專利名稱：新的組織蛋白去乙酰酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有關(guān)一種具有組織蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制酵素活性的化合物。并進(jìn)一步涉及其制法、含其的組合物、及其于活體內(nèi)及活體外抑制HDAC的用途及其作為醫(yī)藥的用途，例如作為抑制增生性病癥(如癌癥與牛皮癬)的醫(yī)藥的用途。
所有真核生物細(xì)胞中，染色質(zhì)中的基因組DNA與組織蛋白結(jié)合形成核小體。各核小體分別由各組織蛋白質(zhì)H2A、H2B、H3與H4的兩套復(fù)本形成的蛋白質(zhì)八聚體組成。DNA環(huán)繞此蛋白質(zhì)核心，以組織蛋白的堿性氨基酸與DNA的帶負(fù)電價(jià)磷酸根交互作用。此等組織蛋白核心最常見的轉(zhuǎn)譯后修飾作用為已保留的高堿性N-末端離氨酸殘基的ε-氨基的可逆性乙?；饔谩Ｓ山M織蛋白乙?；D(zhuǎn)化酶(群)與本文中稱為“HDAC”的組織蛋白去乙酰酶(群)之間競爭形成的動態(tài)平衡建立組織蛋白乙?；饔玫姆€(wěn)定狀態(tài)。組織蛋白乙?；饔门c去乙酰化作用長久以來即與轉(zhuǎn)錄控制相關(guān)。近來所選殖出編碼不同組織蛋白乙?；D(zhuǎn)化酶及組織蛋白去乙酰酶的基因提供為組織蛋白乙?；饔门c轉(zhuǎn)錄控制之間關(guān)系的可能解釋。組織蛋白的可逆性乙酰化作用可造成染色質(zhì)再造及作為基因轉(zhuǎn)錄的控制機(jī)轉(zhuǎn)。通常，組織蛋白的過度乙?；饔脮偈够虮憩F(xiàn)，而組織蛋白去乙?；饔脛t與轉(zhuǎn)錄抑制有相關(guān)性。已知組織蛋白乙?；D(zhuǎn)化酶具有作為轉(zhuǎn)錄共活化劑的作用，而組織蛋白去乙酰酶則屬于轉(zhuǎn)錄抑制途徑。
組織蛋白乙?；c去乙酰化之間的動態(tài)平衡關(guān)系正常細(xì)胞生長所必需。抑制組織蛋白去乙酰酶則可造成細(xì)胞循環(huán)停止、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及使轉(zhuǎn)形的表型逆轉(zhuǎn)。因此，HDAC抑制劑在治療細(xì)胞增生疾病或病癥上具有極大醫(yī)療潛力(Marks等人，Nature ReviewsCancer1194-202，2001)。
有關(guān)組織蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制劑研究顯示，此等酵素的確在細(xì)胞增生及分化上扮演重要角色。抑制劑曲古柳菌素A(TrichostatinA)(TSA)造成G1與G2期的細(xì)胞循環(huán)停止，使不同細(xì)胞株的已轉(zhuǎn)形表型反轉(zhuǎn)，并誘發(fā)弗瑞德(Friend)白血病細(xì)胞及其他細(xì)胞分化。已有文獻(xiàn)指出，TSA(與辛二酰基替苯胺異羥肟酸SAHA)在小白鼠體內(nèi)，可制抑細(xì)胞生長，誘發(fā)末端分化，及防止腫瘤形成(Finnin等人，Nature，401188-193，1999)。
也有文獻(xiàn)指出，曲古柳菌素A適用于治療纖維變性例如肝纖維變性與肝硬化(Greets等人，1998年3月11日公告的歐洲專利申請案EP 0 827 742)。
2001年5月31日公告的專利申請案WO 01/38322特別揭示通式Cy-L1-Ar-Y1-C(O)-NH-Z的其他組織蛋白去乙酰酶抑制劑，并提供治療細(xì)胞增生疾病與病癥的組合物與方法。
2001年9月27日公告的專利申請案WO 01/70675揭示如式Cy2-Cy1-X-Y1-W的組織蛋白去乙酰酶抑制劑，并進(jìn)一步提供治療細(xì)胞增生疾病與病癥的組合物與方法。
所要解決的問題為提供具有高酵素活性的組織蛋白去乙酰酶抑制劑，也需具備有利性質(zhì)，如細(xì)胞活性及提高的生物利用率，最好提高口服的生物利用率，且副作用很小或沒有。
本發(fā)明新穎化合物可解決上述問題。本化合物的結(jié)構(gòu)式不同于現(xiàn)有技術(shù)。
本發(fā)明化合物展現(xiàn)優(yōu)越的活體外組織蛋白去乙酰酶抑制酵素活性。本化合物在細(xì)胞活性上具有有利性質(zhì)，且針對抑制G1與G2兩個(gè)檢查點(diǎn)的細(xì)胞循環(huán)發(fā)展具有專一性質(zhì)(p21誘發(fā)能力)。本發(fā)明化合物具有良好代謝安定性及高度生體可用率，更特定而言，其展現(xiàn)口服生體可用性。
本發(fā)明涉及式(I)化合物 其N-氧化物型、其醫(yī)藥上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)體，其中n為0、1、2或3，且當(dāng)n為0時(shí)，則為一直接鍵合；t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時(shí)，則為一直接鍵合；各Q為氮或-C≤；
各X為氮或-C≤；各Y為氮或-C≤；各Z為氮或-CH＜；R1為-C(O)NR7R8、-NHC(O)R9、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨(dú)立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基；R9分別獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C1-6烷羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯啶酮或甲基咪唑基；R10分別獨(dú)立選自氫或C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺酰基吡嗪基；-L-為一直接鍵合的化學(xué)鍵或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷氧基、氨基、羰基或氨羰基；各R3分別獨(dú)立為氫原子，其中一個(gè)氫原子可被選自芳基的取代基置換；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)


其中各s分別為0、1、2、3、4或5；各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；由芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺酰基；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；芳基磺酰基；芳基磺?；被?；芳氧基；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫苯基；被下列基團(tuán)取代的硫苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基六氫吡啶基、C1-6烷氧基六氫吡啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；被羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；被芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯啶基；吡咯基；六氫吡啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷氨基；嗎啉基C1-6烷氨基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺酰基哌嗪基；萘磺酰基六氫哌嗪；萘磺酰基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺酰基；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯?；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基六氫哌嗪基；C1-6烷氧基六氫吡啶基C1-6烷基；六氫吡啶基氨基C1-6烷氨基；六氫吡啶基氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；(C1-6烷基六氫吡啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；(C1-6烷基六氫吡啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯啶基C1-6烷基；吡咯啶基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；被選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；被C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；被分別獨(dú)立選自下列1、2或3個(gè)取代基取代的苯基；鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨羰基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、六氫吡啶基C1-4烷氧基、吡咯啶基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯被酋；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基六氫吡啶基、C1-4烷氧基六氫吡啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、被-CH＝CH-CH＝CH-取代的呋喃基、吡咯啶基C1-4烷基、吡咯啶基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1-4烷氨基、嗎啉基C1-4烷氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、六氫吡啶基氨基C1-4烷氨基、六氫吡啶基氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、(C1-4烷基六氫吡啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、(C1-4烷基六氫吡啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷氨基、羥基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫苯基C1-4烷氨基；各R5與R6可置于氮上替代氫；上述芳基為苯基，或?yàn)楸灰粋€(gè)或多個(gè)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥羰基的取代基取代的苯基。
“組織蛋白去乙酰酶抑制劑”是指可與組織蛋白去乙酰酶交互作用且可抑制其活性，更特定言之抑制其酵素活性的化合物。抑制組織蛋白去乙酰酶酵素活性意指降低組織蛋白去乙酰酶脫除組織蛋白的乙?；哪芰Α］^佳者，此等抑制作用為專一性，亦即組織蛋白去乙酰酶抑制劑降低組織蛋白去乙酰酶脫除組織蛋白的乙?；哪芰r(shí)所需濃度低于該抑制劑為了產(chǎn)生一些其他為相關(guān)生物效應(yīng)時(shí)所需濃度。
如上文與下文中定義所使用的鹵基通指氟、氯、溴與碘；C1-4烷基指含有1至4個(gè)碳原子的直鏈與分支鏈飽和烴基，如，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基，等等；C1-6烷基包括C1-4烷基及含有5至6個(gè)碳原子的較高碳數(shù)同系物，如，例如戊基、2-甲基-丁基、己基、2-甲基戊基，等等；C1-6烷二基指含有1至6個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈與分支鏈飽和烴基，如，例如亞甲基、1，2-乙二基、1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基，及其分支的異構(gòu)體，如2-甲基戊二基、3-甲基戊二基、2，2-二甲基丁二基、2，3-二甲基丁二基，等等；三鹵C1-6烷基指含有三個(gè)相同或相異鹵基取代基的C1-6烷基，例如三氟甲基；C2-6烯二基指含有一個(gè)雙鍵及2至6個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈與分支鏈烴基，如，例如乙烯二基、2-丙烯二基、3-丁烯二基、2-戊烯二基、3-戊烯二基、3-甲基-2-丁烯二基，等等；氨芳基指經(jīng)氨基取代的芳基；及C3-10環(huán)烷基包括含有3至10個(gè)碳原子的環(huán)狀烴基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、等等。
“另一個(gè)Zn-螯合劑”指可與Zn-離子交互作用的基團(tuán)，其可出現(xiàn)在酵素結(jié)合位置。
醫(yī)藥上可接受的加成鹽包括醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及醫(yī)藥上可接受的堿加成鹽。如上述的醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽包括式(I)化合物可形成的具醫(yī)療活性的無毒性酸加成鹽型。具有堿性性質(zhì)的式(I)化合物經(jīng)過適當(dāng)酸處理后，可轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接近的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚ɡ鐭o機(jī)酸類，如氫鹵酸，例如鹽酸或氫溴酸；硫酸；硝酸；磷酸，等等酸類；有機(jī)酸類如，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(亦即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己胺磺酸、水楊酸、對氨基-水楊酸、雙羥萘酸，等等酸類。
具有酸性性質(zhì)的式(I)化合物可經(jīng)過適當(dāng)有機(jī)或無機(jī)堿處理后，轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受的堿加成鹽。適當(dāng)?shù)膲A式鹽包括例如銨鹽、堿金屬與堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等等，與有機(jī)堿形成的鹽例如芐星青霉素G、N-甲基-D-葡糖胺、哈胺鹽類，及與氨基酸(如，例如精氨酸、賴氨酸)，等等形成的鹽類。
“酸或堿加成鹽”一詞也包括式(I)化合物可形成的水合物及溶劑加成型。此等型式的實(shí)施例為例如水合物與醇化物，等等。
本文所采用“式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)體”指由式(I)化合物的相同原子組成相同鍵合順序但具有無法交換的不同立體結(jié)構(gòu)的所有可能化合物。除非另有說明，否則化合物的化學(xué)式包括該化合物可能出現(xiàn)的所有可能立體化學(xué)異構(gòu)體的混合物。該混合物可包含該化合物基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對映異構(gòu)體與/或?qū)τ钞悩?gòu)體。呈純型或其混合物的式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)體均涵括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(I)化合物的N-氧化物型包括彼等式(I)中一個(gè)或數(shù)個(gè)氮原子被氧化成所謂的N-氧化物的化合物，特定言之，彼等式中一個(gè)或多個(gè)六氫吡啶基、哌嗪基或噠嗪基的氮為N-氧化的N-氧化物。
有些式(I)化合物也可呈其互變異構(gòu)體。此等型式雖然未出現(xiàn)在上式中，但也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文中若使用“式(I)化合物”一詞時(shí)，也包括醫(yī)藥上可接受的加成鹽及所有立體異構(gòu)體。
本文所采用“組織蛋白去乙酰酶”與“HDAC”意指可自組織蛋白的N-末端離氨酸殘基的ε-氨基上脫除乙?；慕退刈迦褐械娜我环N。除非本文中另有說明，否則“組織蛋白”一詞意指來自任何物種的任何組織蛋白的蛋白質(zhì)，包括H1、H2A、H2B、H3、H4與H5。人類HDAC蛋白質(zhì)或基因產(chǎn)物包括(但不限于)HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC-9與HDAC-10。組織蛋白去乙酰酶亦可衍生自原蟲或真菌來源。
第一類值得注意的化合物包括彼等式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)n為1或2；b)t為0、1、2或4；c)各Q為-C≤；d)R1為-C(O)NH(OH)；e)R2為氫或硝基；f)-L-為一直接鍵合或選自C1-6烷二基的二價(jià)基團(tuán)；g)R4為氫；
為選自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-5)、(a-6)、(a-11)、(a-18)、(a-20)、(a-21)、(a-32)、(a-33)、(a-47)、51)的基團(tuán)；i)各s分別獨(dú)立為0、1、2或4；j)各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；鹵基；三鹵C1-6烷基；C1-6烷基；由芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；苯并呋喃基；萘磺?；?；由芳氧基取代的吡啶基；苯基；或由選自羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基中一個(gè)取代基取代的苯基。
第二類值得注意的化合物包括彼等式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)n為1；b)t為0、1或2；c)各Q為-C≤；d)各X為氮；e)各Y為氮；f)R1為-C(O)NH(OH)；g)R2為氫；h)-L-為一直接鍵合；i)各R3分別獨(dú)立代表氫原子；j)R4為氫； 為選自(a-6)、(a-11)、(a-20)、(a-47)或(a-51)的基團(tuán)；l)；各s分別獨(dú)立為0、1或4；m)各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；C1-6烷基；C1-6烷氧基；萘磺?；?；或經(jīng)羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基取代的苯基。
第三類值得注意的化合物包括彼等式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)R1為-C(O)NH(OH)；d)-L-為一直接鍵合。
第四類值得注意的化合物包括彼等式(I)中符合下列一項(xiàng)或多項(xiàng)限制的化合物a)t為1、2、3或4；b)R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；c)R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；d)-L-為一直接鍵合或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；e)R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氨基C1-6烷基、或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)與(a-51)；g)各s分別為0、1、2、3或4；h)R5為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺酰基；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫苯基；呋喃基、被羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；被芳基與C1-6烷基取代的噁唑基C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯啶基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基六氫吡啶基；吡唑基；被選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中一或兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；被C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；i)R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；涣u基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或被分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基。
另一類較佳化合物包括彼等式(I)化合物，式中t為1、2、3或4；R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；-L-為一直接鍵合或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氨基C1-6烷基、或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)與(a-51)；各s分別為0、1、2、3或4；R5為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫苯基；呋喃基、被羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；被芳基與C1-6烷基取代的 唑基C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯啶基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基六氫吡啶基；吡唑基；被選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中一或兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；被C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基。
另一類較佳化合物為彼等式(I)化合物，其中n為1或2；t為0、1、2或4；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫或硝基；-L-為一直接鍵合或選自C1-6烷二基的二價(jià)基團(tuán)；R4為氫； 為選自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-5)、(a-6)、(a-11)、(a-18)、(a-20)、(a-21)、(a-32)、(a-33)、(a-47)、或(a-51)的基團(tuán)；各s分別為0、1、2或4；且各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；鹵基；三鹵C1-6烷基；C1-6烷基；被芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；苯并呋喃基；萘磺?；?；被芳氧基取代的吡啶基；苯基；或被選自羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基中一個(gè)取代基取代的苯基。
另一類更優(yōu)選化合物為彼等式(I)化合物，其中n為1；t為0或1；各Q為-C≤；各X為氮；各Y為氮；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為一直接鍵合；各R3分別獨(dú)立代表氫原子；R4為氫； 為選自(a-6)、(a-11)、(a-20)、(a-47)或(a-51)的基團(tuán)；各s分別為0、1或4；且各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；C1-6烷基；C1-6烷氧基；萘磺?；?；或被羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基取代的芳基。
最優(yōu)選化合物為No.3、No.4、No.8、No.5、No.7、No.6與No.9的化合物。
式(I)化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽與N-氧化物及立體化學(xué)異構(gòu)體可按一般方式制備。其一般合成途徑包括例如a)式(I)中R1為-C(O)NH(OH)的異羥肟酸(稱為式(I-a)化合物)的制法可由式(II)中間體與適當(dāng)酸，如，例如三氟乙酸反應(yīng)。該反應(yīng)是在適當(dāng)溶劑中進(jìn)行，如，例如甲醇。
b)式(II)中間體的制法可由式(III)中間體與式(IV)中間體于適當(dāng)試劑的存在下反應(yīng)，如N′-(乙基碳化亞胺?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(EDC)與1-羥基-1H-苯并三唑(HOBT)。該反應(yīng)可于合適溶劑中進(jìn)行，如DCM與THF的混合物。
c)式(III)中間體的制法可由式(V)中間體與適當(dāng)堿(如NaOH)，于合適溶劑的存在下反應(yīng)，如乙醇。

式(I)化合物亦可使用固相合成技術(shù)制備。通常，固相合成法涉及由中間體于合成法中與聚合物載體反應(yīng)。此由聚合物承載的中間體可再進(jìn)行許多合成步驟。每一步驟后，過濾樹脂，以多種不同溶劑洗滌數(shù)次，以排除雜質(zhì)。每一步驟的樹脂可以分開與下一個(gè)步驟中的不同中間體反應(yīng)，以合成大量化合物。制程中最后一個(gè)步驟之后，以試劑處理樹脂或加工裂解樹脂上的樣本。固相化學(xué)中所使用技術(shù)的更詳細(xì)的說明參見例如“The Combinatorial Index”(B.Bunin AcademicPress)及Novabiochem′s 1999 Catalogue & Peptide SynthesisHandbook(瑞士Novabiochem AG)，其內(nèi)容已以引用的方式并入本文中。
式(I)化合物及一些中間體的結(jié)構(gòu)式可具有至少一個(gè)立體中心。此立體中心可呈R或S構(gòu)型。
依上述制法制備的式(I)化合物通常為對映異構(gòu)體的外消旋混合物，其可依相關(guān)技術(shù)已知的解析法分離。式(I)的外消旋化合物可通過與合適的對手性酸反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的非對映異構(gòu)體的鹽形式。該非對映異構(gòu)體鹽型再由例如選擇性或分段式結(jié)晶法分離，使用堿釋出對映異構(gòu)體。另一種分離式(I)化合物的對映異構(gòu)體的方法涉及使用對手性固相進(jìn)行液相層析。若該反應(yīng)為立體專一性反應(yīng)時(shí)，該純立體化學(xué)異構(gòu)體亦可衍生自適當(dāng)起始物的相應(yīng)純立體化學(xué)異構(gòu)體。若需要專一性立體異構(gòu)體時(shí)，最好以立體專一性制法合成該化合物。此等方法最好使用純對映異構(gòu)體起始物。
式(I)化合物、其醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)體具有抑制組織蛋白去乙酰酶(HDAC)效果的有價(jià)值的醫(yī)藥性質(zhì)。
本發(fā)明提供一種抑制細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)形細(xì)胞)異常生長的方法，其是給予有效量的本發(fā)明化合物。細(xì)胞的異常生長指細(xì)胞不依靠正常的調(diào)節(jié)機(jī)制生長(亦即喪失接觸抑制作用)。其包括直接造成細(xì)胞生長停止、末端分化及/或癌癥細(xì)胞的細(xì)胞凋亡，及間接抑制腫瘤的新血管形成兩種作法來抑制腫瘤生長。
本發(fā)明亦提供一種抑制腫瘤生長的方法，其系對有此需要的個(gè)體例如哺乳動物(更特定言之人類)給予有效量的本發(fā)明化合物。特定言之，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤生長的方法，其系給予有效量的本發(fā)明化合物?？墒芤种频哪[瘤實(shí)施例為(但不限于)肺癌(腺癌瘤，包括非小細(xì)胞肺癌)、胰癌(例如胰癌瘤，如，外分泌胰癌瘤)、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌瘤，如，例如結(jié)腸腺癌瘤與結(jié)腸腺瘤)、攝獲腺癌包括前進(jìn)式疾病、類淋巴球的造血性腫瘤(例如急性淋巴球性白血球、B-細(xì)胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma))、骨髓性白血病(例如急性骨髓性白血病(AML))、甲狀腺濾泡癌、脊髓發(fā)育不良癥候群(MDS)、間質(zhì)性腫瘤(例如纖維肉瘤與橫紋肌肉瘤)、黑色素瘤、惡性畸胎瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、良性皮膚腫瘤(例如角化棘皮瘤)、乳癌瘤(例如前進(jìn)式乳癌)、腎癌瘤、卵巢癌瘤、膀胱癌瘤、與上皮癌瘤。
根據(jù)本發(fā)明化合物可用于其他醫(yī)療目的，例如a)在治療癌癥的腫瘤放射法之前、期間或之后投與根據(jù)本發(fā)明化合物，使腫瘤對放射療法產(chǎn)生敏化作用；b)治療關(guān)節(jié)病變與骨病變病癥，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多關(guān)節(jié)炎、干癬性關(guān)節(jié)炎、僵直性脊柱炎與全身性紅斑狼瘡；c)抑制平滑肌細(xì)胞增生，包括血管增生性病變、動脈粥樣硬化及術(shù)后再狹窄；d)治療炎癥與皮膚病，如潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏癥、過敏性鼻炎、移植物對抗宿主疾病、結(jié)膜炎、氣喘、ARDS、貝希特氏癥(Behcetsdisease)、移植排斥、蕁麻疹、過敏性皮膚炎、局部性脫發(fā)、硬皮癥、疹病、濕疹、皮肌炎、痤瘡、糖尿病、全身性紅斑狼瘡、川崎氏癥、多發(fā)性硬化、肺氣腫、囊性纖維變性與慢性支氣管炎；e)治療子宮內(nèi)膜異位癥、子宮纖維瘤、功能障礙性子宮出血及子宮內(nèi)膜增生；f)治療眼睛血管形成，包括影響視網(wǎng)膜與脈絡(luò)膜血管的血管病變；g)治療心功能障礙；h)抑制免疫壓抑性病癥，如治療HIV感染；i)治療腎功能障礙；j)壓抑內(nèi)分泌病變；k)抑制生糖作用異常的功能障礙；l)治療神經(jīng)病變，例如帕金森氏癥或造成認(rèn)知病變的神經(jīng)病變，例如阿茲海默氏癥或與聚谷酰胺有關(guān)的神經(jīng)性疾?。?br> m)抑制神經(jīng)肌肉病變，例如肌萎縮性側(cè)索硬化；n)治療脊柱肌肉萎縮；o)治療其他可因加強(qiáng)基因表現(xiàn)而治療的其他病變；p)加強(qiáng)基因療法。
因此，本發(fā)明揭示以式(I)化合物作為醫(yī)藥的用途及以式(I)化合物制造醫(yī)藥供治療上述一種或多種病癥的用途。
式(I)化合物、其醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)體基于其可用于生物檢體中，檢測或判別HDAC，而具有有價(jià)值的診斷性質(zhì)，其包括檢測或測定有標(biāo)記的化合物與HDAC之間所形成的錯(cuò)合物。
該檢測或判別法可使用標(biāo)記如放射性同位素、酵素、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)，等等的標(biāo)記試劑的化合物。放射性同位素實(shí)例包括125I、131I、3H與14C。酵素的檢測法通常與適當(dāng)受質(zhì)共軛后，再催化可檢測的反應(yīng)。其實(shí)例包括例如β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、過氧化酶與蘋果酸脫氫酶，以辣根過氧化酶較佳。發(fā)光物質(zhì)包括例如魯米諾(luminol)及魯米諾衍生物、熒光素、多管水母素(aequorin)與熒光素酶。
生物樣本的定義為體組織或體液。體液實(shí)例為腦脊髓液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液，等等。
就其實(shí)用的醫(yī)藥性質(zhì)而言，本化合物可制成不同給藥形式。
為了制備本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，使用有效量的堿或酸加成鹽型特定化合物作為活性成分，與醫(yī)藥上可接受的載劑均勻混合，該載劑可呈多種不同形式，依賴所需給藥制劑型式而定。此等醫(yī)藥組合物最好呈適合例如經(jīng)口、直腸、經(jīng)皮膚給藥或非經(jīng)腸式注射用的單位劑型。例如制備口服劑型組合物時(shí)，任何常用的醫(yī)藥介質(zhì)均可使用，如，例如水、甘醇、油類、醇類，等等，可用于制備口服用液體制劑，如懸浮液、糖漿、酏劑與溶液；或固態(tài)載劑如淀粉、糖類、高嶺土、潤滑劑、結(jié)合劑、崩解劑，等等，可用于制備散劑、丸劑、膠囊、與片劑。
由于片劑與膠囊方便給藥，因此代表最有利的口服單位劑型，此時(shí)當(dāng)然使用固態(tài)醫(yī)藥載劑。非經(jīng)腸式組合物中的載劑通常包括無菌水，至少占絕大部分，但亦可包含其他成份，例如有助于溶解的成份。例如可制備注射液，其中載劑則包括生理食鹽水溶液、葡萄糖溶液或生理食鹽水與葡萄糖溶液的混合物。亦可制備注射用懸浮液，此時(shí)則可使用適當(dāng)液態(tài)載劑、懸浮劑，等等。適合經(jīng)皮膚給藥的組合物中，載劑可視需要包含滲透加強(qiáng)劑及/或合適濕化劑，可視需要與任何性質(zhì)的少量合適添加物組合，該添加物不可對皮膚引起顯著的不良效應(yīng)。此等添加物可促進(jìn)給藥至皮膚及/或可能有助于制備所需組合物。此等組合物可依多種方法給藥，例如呈透皮式貼布、滴劑、或油膏。
上述醫(yī)藥組合物調(diào)配形成方便給藥且劑量均一的單位劑型是特別有利的。本說明書與申請專利范圍所使用的單位劑型指物理性分離的單位劑量，各單位包含經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生所需醫(yī)療效果的預(yù)定量活性成分，與所需的醫(yī)藥載劑組合。此等單位劑型實(shí)例為片劑(包括有畫線或有包衣的片劑)、膠囊、丸劑、散劑包、扁囊片、注射用溶液或懸浮液、茶匙劑、湯匙劑，等等，及其多重劑量組合。
熟悉相關(guān)技術(shù)的人士很容易即可由下文出示的試驗(yàn)結(jié)果決定有效量。通常，醫(yī)療有效量為每公斤體重0.005毫克至100毫克，特定而言的每公斤體重0.005毫克至10毫克。可以在一天內(nèi)將所需劑量分成2、3、4或更多個(gè)小劑量。在適當(dāng)間隔時(shí)間下給藥。該小劑量可調(diào)配成單位劑型，例如每單位劑型包含0.5至500毫克，特定而言的10至500毫克活性成分。
本發(fā)明另一方面，提出一種含HDAC-抑制劑與另一種抗癌劑的組合，尤其用為醫(yī)藥，更明確而言，用于治療癌癥或相關(guān)疾病。
治療上述病癥時(shí)，本發(fā)明化合物宜用于與一種或多種其他醫(yī)藥劑組合，更特定言之，與其他抗癌劑組合?？拱﹦┑膶?shí)施例為-鉑配位化合物，例如順氯銨鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)或草酸鉑(oxalyplatin)；-紫杉烷化合物，例如紫杉醇(paclitaxel)或多西他奇(docetaxel)；-拓樸異構(gòu)酶I抑制劑，如喜樹堿化合物，例如依立替康(irinotecan)或托普特康(topotecan)；-拓樸異構(gòu)酶II抑制劑，如抗腫瘤鬼臼毒素衍生物，例如抑托泊苷(etoposide)或登尼泊苷(teniposide)；-抗腫瘤長春花植物堿，例如長春花堿、長春新堿或長春瑞賓(vinorelbine)；
-抗腫瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶、真希嗒本(gemcitabine)或卡希嗒本(capecitabine)；-烷化劑，如氮芥或亞硝基脲，例如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀(carmustin)或洛莫司汀(lomustin)；-抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物，例如道諾紅菌素(daunorubicin)、道索紅菌素(doxorubicin)、依道紅菌素(idarubicin)或米托蒽昆(mitoxantrone)；-HER2抗體，例如嗒茲美布(trastuzumab)；-雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調(diào)控劑，例如嗒莫希芬(tamoxifen)、妥洛米芬(toremifene)、特洛希芬(droloxifene)、法洛得斯(faslodex)或拉洛希芬(raloxifene)；-芳構(gòu)酶抑制劑，如抑美斯坦(exemestane)、安斯特唑(anastrozole)、樂特唑(letrazole)與弗洛唑(vorozole)；-分化劑，如類視黃素、維生素D與視黃酸代謝阻斷劑(RAMBA)，例如異維甲酸(accutane)；-DNA甲基轉(zhuǎn)化酶抑制劑，例如阿扎胞苷(azacytidine)；-激酶抑制劑，例如黃吡哚(flavoperidol)、抑麻特本(imatinib)甲磺酸鹽或吉菲特本(gefitinib)；-法呢基轉(zhuǎn)化酶抑制劑；或-其他HDAC抑制劑。
“鉑配位化合物”一詞在本文中指可抑制任何腫瘤細(xì)胞生長的鉑配位化合物，其可提供離子形式的鉑。
“紫杉烷化合物”一詞指具有紫杉烷環(huán)系且與某些紫杉類(Taxus)樹木的萃出物相關(guān)或其所衍生的化合物。
“拓樸異構(gòu)酶抑制劑”一詞系指可于真核生物細(xì)胞中改變DNA拓樸結(jié)構(gòu)的酵素。其對細(xì)胞重要功能及細(xì)胞增生具有重要性。真核生物細(xì)胞中有兩類拓樸異構(gòu)酶，亦即I型與II型。拓樸異構(gòu)酶I為一種分子量約100,000的單體酵素。該酵素會結(jié)合DNA，引進(jìn)一個(gè)暫時(shí)性單鏈裂口，打開雙螺旋(或使之解開)，然后先使裂口封合后，再自DAN鏈上解離。拓樸異構(gòu)酶II的作用機(jī)制類似，其涉及引進(jìn)DNA鏈裂口或形成游離基。
“喜樹堿化合物”系指與喜樹堿母化合物有關(guān)或其所衍生的化合物，其系衍生自中國樹種Camptothecin acuminata及印度樹種Nothapodytes foetida的不可溶于水的植物堿。
“鬼臼毒素化合物”一詞指與自曼陀羅花(mandrake)植物萃出的鬼臼毒素母體化合物有關(guān)或其所衍生的化合物。
“抗腫瘤長春花植物堿”一詞指與自長春花(Vinca rosea)植物的萃出物有關(guān)或其所衍生的化合物。
“烷化劑”一詞包括一類共同特色為在生理?xiàng)l件下有能力提供烷基給具有生物活性的大分子(如DNA)的化學(xué)劑。大多數(shù)的較重要制劑如氮芥及亞硝基脲，活性烷化部分基團(tuán)系于活體內(nèi)復(fù)雜的降解反應(yīng)(其中有些為酵素反應(yīng))的后產(chǎn)生。烷化劑的最重要醫(yī)藥作用為特別在DNA合成與細(xì)胞分裂過程中干擾與細(xì)胞增生有關(guān)的基本機(jī)制。烷化劑在快速增生組織中干擾DNA功能與整合性的能力可作為其醫(yī)療用途及其多種毒性的基礎(chǔ)。
“抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物”一詞包括得自波賽鏈球菌(Strep.peuticusvar.caesius)的抗生素及其衍生物，其特征在于具有一個(gè)四環(huán)素結(jié)構(gòu)，利用糖苷鏈連接一種罕見糖氨基糖柔胺(daunosamine)。
已知原發(fā)性乳癌瘤中人類上皮生長因子受體2蛋白質(zhì)(HER2)的擴(kuò)增作用與某些患者的臨床預(yù)后結(jié)果不佳有相關(guān)性。曲妥單抗(trastuzumab)為一種高度純化的重組DNA-衍生的擬人化單株IgG1-k抗體，其與HER2受體的細(xì)胞外功能部位具有高度專一結(jié)合性。
許多乳癌有雌激素受體，且此等腫瘤的生長可受到雌激素刺激?！按萍に厥荏w拮抗劑”及“選擇性雌激素受體調(diào)控劑”系指與雌激素受體(ER)結(jié)合的雌二醇的競爭性抑制劑。選擇性雌激素受體調(diào)控劑與ER結(jié)合時(shí)，會誘發(fā)受體的三度空間形狀改變，抑制其與DNA上雌激素反應(yīng)元素(ERE)的結(jié)合。
停經(jīng)后婦女的循環(huán)雌激素主要來源為腎上腺與卵巢雄激素(雄烯二醇與睪固酮)經(jīng)由周邊組織中芳構(gòu)酶酵素轉(zhuǎn)化成雌激素(雌固酮與雌二醇)。經(jīng)由抑制芳構(gòu)酶或去活化作用消耗雌激素的作法可有效且選擇性治療停經(jīng)后某些與激素相關(guān)的乳癌患者。
“抗雌激素劑”一詞不僅包括雌激素受體拮抗劑與選擇性雌激素受體調(diào)控劑，而且包括如上述芳構(gòu)酶抑制劑。
“分化劑”一詞包括可依不同方式抑制細(xì)胞增生及誘發(fā)分化的化合物。已知維生素D與類視黃素在調(diào)節(jié)多種正常及惡性細(xì)胞型態(tài)的生長與分化上扮演重要角色。視黃酸代謝作用阻斷劑(RAMBA′s)借由抑制細(xì)胞色素P450-所媒介的視黃酸分解代謝作用而提高內(nèi)因性視黃酸含量。
DNA的甲基化反應(yīng)變化為人體贅生瘤最常見的異?，F(xiàn)象。特定基因的發(fā)動子中過度甲基化通常與所涉及的基因失去活性有關(guān)?！癉NA甲基轉(zhuǎn)化酶抑制劑”一詞指透過DNA甲基轉(zhuǎn)化酶的醫(yī)藥抑制作用發(fā)揮作用及使腫瘤抑制基團(tuán)表現(xiàn)再度活化的化合物。
“激酶抑制劑”一詞包括涉及細(xì)胞循環(huán)發(fā)展及計(jì)劃性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)的激酶的強(qiáng)力抑制劑。
“法呢基轉(zhuǎn)化酶抑制劑”一詞指其設(shè)計(jì)用于防止Ras及其他細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的法呢基化反應(yīng)的化合物。已知其可影響惡性細(xì)胞增生與存活。
“其他HDAC抑制劑”一詞包括(但不限于)-短鏈脂肪酸，例如丁酸酯、4-苯基丁酸酯或2-丙基戊酸；-異羥肟酸，例如辛二酰基替苯胺異羥肟酸(SAHA)、雙芳基異羥肟酸酯A-161906、雙環(huán)芳基-N-羥基羧酰胺、吡咯沙敏(pyroxamide)、CG-1521、PDX-101、磺酰胺異羥肟酸、LAQ-824、曲古抑菌素A(trichostatin A)(TSA)、歐色弗丁(oxamflatin)、史克嗒(scriptaid)、間羧基肉桂酸雙異羥肟酸或曲匹地爾(trapoxin)-異羥肟酸類似物；-環(huán)狀四肽，例如曲匹地爾、阿狄辛(apidicin)或縮酚酸肽(depsipeptide)；-苯酰胺，例如MS-275或CI-994，或-狄普特辛(depudecin)。
根據(jù)本發(fā)明治療癌癥的化合物可配合放射療法，依上述給藥患者。放射療法指離子線照射，特定言之指珈瑪射線，尤指由直線加速器發(fā)射者或由現(xiàn)在常用的放射核種發(fā)射者。使用放射該種照射腫瘤的方法可內(nèi)服或外用。
本發(fā)明亦有關(guān)抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)用于例如抑制腫瘤細(xì)胞生長的醫(yī)療法上的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)用于抑制腫瘤細(xì)胞生長上的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦有關(guān)一種于人體中抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法，其包括對該個(gè)體給予有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明亦提供一種抑制異常細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)形細(xì)胞)生長的方法，其系給予有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑可同時(shí)(例如分開或呈單一組合物)或按任何次序給藥。后項(xiàng)作法中，兩種化合物將在同一時(shí)期給藥，其用量與方式應(yīng)足以確保達(dá)成有利或增效的效用。具了解，該組合中各成分的較佳給藥法與給藥順序及個(gè)別劑量與療程將依所給予特定的其他醫(yī)藥劑及HDAC抑制劑、其給藥途徑、所治療的特定腫瘤及所治療的特定宿主而定。最佳給藥方法及順序及劑量與療程很容易由熟悉相關(guān)技術(shù)的人士使用常用方法，依據(jù)本文中所示的資料即可決定。
鉑配位化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用1至500毫克(mg/m2)，例如50至400mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的順氯銨鉑(cisplatin)劑量為約75mg/m2，卡鉑(carboplatin)劑量為約300mg/m2。
紫杉烷化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用50至400毫克(mg/m2)，例如75至250mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的紫杉醇(paclitaxel)劑量為約175至250mg/m2，及多西他奇(docetaxel)的劑量為約75至150mg/m2。
喜樹堿化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用0.1至400毫克(mg/m2)，例如1至300mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的依立替康(irinotecan)劑量為約100至350mg/m2，托普特康(topotecan)劑量為約1至2mg/m2。
抗腫瘤鬼臼毒素衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用30至300毫克(mg/m2)，例如50至250mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的抑托泊苷(etoposide)劑量為約35至100mg/m2，鬼臼噻吩甙(teniposide)劑量為約50至250mg/m2。
抗腫瘤長春花植物堿的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用2至30毫克(mg/m2)，特定言之，每個(gè)療程的長春花堿劑量為約3至12mg/m2，長春新堿劑量為約1至2mg/m2，長春瑞賓(vinorelbine)劑量為約10至30mg/m2。
抗腫瘤核苷衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用200至2500毫克(mg/m2)，例如700至1500mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的5-FU劑量為200至500mg/m2，吉西他濱(gemcitabine)劑量為約800至1200mg/m2，卡培他濱(capecitabine)劑量為約1000至2500mg/m2。
烷化劑，如氮芥或亞硝基脲的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用100至500毫克(mg/m2)，例如120至200mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的環(huán)磷酰胺劑量為約100至500mg/m2，苯丁酸氮芥劑量為約0.1至0.2mg/m2，卡莫司汀(carmustin)劑量為約150至200mg/m2，洛莫司汀(lomustin)劑量為約100至150mg/m2。
抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用10至75毫克(mg/m2)，例如15至60mg/m2，特定言之，每個(gè)療程的柔紅霉素(daunorubicin)劑量為約40至75mg/m2，阿霉素(daunorobicin)劑量為約25至45mg/m2，伊達(dá)比星(idarubicin)劑量為約10至15mg/m2。
曲妥單抗(trastuzumab)的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用1至5毫克(mg/m2)，特定言之，每個(gè)療程劑量為2至4mg/m2。
抗雌激素劑的合宜給藥劑量為每天使用約1至100毫克，依所使用的特定藥劑及所治療病癥而定。它莫西芬(tamoxifen)的合宜口服劑量為一天服用兩次5至50毫克，較佳為10至20毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)到及維持醫(yī)療效果。妥洛米芬(toremifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)成及維持醫(yī)療效果。安斯特唑(anastrozole)的合宜口服劑量為一天服用一次約1毫克。特洛希芬(droloxifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約20-100毫克。拉洛希芬(raloxifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克。依西美坦(exemestane)的合宜口服劑量為一天服用一次約25毫克。
此等劑量可以每個(gè)療程給藥一次、兩次或多次，可以每7、14、21或28天重復(fù)一次。
就其有用的醫(yī)藥性質(zhì)而言，根據(jù)本發(fā)明的組合中的成分(亦即其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑)可調(diào)配成各種不同給藥用醫(yī)藥型式。各成分可于分開的醫(yī)藥組合物中分開調(diào)配，或于單一醫(yī)藥組合物中同時(shí)含有兩種成分。
因此本發(fā)明亦有關(guān)包含其他醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑及一種或多種醫(yī)藥用載劑的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明亦有關(guān)呈醫(yī)藥組合物型式的根據(jù)本發(fā)明的組合物，其包含抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑及一種或多種醫(yī)藥用載劑。
本發(fā)明亦有關(guān)以根據(jù)本發(fā)明的組合于制造抑制腫瘤細(xì)胞生長的醫(yī)藥組合物上的用途。
本發(fā)明亦有關(guān)一種產(chǎn)品，其包含HDAC抑制劑作為第一種活性成分，及包含抗癌劑作為第二種活性成分，形成組合制備，供同時(shí)、分開或順序用于治療癌癥患者。
實(shí)驗(yàn)部分下列實(shí)施例是供說明用。
下文中，“EDC”指N′-(乙基碳化亞?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽，“DCM”指二氯甲烷，“DIEA”指二異丙基乙胺，“DIPE”指二異丙醚，“DMF”指二甲基甲酰胺，“EtOAc”指乙酸乙酯，“iPrOH”指異丙醇，“MeOH”指甲醇，“EtOH”指乙醇，“PyBrOP”指溴-三-吡咯啶基-鏻六氟磷酸鹽，“TEA”指三乙胺，“TFA”指三氟乙酸及“THF”指四氫呋喃。
A.中間體的制法實(shí)施例A1a)取含六氫-1H-1，4-二吖呯(0.20mol)與1-氟-4-硝基-苯(0.10mol)的DCM(300ml)溶液于室溫與氮蒙氣下攪拌24小時(shí)。有黃色結(jié)晶沉淀。于濾器上收集沉淀，以醚洗滌，及干燥。殘質(zhì)(21.1g，87％)溶于水中，以3N NaOH溶液處理。此混合物經(jīng)DCM(3×500ml)萃取，脫水(Na2SO4)，過濾及減壓排除溶劑，于室溫下真空干燥16小時(shí)，產(chǎn)生18.3g六氫-1-(4-硝苯基)-1H-1，4-二吖呯(中間體1)，熔點(diǎn)115-116℃。
b)攪拌添加二-(1，1-二甲基乙基)-二碳酸酯(0.090mol)的DCM(100ml)溶液至含中間體1(0.090mol)的DCM(200ml)冷卻(冰浴)溶液中。有氣體釋出。CO2停止釋出后，離開冰浴，后于室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)1N HCl溶液與水洗滌后，脫水。蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生20.5g(70％)六氫-4-(4-硝苯基)-1H-1，4-二吖呯1-羧酸1，1-二甲基乙酯(中間體2)，熔點(diǎn)128-130℃。
c)分批添加(在20分鐘期間)中間體2(0.047mol)至含肼單水合物(15ml)的甲醇(700ml)溶液與阮來鎳(16.1g)回流混合物中。反應(yīng)混合物攪拌及回流至黃色消失為止?；旌衔锢^續(xù)回流半小時(shí)。過濾排除觸媒。蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生13.0g 4-(4-苯基)六氫-1H-1，4-二吖呯-1-羧酸1，1-二甲基乙酯(中間體3)。
d)取含中間體3(0.045mol)與(1-乙氧基亞乙基)-肼羧酸乙酯(0.090mol)于無溶劑下，于130℃的油浴中攪拌加熱1小時(shí)。再過2小時(shí)后反應(yīng)混合物冷卻，添加2-丙醇(約100ml)研磨。過濾固體，干燥，產(chǎn)生14g固體。固體與醚研磨，過濾及干燥，產(chǎn)生13.0g(77％)1H-1，4-二吖呯-1-羧酸4-〔4-(1，5-二氫-3-甲基-5-氧代-4H-1，2，4-三唑-4-基)苯基〕六氫-1H-1，4-二吖呯-1-羧酸1，1-二甲基乙酯(中間體4)，熔點(diǎn)238-240℃。
e)于Ar蒙氣下反應(yīng)。于室溫下(利用針筒)添加1，1，1-三甲基-N-(三甲硅烷基)-硅烷胺鈉鹽(0.01mol，10ml，1M/THF)至含中間體4(0.01mol)的DMF(200ml)中。開始有鈉鹽固體形成。激烈攪拌，再加DMF(200ml)。于室溫下緩緩添加含2-溴-丁烷(0.02mol)的DMF(100ml)溶液。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌18小時(shí)。(以真空泵)排除DMF溶劑。加水至殘質(zhì)中，所得油狀產(chǎn)物溶于醚(500ml)中。醚溶液濃縮，產(chǎn)生2.70g(此油狀物質(zhì)于靜置時(shí)固化；產(chǎn)率62％)，再經(jīng)硅膠急驟管柱層析法純化(洗脫液1％(10％NH4OH/CH3OH)/CH2Cl2)，產(chǎn)生0.55g 4-[4-[1，5-二氫-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-5-氧代-4H-1，2，4-三唑-4-基]苯基]六氫-1H-1，4-二吖平-1-羧酸1，1-二甲基乙酯(中間體5)，熔點(diǎn)119-120℃。
f)添加中間體5(0.0014mol)至TFA的冷卻溶液(5ml；冰浴)中30分鐘。減壓排除溶劑。加水，混合物經(jīng)碳酸鉀飽和。此混合物經(jīng)乙酸乙酯(2×50ml)萃取，經(jīng)硫酸鈉脫水，過濾及排除溶劑，產(chǎn)生0.35g(65％)4-〔4-(六氫-1H-1，4-二吖平-1-基)苯基〕-2，4-二氫-5-甲基-2-(1-甲基丙基)-3H-1，2，4-三唑-3-酮(中間體6)。
g)取含中間體6(0.00076mol)、4-溴-苯甲酸甲酯(0.00304mol)、(1R)-〔1，1′-聯(lián)萘〕-2，2′-二基-二〔二苯基膦〕(0.016g)、Pd2(bda)3(0.008g)與Cs2CO3(0.40g)的甲苯(10ml)混合物置入氬氣下，手套式操作箱中加壓管(含1小只磁鐵攪拌棒)中。加壓管上鎖緊蓋子，于120℃油浴中攪拌加熱12小時(shí)。再加(1R)-〔1，1′-聯(lián)萘〕-2，2′-二基-二〔二苯基膦〕(0.016g)、Pd2(bda)3(0.008g)與Cs2CO3(0.40g)。混合物于120℃油浴中加熱24小時(shí)。反應(yīng)混合物過濾排除無機(jī)固體物質(zhì)，以約20ml CHCl3洗滌。濾液減壓濃縮至干。殘質(zhì)經(jīng)硅膠急驟管柱層析法純化(洗脫液NH4OH/CH3OH)/CH2Cl20.1/0.9/99)。合并所需溶離份，蒸發(fā)溶劑，于室溫下真空干燥16小時(shí)，產(chǎn)生0.21g(60％)4-[4-[4-[1，5-二氫-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-5-氧代-4H-1，2，4-三唑-4-基]苯基]六氫-1H-1，4-二吖平-1-基]苯甲酸甲酯(中間體7)，熔點(diǎn)152-153℃。
實(shí)施例A2取含4-〔4-(苯甲基)-1-哌嗪基〕-苯甲酸(0.0145mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.029mol)、N，N′-甲烷四基-雙環(huán)己胺(0.0145mol)與1-羥基-1H-苯并三唑(0.021mol)的DCM p.a.(200ml)混合物于室溫下攪拌一個(gè)周末。反應(yīng)混合物經(jīng)水洗滌，脫水(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)自EtOAc中再結(jié)晶，過濾及干燥，產(chǎn)生3.5g及另一份收量2.0g，總產(chǎn)量5.5g(95％)4-〔4-(苯甲基)-1-哌嗪基〕-N-〔(四氫-2H-吡喃-2-基)-氧〕-苯酰胺(中間體8)。
實(shí)施例A3a)中間體9的制法 逐漸添加含1-(苯甲基)哌嗪(0.068mol)的乙腈p.a.(135ml)溶液至含碳酸鉀(0.18mol)與2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.082mol)的乙腈p.a.(135ml)溶液中，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌45分鐘。然后，反應(yīng)混合物靜置一夜，添加DCM(400ml)。加水(300ml)，分離有機(jī)相，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(28g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(洗脫液DCM/MeOH 95/5)。收集純?nèi)茈x份，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)自乙腈中結(jié)晶，過濾，真空干燥，產(chǎn)生15.1g中間體9。
b)中間體10的制法 于50℃下，使含中間體9(0.03mol)的EtOH(250ml)混合物使用10％Pd/C(2g)為觸媒進(jìn)行氫化。吸收H2(1當(dāng)量)后，濾出觸媒，濾液蒸發(fā)。殘質(zhì)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(洗脫液DCM/(MeOH/NH3)90/10)。收集產(chǎn)物溶離份，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生6.8g(＞96％)中間體10。
c)中間體11的制法 添加四(乙醇)鈦(0.0029mol)至含中間體10(0.0022mol)與4-氧代-1-六氫吡啶羧酸1，1-二甲基乙酯(0.0027mol)的1，2-二氯乙烷(6ml)混合物中?；旌衔镉?0℃下攪拌18小時(shí)后，冷卻至室溫。分批添加NaBH(OAc)3(0.0029mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)。加水。經(jīng)DCM萃取，經(jīng)寅式鹽過濾。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘質(zhì)(1.1g)自乙醚/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.49g(51％)中間體11。
d)中間體12的制法
取含中間體11(0.0011mol)的HCl/iPrOH(5ml)混合物于50℃下攪拌1小時(shí)后，冷卻至室溫。濾出沉淀，以EtOH及乙醚依序洗滌及干燥，產(chǎn)生0.38g(94％)中間體12(HCl鹽)。
e)中間體13的制法 于5℃下，添加含2-萘磺酰氯(0.0011mol)的DCM(1ml)溶液至N2氣流下，含中間體12(0.001mol)與TEA(0.0032mol)的DCM(4ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢枰灰埂Ｌ砑?0％碳酸鉀?；旌衔锝?jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干，殘質(zhì)(0.53g)溶于乙醚/DIPE中。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.42g(77％)中間體13。
實(shí)施例4Aa)中間體14的制法 添加四(2-丙醇鹽)鈦(0.0023mol)至N2氣流下，含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(0.0018mol)與4-氧代-1-六氫吡啶羧酸1，1-二甲基乙酯(0.0021mol)的1，2-二氯乙烷(6ml)混合物中。混合物于50℃下攪拌18小時(shí)后，冷卻至室溫。分批添加NaBH(OAc)3(0.0023mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)。加水?；旌衔锝?jīng)寅式鹽過濾。混合物經(jīng)DCM萃取。傾析濾液。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘質(zhì)(1.3g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(70-200μm)(洗脫液DCM100至DCM/MeOH 99/1)。收集純洗脫液，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.72g(86％)中間體14。
b)中間體15的制法 取含中間體14(0.0014mol)的HCl/iPrOH 5N(10ml)混合物于50℃下攪拌18小時(shí)后，冷卻至室溫，過濾，以乙醚洗滌及干燥，產(chǎn)生0.53g(95％)中間體15(HCl鹽)，熔點(diǎn)260℃。
實(shí)施例A5中間體16的制法 添加含5-溴-2-呋喃羧基醛(0.0171mol)的1，2-二甲氧乙烷(15ml)溶液至室溫與N2氣流下，含四(三苯基膦)鈀(0.0045mol)的1，2-二甲氧乙烷(50ml)溶液中。混合物攪拌20分鐘。添加含〔4-(羥甲基)苯基〕二羥硼酸(0.0257mol)的EtOH(18ml)懸浮液?；旌衔飻嚢?0分鐘。添加碳酸鈉(0.15mol)?；旌衔飻嚢杓盎亓?小時(shí)后，使之回升室溫。取有機(jī)層蒸發(fā)。殘質(zhì)溶于DCM中，以水洗滌。分離有機(jī)層，脫水(MgOH4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(4.1g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫液DCM/MeOH 99/1)。收集純?nèi)茈x份，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生2.8g(82％)中間體16。
實(shí)施例A6a)中間體17的制法 于10℃下，滴加含2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0434mol)的乙腈(100ml)溶液至N2氣流下，含4-六氫吡啶甲胺(0.0868mol)與碳酸鉀(0.0434mol)的乙腈(200ml)溶液中。混合物于室溫下攪拌2小時(shí)，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(14.18g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(20-45μm)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH 90/10/1至80/20/2)。收集純?nèi)茈x分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生3.7g(32％)中間體17。
b)中間體18的制法 在含N-環(huán)己基碳化二亞胺，N′-甲基聚苯乙烯(153mg)(NovaBiochem目錄編號01-64-0211)中依序添加N-乙?；?3，4，5-三甲氧基-胺茴酸(0.2mmol)的THF(0.5ml)溶液及1-羥基-1H-苯并三唑的THF(0.5ml)溶液?；旌衔镉谑覝叵抡袷?0分鐘。隨后添加中間體17(0.1mmol)的DCM(1ml)溶液，然后于50℃下，利用N2氣流蒸發(fā)溶劑后，使無溶劑的反應(yīng)混合物于90℃及氮?dú)饬飨蚂o置一夜。產(chǎn)物溶于二氯甲烷(2ml)中，經(jīng)玻璃濾器過濾。殘質(zhì)經(jīng)DCM(2×2ml)潤洗，濾液濃縮。產(chǎn)物于室溫下，經(jīng)THF(1ml)與氫氧化鈉水溶液(1ml，1N)的混合物處理48小時(shí)。最后，添加HCl水溶液(1ml，1N)中和混合物，于70℃與氮?dú)饬飨赂稍铮a(chǎn)物中間體18。
c)中間體19的制法 在中間體18(0.1mmol)中添加含1-羥基-1H-苯并三唑(0.1mmol)、EDC(0.1mmol)與TEA(0.12mmol)的DCM/THF(3/4，7ml)混合溶液。反應(yīng)混合物于室溫下振蕩5分鐘，之后添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.1mmol)。使所得溶液于室溫下振蕩一夜。反應(yīng)混合物于50℃及氮?dú)饬飨聺饪s至5ml體積，然后添加由聚合物承載的異氰酸甲酯(1.25mmol/g，0.25mmol，Argonaut，目錄編號800261)與(聚苯乙烯甲基)三甲基銨二碳酸鹽(0.6mmol)(NovaBiochem目錄編號01-64-0419)，此混合物再振蕩2小時(shí)。反應(yīng)混合物過濾，濾液濃縮。產(chǎn)物經(jīng)制備性HPLC純化，產(chǎn)物29mg中間體19。
實(shí)施例A7中間體20的制法 于0℃下，添加甲磺酰氯(0.006mol)至N2氣流下，含中間體27(0.001mol)與TEA(0.008mol)的DCM(10ml)溶液中?；旌衔镉?℃下攪拌3小時(shí)，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.44g中間體20。此產(chǎn)物直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟。
實(shí)施例A8a)中間體21的制法 稱取中間體樣本(0.1mmol)與2-苯基-4H-3，1-苯并噁嗪-4-酮(0.1mmol)加至容器中，添加甲苯(2ml)。容器密封后，混合物于90℃下加熱10小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑，殘質(zhì)溶于DCM(4ml)中，添加乙二酰基二氯(1mmol)與DMF(1mmol)。所得混合物于90℃下振蕩一夜。反應(yīng)混合物經(jīng)10％碳酸氫鈉水溶液(2×1ml)洗滌，分層，取有機(jī)層濃縮，產(chǎn)生中間體21。
b)中間體22的制法 取中間體21(粗產(chǎn)物)經(jīng)THF/1N NaOH水溶液/MeOH(1/1/0.2，2.2ml)混合物處理，同時(shí)于室溫下激烈攪拌一夜。隨后，添加HCl水溶液(1N，1ml)中和溶液。真空蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生中間體22。
c)中間體23的制法 在中間體22中依序添加1-羥基-1H-苯并三唑(0.13mmol)的THF(無水，1ml)溶液、含EDC(0.13mmol)的DCM(無水，1ml)溶液及TEA(0.15mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?0分鐘。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.13mmol)的THF(無水，1ml)溶液，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌一夜。蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)物經(jīng)逆相HPLC純化，產(chǎn)生中間體23，熔點(diǎn)(219℃)。
B最終化合物的制法實(shí)施例B1使用50％六氫吡啶的DMF溶液(室溫，24小時(shí))脫除N-Fom-羥基胺-2-氯三苯甲基樹脂(Nova Biochem，01-64-0165)的保護(hù)基。樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌數(shù)次，于DMF中膨脹。一次添加全量2當(dāng)量酸1，PyBrOP與4當(dāng)量DIEA?；旌衔镎袷?4小時(shí)，瀝干液體，樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌數(shù)次。樹脂于含2當(dāng)量胺的DMF中膨脹，于室溫下振蕩24小時(shí)，瀝干液體，以DCM與DMF洗滌樹脂。終產(chǎn)物經(jīng)含5％TFA的DCM裂解，以HPLC與MS分析，于已先稱重的試管中蒸發(fā)。
1以樹脂承載量為基準(zhǔn)計(jì)。
實(shí)施例B2化合物1的制法 取含中間體7(0.00075mol)、50％NH2OH/H2O(5ml)、KCN(0.001mol)、MeOH(10ml)與THF(10ml)的混合物于室溫下攪拌48小時(shí)。蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)經(jīng)DCM萃取，以水洗滌。排除溶劑，油狀殘質(zhì)(0.225g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(洗脫液NH4OH/CH3OH/CH2Cl20.05/0.95/99；然后NH4OH/CH3OH/CH2Cl20.1/0.9/99)。收集純?nèi)茈x分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.114g化合物1.H2O，熔點(diǎn)182-184℃及0.040g 4-[4-[4-[1，5-二氫-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-5-氧代-4H-1，2，4-三唑-4-基]苯基]六氫-1H-1，4-二吖呯-1-基]-苯甲酸，熔點(diǎn)244-245℃。
實(shí)施例B3化合物2的制法 于25℃下，取中間體8(0.000088mol)于5％TFA/MeOH(5ml)中攪拌24小時(shí)。然后，將反應(yīng)混合物倒至水(5ml)+1當(dāng)量NaHCO3中。此混合物經(jīng)DCM(2×5ml)萃取。分離的有機(jī)層脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑(于50℃下，以N2氣流吹干)。殘質(zhì)干燥(真空，50℃)，產(chǎn)生0.018g(65％)化合物2，熔點(diǎn)196℃。
實(shí)施例B4a)中間體24的制法 取含中間體13(0.0008mol)與氫氧化鉀(0.0016mol)的EtOH(10ml)混合物攪拌及回流2小時(shí)后，冷卻至室溫。濾出沉淀，以EtOH與乙醚依序洗滌，干燥，產(chǎn)生0.425g(＞100％)中間體24(鈉鹽)。
b)中間體25的制法 于N2氣流下添加EDC(0.001mol)至含中間體24(0.0008mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.001mol)與1-羥基-1H-苯并三唑(0.001mol)的DCM/THF(10ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時(shí)。過濾沉淀，以THF與乙醚依序洗滌，干燥，產(chǎn)生0.4g(83％)中間體25，熔點(diǎn)260℃。
c)化合物3的制法 添加TFA(0.5ml)至含中間體25(0.0006mol)的MeOH(10ml)混合物中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?天。濾出沉淀，以乙醚洗滌，干燥。殘質(zhì)溶于水中，攪拌30分鐘，過濾，干燥，產(chǎn)生0.143g(38％)化合物3(.0.91CF3COOH)，熔點(diǎn)210℃。
實(shí)施例B5中間體26的制法 取含中間體15(0.0013mol)、2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0017mol)與碳酸鉀(0.0039mol)的乙腈(10ml)混合物于80℃下攪拌18小時(shí)。加水?；旌衔镆訢CM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘質(zhì)(0.5g)自CH3CN/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.25g(37％)中間體26。
類似實(shí)施例〔B4〕的方法處理中間體26，產(chǎn)生0.126g(74％)化合物4(.0.86CF3COOH)，熔點(diǎn)230℃。
實(shí)施例B6中間體27的制法 取含中間體10(0.0015mol)與中間體16(0.0015mol)的MeOH(6ml)混合物于60℃下攪拌20小時(shí)后，冷卻至0℃。添加氫硼酸鈉(0.0022mol)。混合物回升室溫，然后攪拌4小時(shí)，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(0.8g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.1至95/5/0.1)。收集純?nèi)茈x分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.28g(45％)中間體27。
類似實(shí)施例〔B4〕的方法處理中間體27，產(chǎn)生0.143g(89％)化合物5(.0.83CF3COOH)，熔點(diǎn)219℃。
化合物5實(shí)施例B7中間體28的制法 取含中間體10(0.0042mol)與2-萘羧基醛(0.005mol)的1，2-二氯乙烷(10ml)混合物于50℃下攪拌3小時(shí)后，冷卻至室溫。分批添加NaBH(OAc)3(0.0055mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時(shí)。加水。混合物經(jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘質(zhì)(2g)溶于CH3CN/DIPE中。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生1.2g(75％)中間體28，熔點(diǎn)147℃。
類似實(shí)施例〔B4〕的方法處理中間體28，產(chǎn)生0.724g(88％)化合物6(.0.83CF3COOH)，熔點(diǎn)＞260℃。
化合物6
實(shí)施例B8中間體29的制法 于5℃下，添加含2-萘乙醇甲磺酸酯(0.0029mol)的乙腈(3ml)溶液至含中間體10(0.0024mol)與碳酸鉀(0.0048mol)的乙腈(6ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時(shí)后，攪拌及回流一夜，冷卻至室溫。加水?；旌衔镞^濾，以水與乙醚依序洗滌，干燥，產(chǎn)生0.45g(48％)中間體29，熔點(diǎn)128℃。
類似實(shí)施例〔B4〕的方法處理中間體29，產(chǎn)生0.254g(86％)化合物7(.0.79CF3COOH)，熔點(diǎn)209℃。
化合物7實(shí)施例B9化合物8的制法 于室溫下，取中間體19(0.05mmol)經(jīng)THF(2ml，含于DCM/MeOH1/1中)處理10分鐘。隨后于室溫氮?dú)饬飨抡舭l(fā)排除溶劑，然后添加1，4-二噁烷，重復(fù)蒸發(fā)過程。樣本于氮?dú)饬髋c40℃下干燥一夜，產(chǎn)生化合物8(.CF3COOH)。
實(shí)施例B10中間體30的制法 取含中間體20(0.001mol)、嗎啉(0.0013mol)與碳酸鉀(0.002mol)的乙腈(6ml)混合物攪拌及回流一夜后，冷卻，倒至冰水中，以EtOAc萃取。分離有機(jī)層，脫水(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(0.79g)經(jīng)硅膠管柱層析法純化(10μm)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH96/4/0.1)。收集純?nèi)茈x分，蒸發(fā)溶劑。殘質(zhì)(0.183g)自DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.086g(47％)中間體30，熔點(diǎn)120℃。
類似實(shí)施例〔B1〕的方法處理中間體30，產(chǎn)生0.432g(87％)化合物9(0.47H2O.1.99CF3COOH)，熔點(diǎn)140℃。
化合物9實(shí)施例B11化合物10的制法 添加TFA溶液(5％DCM/MeOH 1/1，2ml)至中間體23中，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌5天。然后于室溫與氮?dú)饬飨抡舭l(fā)溶劑，添加1，4-二噁烷，重復(fù)濃縮過程。然后取樣于40℃與氮?dú)饬飨赂稍镆灰?，產(chǎn)生化合物10(.CF3COOH)。
表F-1列出根據(jù)上述一種實(shí)施例制備的化合物。表中采用下列縮寫.C2HF3O2代表三氟乙酸鹽。表F-1




C.藥理實(shí)施例組織蛋白去乙酰酶抑制作用的活體外分析法(參見實(shí)施例C.1)是測定式(I)化合物所得的抑制HDAC酵素活性。
式(I)化合物的細(xì)胞活性是于A2780腫瘤細(xì)胞上，采用測試細(xì)胞毒性或存活性的比色測定法測定(Mosmamm Tim，Journal ofImmunological Methods 6555-63，1983)(參見實(shí)施例C.2)。
于水性介質(zhì)中的動力溶解性系測定該化合物于稀釋時(shí)保持水溶液狀態(tài)的能力(參見實(shí)施例C.3)。
DMSO母液系使用單一水性緩沖溶劑，于連續(xù)3個(gè)步驟中稀釋。每一次稀釋后的濁度均使用濁度計(jì)測定。
藥物的通透性表現(xiàn)其由一種介質(zhì)移動至或通過另一種介質(zhì)的能力。明確言之，其移動通過腸膜進(jìn)入血流與/或自血流進(jìn)入目標(biāo)中的能力。通透性(參見實(shí)施例C.4)的測定法可測定濾器固定化的人工膜磷脂雙層物的形成量。濾器固定化的人工膜分析法，由96孔微滴定板與96孔過濾板形成“夾心”，因此每個(gè)組成的孔中即分隔成兩個(gè)隔間，底層為供體溶液，上層為受體溶液，中間以涂覆2％(重量/體積)二油?；字；?膽堿的十二碳烷溶液的125微米微過濾片(0.45微米孔徑)分隔，當(dāng)該系統(tǒng)接觸到水性緩沖液時(shí)，濾片通道內(nèi)會形成多層膜的雙層物。測定通過此人工膜的化合物通透性，以公分/秒表示。其目的為檢視藥物在兩種不同pH4.0與7.4下通過平行人工膜的通透性。采用UV-分光光度計(jì)，于250至500nm之間的最適當(dāng)波長下檢性。采用UV-分光光度計(jì)，于250至500nm之間的最適當(dāng)波長下檢測化合物。
藥物的代謝作用指該脂溶性異種生物化合物或生物內(nèi)生化合物經(jīng)酵素轉(zhuǎn)化成極性、水溶性且可排泄的代謝物(群)。藥物代謝作用的主要器官為肝臟。代謝物的活性通常低于母化合物或無活性。然而，有些代謝物可能加強(qiáng)活性或毒性效果。因此，藥物代謝作用可包括“去毒化”與“毒化”過程。其中決定生物體是否有能力處理藥物與化學(xué)物的主要酵素系統(tǒng)代表為細(xì)胞色素P450單氧化酶，其系依賴NADPH的酵素?；衔锏拇x安定性可于活體外，使用亞細(xì)胞人類組織測定(參見實(shí)施例C.5)。本文中化合物的代謝安定性系由此等化合物與微粒體培養(yǎng)15分鐘后的藥物代謝％表示。以LC-MS分析法為化合物定量。
腫瘤抑制因子p53可因應(yīng)DNA損傷，轉(zhuǎn)錄活性化許多種基因，包括WAF1/CIP1基因、WAF1基因的21kDa產(chǎn)物出現(xiàn)在正常細(xì)胞中包括環(huán)素、依賴環(huán)素的激酶(CDKs)及增生細(xì)胞核抗原(PCNA)的復(fù)合體中，但不出現(xiàn)在轉(zhuǎn)形細(xì)胞中，且似乎為CDK活性的通用抑制劑。p21WAF1結(jié)合并抑制CDKs的一種后果為防止依賴CDK的磷酸化反應(yīng)及隨后使Rb蛋白質(zhì)去活化，Rb蛋白質(zhì)系細(xì)胞循環(huán)發(fā)展所必要者。因此，使用HDAC抑制劑因與細(xì)胞接觸而誘發(fā)產(chǎn)生的p21WAF1即可成為細(xì)胞循環(huán)發(fā)展過程中，在G1與G2兩個(gè)檢查點(diǎn)的抑制作用的強(qiáng)力且專一性的指標(biāo)。
化合物誘發(fā)p21WAF1的能力系采用p21WAF1酵素連結(jié)免疫吸附性分析法測定(致癌基因的WAF1 ELISA)。p21WAF1分析法為一種同時(shí)使用小白鼠單株抗體與兔子多株抗體的“夾心”酵素免疫分析法。對人類WAF1蛋白質(zhì)具專一性的兔子多株抗體已固定在試驗(yàn)套組所提供的塑膠孔表面上。樣本中所要分析的任何p21WAF均會與捕捉抗體結(jié)合。生物素基化檢測劑單株抗體亦可辨識人類p21WAF1蛋白質(zhì)，而且會與捕捉抗體所保留的任何p21WAF1結(jié)合。檢測劑抗體則再與辣根過氧化酶-共軛的抗生物素結(jié)合。辣根過氧化酶催化發(fā)色性受質(zhì)四甲基聯(lián)苯胺的有色溶液轉(zhuǎn)呈藍(lán)色溶液(或當(dāng)添加中止反應(yīng)劑后，則轉(zhuǎn)呈黃色)，其深度與分析板上p21WAF1蛋白質(zhì)的結(jié)合量成比例。采用分光光度計(jì)定量有色反應(yīng)產(chǎn)物。使用已知濃度的p21WAF1(冷凍干燥物)所構(gòu)成的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量(參見實(shí)施例C.6)。
實(shí)施例C.1組織蛋白去乙酰酶的抑制作用的活體外分析法取60μg/ml HeLa核萃出物(供應(yīng)商Biomol)與2×10-8M放射性標(biāo)記的肽受質(zhì)培養(yǎng)。測定HDAC活性所使用的受質(zhì)為合成肽，亦即組織蛋白H4的氨基酸14-21。該受質(zhì)的NH2末端部分經(jīng)6-氨基己酸間隔基進(jìn)行生物素基化，其COOH-末端部分則被酰胺基保護(hù)，并于離胺酸16上專一性〔3H〕乙酰化。添加受質(zhì)生物素-(6-氨基己酸)Gly-Ala-([H3]-乙?；?Lys-Arg-His-Arg-Lys-Val-NH2)至含25mM Hepes、1M蔗糖、0.1mg/ml BSA與0.01％Triton X-100的pH7.4緩沖液。30分鐘后，添加HCl與乙酸中止去乙?；磻?yīng)(終濃度分別為0.035mM與3.8mM)。反應(yīng)停止后，以乙酸乙酯萃取游離的3H-乙酸酯?；旌吓c離心后，于β-計(jì)數(shù)器上計(jì)算上層有機(jī)相的放射活性。每次實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行對照組(含HeLa核萃物與DMSO，但不含化合物)、空白培養(yǎng)組(含DMSO，但不含HeLa核萃物或化合物)及樣本試驗(yàn)組(含溶于DMSO中的化合物與HeLa核萃物)。第一例中，化合物的試驗(yàn)濃度為10-5M。當(dāng)化合物于10-5M下展現(xiàn)活性時(shí)，則在10-5M與1012M之間濃度測試化合物，制成濃度-效應(yīng)曲線。每次試驗(yàn)的對照組與樣本組的數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。對照組樣本代表100％受質(zhì)去乙酰化。各樣本的放射活性以相對于對照組平均值的百分比表示。若適當(dāng)時(shí)，采用概率分析法計(jì)算已分級的數(shù)據(jù)，計(jì)算IC50值(使代謝物量下降至對照組的50％時(shí)所需藥物濃度)。此時(shí)，以pIC50(IC50值的負(fù)對數(shù)值)表示試驗(yàn)化合物的效應(yīng)。所有試驗(yàn)化合物在10-5M的試驗(yàn)濃度下均展現(xiàn)酵素活性，有28種化合物的pIC50≥5(參見表F-2)。
實(shí)施例C.2于A2780細(xì)胞上測定抗增生活性所有試驗(yàn)化合物均溶于DMSO中，再于培養(yǎng)基中稀釋。細(xì)胞增生分析法中的最終DMSO濃度不可超過0.1％(v/v)。對照組含有A2780細(xì)胞及不含化合物的DMSO，而空白組則含有DMSO，但不含細(xì)胞。取MTT溶于PBS中，5mg/ml。制備甘氨酸緩沖液，其包含0.1M甘氨酸與0.1M NaCl，以1M NaOH緩沖至pH10.5(所有試驗(yàn)均來自Merck藥廠)。
取人類A2780卵巢癌瘤細(xì)胞(系美國賓州Fox Chase癌癥中心T.C.Hamilton博士的熱心捐贈)于補(bǔ)充2mM L-麥酰胺、50μg/ml慶大霉素與10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞照例呈單層培養(yǎng)物保持在37℃的潮濕5％CO2大氣中。每周使用胰蛋白酶/EDTA溶液傳代細(xì)胞一次，分割比例為1∶40。所有培養(yǎng)基與補(bǔ)充物均得自LifeTechnologies。采用Gen-Probe霉?jié){菌組織培養(yǎng)套組(供應(yīng)商BioMerieux)測得細(xì)胞中不含霉?jié){菌污染物。
將細(xì)胞接種在NUNCTM96孔培養(yǎng)板中(供應(yīng)商LifeTechnologies)，使之附著在塑膠板上一夜。用于涂覆的密度為每孔1500個(gè)細(xì)胞，總體積為200μl培養(yǎng)基。細(xì)胞附著在培養(yǎng)板上后，換下培養(yǎng)基，添加藥物與/溶劑至最終體積200μl。培養(yǎng)4天后，以200μl新鮮培養(yǎng)基置換培養(yǎng)基，采用以MTT為主的分析法分析細(xì)胞密度與活力。每孔中添加25μl MTT溶液，細(xì)胞再于37℃下培養(yǎng)2小時(shí)。小心吸出培養(yǎng)基，依序添加25μl甘氨酸緩沖液及100μl DMSO，使藍(lán)色MTT-甲產(chǎn)物溶解。微試驗(yàn)板于微試驗(yàn)板振蕩器上振蕩10分鐘，使用Emax96孔分光光度計(jì)(供應(yīng)商Sopachem)測定540nm的吸光度。實(shí)驗(yàn)中，各實(shí)驗(yàn)條件的結(jié)果均為3個(gè)重復(fù)孔的平均值。初次篩選用的化合物系于單一固定濃度10-6M下測試?；钚曰衔飫t重復(fù)試驗(yàn)，以建立完整的濃度-效應(yīng)曲線。每次實(shí)驗(yàn)的對照組(不含藥物)及空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)均平行進(jìn)行。所有對照組與樣本組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。每個(gè)樣本的細(xì)胞生長平均值(以吸光度為單位)均以相對于對照組細(xì)胞生長平均值的百分比表示。若適當(dāng)時(shí)，采用概率分析法計(jì)算已分級的數(shù)據(jù)，計(jì)算IC50值(使細(xì)胞生長下降至對照組的50％時(shí)所需藥物濃度)(Finney，D.J.，Probit Analyses，第2版，第10章，GradedResponse，Cambridge University Press，Cambridge，1962)。本文中以pIC50(IC50值的負(fù)對數(shù)值)表示試驗(yàn)化合物的效果。大多數(shù)試驗(yàn)化合物在10-6M的試驗(yàn)濃度下展現(xiàn)細(xì)胞活性且有9種化合物的pIC50≥5(參見表F-2)。
實(shí)施例C.3于水性介質(zhì)中的動力溶解性第一個(gè)稀釋步驟中，取10μl活性化合物的濃縮母液溶于DMSO中(5mM)，加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。第二個(gè)稀釋步驟中，取一部分(20μl)第一個(gè)稀釋步驟溶液再加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。最后，第三個(gè)稀釋步驟中，取一部分(20μl)第二個(gè)稀釋步驟溶液再加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋，混合。所有稀釋液均于96孔板中進(jìn)行。最后一次稀釋后，立即使用濁度計(jì)測定連續(xù)3個(gè)稀釋步驟的濁度。每種化合物的稀釋液均進(jìn)行三重復(fù)，以排除偶然誤差。依據(jù)濁度測定值，分成3級。高溶解度的化合物得到3分，此等化合物的第一次稀釋呈澄清狀。中度溶解度的化合物得到2分。此等化合物的第一次稀釋液不澄清，但第二次稀釋液即澄清。低溶解度的化合物得到1分。此等化合物的第一次與第二次稀釋液均不澄清。測定6種化合物的溶解度。其中有3種化合物得到3分，2種化合物得到2分，及1種化合物得到1分(參見表F-2)。
實(shí)施例C.4平行人工膜通透性分析法于含2ml水性緩沖液系統(tǒng)pH4或pH7.4(PSR4系統(tǒng)溶液濃縮物(pION))的深孔或預(yù)混合板中稀釋母液樣本(10μl含于100％DMSO中的5mM母液)。添加樣本至參考板中之前，先添加150μl緩沖液至孔中，測定空白UV值。之后，棄置緩沖液，此板子用為參考板。所有測定法均于耐UV的板子上進(jìn)行(供應(yīng)商Coaster或Greiner)。
測定參考板的空白值后，添加150μl稀釋的樣本至參考板中，添加200μl稀釋樣本至供體板1中。使用4ul人工膜形成溶液(1，2-二油?；?順式-甘油-3-膽堿磷酸含于含0.1％2，6-二-叔丁基-4-甲基苯酚的十二碳烷中)涂覆受體過濾板1(供應(yīng)商Millipore，型號MAIP N45)，置于供體板1上方，形成“夾心”。添加緩沖液(200μl)至上方的受體孔中。此“夾心”加蓋，保存在室溫與黑暗中18小時(shí)。
添加150μl緩沖液至孔中后，測定UV值，測定受體板2的空白值。受體板2測定空白值后，棄置緩沖液，自受體過濾板1中取出150μl受體溶液移至受體板2中。然后自夾心中取出受體過濾板1。測定供體板2的空白值(如上述)后，自供體板1中取出150μl供體溶液移至供體板2中。掃描供體板2、受體板2及參考板的孔中UV光譜(SpectraMAX 190)。所有光譜均經(jīng)PSR4p精算軟體(Command Software)計(jì)算通透性。所有化合物均進(jìn)行三重復(fù)。每次實(shí)驗(yàn)均使用酰胺咪嗪(carbamazepine)、灰黃霉素(griseofulvin)、無環(huán)烏苷(acycloguanosine)、阿替洛爾(atenolol)、呋噻米(furosemide)與氯噻嗪(chlorothiazide)作為標(biāo)準(zhǔn)物。化合物分成三類低通透性(平均值＜0.5×10-6cm/s；得分1)，中通透性(1×10-6cm/s＞平均值≥0.5×10-6cm/s；得分2)或高通透性(≥0.5×10-6cm/s；得分3)。試驗(yàn)兩種化合物，其在一種pH測定值下的得分為至少2分。
實(shí)施例C.5代謝安定性依據(jù)Gorrod等人(Xenobiotica 5453-462，1975)制備亞細(xì)胞組織制劑，其系使組織經(jīng)過機(jī)械性均質(zhì)化后離心分離。肝組織于冰冷0.1M Tris-HCl(pH7.4)緩沖液中潤洗，以洗除過量血液。隨后吸干組織，稱重，使用手術(shù)用剪刀粗略剪斷。組織碎片于3倍體積冰冷的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，使用裝有鐵弗龍搗杵的Potter-S(意大利Braun公司)或Sorvall Omni-Mix均質(zhì)器均質(zhì)化7×10秒，均質(zhì)化期間，容器保持在冰中/上。
組織均質(zhì)液于4℃下，使用Sorvall離心機(jī)或Beckmann超離心機(jī)，于9000xg下離心20分鐘。所得上澄液保存在-80℃下，稱為“S9”。
此S9部分再使用Beckmann超離心機(jī)，于100,000xg下離心60分鐘(4℃)。小心吸出所得上澄液，此部分稱為“胞液”。離心塊再懸浮于0.1M磷酸鹽緩沖液中(pH7.4)，每0.5克組織原始重的終體積為1ml，稱為“微粒體”。
所有亞細(xì)胞組織部分開后，立即于液態(tài)氮中冷凍，保存在-80℃下，直到使用時(shí)為止。
試驗(yàn)樣本的培養(yǎng)混合含有PBS(0.1M)、化合物(5μM)、微粒體(1mg/ml)與NADPH-發(fā)生系統(tǒng)(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化鎂及0.8單位葡萄糖-6-磷酸去氫酶)。對照組樣本含有相同材料，但微粒體改為經(jīng)受熱去活性(95℃下10分鐘)的微粒體。對照組樣本中化合物的回收率總是100％。
混合物于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘。添加0.8mM NADP的零時(shí)間點(diǎn)(t＝0)開始反應(yīng)，樣本培養(yǎng)15分鐘(t＝15)。添加2倍體積DMSO停止反應(yīng)。樣本隨后于900xg下離心10分鐘，分析前保存在室溫下的上澄液不可超過24小時(shí)。所有培養(yǎng)均進(jìn)行二重復(fù)。采用LC-MS分析法分析上澄液。于Xterra MS C18(50×4.6mm，5um，美國Waters公司)上溶離樣本。采用Alliance 2790(供應(yīng)商美國Waters公司)HPLC系統(tǒng)。溶離液為緩沖液A(含于H2O/乙腈(95/5)中的25mM乙酸銨(pH5.2))，溶劑B為乙腈，且溶劑C為甲醇，流速為2.4ml/分鐘。所使用的梯度為在5分鐘內(nèi)，以線性梯度，使有機(jī)相濃度由0％逐漸提高至50％B與50％C，于1分鐘內(nèi)至100％B，然后保持有機(jī)相固定濃度1.5分鐘。注射樣本總體積為25μl。
采用附有ESI光源的Quattro(供應(yīng)商英國曼徹斯特市Microsome公司)三重四極質(zhì)譜儀作為檢測器。光源與去溶劑化溫度分別設(shè)定在120與350℃，使用氮?dú)庾鳛闅忪F劑及脫水氣體。以正掃描模式取得數(shù)據(jù)(單離子反應(yīng))，錐管電壓設(shè)定在10V，滯留時(shí)間為1秒。
代謝安定性以化合物于活性微粒體(E(act))的存在下培養(yǎng)15分鐘后的代謝％表示(代謝％＝100％-((E(act)于t＝15時(shí)的總離子電流(TIC)/E(act)于t＝0時(shí)的TIC)×100)。代謝百分比小于20％的化合物則定義為具高度代謝安定性。代謝百分比在20與70％之間的化合物則定義為具中度安定性，而代謝百分比高于70％的化合物則定義為具低度代謝安定性。當(dāng)進(jìn)行代謝安定性試驗(yàn)時(shí)，總是包含3種參考化合物。使用菲帕米(Varapamil)作為低度代謝安定性的化合物(代謝％＝73％)。使用西沙比利(Cisapride)作為中度代謝安定性的化合物(代謝％＝45％)。使用丙醇作為中度至高度代謝安定性的化合物(代謝％＝25％)。使用此等參考化合物確認(rèn)代謝安定性分析法的有效性。
試驗(yàn)3種化合物，其中1種代謝％小于20％，2種的代謝％在20至70％之間。
實(shí)施例C.6p21誘發(fā)能力采用下列方法，于人類A2780卵巢癌瘤細(xì)胞上測定p21蛋白質(zhì)表現(xiàn)程度。將A2780細(xì)胞(20000個(gè)細(xì)胞/180μl)接種在96孔微分析板中，補(bǔ)充2mM L-麥酰胺、50μg/ml慶大霉素與10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中。溶解細(xì)胞前24小時(shí)，化合物的最終添加濃度為10-5、10-6、10-7與10-8M。所有試驗(yàn)化合物均溶在DMSO中，再于培養(yǎng)基中稀釋。添加化合物24小時(shí)后，排出細(xì)胞的上澄液。以200μl冰冷PBS洗滌細(xì)胞。吸清凹孔，添加30μl溶胞緩沖液(50mM Tris.HCl(pH7.6)，150mM HCl，1％Nonidet p40與10％甘油)。分析板于-70℃下培養(yǎng)一夜。
自金屬箔包裝中取出適量微滴定孔，置入空的凹孔維持器中。制備洗滌緩沖液(20×分析板洗滌濃縮液100ml PBS與界面活性劑的20倍濃縮液。含有2％氯乙酰胺)的操作溶液(1×)。冷凍干燥的p21WAF標(biāo)準(zhǔn)物與蒸餾水重新組合，再經(jīng)樣本稀釋液(由套組中供應(yīng))稀釋。
樣本經(jīng)樣本稀釋液稀釋1∶4。吸取樣本(100μl)與p21WAF1標(biāo)準(zhǔn)物(100μl)加至適當(dāng)凹孔中，于室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。以1×洗滌緩沖液洗滌凹孔3次后，吸取100μl檢測劑抗體試劑(生物素基化單株p21WAF1抗體溶液)加至各孔中。凹孔于室溫下培養(yǎng)1小時(shí)后，以1×洗滌緩沖液洗滌3次。稀釋400×共軛物(過氧化酶抗生物素共軛物400倍濃縮液)，取100μl×溶液加至孔中。凹孔于室溫下培養(yǎng)30分鐘后，以1×洗滌緩沖液洗滌3次，以蒸餾水洗滌1次。添加受質(zhì)溶液(發(fā)色性受質(zhì))(100μl)至孔中，于黑暗中室溫下培養(yǎng)30分鐘。依前述添加受質(zhì)溶液的相同順序添加停止反應(yīng)溶液至各孔中。使用分光光度計(jì)讀板機(jī)，于450/595nm雙重波長下測定各孔吸光度。每次實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行對照組(不含藥物)與空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)。所有對照組與樣本組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。各樣本的p21WAF1誘發(fā)數(shù)值(單位為吸光度)以相對于對照組中p21 WAF1數(shù)值百分比表示。誘發(fā)百分比高于130％時(shí)，定義為顯著誘發(fā)。本分析法中，試驗(yàn)2種化合物，其均展現(xiàn)顯著的誘發(fā)作用。
表F-2表F-2出示依據(jù)實(shí)施例C.1、C.2與C.3試驗(yàn)的化合物的結(jié)果
D.組合物實(shí)施例膜衣片劑片劑核心制法取含100g式(I)化合物、570g乳糖與200g淀粉的混合物混合均勻后，與含5g十二烷基硫酸鈉及10g聚乙烯吡咯烷酮的約200ml水溶液濕化。濕粉末混合物經(jīng)過篩、干燥及再過篩一次。然后添加100g微晶纖維素與15g氫化植物油。全部混合均勻，壓成片劑，產(chǎn)生10,000片劑，各含100mg式(I)化合物。
包衣添加含5g乙基纖維素的150ml二氯甲烷溶液至含10g甲基纖維素的75ml變性乙醇溶液中。然后添加75ml二氯甲烷與2.5ml 1，2，3-丙三醇。取10g聚乙二醇熔化及溶解于75ml二氯甲烷中。后項(xiàng)溶液加至前項(xiàng)溶液中，然后添加2.5g十八碳烷酸鎂、5g聚乙烯吡咯烷酮與30ml濃縮色素懸浮液，全部均質(zhì)化。于包覆設(shè)備中，以所得混合物包覆片劑核心。
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物 其N-氧化物型、其醫(yī)藥上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)體，其中n為0、1、2或3，且當(dāng)n為0時(shí)，則為一直接鍵合；t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時(shí)，則為一直接鍵合；各Q為氮或-C≤；各X為氮或-C≤；各Y為氮或-C≤；各Z為氮或-CH＜；R1為-C(O)NR7R8、-NHC(O)R9、-C(O)C1-6烷二基SR9、-CR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨(dú)立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基；R9分別獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C1-6烷羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯啶酮或甲基咪唑基；R10分別獨(dú)立選自氫或C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺酰基吡嗪基；-L-選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基、羰基或氨羰基；各R3分別獨(dú)立為氫原子，其中一個(gè)氫原子可被選自芳基的取代基置換；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán) 其中各s分別為0、1、2、3、4或5；各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；被芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；磺杌鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；芳基磺?；环蓟酋；被?；芳氧基；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；硫苯基；被下列基團(tuán)取代的硫苯基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基六氫吡啶基、C1-6烷氧基六氫吡啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；被羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；唑基；被芳基與C1-6烷基取代的 唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯啶基；吡咯基；六氫吡啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷氨基；嗎啉基C1-6烷氨基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺酰基哌嗪基；萘磺?；鶜溥拎せ?；萘磺?；籆1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺酰基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基六氫吡啶基；C1-6烷氧基六氫吡啶基C1-6烷基；六氫吡啶基氨基C1-6烷氨基；六氫吡啶基氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；(C1-6烷基六氫吡啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；(C1-6烷基六氫吡啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；羥基C1-6烷氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯啶基C1-6烷基；吡咯啶基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；被選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；被C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；被分別獨(dú)立選自下列1、2或3個(gè)取代基取代的苯基；鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨羰基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺酰基氨基(C1- 4烷基)氨基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、六氫吡啶基C1-4烷氧基、吡咯啶基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯被酋；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基六氫吡啶基、C1-4烷氧基六氫吡啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、被-CH＝CH-CH＝CH-取代的呋喃基、吡咯啶基C1-4烷基、吡咯啶基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1-4烷氨基、嗎啉基C1-4烷氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、六氫吡啶基氨基C1-4烷氨基、六氫吡啶基氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、(C1-4烷基六氫吡啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、(C1-4烷基六氫吡啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷氨基、羥基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或硫苯基C1-4烷氨基；各R5與R6可置于氮上替代氫；上述芳基為苯基，或?yàn)楸灰粋€(gè)或多個(gè)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥羰基的取代基取代的苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n為1或2；t為0、1、2或4；各Q為-C≤；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫或硝基；-L-為一直接鍵合或選自C1-6烷二基的二價(jià)基團(tuán)；R4為氫； 為選自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-5)、(a-6)、(a-11)、(a-18)、(a-20)、(a-21)、(a-32)、(a-33)、(a-47)、或(a-51)的基團(tuán)；各s分別為0、1、2或4；且各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；鹵基；三鹵C1-6烷基；C1-6烷基；被芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；苯并呋喃基；萘磺?；槐环佳趸〈倪拎せ?；苯基；或被選自羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基中一個(gè)取代基取代的苯基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中t為1、2、3或4；R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個(gè)Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨(dú)立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；-L-為一直接鍵合或選自下列的二價(jià)基團(tuán)C1-6烷二基、C1-6烷二基氧、氨基或羰基；R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氨基C1-6烷基、或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)與(a-51)；各s分別為0、1、2、3或4；R5為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺酰基；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；硫苯基；呋喃基、被羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；被芳基與C1-6烷基取代的 唑基C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯啶基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基六氫吡啶基；吡唑基；被選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中一或兩個(gè)取代基取代的吡唑基；吡啶基；被C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基；R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨(dú)立選自鹵基、C1-6烷基；C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中n為1；t為0或1；各Q為-C≤；各X為氮；各Y為氮；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為一直接鍵合；各R3分別獨(dú)立代表氫原子；R4為氫； 為選自(a-6)、(a-11)、(a-20)、(a-47)或(a-51)的基團(tuán)；各s分別為0、1或4；且各R5與R6分別獨(dú)立選自氫；C1-6烷基；C1-6烷氧基；萘磺酰基；或被羥基C1-4烷基或嗎啉基C1-4烷基取代的苯基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4中的化合物，其是選自No.3、No.4、No.8、No.5、No.7、No.6與No.9化合物。
6.一種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥上可接受的載劑及作為活性成分的醫(yī)療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至5中的化合物。
7.一種制備根據(jù)權(quán)利要求6的醫(yī)藥組合物的方法，其中均勻混合醫(yī)藥上可接受的載劑及根據(jù)權(quán)利要求1至5中的化合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物，其是用為醫(yī)藥。
9.一種以根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物用于制造醫(yī)藥，供治療增生疾病上的用途。
10.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于由式(II)中間體與適當(dāng)酸(如，例如三氟乙酸)反應(yīng)，產(chǎn)生式(I-a)異羥肟酸，其中R1為-C(O)NH(OH)。
11.一種用于生物檢體中檢測或判別HDAC的方法，其包括檢測或測定如權(quán)利要求1所定義的有標(biāo)記化合物與HDAC之間所形成的錯(cuò)合物。
12.一種含抗癌劑與權(quán)利要求權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的HDAC抑制劑的組合物。
全文摘要
本發(fā)明包括一種新穎的式(I)化合物，其中n、t、R
文檔編號A61K31/53GK1639125SQ03805675
公開日2005年7月13日 申請日期2003年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月13日
發(fā)明者P·R·安日保, I·N·C·皮拉特, S·F·A·范布蘭德特, B·羅克斯, P·滕霍爾特, M·G·C·費(fèi)爾東克, L·梅爾佩爾, A·B·迪亞特金 申請人:詹森藥業(yè)有限公司