不成熟的DC成為成熟的DC。然后，用FACS測(cè)定CD83和CD25的細(xì)胞表面表達(dá)水平。
這些試驗(yàn)表明，本發(fā)明化合物抑制CD86、HLA-DR、CD83和CD25的細(xì)胞表面表達(dá)水平。
4.DC介導(dǎo)的抗原特異性自體T-細(xì)胞刺激測(cè)定在所試化合物不存在或存在下，產(chǎn)生不成熟的Mo-DC。然后，在所試化合物存在或不存在下，用100μg/ml的KLH對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脈沖過(guò)夜并再與自體CD4-陽(yáng)性T-細(xì)胞共同培養(yǎng)9天以引發(fā)原代T-細(xì)胞反應(yīng)。洗滌細(xì)胞后，不加入化合物，用新KLH-脈沖的DC在不同的T/DC比率下再刺激致敏的T-細(xì)胞3天。在最后16小時(shí)，加入1μCi的氚標(biāo)胸苷。在硝基纖維素濾膜上收集細(xì)胞并經(jīng)液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)數(shù)結(jié)合的DNA的放射性。
這些試驗(yàn)表明，本發(fā)明化合物抑制DC介導(dǎo)的T-細(xì)胞增殖。
5.T-細(xì)胞的細(xì)胞因子生成48小時(shí)后，自DC/T-細(xì)胞再刺激培養(yǎng)物(見(jiàn)上文)中提取上清液并用可經(jīng)商業(yè)獲得的試劑盒經(jīng)ELISA測(cè)定GM-CSF和IL-2。
這些試驗(yàn)表明，本發(fā)明化合物抑制DC介導(dǎo)的T-細(xì)胞的細(xì)胞因子生成。
6.本發(fā)明化合物在血漿中的穩(wěn)定性的測(cè)定由人類志愿者和Balb/c小鼠獲得肝素化血。于室溫(RT)下，將獲得的血于13,000rpm離心4分鐘，得到血漿。向血漿的等份樣本(1ml)中加入所試化合物，即本發(fā)明化合物(1μl的10mM在DMSO或水中的儲(chǔ)備液)。于37℃下溫育樣本。于不同時(shí)間點(diǎn)，從上述樣本中取100μl的等份樣本。加入一份內(nèi)標(biāo)(5μl的100μg/ml內(nèi)標(biāo)化合物的甲醇溶液)，然后加入300μl的甲醇(或乙腈或乙腈/1M的HCl，視要求而定)。以13,000rpm離心分離樣本5分鐘。
為便于分析，將得到的50μl的上清液注入HPLC系統(tǒng)(HP1090)，配有Hypersil BDS C-8柱(5μm，250×4.6mm)及預(yù)柱(10×4.6mm)。于55℃下，并以流速1.5ml/min用乙腈和10mm的(NH4)2SO4的混合物(pH2.7；對(duì)不同物質(zhì)所用混合物的乙腈含量為55-65％)等度洗脫柱。
特定化合物的分析可能需要不同的HPLC-系統(tǒng)，例如柱ZorbaxExtend C18(3.5μm，150×4.6mm)；預(yù)柱Hypersil BDS，C-8(5μm，10×4.6mm)；RT；溶劑的乙腈含量65％。
于277nm進(jìn)行UV檢測(cè)。為便于校準(zhǔn)，血漿樣本可與式I化合物(其中R4為氫)或式I化合物(其中R4為如上定義，但不為氫)混合；兩者的濃度都在0.5-20μm范圍內(nèi)，還包括內(nèi)標(biāo)。用這些校準(zhǔn)設(shè)置計(jì)算絕對(duì)濃度。
在這些測(cè)定試驗(yàn)中，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)在血漿中，其中R4為如上定義、但不為氫的式I化合物的穩(wěn)定性低于其中R4為氫的式I化合物。由此可以可知，其中R4為如上定義、但不為氫的式I化合物可以作為其中R4為氫的式I化合物的前藥。另一方面，其中R4為氫的式I化合物可以成為高活性物質(zhì)，例如可以以此確定在體外和體內(nèi)均顯現(xiàn)出很好的活性的本發(fā)明化合物的基本結(jié)構(gòu)。因此，其中R4為氫的式I化合物可以作為那些具有常規(guī)藥物結(jié)構(gòu)的化合物。
在如口服后，本發(fā)明化合物顯示出優(yōu)良的溶解性和優(yōu)良的血漿水平。
因此，本發(fā)明化合物可以用作DC功能調(diào)節(jié)劑和免疫球蛋白合成抑制劑，尤其是IgE合成抑制劑，并因此可以用于治療IgE介導(dǎo)的疾病，特別IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病，例如由IgE表達(dá)介導(dǎo)的疾病，如變應(yīng)性皮炎(特別是在兒童中的變應(yīng)性皮炎)、蕁麻疹(特別是急性蕁麻疹)、過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻炎、食物過(guò)敏、過(guò)敏性結(jié)膜炎、枯草熱、大皰性類天皰瘡以及工業(yè)過(guò)敏。此外，這些化合物可以用于治療以炎癥為主要病理的其它疾病，例如自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、牛皮癬和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)以及腸胃疾病(例如克羅恩氏病)和移植物慢性排斥反應(yīng)。
另一方面，本發(fā)明提供了胺在制備用于治療IgE合成介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物中的用途，所述胺可被下列基團(tuán)所取代-苯基-取代的嘧啶；和-苯基；和-第三種取代基，所述胺為例如本發(fā)明化合物，第三種取代基包括例如如上定義的基團(tuán)R4。
在一個(gè)優(yōu)選方面，本發(fā)明提供了式I化合物(其中取代基R1至R4為如上定義)在制備用于治療IgE合成介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物中的用途。
當(dāng)然，根據(jù)例如所使用的特定化合物、給藥方式和所期望的治療，在上述用途中所采用劑量有所不同。然而，通常而言，當(dāng)以約1mg/kg至約30mg/kg動(dòng)物體重的日劑量給予化合物時(shí)(相應(yīng)地以分劑量每日給予2至4次)均可獲得滿意的結(jié)果。對(duì)于大多數(shù)大哺乳動(dòng)物來(lái)講，適當(dāng)給予總?cè)談┝繛榧s70mg至約2000mg，例如，以分劑量每日分4次給予或以緩釋形式給藥。單位劑量包括，例如，約17.5mg至約1000mg的化合物與至少一種固體或液體藥學(xué)上可接受的賦形劑(例如載體或稀釋劑)的混合物。
本發(fā)明化合物可以以已知標(biāo)準(zhǔn)的類似方法給藥，例如糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥。也可以與常規(guī)治療可接受的載體和稀釋劑以及任選的另外的賦形劑混合，并且可以以例如口服形式給藥，例如片劑、膠囊劑；或者，也可以局部給藥，例如以常規(guī)形式，如氣霧劑、軟膏或霜?jiǎng)?；胃腸外或靜脈內(nèi)給藥。當(dāng)然，物質(zhì)的濃度可以例如根據(jù)所給的化合物、所需治療以及給藥形式的性質(zhì)有所不同。然而，通常而言，當(dāng)局部給藥時(shí)，濃度為約0.05％(重量)至約5％(重量)，特別是約0.1％(重量)至約1％(重量)時(shí)，即可以獲得滿意的效果。
另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療IgE介導(dǎo)的疾病(例如IgE表達(dá)介導(dǎo)的疾病)、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物中的用途。
用于治療IgE介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物組合物可以通過(guò)將本發(fā)明化合物與至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑(例如載體或稀釋劑)混合在一起來(lái)制備。
另一方面，本發(fā)明提供了治療IgE介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的方法，該方法包括給予需要此類治療的宿主治療有效量的本發(fā)明化合物，例如以藥物組合物形式。
本發(fā)明化合物具有良好的耐受性，這可以通過(guò)常規(guī)方法證明。本發(fā)明化合物具有有益的藥理學(xué)性質(zhì)，例如在各種溶劑中具有優(yōu)良的可溶性。
另一方面，本發(fā)明提供了可以用作藥物的本發(fā)明化合物，優(yōu)選用于治療IgE介導(dǎo)疾病、自身免疫性疾病、腸胃疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)。
本發(fā)明化合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式(例如酸加成鹽或金屬鹽)或游離形式形式給藥，任選以溶劑合物的形式。鹽形式的本發(fā)明化合物與游離形式(任選以溶劑合物形式)的本發(fā)明化合物顯現(xiàn)出相同的活性。
另一方面，本發(fā)明提供含有本發(fā)明化合物與至少一種藥物賦形劑(例如載體或稀釋劑)的藥物組合物。這些組合物可以根據(jù)常規(guī)方法生產(chǎn)。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的一種或多種化合物可以單獨(dú)或與一種或多種其他藥用活性物質(zhì)聯(lián)合用作藥物進(jìn)行治療，例如用于治療IgE介導(dǎo)的疾病(特別是IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病)，例如IgE表達(dá)介導(dǎo)的疾病，如變應(yīng)性皮炎(特別是兒童變應(yīng)性皮炎)，蕁麻疹(特別是急性蕁麻疹)、過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻炎、食物過(guò)敏、過(guò)敏性結(jié)膜炎、枯草熱、大皰性類天皰瘡以及工業(yè)過(guò)敏。此外，這些化合物也可用于治療其他炎癥為主要病理的疾病，例如自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、牛皮癬和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)以及腸胃疾病(例如克羅恩氏病)和移植物慢性排斥反應(yīng)。所述其他藥用活性物質(zhì)包括例如類固醇、抗組胺藥、子囊霉素、ASM981、雷帕霉素。
聯(lián)合包括固定聯(lián)合，其中在同一制劑中含有兩種或多種藥用活性物質(zhì)；試劑盒，其中兩種或多種藥用活性物質(zhì)以分開(kāi)的制劑形式在同一包裝中一起銷售，例如在該包裝中還包括關(guān)于聯(lián)合給藥的說(shuō)明；以及自由聯(lián)合，其中聯(lián)合使用的藥用活性物質(zhì)分別進(jìn)行包裝，但同時(shí)提供關(guān)于同時(shí)或順序給藥的說(shuō)明。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合，該組合包含作為活性成分的本發(fā)明化合物和聯(lián)合(例如包括固定聯(lián)合、試劑盒和自由聯(lián)合)的一種或多種其他藥用活性物質(zhì)，例如其他藥用活性物質(zhì)選自如類固醇、抗組胺藥、子囊霉素、ASM981、雷帕霉素。
在下列說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例中，提及的溫度為攝氏度且未經(jīng)校正。在給出的1H-NMR數(shù)據(jù)中，化學(xué)位移的單位為δ；J值的單位為Hz。并且使用了下列縮寫m.p.熔點(diǎn)RT室溫br.寬峰實(shí)施例1N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺A)1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮于約100℃，將50g的3-氯苯乙酮和65ml的N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛加熱約24小時(shí)并冷卻至室溫。濾出形成的沉淀，洗滌并干燥。得到40g的1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮，為晶體形式。熔點(diǎn)72.8℃。
B)N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸鹽將13.75ml的37％HCl水溶液滴加入17.5ml的4-三氟甲基苯胺和28ml水的混合物中，將得到的混合物預(yù)熱至約75℃約20分鐘。于約75℃，向得到的混合物中滴加入12.9g氨腈的13ml水溶液，并于該溫度下繼續(xù)攪拌約4小時(shí)。得到的混合物冷卻至室溫并滴加入9.26g的Na2CO3的43ml水溶液。向得到的混合物中再加入140ml水并將得到的混合物攪拌過(guò)夜。濾出固體沉淀，洗滌并干燥。得到14g的N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸鹽，為晶體形式，熔點(diǎn)125.3℃。
C)N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺于120℃，將1.5g的1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮、1.7g的N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸鹽和15ml的n-丁醇的混合物加熱24小時(shí)，得到的混合物冷卻至室溫，得到固體沉淀。濾出該沉淀并用n-丁醇再結(jié)晶。得到1.0g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，為晶體形式，熔點(diǎn)201.5℃。
類似于實(shí)施例1所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚希梢缘玫较率交衔?其中R1EX、R2EX和R3EX如下表1定義且R4EX為H，其熔點(diǎn)在下表1中給出表1
以下式化合物為起始原料
其中R4為氫，即化合物N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，可以得到下列實(shí)施例6-68的化合物，其中R4如各實(shí)施例中所定義。
實(shí)施例6式IIEX化合物，其中R4EX為式-CO-CH3基團(tuán)N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-乙酰胺將1.6g式IIEX化合物(其中R4為氫)溶液和300mg的4-二甲基氨基嘧啶的30ml無(wú)水吡啶用乙酸酐處理并于70℃攪拌。自得到的混合物中蒸發(fā)溶劑，加入乙醚并將得到的沉淀經(jīng)過(guò)濾除去。濃縮得到的濾液并將得到的濃縮液經(jīng)硅膠中壓層析。自甲苯和戊烷的混合物中，得到N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-乙酰胺，為粉末狀的固體(晶體)形式。
熔點(diǎn)128.6-129.6℃。
類似于實(shí)施例6所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，得到式IIEX化合物，其中R4EX如下表2所示，其1H-NMR或熔點(diǎn)數(shù)據(jù)在表2中給出表2
實(shí)施例21式IIEX化合物，其中R4EX為下式基團(tuán) 4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸3-((S)-2-叔-丁氧基羰基氨基-丙?；被?-丙酯的游離堿和鹽酸鹽的形式將0.5g式IIEX化合物(其中R4為氫)的30ml無(wú)水氯代苯溶液用0.76ml的20％光氣甲苯溶液處理。于130℃，攪拌得到的混合物，將得到的澄清溶液冷卻至100℃，然后再加入0.76ml的20％光氣的甲苯溶液。于130℃攪拌得到的混合物，冷卻至100℃，并用氬氣處理以除去多余的光氣。向得到的混合物中加入144μl[(S)-1-(3-羥基-丙基氨基甲?；?-乙基]-氨基甲酸叔-丁酯和130μl吡啶的5ml氯代苯溶液，于130℃，攪拌得到的混合物并冷卻至室溫。得到的混合物用1N的HCl水溶液、水、飽和的NaHCO3溶液和鹽水洗滌并濃縮。得到的濃縮液經(jīng)硅膠快速層析。得到[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸3-((S)-2-叔-丁氧基羰基氨基-丙?；被?-丙酯，為油狀形式。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，RT)δ8.77(d；1H)，7.94(s；1H)，7.83(d；1H)，7.69(d；1H)，7.51(d；1H)，7.50-7.38(m；4H)，4.35(t；2H)，3.16(m；2H)，1.84(m；2H)，1.43(s；9H).
將276mg[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸3-((S)-2-叔-丁氧基羰基氨基-丙?；被?-丙酯的三氟乙酸溶液攪拌約2小時(shí)。將得到的混合物的溶劑蒸發(fā)并將蒸發(fā)后得到的殘留物溶于乙醚。得到的混合物用HCl的乙醚處理。得到[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸3-((S)-2-叔-丁氧基羰基氨基-丙?；被?-丙酯，為鹽酸鹽沉淀，濾出，洗滌并干燥。
m.p.54.6-54.8℃.
類似于實(shí)施例21所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，得到式IIEX化合物，其中R4EX如下表3所述，其1H-NMR或熔點(diǎn)數(shù)據(jù)在表3中給出表3
在表3中，熔點(diǎn)或1H-NMR數(shù)據(jù)是實(shí)施例22-28、29a和30化合物的鹽酸鹽形式的數(shù)據(jù)，例如29b的苯磺酸鹽形式以及例如31的三氟乙酸鹽形式。
實(shí)施例32a式IIEX化合物，其中R4EX為下式的基團(tuán) -(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸2-[(2-羥基-乙基)-甲基-氨基]-乙酯的鹽酸鹽形式將0.5g式IIEX化合物(其中R4為氫)的30ml無(wú)水氯代苯的溶液用0.76ml的20％光氣的甲苯溶液處理。于130℃攪拌得到的混合物，將得到的澄清溶液冷卻至100℃，然后再加入0.76ml的20％光氣的甲苯溶液。于130℃，攪拌得到的混合物，冷卻至100℃并用氬氣處理以除去多余的光氣。于室溫下，將得到的混合物用0.675ml的2-[(2-羥基-乙基)-甲基-氨基]-乙醇的5ml氯代苯溶液處理，并于130℃攪拌，冷卻至室溫并真空濃縮。濃縮殘留物溶于乙酸乙酯并用水、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌。得到的有機(jī)層用乙酸處理，真空濃縮得到的混合物，然后層析得到的濃縮液。將得到的乙酸鹽形式的[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸2-[(2-羥基-乙基)-甲基-氨基]-乙酯溶于乙醚并用HCl的乙醚處理。得到鹽酸鹽形式的[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸2-[(2-羥基-乙基)-甲基-氨基]-乙酯沉淀(晶體)，濾出，洗滌并干燥。熔點(diǎn)145.9-147.7℃。
類似于實(shí)施例32a所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚希玫绞絀IEX化合物，其中R4EX如下表4所述，其1H-NMR或熔點(diǎn)數(shù)據(jù)在表4中給出表4
在表4中實(shí)施例33、37和40的m.p.或1H-NMR數(shù)據(jù)為游離堿形式的化合物的數(shù)據(jù)，實(shí)施例34、35、36、38和39的m.p.或1H-NMR數(shù)據(jù)為鹽酸鹽形式的化合物的數(shù)據(jù)，實(shí)施例32b至32f)的m.p.為下列鹽的數(shù)據(jù)32b)甲磺酸鹽，32c)硫酸鹽，32d)酒石酸鹽，32e)p-甲苯磺酸鹽和32f)苯磺酸鹽。
實(shí)施例41式IIEX化合物，其中R4EX為-CH3[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-甲基-(4-三氟甲基-苯基)-胺將160mg的式IIEX化合物(其中R4為氫)的4ml無(wú)水二甲基甲酰胺溶液用NaH處理，于100℃，攪拌得到的混合物，冷卻至室溫并用57μl碘甲烷處理。于室溫下，將得到的混合物攪拌過(guò)夜。自得到的混合物中濾出沉淀并將得到的濾液真空濃縮。得到的濃縮殘留物經(jīng)硅膠快速層析。得到的[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-甲基-(4-三氟甲基-苯基)-胺自n-戊烷中沉淀，為固體形式，濾出并干燥。結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR數(shù)據(jù)證實(shí)。
類似于實(shí)施例41所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，制備式IIEX化合物(其中R4EX為CH3)。
實(shí)施例421H-NMR8.55(d，J＝5.2Hz，1H)；7.49(d，1H)；3.59(s，3H)實(shí)施例43R4EX為-CO-N(CH3)2于80℃，將0.5g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺、86mg的NaH、0.4ml的N，N-二甲基氨基甲酰氯的5ml N，N-二甲基甲酰胺的混合物加熱4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并向得到的殘留物中加入乙酸乙酯。洗滌并干燥后，得到的濃縮液經(jīng)硅膠層析，得到產(chǎn)物，熔點(diǎn)143℃。
實(shí)施例44R4Ex為 將1g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺、1.98ml的戊二酸單甲基酯氯化物、1.1ml吡啶和10mg的二甲基氨基吡啶的25ml甲苯的混合物加熱。用乙酸乙酯稀釋混合物，并用冷的0.01N的HCl水溶液、碳酸氫鹽水溶液和鹽水洗滌。干燥有機(jī)層，蒸發(fā)溶劑，得到產(chǎn)物。(d6-DMSO，500MHz，RT)8.83(d，J＝5.2，1H)；8.12-8.10(m，1H)；8.10-8.07(m，1H)；8.02(d，J＝5.2，1H)；7.79(d，J＝8.5，2H)7.65-7.62(m，1H)；7.57(t，J＝7.8，1H)；7.47(d，J＝8.2，2H)；3.53(s，3H)；2.84(t，J＝7.3，2H)；2.38(t，J＝7.5，2H)；1.89(quintett，J＝7.3，2H)類似于實(shí)施例44所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，得到式I化合物，其中R4EX如下表5所述，其1H-NMR(d6-DMSO，500MHz，RT，除非特別指明)或熔點(diǎn)在表5中給出表5 實(shí)施例49aR4Ex為 將0.01N的NaOH水溶液滴加入4.5g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺在四氫呋喃和水的混合物的溶液中。濾出形成的沉淀并蒸發(fā)溶劑。過(guò)濾得到的蒸發(fā)殘留物，用0.1N的HCl酸化得到的濾液至pH為2并用乙酸乙酯提取。洗滌有機(jī)層并干燥，除去溶劑得到固體。自二氯代甲烷和戊烷的混合物中結(jié)晶得到產(chǎn)物。熔點(diǎn)138.6℃C。1H-NMR(d6-DMSO，500MHz，RT)12.01(br，1H)；8.83(d，J＝5.2，1H)；8.10(m，1H)；8.09-8.07(m，1H)；8.01(d，J＝5.4，1H)；7.78(d，J＝8.7，2H)；7.63-7.61(m，1H)；7.56(t，J＝7.8，1H)；7.47(d，J＝8.7，2H)；2.84(t，J＝7.5，2H)；2.29(t，J＝7.4，2H)；1.87(quintett，J＝7.3，2H)實(shí)施例49b將40mg氫氧化鈣加至0.5g實(shí)施例49a化合物、11ml四氫呋喃和5ml水的混合物中。搖動(dòng)得到的混合物幾分鐘，放置于室溫。過(guò)濾分離的晶體并用冷的異丙醇洗滌得到實(shí)施例49a化合物的鈣鹽。
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz，RT)8.83(d，J＝5.3)；8.00(d，J＝5.3)；7.78(d，J＝8.5)；7.45(d，J＝8.3)；2.78(t，J＝7.5)；1.99(t，J＝7.3)；1.8(m)類似于實(shí)施例49a所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，得到式I化合物，其中R4EX如下表6所述，其1H-NMR(d6-DMSO，500MHz，RT)或熔點(diǎn)在表6中給出表6
實(shí)施例54R4Ex為 將1.97ml二異丙基乙基胺滴加入2g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺、1.21ml的琥珀酰氯和10mg二甲基氨基吡啶的CH2Cl2的混合物中。于室溫下，攪拌混合物，冷卻并加入2g的L-丙氨酸甲基酯鹽酸鹽。向混合物中滴加入3.4ml二異丙基乙基胺并繼續(xù)攪拌。得到的混合物用乙酸乙酯稀釋并干燥。蒸發(fā)溶劑，結(jié)晶后得到產(chǎn)物(熔點(diǎn)170.9℃C)。
(d6-DMSO，500MHz，RT)8.83(d，J＝5.3，1H)；8.31(d，J＝7.0，1H)；8.12-8.08(m，2H)；8.01(d，J＝5.3，1H)；7.79(d，J＝8.4，2H)；7.64-7.62(m，1H)；7.57(t，J＝7.9，1H)；7.46(d，J＝8.2，2H)；4.24(quintett，J＝7.2，1H)；3.58(s，3H)；3.04-2.98(m，2H)；2.60-2.51(m，2H)；1.24(d，J＝7.3，3H)類似于實(shí)施例54所述方法，但采用適當(dāng)?shù)钠鹗荚?，得到式I化合物，其中R4如下表7所述，其1H-NMR(d6-DMSO，500MHz，RT)或熔點(diǎn)在表7中給出表7


實(shí)施例68R4Ex為 將6.5g的3-[5-(2-氯代羰基-乙氧基)-戊基氧基]-丙酰氯在10ml的CH2Cl2中的溶液滴加入1g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺、10mg二甲基氨基吡啶和2.7ml的二異丙基乙基胺的CH2Cl2的混合物中。于室溫下攪拌得到的混合物，冷卻并加入乙腈和水；繼續(xù)攪拌混合物。得到的混合物用乙酸乙酯提取。洗滌形成的有機(jī)層，干燥，除去溶劑，得到產(chǎn)物。
1H-NMR(d6-DMSO，500MHz，RT)8.83(d，J＝5.2，1H)；8.12(t，J＝1.9，1H)；8.10(dt，J＝7.6，1.5，1H)；8.02(d，J＝5.4，1H)；7.79(d，J＝8.3，2H)；7.64(m，1H)；7.57(t，J＝7.9，1H)；7.44(d，J＝8.1，2H)；3.68(t，J＝6.4，2H)；3.51(t，J＝6.4，2H)；3.03(t，J＝6.5，2H)；2.39(t，J＝6.3，2H)；1.47-1.39(m，4H)；1.28-1.21(m，2H)。
權(quán)利要求
1.下式化合物 其中R1為鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R2為氫、鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R3為鹵素或鹵代(C1-4)烷基，R4為氫、(C1-8)烷基、羥基(C1-6)烷基或下式基團(tuán)-CO-R5，-CO-(CH2)m-OR6，-CO-CO-R7，-CO-CO-OR8，-CO-N(R9R10)，-CO-(CH2)n-CO-R11，-CO-(CHR15)-O-(CH2)o-CO-R11，-CO-(CH2)p-O-(CH2)q-O-(CH2)r-R16，-CO-O-(CH2)s-O-CO-R17，-CO-O-(CH2)t-N(R18R19)，-CO-O-(CH2)u-NH-CO-CH(NH2)-R20，或者-CO-O-(CH2)w-NH-CO-R17，其中R5為氫、(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、氨基、(C1-4)烷基氨基、二(C1-4)烷基氨基、芳基或具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，R6為氫、(C1-4)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、被具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基取代的(C1-4)烷基、氨基(C1-6)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、二(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、羥基(C1-6)烷基、羥基(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基或氨基酸殘基，如-CH2-CH(NH2)-COOH，R7和R8互相獨(dú)立為(C1-4)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基或具有1-4個(gè)選自N、O或S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，R9和R10互相獨(dú)立為氫或(C1-4)烷基或R9和R10之一為氫且另一個(gè)為(C3-8)環(huán)烷基、(C1-4)烷基、芳基或雜環(huán)基，R11為(C1-4)烷基、-OR12、-NR13R14、氨基酸、它們的(C1-4)烷基酯或它們的二(C1-4)烷基酯，R12為氫或(C1-4)烷基，R13和R14互相獨(dú)立為氫、(C1-4)烷基、氨基(C1-6)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基、二(C1-4)烷基氨基(C1-6)烷基，R15為氫或(C1-4)烷基，R16為氫、(C1-4)烷基、羧基或羧酸酯，R17為氨基(C1-4)烷基、(C1-4)烷基氨基(C1-4)烷基或二(C1-4)烷基氨基(C1-4)烷基，R18為氫或(C1-4)烷基，R19為羥基(C1-4)烷基，R20為(C1-4)烷基或羥基(C1-4)烷基，m為0-4，n為2-8，o為0-4，p為0-4，q為1-8，r為0-4，s為1-4，t為1-4，u為1-6，且w為1-6。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中-R1為氯或三氟甲基，-R2為氫或三氟甲基，-R3為氯、氟或三氟甲基，-R4為氫；(C1-4)烷基，如甲基；羥基(C1-4)烷基，如羥基乙基；或下式基團(tuán)-CO-R5，-CO-(CH2)m-OR6，-CO-CO-R7，-CO-CO-OR8，-CO-N(R9R10)，-CO-(CH2)n-CO-R11，-CO-(CHR15)-O-(CH2)o-CO-R11，-CO-(CH2)p-O-(CH2)q-O-(CH2)r-R16，-CO-O-(CH2)s-O-CO-R17，-CO-O-(CH2)t-N(R18R19)，-CO-O-(CH2)u-NH-CO-CH(NH2)-R20，或-CO-O-(CH2)w-NH-CO-R17，其中R5為氫、(C1-4)烷基、(C3-6)環(huán)烷基、二甲基氨基、苯基或?yàn)榫哂幸粋€(gè)O雜原子的6-元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基，如四氫吡喃基，R6為氫、(C1-4)烷基、被為具有1或2個(gè)選自N或O的雜原子的5或6元雜環(huán)環(huán)系的雜環(huán)基取代的(C1-2)烷基，例如包括未取代的吡咯烷、嗎啉和哌嗪以及被如(C1-2)烷基或(C1-2)羥基烷基取代的哌嗪；氨基(C1-4)烷基、(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、二(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、羥基(C1-3)烷基、羥基(C1-2)烷基氨基(C1-2)烷基或氨基酸殘基，如-CH2-CH(NH2)-COOH，R7和R8互相獨(dú)立為(C1-2)烷基或苯基，R9和R10互相獨(dú)立為氫或(C1-2)烷基，R11為(C1-2)烷基、-OR12、-NR13R14、氨基酸、它們的(C1-2)烷基酯或它們的二(C1-2)烷基酯，優(yōu)選選自下列的氨基酸丙氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和賴氨酸，其中連接是通過(guò)α-氨基基團(tuán)進(jìn)行，或者在為如賴氨酸的情況下，則通過(guò)∈-氨基基團(tuán)進(jìn)行，R12為氫或(C1-2)烷基，R13和R14互相獨(dú)立為氫、(C1-2)烷基、氨基(C1-4)烷基、(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基、二(C1-2)烷基氨基(C1-4)烷基，R15為氫或(C1-2)烷基，R16為氫、(C1-2)烷基、羧基或羧酸酯，R17為氨基(C1-2)烷基，R18為氫或(C1-2)烷基，R19為羥基(C1-2)烷基，R20為(C1-2)烷基或羥基(C1-2)烷基，m為0或1，n為2-4，o為0或1，p為0-2，q為2-5，r為0-2，s為2，t為2，u為1-3，且w為1-3。
3.為式I化合物的權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為氯，R2為氫，R3為三氟甲基，且R4為氫。
4.為式I化合物的權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為氯，R2為氫，R3為三氟甲基，且R4為式-CO-O-(CH2)2-N[(C2H5OH)(CH3)]基團(tuán)。
5.鹽形式的權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物在制備用于治療IgE合成介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、胃腸疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物中的用途。
7.治療IgE合成介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、胃腸疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的方法，該方法包括給予需要該治療的宿主治療有效量的權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物。
8.用作藥物的權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物。
9.含有權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物以及至少一種藥用賦形劑的藥物組合物。
10.胺在制備用于治療IgE合成介導(dǎo)的疾病、自身免疫性疾病、胃腸疾病和移植物慢性排斥反應(yīng)的藥物中的用途，該胺被下列基團(tuán)取代-苯基-取代的嘧啶；和-苯基；以及-第三種取代基，例如如權(quán)利要求1-5中定義的R4。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)可被苯基－取代的嘧啶、苯基以及第三種取代基取代的胺以及該胺作為藥物的用途。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1622807SQ03802737
公開(kāi)日2005年6月1日 申請(qǐng)日期2003年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月1日
發(fā)明者M·布魯斯, P·埃特邁爾, K·魏甘德, M·沃伊澤奇拉格爾 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司