專利名稱：細(xì)菌聚集表面的處理的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用絲光綠蠅的幼蟲(chóng)的分泌物處理聚集了能產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌的表面的方法以及可用于此方法的組合物。
生物薄膜是在表面生長(zhǎng)并且持續(xù)存在的生物膜。它們可存在于運(yùn)輸或處理流體的工業(yè)設(shè)備的表面上、管道系統(tǒng)中以及在與這些設(shè)備或系統(tǒng)鄰近的表面上。它們通常存在于醫(yī)用植入物或插入到體內(nèi)的裝置的表面上。它們也可形成于暴露于空氣的身體的區(qū)域；尤其是它們可存在于傷口中以及在肺的內(nèi)層上。生物薄膜可被描述成包圍在粘附于表面的多糖基質(zhì)內(nèi)的細(xì)菌群落。
生物薄膜通常為穩(wěn)定的形式，通過(guò)傳統(tǒng)方法很難對(duì)其進(jìn)行處理。這取決于其中包埋了微生物的多糖生物薄膜基質(zhì)的保護(hù)特性。
常規(guī)的藥物，諸如抗生素受生物薄膜中微生物的擴(kuò)散壁壘或改變的新陳代謝狀態(tài)的影響而效果較小。
生物薄膜的形成被認(rèn)為與微生物通過(guò)被稱為密度感受的過(guò)程進(jìn)行的可擴(kuò)散的信號(hào)分子的產(chǎn)生相關(guān)。這些分子被認(rèn)為通過(guò)微生物啟動(dòng)外多糖、外蛋白質(zhì)及其它次級(jí)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。干擾這些分子作用的化合物可抑制生物薄膜的形成和/或削弱已經(jīng)形成的生物薄膜。
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種最普通和最成問(wèn)題的傳染性細(xì)菌。尤其是其形成的生物薄膜很難用常規(guī)的抗生素處理。銅綠假單胞菌形成的生物薄膜對(duì)于具有囊狀纖維化的患者是非常嚴(yán)重的問(wèn)題，其中銅綠假單胞菌在所述患者的肺中繁殖會(huì)引起很難治療且最終常常致死的感染。
有效的傷口愈合是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程，其涉及許多的機(jī)制包括細(xì)胞遷移、生長(zhǎng)因子的分泌、血管生成、組織n lelling以及有助于以協(xié)調(diào)以及以明顯分階段的方式來(lái)促進(jìn)受控的組織再生的傷口的固有蛋白酶/抗蛋白酶平衡。
傷口護(hù)理產(chǎn)品在現(xiàn)代醫(yī)療實(shí)踐中是必要的，尤其是用于慢性創(chuàng)傷或燒傷患者的治療。許多不同的物質(zhì)以前被認(rèn)為具有有助于傷口愈合的活性。這些以前所討論的物質(zhì)包括鏈激酶、膠原酶以及鏈道酶(全部獲自細(xì)菌來(lái)源)、菠羅蛋白酶(來(lái)自菠蘿)、纖溶酶和胰蛋白酶(獲自牛)以及磷蝦酶(獲自甲殼綱動(dòng)物)。臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)顯示這些物質(zhì)僅對(duì)促進(jìn)傷口愈合部分地有效。
已知作為活生物體的麗蠅(green bottle fly)、絲光綠蠅的幼蟲(chóng)(蛆)具有顯著的傷口愈合特性。利用絲光綠蠅幼蟲(chóng)進(jìn)行的清創(chuàng)術(shù)治療已成為被廣泛接受的臨床應(yīng)用。然而，在文獻(xiàn)中很少有關(guān)于此方式的報(bào)道，其中這些幼蟲(chóng)能夠?qū)趦艋酵ǔ７峭讌f(xié)性的傷口愈合的程度。愈合可以是機(jī)械的、生化的或兩者相結(jié)合的方式。我們的工作表明了可以利用體外分泌物來(lái)模仿這些幼蟲(chóng)的作用。
盡管是有效的，然而活幼蟲(chóng)對(duì)許多來(lái)說(shuō)是使人厭惡的，并且通過(guò)在傷口上利用活幼蟲(chóng)以及當(dāng)使用幼蟲(chóng)時(shí)不可避免地將它們的天然分泌物導(dǎo)入到傷口中，對(duì)于許多病人和對(duì)許多醫(yī)療工作者來(lái)說(shuō)是無(wú)法接受的。使用活的生物體也增加了患者發(fā)生過(guò)敏性反應(yīng)的危險(xiǎn)。
已知絲光綠蠅幼蟲(chóng)的排泄物/分泌物(ES)含有一種顯示出胰蛋白酶類絲氨酸蛋白酶活性的酶。本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)了體外的ES也具有破壞細(xì)菌產(chǎn)生的低分子量信號(hào)分子的能力來(lái)測(cè)定細(xì)菌群落的密度，并且因此破壞生物薄膜所賴以形成的細(xì)菌信息網(wǎng)絡(luò)。
本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了一種處理聚集了能產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌的表面的方法，其包括用獲自絲光綠蠅分泌物/排泄物的具有N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯降解活性的物質(zhì)接觸表面。典型地，所述的能產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌為銅綠假單胞菌或金黃色葡萄球菌。
目前通常比較接受的對(duì)生物薄膜的研究是更接近于細(xì)菌存在的自然模式而不是更廣泛地研究浮游生物的系統(tǒng)。Thomas S.等，J.TissueViability，1999 Vol 9 No.4 p127-132報(bào)道了絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物針對(duì)浮游細(xì)菌細(xì)胞的抗微生物活性。我們尚不能重復(fù)這些結(jié)果。然而，在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的條件下，絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物具有阻止或減少細(xì)菌性的生物薄膜形成的活性。去除傷口中的細(xì)菌性的生物薄膜在與感染進(jìn)行的斗爭(zhēng)中將是有利的。
我們的實(shí)驗(yàn)顯示作為細(xì)菌性的生物薄膜的一部分而形成的外多糖被通過(guò)絲光綠蠅分泌物的作用去除。這些作用有說(shuō)服力地表明了在分泌物中存在糖苷酶活性。
慢性傷口的愈合已被證明由于細(xì)菌感染的存在而削弱。感染的水平影響愈合和惡化之間的平衡。導(dǎo)致傷口組織缺氧和病變作用的細(xì)菌是有效愈合的阻礙。
眾所周知，可擴(kuò)散的低分子量的信號(hào)分子允許單獨(dú)的細(xì)菌來(lái)測(cè)定群體密度，并且因此當(dāng)集聚“密度”時(shí)以一種協(xié)調(diào)的方式進(jìn)行作用。這些作用，通常被稱為“密度感受”，現(xiàn)在已知它調(diào)控病原體中毒性決定因子的產(chǎn)生，因此確保感染危險(xiǎn)期的鞏固的攻擊。已知低分子量的信號(hào)分子(密度感受分子)包括N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯，例如，來(lái)自銅綠假單胞菌(參見(jiàn)

圖1)的N-丁?；鵏-高絲氨酸內(nèi)酯(BHL)和N-(3-氧代十二烷基)-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OdDHL)。內(nèi)酯也引起真核生物組織中的細(xì)胞程序性死亡，因此在抵抗傷口愈合所需的組織再生中起作用。顯然破壞這些信號(hào)分子將減少細(xì)菌對(duì)宿主組織的有效攻擊的能力。我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物具有降解BHL和較小程度的降解OdDHL的活性。一旦細(xì)菌形成一種生物薄膜，BHL被認(rèn)為是更有活性的。我們已發(fā)現(xiàn)這些活性為熱穩(wěn)定的，然而對(duì)苯基甲磺酰氟(PMSF)和4-氨基苯基-甲磺酰氟(APMSF)是敏感的，已知其中所述的苯基甲磺酰氟(PMSF)和4-氨基苯基-甲磺酰氟(APMSF)抑制絲氨酸蛋白酶和酯酶的活性。
來(lái)自絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物可以通過(guò)用磷酸鹽緩沖液洗滌無(wú)菌的幼蟲(chóng)，然后在無(wú)菌的條件下過(guò)濾來(lái)收集。
我們令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)幼蟲(chóng)的分泌物與常規(guī)的抗生素諸如四環(huán)素結(jié)合使用時(shí)，具有大于幼蟲(chóng)分泌物和抗生素分別單獨(dú)地使用時(shí)各自的作用。因此，當(dāng)組合使用時(shí)這些單獨(dú)的物質(zhì)之間具有某些協(xié)同作用。因此，根據(jù)進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了包括絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物和一種或多種抗生素化合物的抗微生物組合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的抗生素化合物為四環(huán)素。
在我們研究的過(guò)程中，我們意識(shí)到幼蟲(chóng)分泌物的很多重要組分可能被忽略了，如它們可以是在血淋巴或其它組織中通過(guò)暴露于細(xì)菌就可誘導(dǎo)的(如Hoffmann等在Drosophila melanogaster中描述的(1999))而不是組成型表達(dá)的。因此，我們測(cè)試了在體外暴露于用于在血淋巴中產(chǎn)生抗微生物化合物的細(xì)菌之后表型改變的絲光綠蠅幼蟲(chóng)。
可利用任意已知的皮膚傳遞系統(tǒng)或輸入到無(wú)菌載體諸如膏藥中以敷料的形式將添加或者沒(méi)有添加常規(guī)抗生素的無(wú)菌分泌物輸送到傷口區(qū)域上，來(lái)用于傷口區(qū)域。
實(shí)驗(yàn)用于制備絲光綠蠅(L.sericata)分泌物的方法1日齡的(1St齡蟲(chóng))叉葉綠蠅絲光綠蠅的幼蟲(chóng)購(gòu)自SurgicalMaterials Testing Laboratory(SMTL)Bridgend。
在無(wú)菌條件下飼養(yǎng)且利用無(wú)菌設(shè)備以及在層流櫥柜中收集所有這些絲光綠蠅幼蟲(chóng)的分泌物。在向每一通用樣品(含有大約200個(gè)幼蟲(chóng))中添加200μl磷酸的緩沖鹽水溶液(PBS)后，收集分泌物。在移取(無(wú)菌移液管)、離心(13,000xg 10分鐘)和冷凍(-20℃)分泌物之前用PBS洗滌幼蟲(chóng)。在第二次洗滌之前，讓幼蟲(chóng)休息40分鐘，然后重復(fù)進(jìn)行第三次洗滌。
測(cè)定所收集的分泌物的蛋白質(zhì)含量(BioRad蛋白測(cè)定試驗(yàn))和蛋白酶活性(異硫氰胺熒光素標(biāo)記的(FITC)酪蛋白)。無(wú)菌過(guò)濾分泌物(22μm過(guò)濾)并等分備用且在-20℃儲(chǔ)藏。
1.絲光綠蠅ES與常規(guī)抗生素的協(xié)同作用利用最小抑菌濃度試驗(yàn)在96孔平皿中測(cè)定抑制浮游細(xì)菌生長(zhǎng)的ES的濃度-通過(guò)在492nm處吸光率的增加來(lái)測(cè)定生長(zhǎng)。
與Thomas等(1999)的觀察進(jìn)行比較的結(jié)果表明，由絲光綠蠅在無(wú)菌條件下生長(zhǎng)產(chǎn)生的ES對(duì)革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性細(xì)菌(分別為金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌)的生長(zhǎng)沒(méi)有抗生作用(圖2)。
類似地，在492nm處進(jìn)行24h的吸收之后，比較ES和加熱變性(沸騰10分鐘)的ES以及常規(guī)抗生素四環(huán)素對(duì)銅綠假單胞菌生長(zhǎng)的影響(圖3)。10μg/ml四環(huán)素完全破壞生長(zhǎng)。相比之下，活性的ES顯示通過(guò)此方法測(cè)定的生長(zhǎng)的微弱增強(qiáng)(可能取決于生物薄膜剝離-參見(jiàn)下面的圖4)。然而，利用亞致命水平的四環(huán)素與ES結(jié)合，發(fā)現(xiàn)在降低細(xì)菌生長(zhǎng)的這兩者之間具有協(xié)同效應(yīng)(圖4)。這也通過(guò)用24小時(shí)后的菌落數(shù)來(lái)證實(shí)，其中發(fā)現(xiàn)四環(huán)素和活性ES的組合將活菌數(shù)減少了三分之一。
結(jié)論是，單獨(dú)的絲光綠蠅分泌物對(duì)浮游條件下的細(xì)菌生長(zhǎng)不具有抗生作用，然而與常規(guī)的抗生素四環(huán)素一起具有協(xié)同效應(yīng)。
2.在存在絲光綠蠅ES的條件下減少生物薄膜的形成目前通常比較接受的是，對(duì)生物薄膜的研究是更接近于細(xì)菌存在的自然模式，而不是更廣泛使用的但是不適當(dāng)?shù)母∮紊锵到y(tǒng)。去除傷口中的細(xì)菌性生物薄膜在與感染進(jìn)行的斗爭(zhēng)中將是有利的。
利用O′Toole和Kolter(1999)的結(jié)晶紫法測(cè)定在存在絲光綠蠅ES時(shí)生物薄膜形成的減少。
在96孔平皿中培養(yǎng)生長(zhǎng)24h，然后在去除浮游細(xì)菌之后測(cè)定附著的細(xì)菌(參見(jiàn)第3部分)。在溶解和在540nm處測(cè)定染色的吸光率之前用結(jié)晶紫染料染色所附著的細(xì)菌。在絲光綠蠅ES的存在下，測(cè)定金黃色葡萄球菌生物薄膜在生物薄膜形成中的劑量反應(yīng)減少達(dá)24之久(圖5a)。在ES存在時(shí)溫育蓋玻片的培養(yǎng)生長(zhǎng)中，在銅綠假單胞菌生物薄膜形成中發(fā)現(xiàn)類似的減少。利用Baclight染色來(lái)顯像微菌落(圖5b和5c)。
結(jié)論是，在實(shí)驗(yàn)室的條件下絲光綠蠅分泌物對(duì)于阻止細(xì)菌膜的形成是有活性的。
3.絲光綠蠅ES產(chǎn)物的糖苷酶活性當(dāng)培養(yǎng)物在存在絲光綠蠅ES產(chǎn)物的條件下生長(zhǎng)時(shí)，在產(chǎn)生生物薄膜的條件下生長(zhǎng)的培養(yǎng)物中回收的細(xì)胞顯示出了差異。培養(yǎng)物在96孔微滴定板中的100μL等分試樣中生長(zhǎng)。與燒瓶生長(zhǎng)培養(yǎng)相比，這樣具有增加液體與塑料孔表面接觸的表面面積的作用，由此促進(jìn)了生物薄膜的增長(zhǎng)。從過(guò)夜的培養(yǎng)物接種銅綠假單胞菌并生長(zhǎng)到早期的指數(shù)生長(zhǎng)期，然后稀釋(1/2000)來(lái)得到～103個(gè)細(xì)胞/孔。培養(yǎng)物然后在存在ES、滅活ES(沸騰10min)或磷酸鹽緩沖液(對(duì)照)的條件下生長(zhǎng)。37℃過(guò)夜培養(yǎng)培養(yǎng)物，然后收集每一種等分試樣并離心(13,000xg 10分鐘)回收細(xì)胞。結(jié)果表明(圖6)，在對(duì)照和滅活ES樣本中存在的“粘液層”，而在活性ES存在時(shí)卻不存在。加入活性ES的等分試樣到樣本D(變性ES)中，然后在37℃溫育過(guò)夜導(dǎo)致最初形成的粘液層被除去。我們認(rèn)為粘液層可能包括作為生物薄膜的一部分的外多糖，并且通過(guò)絲光綠蠅ES中的糖苷酶可使其去除。就銅綠假單胞菌而言，人們認(rèn)為其外多糖是藻酸鹽(一種由古洛糖醛酸和甘露糖醛酸構(gòu)成的聚合物)。
結(jié)論是酶催化除去外多糖將降低細(xì)菌形成有效的生物薄膜并且因此在傷口中形成一種有效的感染的能力。
4.通過(guò)來(lái)自絲光綠蠅排泄/分泌產(chǎn)物(ES)的熱穩(wěn)定的PMSF/APMSF-敏感的活性(內(nèi)酯酶)使銅綠假單胞菌的密度感受信號(hào)分子失活可利用薄層色譜法(TLC)測(cè)定BHL和OdDHL(分別為RP18F245S或RP2UV254板)。在色譜層析之后，信號(hào)分子的位置和量可以通過(guò)它們對(duì)生物傳感器生物的影響來(lái)顯示。當(dāng)和BHL或HL接觸時(shí)，所使用的特定生物會(huì)發(fā)光。因此，如果將TLC板用含有生物傳感器生物的軟瓊脂覆蓋，則溫育一段時(shí)期后，通過(guò)光線的發(fā)射顯示了信號(hào)分子的位置。通過(guò)轉(zhuǎn)換成假的顏色顯示了發(fā)射光的強(qiáng)度，其中最強(qiáng)烈的光顯示為黃色并且漸變?yōu)樽钊醯?深藍(lán)色(附圖7-側(cè)面的條棒)。
通過(guò)下列的溫育測(cè)試絲光綠蠅分泌物對(duì)BHL的作用1.100μl ES(120μg/ml蛋白)+100μM BHL2.100μl沸騰的ES(120μg/ml蛋白)+100μM BHL3.100μl ES(120μg/ml蛋白)+100μM BHL4.用APMSF(2mM)預(yù)溫育的100μl ES(120μg/ml蛋白)+100μM BHL5.在緩沖液(磷酸鹽緩沖液)中的100μMBHL溫育6小時(shí)后，每一溫育的1μl被用于RP18F254STLC板并在如上所述利用生物傳感器覆蓋來(lái)顯示BHL之前用60％(v/v)甲醇/水進(jìn)行分離。
結(jié)果(圖7)證實(shí)了幼蟲(chóng)ES對(duì)降低BHL的作用。陽(yáng)性對(duì)照(泳道5)表明光產(chǎn)生來(lái)自單獨(dú)的BHL。在幼蟲(chóng)ES(泳道1)存在下與BHL一起溫育時(shí)光產(chǎn)生降低(泳道1)，表明了信號(hào)分子的降解。通過(guò)將ES與苯基甲磺酰氟(PMSF)(泳道4)一起預(yù)溫育阻止了此降解以及通過(guò)將ES與4-氨基苯基-甲磺酰氟(APMSF)一起預(yù)溫育在較低的程度上阻止了此降解(泳道3)(絲氨酸蛋白酶活性的抑制劑)。煮沸的ES(泳道2)沒(méi)有阻止降低，由此表明了活性的熱穩(wěn)定性。
此外，實(shí)驗(yàn)證實(shí)了ES對(duì)在6小時(shí)的溫育開(kāi)始時(shí)和結(jié)束時(shí)采集的OdDHL(附圖8和9)比較樣品有類似的作用。
這一次，在RP2/UV254板上利用45％(v/v)甲醇/水進(jìn)行色譜層析。降解導(dǎo)致了第二種物質(zhì)的出現(xiàn)，確信它為OdDHL分子的開(kāi)環(huán)。這有待于通過(guò)柱層析(通過(guò)C18柱進(jìn)行高效液相色譜)來(lái)證實(shí)。同樣，該降解對(duì)煮沸是穩(wěn)定的但其受PMSF抑制和在較少程度上受APMSF抑制。
結(jié)論是，絲光綠蠅幼蟲(chóng)ES具有對(duì)能降解BHL和OdDHL的PMSF和APMSF敏感的熱穩(wěn)定活性，其中的BHL和OdDHL是兩種涉及銅綠假單胞菌的生物薄膜形成和感染并且由此與傷口愈合有關(guān)的信號(hào)分子。
5.絲光綠蠅中抗微生物活性的誘導(dǎo)絲光綠蠅的無(wú)菌幼蟲(chóng)獲自Surgical Materials TestingLaboratory SMTL(Princess of Wales Hospital，Bridgend CF311RQ)。
將幼蟲(chóng)培養(yǎng)在Sherman(1995)所描述的培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基包括分解的豬肝和細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂，用在密閉容器中的高壓滅菌器進(jìn)行殺菌，其中的密閉容器允許氣體和濕氣在容器的內(nèi)部和外部之間交換但其阻止細(xì)菌進(jìn)入到容器中。在容器的基體中提供用于幼蟲(chóng)的培養(yǎng)基的薄膜層。
將無(wú)菌的第一齡幼蟲(chóng)(200個(gè))懸浮在200μl的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液中并轉(zhuǎn)入到容器中。在保濕室中在28℃的無(wú)菌條件下培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)，來(lái)允許幼蟲(chóng)的產(chǎn)生。將銅綠假單胞菌的突變體PAO P47接種到10mlLuria Bertani(LB)培養(yǎng)基中并在37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。給容器接種1ml(～108活菌數(shù))的培養(yǎng)物并且允許幼蟲(chóng)在細(xì)菌的存在下培養(yǎng)。在另一48h之后，處死幼蟲(chóng)并在脊前部切口收集血淋巴。微離心(13,000xg持續(xù)10分鐘)血淋巴以除去細(xì)胞。
通過(guò)在含有大腸桿菌D31的細(xì)菌菌苔中的2μl血淋巴的微孔周圍無(wú)菌噬菌斑的形成來(lái)評(píng)估抗微生物的活性。接種1μl的培養(yǎng)物到7ml的熔化(50℃)的含有10μg/ml鏈霉素和5mg....yso酶的1％LB瓊脂中來(lái)制備平板。這些在無(wú)菌皮式培養(yǎng)皿中形成。利用模板以距離平板邊緣等間距的規(guī)則模式來(lái)形成微孔(8)。通過(guò)與用2μl分別為100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml的天蠶素B(Sigma)產(chǎn)生的噬菌斑進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估抗微生物活性(附圖10)。通過(guò)銅綠假單胞菌誘導(dǎo)48h之后獲得的血淋巴產(chǎn)生的5mm直徑的抗微生物噬菌斑大于那些用10μg/ml標(biāo)準(zhǔn)的天蠶素產(chǎn)生的抗微生物噬菌斑(4.25mm)但小于用100μg/ml標(biāo)準(zhǔn)的天蠶素產(chǎn)生的抗微生物噬菌斑(8mm)。
結(jié)論是，通過(guò)在培養(yǎng)過(guò)程中暴露于銅綠假單胞菌誘導(dǎo)后，在絲光綠蠅的血淋巴中發(fā)現(xiàn)了抗細(xì)菌活性。
參考文獻(xiàn)OT′oole，G.A.和Kolter，R.(1999)，通過(guò)多重的、收斂的信號(hào)途徑引發(fā)熒光假單胞菌WCS365中生物薄膜的形成一種遺傳分析，Molecular Microbiology 28449-461.
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權(quán)利要求
1.一種處理聚集了能產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌的表面的方法，其包括使獲自絲光綠蠅分泌物/排泄物的具有N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯降解活性的物質(zhì)與表面接觸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的表面選自金屬表面、玻璃表面和塑料材料的表面。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述的表面為醫(yī)療裝置或植入物的表面。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的表面為傷口表面。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任意一項(xiàng)的方法，其中所述的能夠產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌為銅綠假單胞菌或金黃色葡萄球菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到5中任意一項(xiàng)的方法，其中在包括另外一或多種抗生素化合物的組合物中提供所述的物質(zhì)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的抗生素化合物為四環(huán)素。
8.一種包括分離自絲光綠蠅的分泌物/排泄物或其類似物以及一種或多種抗生素化合物的抗微生物的組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中所述的抗生素化合物為四環(huán)素。
10.一種抗微生物的組合物，它包括作為活性成分的分離自絲光綠蠅的分泌物/排泄物的具有N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯-降解活性的物質(zhì)或其類似物以及載體。
11.一種抗微生物的組合物，它包括作為活性成分的分離自絲光綠蠅的分泌物/排泄物的絲氨酸蛋白酶或其類似物以及載體。
12.一種抗微生物的組合物，其包括作為活性成分的分離自絲光綠蠅的分泌物/排泄物的糖苷酶或其類似物以及載體。
13.一種抗微生物的組合物，其包括作為活性成分的分離自絲光綠蠅的分泌物/排泄物的具有無(wú)蠶素類活性的物質(zhì)或其類似物以及載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求10到13中任意一項(xiàng)的組合物，它還含有一種或多種抗生素化合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述的抗生素化合物為四環(huán)素。
16.一種含有獲自絲光綠蠅幼蟲(chóng)的無(wú)細(xì)胞血淋巴的抗微生物組合物，其中讓絲光綠蠅幼蟲(chóng)生長(zhǎng)在存在銅綠假單胞菌或所述血淋巴的一種或多種活性組分或該組分的合成類似物的條件下。
17.一種含有權(quán)利要求8到16中任意一項(xiàng)的組合物以及載體的傷口敷料。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過(guò)與具有N－?；呓z氨酸內(nèi)酯降解活性的物質(zhì)接觸來(lái)處理聚集了能產(chǎn)生生物薄膜的細(xì)菌的表面，其中所述的具有N－?；呓z氨酸內(nèi)酯降解活性的物質(zhì)獲自麗蠅、絲光綠蠅(Luciliasericata)幼蟲(chóng)的分泌物和/或排泄物。此外，當(dāng)所述的幼蟲(chóng)分泌物/排泄物與抗生素，例如四環(huán)素結(jié)合使用時(shí)可獲得協(xié)同作用。這些獲自絲光綠蠅幼蟲(chóng)分泌物和/或排泄物的具有N－?；呓z氨酸內(nèi)酯降解活性的物質(zhì)也構(gòu)成了本發(fā)明的一部分。
文檔編號(hào)A61L15/44GK1649606SQ03809944
公開(kāi)日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2003年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月9日
發(fā)明者D·I·普里查德 申請(qǐng)人:英國(guó)國(guó)防部