專利名稱：：反義iap核堿基寡聚物及其應用的制作方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及反義IAP核堿基寡聚物和運用它們誘導程序性細胞死亡的方法。細胞死亡的一個途徑被稱作程序性細胞死亡，或程序性細胞死亡。程序性細胞死亡通常作為健康組織發(fā)育及維持的一個正常部分。該過程發(fā)生地如此之快以至于很難檢測得到?，F(xiàn)在已經(jīng)知道程序性細胞死亡的途徑在胚胎的發(fā)育、病毒的發(fā)病機理、癌癥、自身免疫性疾病、神經(jīng)變性疾病以及其它的一些情況中起到關(guān)鍵作用。細胞凋亡反應的衰竭已經(jīng)牽涉到癌癥，自身免疫性疾病如紅斑狼瘡和多發(fā)性硬化癥，以及包括與皰疹病毒、痘病毒和腺病毒相關(guān)的病毒性感染的發(fā)展。近幾年程序性細胞死亡在癌癥中的重要性已經(jīng)清楚。二十世紀七十年代末生長促進癌基因的識別使幾乎全世界聚焦于統(tǒng)治癌癥生物學研究多年的細胞增生。長期存在的教條認為相對于“正?！奔毎麃碚f抗癌治療優(yōu)選地靶向于快速分化癌細胞。這種解釋不完全令人滿意，因為一些慢生長腫瘤容易治療，而許多快速分化腫瘤類型對抗癌治療極其抵抗。目前癌癥領(lǐng)域的進展導致了一種新的癌癥生物學模式，其中瘤形成被視為是沒有完成程序性細胞死亡的正常途徑。正常的細胞通過各種生長因子接收從它們的鄰細胞傳來的連續(xù)的反饋，如果從其所處的環(huán)境中移開就會“自殺”。癌細胞以某種方式繞開這些命令，持續(xù)的不適當?shù)脑鲋?。許多癌癥治療，包括放射療法和許多化學療法，以前被認為通過引起細胞損傷起作用，現(xiàn)在認為事實上是通過引發(fā)程序性細胞死亡起作用的。雖然這種抵抗的決定因素現(xiàn)在僅在研究之中，然而正常細胞類型和癌癥細胞類型均顯示出對細胞凋亡觸發(fā)劑的寬量程的敏感性。許多正常的細胞類型對亞致死劑量的放射或細胞毒類化學藥物產(chǎn)生響應，經(jīng)歷暫時的生長抑制，而鄰近的癌癥細胞產(chǎn)生程序性細胞死亡。這種在給定劑量下的不同效果提供了可以成功治療癌癥的決定性的治療窗。因此，腫瘤細胞對程序性細胞死亡的抵抗作為癌癥治療失敗的主要原因也就不足為奇了。已經(jīng)鑒定了幾種抑制程序性細胞死亡的有效的內(nèi)源性蛋白質(zhì)，包括哺乳動物細胞中的Bcl-2，IAP(程序性細胞死亡抑制劑)家族。后一家族中的某些成員直接抑制終端效應器半胱天冬酶，即參與完成細胞死亡的casp-3和casp-7，還抑制對于癌癥化學療法誘導的細胞死亡的調(diào)解十分重要的主要線粒體起始因子半胱天冬酶，casp-9。IAP是唯一的已知的內(nèi)源性半胱天冬酶抑制劑，因此在程序性細胞死亡的調(diào)節(jié)中起著重要的作用。IAP曾被假定為促成一些癌癥的發(fā)生，MALT淋巴瘤中鑒定出一種假定因果的涉及一種特定IAP(cIAP2/HIAP1)的染色體易位。最近患急性骨髓性白血病的患者的情況說明了升高的XIAP，預后不良與短的存活率之間的相互關(guān)聯(lián)。XIAP在許多NCI型的腫瘤細胞系中大大的過表達。應用改良的癌癥療法成為一種需要，特別是能夠誘導癌癥細胞發(fā)生程序性細胞死亡和在此類細胞中避免提供抗細胞凋亡信號的療法。發(fā)明概述總的來說，本發(fā)明涉及用于誘導細胞中程序性細胞死亡的方法和試劑。本發(fā)明的方法和試劑對治療癌癥和其它增殖性疾病有效。本發(fā)明涉及核堿基寡聚物，特別是寡核苷酸，用于調(diào)解編碼IAP的多核苷酸的功能。這些寡聚物減少產(chǎn)生的IAP的數(shù)量，此數(shù)量允許通常表達IAP的細胞產(chǎn)生程序性細胞死亡。這一點通過提供核堿基寡聚物來實現(xiàn)，所述核堿基寡聚物特異性的與編碼IAP的一種或多種多核苷酸雜交。核堿基寡聚物與IAP多核苷酸(如RNA，DNA)的特異性雜交作用干擾IAP多核苷酸的正常功能，減少IAP蛋白質(zhì)的產(chǎn)生數(shù)量。這種通過特異性雜交到靶位的化合物對靶核酸的功能的調(diào)解通常被稱為“反義”。一方面，本發(fā)明涉及長度多達30個核堿基的核堿基寡聚物，寡聚物包括選自SEQIDNO1-99，143，147，151，163-260，287，289和300-460序列的至少八個連續(xù)的核堿基。所要達到的是將寡聚物給予細胞時能夠抑制IAP的表達。在某些實施方案中，核堿基寡聚物包括選自SEQIDNO1-99，143，147，151，163-260，287，289和300-460的序列。令人期望的是核堿基寡聚物由(或基本上由)一種或多種上述的SEQIDNOs組成。例如，核堿基寡聚物可以是包括選自SEQIDNOs97，98，99，143，147，151，287和289序列的XIAP反義核酸，包括選自SEQIDNOs300-389序列的HIAP1反義核酸，或者包括選自SEQIDNOs390-460序列的HIAP2反義核酸。在一個特別理想的實施方案中，本發(fā)明涉及具有11個DNA殘基的核堿基寡聚物，所述DNA殘基的每一側(cè)連接有4個2’-O-甲基RNA殘基并由下列序列中的一種組成5’-AUUGGTTCCAATGTGUUCU-3’(SEQIDNO155)；5’-ACACGACCGCTAAGAAACA-3’(SEQIDNO16)；5’-ACAGGACTACCACTTGGAA-3’(SEQIDNO157)；5’-UGCCAGTGTTGATGCUGAA-3’(SEQIDNO27)；5’-GCUGAGTCTCCATATUGCC-3’(SEQIDNO141)；5’-UCGGGTATATGGTGTCUGA-3’(SEQIDNO41)；5’-AAGCACTGCACTTGGUCAC-3’(SEQIDNO47)；5’-CCGGCCCAAAACAAAGAAG-3’(SEQIDNO51)；5’-ACCCTGGATACCATTUAGC-3’(SEQIDNO63)；5’-UGUCAGTACATGTTGGCUC-3’(SEQIDNO161)；和5’-UGCACCCTGGATACCAUUU-3’(SEQIDNO151)。本發(fā)明的核堿基寡聚物可以包括至少一個經(jīng)修飾的鍵(如硫代磷酸酯，甲基膦酸酯，磷酸三酯，二硫代磷酸酯，或者磷酸硒酸酯鍵)，經(jīng)修飾的核堿基(如，5-甲基胞嘧啶)，和/或經(jīng)修飾的糖部分(如，2’-O-甲氧乙基基團或2’-O-甲基基團)。在一個實施方案中，寡聚物是嵌合的寡聚物(如，一種寡核苷酸包括由硫代磷酸酯或磷酸二酯鍵連接的DNA殘基，每一側(cè)帶有至少一、二、三或四個由硫代磷酸酯鍵連接的2’-O-甲基RNA殘基)。另一方面，本發(fā)明涉及一種增強細胞中程序性細胞死亡的方法。該方法包括給予細胞本發(fā)明的核堿基寡聚物以便IAP(如，XIAP，HIAP1，或HIAP2)的表達被抑制的步驟。核堿基寡聚物可以是，例如，反義化合物、雙鏈RNA或核酶的組成部分。這一給藥步驟可以單獨進行或者與第二步(如給予化療劑，生物反應調(diào)節(jié)劑，和/或化學致敏劑)結(jié)合。細胞可以是體外或體內(nèi)的。在一個實施方案中，細胞是癌細胞(如人類癌細胞)或源于淋巴或骨髓的細胞。在一個相關(guān)方面，本發(fā)明涉及通過給予動物有效量的本發(fā)明的核堿基寡聚物來治療動物具有增生性疾病(如，癌癥，淋巴增生性障礙或骨髓增生異常綜合征)或預防這樣疾病發(fā)生的方法。癌癥可以是例如急性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病、急性原粒細胞白血病、急性早幼粒細胞白血病、急性骨髓單核細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性紅白血病、慢性白血病、慢性骨髓細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、慢性淋巴細胞白血病、真性紅細胞增多癥、淋巴瘤、何杰金氏病、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、頸癌、子宮癌、睪丸癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜細胞瘤、松果體瘤、成血管細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤、黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤或視網(wǎng)膜母細胞瘤。治療癌癥時，優(yōu)選還給予一種或多種化療劑、生物反應調(diào)節(jié)劑、和/或化學致敏劑。優(yōu)選的，給予一種或多種這些藥劑是在給予核堿基寡聚物五天之內(nèi)。典型的化療劑是阿霉素(多柔比星)、長春烯堿、依托泊苷、紫杉醇和順鉑?？梢詰萌我庖环N能夠在靶位形成有效量的給藥方式，特別優(yōu)選的給藥方式是通過靜脈內(nèi)和瘤內(nèi)給藥。另一方面，本發(fā)明涉及包括本發(fā)明的核堿基寡聚物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。如果需要，藥物組合物中還可以包括其他組分(如膠體分散體系或化療劑)。本發(fā)明還涉及一種能夠切割XIAP，HIAP1或HIAP2mRNA的催化性RNA分子。在優(yōu)選的實施方案中，催化性RNA分子的結(jié)合臂上包括相應于本發(fā)明的核堿基寡聚物的至少8個連續(xù)的核堿基(如表1、2、6和7中任意一個的核堿基序列)。RNA分子優(yōu)選錘頭狀基序，但也可以是發(fā)夾結(jié)構(gòu)，丁型肝炎病毒，組1內(nèi)含子，VSRNA或RNA酶PRNA基序。本發(fā)明還涉及表達載體，其包括編碼一種或多種催化性RNA分子并且位置適當?shù)暮怂幔糜谠诓溉閯游锛毎斜磉_。本發(fā)明還涉及一種通過給予動物有效量的上述催化性RNA分子或編碼催化性RNA分子的表達載體來治療患有癌癥或淋巴組織增生性疾病的動物的方法。在另外一方面，本發(fā)明涉及具有21至29個核堿基的雙鏈RNA分子，其中至少八個連續(xù)的核堿基相應于表1、2、6和7中的任意序列。一個相關(guān)的方面，本發(fā)明還涉及具有50至70個核堿基的雙鏈RNA分子，所述的RNA分子包含21至29個核堿基的第一結(jié)構(gòu)域，這些核堿基包括對應于表1，2，6和7中任一序列的至少8個連續(xù)的核堿基；與所述的第一結(jié)構(gòu)域互補的第二結(jié)構(gòu)域，以及位于所述第一和第二結(jié)構(gòu)域之間的環(huán)形結(jié)構(gòu)域，以便所述第一結(jié)構(gòu)域和所述第二結(jié)構(gòu)域能夠復合形成雙鏈發(fā)夾式RNA分子。本發(fā)明還以一種編碼這種雙鏈RNA的表達載體(如腺病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)為特征。本發(fā)明還以一種通過給予動物有效量的上述雙鏈RNA分子治療患有癌癥或淋巴增生性障礙的動物的方法為特征。這里的“核堿基寡聚物”是指一種包括至少八個通過連接基團連接在一起的核堿基化合物。經(jīng)過修飾和未經(jīng)修飾的天然和非天然的寡核苷酸，以及寡核苷酸模擬物如蛋白質(zhì)核酸(ProteinNucleicAcids)，鎖核苷酸和阿拉伯糖核酸包括在該定義中。很多核堿基或連接基團用于本發(fā)明的核堿基寡聚物之中，包括那些下文在標題為“寡核苷酸和其它核堿基寡聚物”部分中詳細描述的核堿基寡聚物?！暗鞍踪|(zhì)”或“多肽”或“多肽片段”是指構(gòu)成一種天然存在的多肽或肽的全部或部分，或者構(gòu)成一種非天然存在的多肽或肽的兩個氨基酸以上的任意鏈，不管翻譯后修飾(如糖基化或磷酸化)。“程序性細胞死亡”是指細胞死亡的程序，其中死亡細胞顯示一系列具有明顯特征的生化標志包括細胞膜起泡，細胞體皺縮，染色體凝聚和DNA梯形。通過編程性死亡的細胞包括神經(jīng)元(如在神經(jīng)變性疾病例如中風，帕金森氏病和阿爾默海茨病的過程中)，心肌癥(在心肌梗塞后或充血性心力衰竭過程中)，和癌癥細胞(如暴露于放射性或化療劑后)。未減輕環(huán)境壓力(如缺氧負荷)可以引起細胞進入程序性細胞死亡程序的早期，這一程序是可逆的(即在程序性細胞死亡程序早期的細胞可能被救活)。在細胞編程性死亡的晚期(定型期)，細胞不能被救活，結(jié)果將導致死亡。已知的刺激和抑制不同種細胞程序性細胞死亡的蛋白質(zhì)和化合物均是本領(lǐng)域公知的。例如，半胱天冬酶(ICE)家族的細胞內(nèi)表達和激活誘導或活化程序性細胞死亡，然而IAP的表達或一些Bcl-2家族的成員抑制程序性細胞死亡。另外，在一些特別的細胞類型中有抑制細胞死亡的存活因子。例如，神經(jīng)營養(yǎng)因子，如NGF抑制神經(jīng)元的程序性細胞死亡。這里的“IAP基因”是指編碼具有至少一種BIR域的多肽，并且當以其它細胞內(nèi)或細胞外遞送方式提供時能夠調(diào)節(jié)(抑制或增強)細胞或組織內(nèi)程序性細胞死亡(如見US專利No.5,919,912)的基因。在優(yōu)選的實施方案中，IAP基因是一種與至少一種人或小鼠XIAP、HIAP1或HIAP2(任何一種在US專利No.6,156,535中描述)具有大約50％或更多(如至少85％、90％或95％)同一性的基因。優(yōu)選的測定同一性的序列的區(qū)域是編碼至少一種BIR域和環(huán)鋅指結(jié)構(gòu)域的區(qū)域。哺乳動物IAP基因包括從任意的哺乳動物中分離的核苷酸序列。優(yōu)選的哺乳動物是人類。這里“IAP蛋白質(zhì)”或“IAP多肽”是指一種由IAP基因編碼的多肽或其片段。這里的“IAP生物活性”是指已知在體內(nèi)或體外通過IAP多肽引起的任何活性。這里的“增強的程序性細胞死亡”是指增加那些在給定細胞群中(如癌癥細胞、淋巴細胞、成纖維細胞或任何其它細胞)的程序性細胞死亡的細胞的數(shù)量?？梢岳斫庠谔囟ㄔ囼炛杏梢环N提高程序性細胞死亡的化合物所引起的程序性細胞死亡提高的程度是不同的，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定程序性細胞死亡的水平的統(tǒng)計學顯著差異由此鑒定提高程序性細胞死亡的核堿基寡聚物，其中程序性細胞死亡受IAP抑制。優(yōu)選的“提高程序性細胞死亡”是指與沒有給予本發(fā)明的核堿基寡聚物但是接受了基本上類似的治療的細胞相比，進行程序性細胞死亡的細胞的增加量至少是10％，優(yōu)選25％甚至是50％；最優(yōu)選的是增加至少一倍。優(yōu)選的檢測樣本是正常的進行非充分的程序性細胞死亡的細胞(即，癌細胞)的樣本。這里將描述在程序性細胞死亡的水平上檢測變化的方法。所述的“抑制目標基因的表達”的核堿基寡聚物是指相對于未經(jīng)處理的對照組而言，能夠減少至少5％，更優(yōu)選至少大約10％，25％，甚至50％目標mRNA的數(shù)量，或者由這種mRNA編碼的蛋白質(zhì)的數(shù)量的核堿基寡聚物。測定mRNA和蛋白質(zhì)水平的方法是本領(lǐng)域公知的；這里描述一些示例方法?！半s交”是指互補核堿基之間的氫連接，可以是沃森-克里克，Hoogsteen或反式Hoogsteen氫連接。例如，腺嘌呤和胸腺嘧啶是通過氫連接形成的互補核堿基對。所述的“增生性疾病”是指由于不適當?shù)母咚降募毎只?，不適當?shù)牡退降某绦蛐约毎劳?，或二者兼?zhèn)渌鸬募膊。蛘吣軌驅(qū)е逻@種不適當?shù)母咚降募毎只?，不適當?shù)牡退降某绦蛐约毎劳?，或二者兼?zhèn)涞募膊?。例如，癌癥是增生性疾病的一個例子。癌癥的例子包括，但不限于，白血球過多癥(如，急性白血病，急性淋巴細胞性白血病，急性髓細胞性白血病，急性原粒細胞性白血病，急性早幼粒細胞性白血病，急性骨髓單核細胞性白血病，急性單核細胞性白血病，急性紅白血病，慢性白血病，慢性髓細胞性白血病，慢性淋巴細胞性白血病)紅細胞增多癥，淋巴瘤(何杰金氏病，非何杰金氏病)，特發(fā)性巨球蛋白血癥，重鏈病，和實體瘤，如肉瘤和癌(例如，纖維肉瘤，粘液肉瘤脂肪肉瘤，軟骨肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，內(nèi)皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管內(nèi)皮肉瘤，滑膜瘤；間皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結(jié)腸癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭腺癌，囊腺癌，骨髓癌，支氣管癌，腎細胞癌，肝癌，尼羅導管癌，絨毛膜癌，精原細胞癌，胚胎性癌，維爾姆斯瘤(Wilims)，宮頸癌，子宮癌，睪丸癌，肺癌，小細胞肺癌，膀胱癌，上皮癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，星形細胞瘤，成神經(jīng)管細胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，成血管細胞瘤，聽神經(jīng)瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，神經(jīng)鞘瘤，腦脊膜瘤，黑素瘤，神經(jīng)母細胞瘤，和視網(wǎng)膜母細胞瘤)。淋巴組織增生性疾病也被認為是增生性疾病。優(yōu)選的，本發(fā)明的核堿基寡聚物在不能正常的進行充分的程序性細胞死亡的細胞中能夠增強程序性細胞死亡和/或減少IAPmRNA或蛋白質(zhì)水平。相對于對照組而言，優(yōu)選的增加至少10％，更優(yōu)選增加25％，最優(yōu)選增加1倍或更多。優(yōu)選的本發(fā)明的核堿基寡聚物包括大約8至30個核堿基，其中至少八個連續(xù)核堿基是選自SEQIDNO1-99，143，147，151，163-260，287，289和300-460的序列。本發(fā)明的核堿基寡聚物還可以包括，例如，附加的20，40，60，85，120或更多的與IAP多核苷酸互補的連續(xù)的核堿基。核堿基寡聚物(或其中一部分)可以包括一個經(jīng)修飾的骨架。硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯和其它經(jīng)修飾的骨架是本領(lǐng)域公知的。核堿基寡聚物可以包括一或多個非天然連接。所述的“化療劑”是指用來殺死癌癥細胞或減緩其生長的藥劑。相應的，認為細胞毒性劑和細胞生長抑制劑都是化學治療劑。所述的“生物反應調(diào)節(jié)劑”是指刺激或恢復免疫系統(tǒng)抵抗疾病能力的藥劑。一些，但不是全部，生物反應調(diào)節(jié)劑可以減緩癌癥細胞生長，因此也被認為是化學治療劑。生物反應調(diào)節(jié)劑的例子是干擾素(α，β，γ)，白細胞介素-2，美羅華(rituximab)和曲妥單抗(transtuzumab)。所述的“化學致敏劑“是指能夠使腫瘤細胞對化學治療作用更加敏感的藥劑。所述的“治療有效量“是指與未經(jīng)治療的患者相比能夠改善疾病癥狀，抑制靶細胞生長，減小腫瘤的大小和數(shù)量，抑制IAP表達或增強靶細胞的程序性細胞死亡的化合物(例如，一種核堿基寡聚物)的量。本發(fā)明用來治療異常增生(即，癌癥)的活性化合物的有效量依賴給藥方式，年齡，體重和受試者整體健康狀況的不同而不同。最終，主治醫(yī)師或獸醫(yī)決定適當?shù)牧亢蛣┝糠桨?。這個量被認為是一個“有效的”量。所述的“淋巴組織增生性疾病”是指淋巴系統(tǒng)的細胞(例如，T-細胞和B-細胞)異常增生的疾病，包括多發(fā)性硬化癥，克羅恩病，紅斑狼瘡，類風濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。所述的“核酶”是指具有酶活性，對于靶RNA分子具有特異性位點和分裂能力的RNA。核酶可以用于減少多肽的表達。應用核酶減少多肽表達的方法在如Turner等(Adv.Exp.Med.Biol.465303-318，2000)和Norris等(Adv.Exp.Med.Biol.465293-301，2000)中有所描述。所述的“報告基因”是指編碼一種其表達可被測定的多肽的基因；這樣的多肽包括，但不局限于，葡萄糖醛酸酶(GUS)，熒光素酶，氯霉素轉(zhuǎn)乙?；?CAT)和β-半乳糖苷酶。所述的“啟動子”是指足以引導轉(zhuǎn)錄的多核苷酸。所述的“可操作性連接”是指第一多核苷酸位于第二多核苷酸的鄰近位置，該第二多核苷酸在有適當?shù)姆肿?如，轉(zhuǎn)錄激活因子蛋白質(zhì))與其結(jié)合時能夠引導第一多核苷酸的轉(zhuǎn)錄。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將以下面的優(yōu)選實施方案的說明和權(quán)利要求進一步加以明確。附圖簡述圖1A-1L表示相對于總蛋白質(zhì)而言，反義XIAP寡核苷酸對XIAP蛋白質(zhì)表達的效果圖。圖1B，1D，1F，1H，1J和1L是與模擬試驗的轉(zhuǎn)染結(jié)果相比，每一個寡核苷酸轉(zhuǎn)染的總蛋白質(zhì)濃度，模擬轉(zhuǎn)染用來使上述的XIAP蛋白質(zhì)結(jié)果標準化。圖2A-2C表示多種反義XIAP寡核苷酸，單獨或結(jié)合起來，作用于XIAPRNA(圖2A)和蛋白質(zhì)(圖2B)的效果圖。圖2C是與模擬轉(zhuǎn)染結(jié)果相比較每一個寡核苷酸轉(zhuǎn)染的總蛋白質(zhì)濃度值，模擬轉(zhuǎn)染用來使圖2B中表示的XIAP蛋白質(zhì)結(jié)果標準化。圖3和圖4表示31nM(圖3)或63nM(圖4)的4×4混合骨架(MBO)FG8或E12寡核苷酸的效果圖。H460肺癌細胞用125nMMBO和Lipofectamine2000在一天兩天或連續(xù)三天中轉(zhuǎn)染18小時。在指示時間采集用于蛋白質(zhì)印跡法(western)分析的樣本。進行光密度掃描法，XIAP蛋白質(zhì)水平以GAPDH為標準，與定位至100％的模擬對照試驗相比較。標明的百分數(shù)表示XIAP蛋白質(zhì)對特異的無序(Scrambled)對照組的百分數(shù)。圖5A-5D表示反義XIAP寡核苷酸對細胞活力的效果圖(圖5A，5C和5D)，以及阿霉素存在時的化學致敏作用(圖5B)。圖6表示在體外H460細胞中寡核苷酸介導的特異的XIAPmRNA的下降。描述在H460細胞內(nèi)用單獨的Lipofectamine2000(LFA)處理，或用1.2□M的寡核苷酸F3、G4、C5、AB6、DE4或D7和Lipofectamine2000處理，或用分別的反極性(RP)或無序(SC)寡核苷酸對照品處理的XIAPmRNA圖。進行轉(zhuǎn)染6個小時的XIAPmRNA相對量的實時RT-PCR定量。所有的數(shù)據(jù)都以代表性試驗中的三個數(shù)據(jù)的平均值±標準偏差(SD)表示。同等實驗條件下未處理細胞(對照組)中的XIAPmRNA的水平指定為1。圖7表示用不同的PS-XIAP寡核苷酸轉(zhuǎn)染后H460細胞的XIAPRNA的水平。H460人類肺癌細胞用1uMPS-寡核苷酸和Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染6個小時。然后采集細胞做Taqman分析。圖8表示用4×4MBO轉(zhuǎn)染9小時后H460細胞中的XIAPRNA的水平圖。H460細胞用62.5nM至1uM的4×4MBO和Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染9個小時。然后采集細胞做Taqman分析。圖9表示用4×4MBO轉(zhuǎn)染24小時后H460細胞中的XIAP蛋白質(zhì)降低(knockdown)。H460細胞用1uM的4×4MBO和Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染24個小時。然后采集細胞做蛋白質(zhì)印跡分析。進行光密度掃描法測定，XIAP蛋白質(zhì)水平用肌動蛋白校正，與被設(shè)置為100％的特定無序(sm，rm)的對照組相比較。圖10A和10B是表示體外H460細胞中的XIAP蛋白質(zhì)的反義介導的特異性下調(diào)的示意圖。描述單獨用Lipodectamine2000(LFA)處理，或用LFA加上1.2uMXIAP寡核苷酸F3、G4或C5處理，或用它們各自的寡核苷酸對照(RP，SC)處理的H460細胞中的XIAP蛋白質(zhì)水平。XIAP蛋白質(zhì)水平用蛋白質(zhì)印跡法分析(圖10A)，蛋白質(zhì)的量用光密度法來定量(圖10B)。XIAP水平用細胞肌動蛋白水平校正，與未經(jīng)處理的對照組(CNT)水平相比。圖11A和11B是表示XIAP寡核苷酸介導的對半胱天冬酶的作用的示意圖。表示與對照組相比在轉(zhuǎn)染的H460細胞中，1.2uM的XIAP寡核苷酸F3、G4或C5或它們各自的RP和SCODN對照對前-半胱天冬酶-3，PARP(全長(116kDa)和經(jīng)處理的(85kDa))(圖10A)和Bcl-2和Bax蛋白水平(圖10B)表達的影響。用蛋白質(zhì)印跡法分析蛋白質(zhì)的表達。Bcl-2和Bax蛋白質(zhì)水平以細胞肌動蛋白水平為標準，用光密度法定量。Bcl-2和Bax的比率以兩個或三個獨立的實驗的平均值表示，對照組(CNT)的比率設(shè)為1。圖12A和12B是表示XIAP特異寡核苷酸誘導程序性細胞死亡的圖解。在用1.2uMXIAPG4AS寡核苷酸，G4SC寡核苷酸處理的或未經(jīng)處理的對照組(CNT)的H460細胞中測定程序性細胞死亡的誘導。圖12A表示具有亞-G0/G1DNA含量(細胞凋亡的)的細胞的百分數(shù)，用碘化丙錠(PI)染色和流式細胞儀測量。圖12B表示用DAPI染色的寡核苷酸處理的H460細胞的核形態(tài)學。箭頭表示具有核DNA皺縮或剪切的特征性細胞凋亡形態(tài)學的細胞。圖13A是XIAPG4AS寡核苷酸治療對H460細胞活力影響的效果圖。細胞用濃度遞增的單獨的LFA或LFA與G4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸復合的LFA-寡核苷酸復合物處理，處理24小時后通過MTT分析測定細胞活力。數(shù)據(jù)以三個獨立實驗的平均值±SD表示。圖13B表示在有或沒有阿霉素(DOX)、紫杉醇、長春烯堿(VNB)或依托泊苷(Etop)存在時，在0.4uM劑量下，用單獨的LFA或LFA與G4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸復合的LFA-寡核苷酸復合物處理后死亡H460細胞的百分數(shù)，以MTT分析測定。數(shù)據(jù)以三個獨立的實驗的平均值±SD表示。圖14表示用XIAPAS2×2MBOs和長春烯堿處理的小鼠的相對H460腫瘤生長。寡核苷酸以50ug/g瘤質(zhì)量瘤內(nèi)注射于皮下移植H460細胞異種移植物的SCID-RAG2小鼠。這種治療與給予長春烯堿相結(jié)合。圖15是表示用XIAPASPS-寡核苷酸系統(tǒng)治療的小鼠的平均H460細胞腫瘤大小的圖。將XIAPASPS-寡核苷酸系統(tǒng)給藥(腹膜內(nèi)注射)于皮下植入H460細胞異種移植物的SCID-RAG2小鼠，與對照組相比減小了腫瘤的體積。圖16是表示用XIAPASPS-寡核苷酸系統(tǒng)治療的小鼠中MDA-MB-435/LCC6人乳腺癌細胞腫瘤大小的圖。將XIAPASPS-寡核苷酸系統(tǒng)給藥于在乳房脂肪墊中植入LCC6細胞異種移植物的雌性SCID-RAG2小鼠，與對照組相比減小了腫瘤的體積。圖17是表明在體內(nèi)G4寡核苷酸對腫瘤生長和腫瘤XIAP蛋白質(zhì)水平的效果的示意圖。全身給予裸XIAPG4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸對雄性SCID-RAG2小鼠皮下H460細胞異種移植物生長的抗腫瘤效力。所有的數(shù)據(jù)以平均值±SEM表示(n＝6只小鼠/組)。圖18A和18B是描述單獨用G4AS寡核苷酸、G4SC寡核苷酸或賦形劑(對照)治療21天后SCID-RAG2小鼠中植入的H460腫瘤異種移植物中的XIAP的蛋白質(zhì)表達水平，用蛋白質(zhì)印跡法分析，用光密度法定量。XIAP的水平用細胞的肌動蛋白校正。所有的數(shù)據(jù)以平均值±SD表示(n＝3)。圖19A和19B表示用15mg/kg系統(tǒng)給藥XIAPG4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸超過21天后，G4寡核苷酸對植入SCID-RAG2小鼠的H460腫瘤的組織病理學體內(nèi)影響的顯微照片。圖19A描述用蘇木精和伊紅染色的腫瘤切片。圖19B表示腫瘤切片中泛素表達的免疫組織化學。展示了典型的腫瘤顯微照片。內(nèi)部的刻度標記等于100μm。圖20A和20B表示長春烯堿(VNB)與XIAP寡核苷酸聯(lián)合使用體內(nèi)效力增加的圖。測定SCID-RAG2小鼠中VNB聯(lián)合或不聯(lián)合XIAPG4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸的抗H460腫瘤異種移植物的效力。圖20A描述單個藥劑的抗腫瘤活性，而圖20B描述VNB和G4寡核苷酸聯(lián)合使用的抗腫瘤活性。所有的數(shù)據(jù)以平均值±SEM表示(n＝6只小鼠/組)。圖21是表示HIAP1寡核苷酸對HIAP1RNA水平影響的圖。圖22A和22B是表示蛋白質(zhì)印跡的光密度掃描的示意圖，該蛋白質(zhì)印跡法顯示HIAP1寡核苷酸對細胞阻斷放線菌酮誘導的HIAP1蛋白質(zhì)上調(diào)的能力的作用。圖23是表示通過總蛋白質(zhì)測量HIAP1表明寡核苷酸對細胞毒性的影響圖。圖24是表示對HIAP1寡核苷酸APO2序列特異性的驗證的圖。圖25表示HIAP1寡核苷酸對抗藥SF295成膠質(zhì)細胞瘤化學致敏作用的影響。發(fā)明詳述本發(fā)明提供抑制IAP表達的核堿基寡聚物和將其用于細胞中誘導程序性細胞死亡的方法。本發(fā)明的核堿基寡聚物也可以用于形成藥物組合物。本發(fā)明還涉及提高細胞內(nèi)程序性細胞死亡的方法，該方法是將本發(fā)明的寡核苷酸與化療劑，如細胞毒性劑、細胞生長抑制劑或生物反應調(diào)節(jié)劑(如，阿霉素、長春烯堿、依托泊苷、紫杉醇、順鉑、干擾素、白細胞介素2、單克隆抗體)聯(lián)合給藥?；瘜W治療劑可以是，例如，如果需要，也可以給予化學致敏劑(即一種使增殖的細胞對化學治療更加敏感的藥劑)。上述藥劑的任意結(jié)合可以構(gòu)成藥物組合物。這些藥物組合物用來治療增生性疾病，如，癌癥或淋巴增生性障礙，或增生性疾病的癥狀。本發(fā)明的核堿基寡聚物也可以與放射療法結(jié)合用來治療癌癥或其它增生性疾病。癌癥細胞中程序性細胞死亡的激活作用提供了新的強效改善患者對常規(guī)的化學治療或放射治療的響應的方法。就直接抑制半胱天冬酶和抑制程序性細胞死亡的能力而言，XIAP是IAP基因家族中最有效的成員。我們研究過在體內(nèi)和體外XIAP通過反義(AS)寡核苷酸的下調(diào)對人類非小細胞肺癌(NIH-H460)生長的作用。經(jīng)實時RT-PCT和蛋白質(zhì)印跡法測定，在培養(yǎng)的H460人類肺癌細胞中，寡核苷酸G4AS被鑒定為最有效的化合物，分別有效地下調(diào)XIAPmRNA55％，下調(diào)蛋白質(zhì)水平高達60％，在1.2uM濃度時誘導60％的細胞死亡。相反的，無序?qū)φ战MG4寡核苷酸僅引起很少的XIAP損失和小于10％的細胞死亡。由前-半胱天冬酶-3和PARP蛋白質(zhì)的降解顯示，用G4AS的治療誘導程序性細胞死亡，在1.2uM濃度時伴隨顯著的核DNA濃縮和剪切。而且，XIAPAS寡核苷酸使H460細胞對阿霉素，紫杉醇，長春烯堿和依托泊苷的細胞毒性效應敏感。在動物模型中，我們證明在系統(tǒng)的腹膜內(nèi)給藥的SCID/RAG2-免疫缺陷小鼠的異種移植物模型中15mg/kg的G4AS對人類H460腫瘤具有顯著的序列特異性的生長抑制作用。系統(tǒng)的ASODN給藥與腫瘤異種移植XIAP蛋白質(zhì)下調(diào)85％有關(guān)。15mg/kg的G4AS和5mg/kg的長春烯堿聯(lián)合應用明顯的抑制腫瘤的生長，比它們分別單獨使用效果明顯。這些研究表明XIAP的下調(diào)是肺癌細胞死亡的一個明顯信號，并且能夠在體外誘導程序性細胞死亡，在體內(nèi)抑制腫瘤生長。這些研究支持IAP是人類非小細胞肺癌和其它實體瘤的癌癥治療的適當靶位的論點。治療治療可以用在癌癥治療之處家中，醫(yī)師診室，診所，醫(yī)院的門診部，或住院部進行。治療通常由住院開始，以便于醫(yī)生可以近距離的觀察治療效果和做出所需的調(diào)整。治療的持續(xù)時間取決于被治療的癌癥的種類，患者的年齡和狀況，所患疾病的階段和類型，患者機體對治療的響應情況。給藥應有不同的間隔(如，每天一次，每周一次，或每月一次)。治療應按照啟動和停止循環(huán)進行，這種循環(huán)包括修整期以便于患者的機體有機會構(gòu)造新的健康的細胞并且恢復機體的抵抗力。根據(jù)癌癥的種類和其所處的階段，治療可以用來減緩癌癥的擴散，減慢癌癥的生長，殺死或捕獲可能從原始的腫瘤擴散到身體其它部位的癌癥細胞，減輕由癌癥引起的癥狀，避免癌癥的首次發(fā)生。這里所用的術(shù)語“癌癥”或“新生物”或腫瘤細胞“是指以異常方式增長的細胞的集合。癌癥生長是不受控制的和遞增的，在不激發(fā)情況下發(fā)生，或者將使正常細胞的增生停止。本發(fā)明的核堿基寡聚物或其它IAP抗細胞凋亡的路徑的負調(diào)節(jié)物可以在藥學可接受的稀釋劑，載體或賦形劑中以單位藥劑的形式給藥。采用常規(guī)的藥學方法制備合適的藥劑或組合物，通過這些藥劑或組合物將化合物給予患有由過度細胞增生引起的疾病的患者。給藥可以在患者具有癥狀之前。任何適當?shù)慕o藥途徑都可以采用，例如，腸胃道外給藥，靜脈內(nèi)，動脈內(nèi)，皮下，瘤內(nèi)，肌內(nèi)，顱內(nèi)，眶內(nèi)，眼睛，心室內(nèi)，肝內(nèi)，囊內(nèi)，鞘膜內(nèi)，腦池內(nèi)，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，氣霧劑，栓劑，或口服給藥。例如，治療藥劑可以是液體溶液或混懸液的形式；對于口服給藥，制劑可以是片劑或膠囊；鼻內(nèi)給藥制劑是粉末劑，滴鼻劑或氣霧劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的制備藥劑的方法在，例如″RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy″Ed.A.R.Gennaro，LippincourtWilliams&Wilkins，Philadelphia，PA，2000中公開。例如腸胃道外給藥的制劑可以包括賦形劑，無菌水，或鹽，聚二醇，如聚乙二醇，植物油，或氫化萘。生物相容的，生物可降解的丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯共聚物，或聚氧乙烯-聚丙乙烯共聚物可以用來控制化合物的釋放。其它的可用作IAP調(diào)節(jié)化合物的有用的腸胃道外遞藥系統(tǒng)包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物顆粒，滲透泵，可植入的灌注系統(tǒng)和脂質(zhì)體。可吸入的藥劑可以包括賦形劑，例如，乳糖，或者可以是水溶液包括，例如，聚氧乙烯-9-月桂基醚，甘氨膽酸鹽，和脫氧膽酸鹽，或以滴鼻劑或凝膠形式給藥的油溶液。藥劑以治療有效量(如，預防、消除或減輕病理狀態(tài)的量)給予患者，提供對疾病或病癥的治療。本發(fā)明的核堿基寡聚物的優(yōu)選的劑量可能依賴于疾病的類型和程度，特定患者的整體健康狀況，復方賦形劑的組成和給藥途徑的變化。如上所述，如果需要，本發(fā)明的核堿基寡聚物的治療可以與治療增生性疾病的其它療法(如放射性療法，外科手術(shù)或化學療法)聯(lián)合使用。對于上述的任何一種方法，本發(fā)明的核堿基寡聚物優(yōu)選以靜脈內(nèi)給藥或施用于需要發(fā)生程序性細胞死亡的位點(例如，注射)。寡核苷酸和其它核堿基寡聚物至少兩種寡核苷酸通過RNA酶H誘導RNA的剪切具有磷酸二酯(PO)或硫代磷酸酯(PS)連接的多聚脫氧核苷酸。雖然2′-OMe-RNA序列表現(xiàn)出對RNA靶位的高親合力，但是這些序列不是RNA酶H的作用底物。一種理想的寡核苷酸是基于2’-修飾的寡核苷酸，該寡核苷酸包含寡聚脫氧核苷酸缺口其中一些或所有核酸間連接鍵修飾成硫代磷酸酯以抵抗核酸酶。甲基膦酸酯修飾的存在提高了寡核苷酸與它的靶位RNA的親和力，由此降低了IC50。這種修飾也增加了修飾的寡核苷酸對核酸酶的抵抗?？梢岳斫獗景l(fā)明的方法和制劑可以與任何其它先進的方法結(jié)合使用，包括共價閉合的多重反義(CMAS)寡核苷酸(Moon等，BiochemJ.346295-303，2000；PCT公開號No.WO00/61595)，帶狀反義(RiAS)寡核苷酸(Moon等，J.Biol.Chem.2754647-4653，2000；PCT公開號WO00/61595)和大環(huán)反義寡核苷酸(美國專利申請公開號US2002/0168631A1)。如本領(lǐng)域公知的，核苷是核堿基-糖的結(jié)合體。核苷的堿基部分通常是一個雜環(huán)的堿基。這種雜環(huán)的堿基中最常見的兩類是嘌呤和嘧啶。核苷酸是糖部分與磷酸基共價連接的核苷。對于那些包括戊呋喃糖的核苷來說，磷酸基可以與糖的2’，3’或5’位的任意羥基部分連接。在形成寡核苷酸中磷酸基共價鏈接鄰近的核苷形成線性的多聚體化合物。依次的，這個線性的多聚體結(jié)構(gòu)的尾端進一步鏈接形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)；開放的直線形結(jié)構(gòu)通常是優(yōu)選的。在寡核苷酸結(jié)構(gòu)中，磷酸基通常被認為形成寡核苷酸的骨架。RNA和DNA的通常的連接或骨架是3’和5’磷酸二酯連接。用于本發(fā)明的優(yōu)選的核堿基寡聚物的特例包括含有經(jīng)修飾的骨架或非天然的核苷間鏈接的寡核苷酸。如說明書中定義的，具有經(jīng)修飾的骨架的核堿基寡聚物包括在骨架中保留磷原子的及骨架中沒有磷原子的。根據(jù)本說明書的目的，那些核苷間的骨架沒有磷原子的經(jīng)修飾的寡核苷酸也被視為核堿基寡聚物。具有經(jīng)修飾的寡核苷酸骨架的核堿基寡聚物包括，例如，硫代磷酸酯，手性硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，磷酸三酯，氨基烷基-磷酸三酯，甲基或其它烷基磷酸酯包括3’-烯基磷酸酯和手性磷酸酯，次膦酸鹽，氨基磷酸酯包括3’-氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯，硫代氨基磷酸酯，硫代烷基磷酸酯，硫代烷基磷酸三酯，具有正常的3′-5′連接的硼烷磷酸酯，這些化合物2′-5′連接的類似物，和那些具有反向極性的化合物，其中核堿基單元的鄰近配對是3′-5′連接至5′-3′或2′-5′鏈接至5′-2′。也包括各種鹽，混合鹽和游離酸的形式。教導上述含磷鏈接的制備方法的典型美國專利包括，但不限于，美國專利號No.3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361和5,625,050，全部引入這里作為參考。具有不含磷原子的經(jīng)修飾的寡核苷酸骨架的核堿基寡聚物具有由短鏈烷基或環(huán)烷基核苷間連接，混合雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷間鏈接，或一種或多種短鏈雜原子或雜環(huán)的核苷間連接構(gòu)成的骨架。包括那些具有嗎啉代連接(部分的由核苷的糖部分形成)；硅氧烷骨架；硫化物，亞砜和砜的骨架；甲酰乙?；土虼柞Ｒ阴；羌埽粊喖谆柞Ｒ阴；土虼柞Ｒ阴；羌埽话N的骨架；氨基磺酸酯骨架；亞甲基亞胺基和亞甲基肼基骨架；磺酸酯和氨苯磺胺骨架；酰胺骨架；和其它具有混合的N，O，S和CH2構(gòu)成部分。教導上述寡核苷酸制備的典型的美國專利包括，但不限于，美國專利No.5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,610,289；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；和5,677,439，這些都全文引入作為參考。在其它核堿基寡聚物中，糖和核苷間連接，即骨架，被一些新的基團取代。核堿基單元保留與IAP雜交。這樣的核堿基寡聚物被認為是肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖骨架被含有酰胺的骨架取代，特別是氨基乙基甘氨酸骨架。核堿基被直接或間接的固定或束縛到骨架的酰胺部分的氮雜氮原子上。制備或應用這些核堿基寡聚物的方法記述在如″PeptideNucleicAcidsProtocolsandApplications″Ed.P.E.Nielsen，HorizonPress，Norfolk，UnitedKingdom，1999中。教導制備PNA的典型的美國專利包括，但不局限于，美國專利號No.5,539,082；5,714,331；和5,719,262，每一篇都引入這里作為參考。關(guān)于PNA的進一步教導見Nielsen等，Science，1991，254，1497-1500。在本發(fā)明的特別的實施例中，核堿基寡聚物具有硫代磷酸酯骨架和帶有雜原子骨架的核苷，特別是-CH2-NH-O-CH2-，-CH2-N(CH3)-O-CH2-(已知的亞甲基(甲基亞氨基)或MMI骨架)，-CH2-O-N(CH3)-CH2-，-CH2-N(CH3)-N(CH3)-CH2-，和-O-N(CH3)-CH2-CH2-。在其它的實施例中，寡核苷酸具有美國專利No.5,034,506描述的嗎啉代骨架結(jié)構(gòu)。核堿基寡聚物還可以包含一或多個取代的糖部分。核堿基寡聚物在2’位含有下列基團OH；F；O-，S-，或N-烷基；O-，S-，或N-烯基；O-，S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基、炔基可以是取代或未取代的C1至C10烷基或C2至C10烯基和炔基。特別優(yōu)選的是O[(CH2)nO]mCH3，O(CH2)nOCH3，O(CH2)nNH2，O(CH2)nCH3，O(CH2)nONH2和O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2，其中n和m是從1至大約10。其它優(yōu)選的核堿基寡聚物包括在2’位是下列基團之一C1至C10低級烷基、取代的低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨基烷基氨基、聚烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA切割基團、報道基團、嵌入劑、改善核堿基寡聚物藥物代謝動力學性質(zhì)的基團、或改善核堿基寡聚物藥效學性質(zhì)的基團、和具有相似性質(zhì)的其它取代基。優(yōu)選的修飾是2′-O-甲基和2′-甲氧基乙氧基(2′-O-CH2CH2OCH3，還公知為2′-O-(2-甲氧基乙基)或2′-MOE)。其它理想的修飾是2’-二甲基氨基氧乙氧基(即O(CH2)2ON(CH3)2，還公知為2’-DMAOE。其它的修飾包括，2’-氨基丙氧基(2′-OCH2CH2CH2NH2)和2’-氟(2′-F)。相似的修飾還可以是在寡核苷酸或其它核堿基寡聚物的其它位置，特別是在3’端核苷酸或2′-5′連接的寡核苷酸上的糖的3’位和5’端核苷酸的5’位。核堿基寡聚物還可以有糖的模擬物如環(huán)丁基部分來取代戊呋喃糖。教導這種經(jīng)修飾的糖結(jié)構(gòu)的制備的典型美國專利包括，但不局限于，美國專利No.4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；和5,700,920，每一篇都全文引入作為參考。核堿基寡聚物還可以包括核堿基修飾或取代。這里所使用的“未修飾”或“天然的”核堿基包括嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)，胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核堿基包括其它合成和天然的核堿基，例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、6-甲基和其它腺嘌呤和鳥嘌呤的烷基衍生物；腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基或其它烷基衍生物；2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶；5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶；5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶；5-尿嘧啶(假尿嘧啶)；4-硫尿嘧啶；8-鹵代、8-氨基、8-巰基、8-硫烷基、8-羥基、和其它8-取代腺嘌呤和鳥嘌呤；5-鹵代(如，5-溴代)、5-三氟甲基和其它5-取代尿嘧啶和胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤；8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤；7-去氮雜鳥嘌呤和7-去氮雜腺嘌呤；3-去氮雜鳥嘌呤和3-去氮雜腺嘌呤。更多的核堿基包括那些公開于美國專利No.3,687,808，TheConciseEncyclopediaOfPolymerScienceAndEngineering，858-859頁，Kroschwitz，J.I.，ed.JohnWiley&Sons，1990，Englisch等，AngewandteChemie，InternationalEdition，1991，30，613，Sanghvi，Y.S.，Chapter15，AntisenseResearchandApplications，289-302頁，Crooke，S.T.和Lebleu，B.，ed.，CRCPress，1993中的核堿基。這些核堿基中的某些對于增強本發(fā)明的反義寡核苷酸的結(jié)合親和力特別有用。包括5-取代的嘧啶，6-氮雜嘧啶，N-2、N-6、和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代物顯示出增強核苷酸雙鏈穩(wěn)定性0.6-1.2度。C.(Sanghvi，Y.S.，Crooke，S.T.andLebleu，B.，eds.，AntisenseResearchandApplications，CRCPress，BocaRaton，1993，pp.276-278)，是理想的堿基取代，當與2’-O-甲氧基乙基或2’-甲基糖基修飾結(jié)合時更是如此。教導上述經(jīng)修飾的核堿基的某種及其它經(jīng)修飾的核堿基的制備的典型的美國專利包括No.4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,681,941；和5,750,692，每一篇都結(jié)合在此作為參考。本發(fā)明的其它核堿基寡聚物的修飾包括向核堿基寡聚物上化學連接一個或多個能夠增強寡核苷酸活性、細胞分配或細胞攝取的部分或共軛物。這樣的部分包括但不局限于，脂質(zhì)部分如膽固醇部分(Letsinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，866553-6556，1989)，膽酸(Manoharan等，Bioorg.Med.Chem.Let，41053-1060，1994)，硫醚，如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等，Ann.N.Y.Acad.Sci.，660306-309，1992；Manoharan等，Bioorg.Med.Chem.Let.，32765-2770，1993)，巰基膽固醇(Oberhauser等，Nucl.AcidsRes.，20533-5381992)，脂肪族鏈，如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等，EMBOJ.，101111-1118，1991；Kabanov等，F(xiàn)EBSLett.，259327-330，1990；Svinarchuk等，Biochimie，7549-54，1993)，磷脂，如二-十六烷基-rac-甘油或三乙銨1，2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-H-磷酸酯(Manoharan等，TetrahedronLett.，363651-3654，1995；Shea等，Nucl.AcidsRes.，183777-3783，1990)，聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等，Nucleosides&Nucleotides，14969-973，1995)，或金剛烷乙酸(Manoharan等，TetrahedronLett.，363651-3654，1995)，十六烷基部分(Mishra等，Biochim.Biophys.Acta，1264229-237，1995)，或十八氨基或己氨基-羰基-羥膽固醇部分(Crooke等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，277923-937，1996)。教導這些核堿基寡聚物共軛物制備的典型的美國專利包括No.4,587,263；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,818,979；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,948,882；4,958,013；5,082,830；5,109,124；5,112,963；5,118,802；5,138,045；5,214,136；5,218,105；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241；5,391,723；5,414,077；5,416,203；5,151,463；5,486,603；5,510,475；5,512,439；5,512,667；5,514,785；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,578,718；5,580,731；5,585,481；5,587,371；5,591,584；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928；5,608,046；和5,688,941，每一篇都全文引入作為參考。本發(fā)明還包括嵌合化合物的核堿基寡聚物?！扒逗稀焙藟A基寡聚物是包含兩個或多個化學獨立區(qū)域的核堿基寡聚物特別是寡核苷酸，每一個化學獨立的區(qū)域都由至少一個單體單位組成，即，寡核苷酸中的核苷酸。這些核堿基寡聚物典型的具有至少一個區(qū)域，在該區(qū)域中核苷酸寡聚物被修飾，與核堿基寡聚物相比，經(jīng)修飾的核苷酸寡聚物增強了對核酸酶降解作用的抵抗力，增加了細胞攝取，和/或增強了對靶核苷酸的結(jié)合親和力。核堿基寡聚物的另外的區(qū)域用作能夠裂解RNADNA或RNARNA雜交體的酶作用底物。例如，RNA酶H是細胞核酸內(nèi)切酶，能夠裂解RNADNA雙鏈的RNA鏈。因此，激活RNA酶H導致靶RNA的剪切，由此大大的增強了核堿基寡聚物抑制基因表達的作用。因而，與雜交到相同靶區(qū)域的硫代磷酸酯脫氧寡核苷酸相比，使用嵌合核堿基寡聚物時產(chǎn)生相同結(jié)果的核堿基寡聚物更短。本發(fā)明的嵌合核堿基寡聚物可以形成上述兩種或多種核堿基寡聚物的復合結(jié)構(gòu)。如果是寡核苷酸，這樣的核堿基寡聚物在本領(lǐng)域稱作雜交體或gapmer。教導這種雜交體結(jié)構(gòu)的制備方法的典型的美國專利包括No.5,013,830；5,149,797；5,220,007；5,256,775；5,366,878；5,403,711；5,491,133；5,565,350；5,623,065；5,652,355；5,652,356；和5,700,922，每一篇都全文引入此處作為參考。按照本發(fā)明應用的核堿基寡聚物可以通過公知的固相合成技術(shù)便利的常規(guī)的制備。這種合成所用的設(shè)備由如AppliedBiosystems(FosterCity，Calif.)等銷售。其它的本領(lǐng)域公知的合成方法也可以使用。使用相似的技術(shù)制備寡核苷酸如硫代磷酸酯和烷基化衍生物是眾所周知的。本發(fā)明的核堿基寡聚物也可以與其它分子，分子結(jié)構(gòu)或化合物的混合物混合，被包裹，共軛或與其他分子、分子結(jié)構(gòu)或化合物的混合物聯(lián)合，例如脂質(zhì)體，受體靶向分子，口服，直腸，局部或其它制劑，以輔助攝取，分布和/或吸收。教導制備這種攝取、分布和/或吸收輔助藥劑的方法的典型的美國專利包括No.5,108,921；5,354,844；5,416,016；5,459,127；5,521,291；5,543,158；5,547,932；5,583,020；5,591,721；4,426,330；4,534,899；5,013,556；5,108,921；5,213,804；5,227,170；5,264,221；5,356,633；5,395,619；5,416,016；5,417,978；5,462,854；5,469,854；5,512,295；5,527,528；5,534,259；5,543,152；5,556,948；5,580,575；和5,595,756，每一篇都全文引入作為參考。本發(fā)明的核堿基寡聚物包括任何藥學可接受的鹽、酯、或這種酯的鹽，或其它任何給予動物后能夠提供(直接的或間接的)生物學活性的代謝物或其殘余部分的化合物。相應的，例如，本發(fā)明的公開也涉及本發(fā)明化合物的前藥和藥學上可接受的鹽，該前藥的藥學可接受的鹽和其它生物等效物。術(shù)語“前藥”指以非活性形式制備，在內(nèi)源性酶或其它化學試劑和/或條件的作用下在體內(nèi)或其細胞中轉(zhuǎn)化成活性形式(即，藥物)的治療劑。特別的，按照PCT公開號WO93/24510或WO94/26764公開的方法制備本發(fā)明的寡核苷酸前藥模型SATE[(S-乙?；?2-巰基乙基)磷酸鹽]衍生物。術(shù)語“藥學可接受的鹽”是指保留母體化合物的需要得到的生物學活性并且不傳遞不期望的毒物學作用的鹽。藥學可接受的堿加成鹽是與金屬或胺，如堿金屬和堿土金屬或有機胺類形成的。作為金屬陽離子使用的例子是鈉、鉀、鎂、鈣等等。適當?shù)陌奉惖睦邮荖，N′-二芐乙烯二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、二聚環(huán)戊二烯、二乙胺茶堿、N-甲基葡萄糖胺和普魯卡因(例如，見Berge等，J.PharmaSci.，661-19，1977)。酸性化合物的堿加成鹽以常規(guī)方式的通過游離酸與足夠量的期望的堿接觸生成鹽而制備。以常規(guī)的方式使鹽的形式接觸酸并且分離游離酸可以使游離酸的形式再生。游離酸的形式與其鹽的形式在一些物理性質(zhì)如極性溶液中的溶解度上存在一定的差別，但是在其它方面，出于本發(fā)明的目的，鹽等同于它們的游離酸。這里所使用的“藥學上的加成鹽”包括本發(fā)明的組合物的一種組分的酸形式的藥學可接受的鹽。包括胺類的有機或無機酸鹽。優(yōu)選的酸鹽是鹽酸鹽、醋酸鹽、水楊酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽。其它的適當?shù)乃帉W可接受的鹽是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括多種無機和有機酸的堿性鹽，無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸或磷酸；有機羧酸、磺酸、磺基或磷酸基的酸或N-取代的氨基磺酸，例如，醋酸、丙酸、羥乙酸、琥珀酸、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡萄糖酸、葡萄糖二酸、葡糖醛酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苯乙醇酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、2-苯氧苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、雙羥萘酸、煙酸或異煙腙；及氨基酸例如自然界中參與蛋白質(zhì)合成的20種α氨基酸，如谷氨酸或天門冬氨酸，還有苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、4-甲苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5-二磺酸、2-或3-磷酸甘油酸、葡萄糖-6-磷酸鹽、N-環(huán)己基氨基磺酸(形成環(huán)己氨基磺酸鹽)，或其它酸有機化合物，如抗壞血酸?；衔锏乃帉W可接受的鹽可以用藥學可接受的陽離子制備。適當?shù)乃帉W可接受的陽離子是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括堿金屬、堿土金屬、銨和季銨的陽離子。碳酸鹽和碳酸氫鹽也可以。對于寡核苷酸和其它核堿基寡聚物而言，適當?shù)乃帉W可接受的鹽包括(i)與陽離子如鈉、鉀、銨、鎂、鈣、多胺如精胺和精脒等形成的鹽；(ii)與無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等形成的酸加成鹽；(iii)與有機酸如醋酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、葡糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、棕櫚酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、多聚半乳糖醛酸等等形成的鹽；和(iv)由元素陰離子如氯、溴和碘得到的鹽。本發(fā)明還包括包含本發(fā)明的核堿基寡聚物的藥物組合物和藥劑。本發(fā)明的藥物組合物可以以很多途徑給藥，取決于期望局部治療還是全身療法以及被治療的面積?？梢跃植拷o藥(包括眼部的和粘膜的包括陰道和直腸給藥)，肺的，如，通過吸入或吹入粉末劑或氣霧劑，包括通過噴霧器；氣管內(nèi)，鼻內(nèi)，表皮和透皮)，口服或腸胃道外給藥。腸胃道外給藥包括靜脈內(nèi)，動脈內(nèi)，皮下，腹膜內(nèi)，或肌肉內(nèi)注射或輸注；或顱內(nèi)，如，鞘膜內(nèi)或心室內(nèi)給藥。鎖核苷酸(Lockednucleicacids)鎖核苷酸(LNAs)是可以用在本發(fā)明的核堿基寡聚物。LNAs包括一個能夠限制核苷酸類似物的呋喃核糖環(huán)的靈活性并將其鎖定在剛性的雙環(huán)N-型構(gòu)象的2’O，4’-C亞甲基橋。LNAs表現(xiàn)出對特定核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶的增強的耐受性并激活RNA酶H，幾乎能夠整合到任何核堿基寡聚物。而且，包含LNA的核堿基寡聚物可以用標準的亞磷酰胺合成實驗設(shè)計制備。其它關(guān)于LNAs的詳細內(nèi)容見PCT申請WO99/14226和美國專利申請公開US2002/0094555A1，每一篇都合并在此作為參考。阿拉伯糖核酸阿拉伯糖核酸(ANAs)也可以用作本發(fā)明的方法和制劑中。ANAs是基于用D-阿拉伯糖代替天然的D-2’-去氧核糖的核堿基寡聚物。非衍生的ANA類似物與RNA的結(jié)合親和力與硫代磷酸酯與RNA的結(jié)合親和力相似。阿拉伯糖用氟衍生(2’F-ANA)，將導致結(jié)合親和力增強，并有效的選擇性的水解所得到的ANA/RNA和F-ANA/RNA雙鏈中的結(jié)合RNA。這些類似物的末端用簡單的L糖衍生而使其在細胞介質(zhì)中穩(wěn)定。ANAs在治療中的用途在如Damha等，NucleosidesNucleotides&NucleicAcids20429-440，2001中討論。核堿基寡聚物的傳遞我們在此證明裸寡核苷酸能夠進入腫瘤細胞并且抑制IAP表達。但是，也許期望使用一種制劑以輔助寡核苷酸或其它核堿基寡聚物傳遞入細胞(如，見美國專利No.5,656,611,5,753,613,5,785,992，6,120,798，6,221,959，6,346,613，和6,353,055，每一篇都結(jié)合在此作為參考。)。核酶包括本發(fā)明的反義IAP序列的催化性RNA分子或核酶在體內(nèi)可以用于抑制IAP聚核苷酸的表達。反義RNAs中包含核酶序列賦予RNA裂解活性，因此增強了構(gòu)建體的活性。這種目標RNA特異性核酶的設(shè)計和應用在Haseloff等，Nature334585-591。1988，and美國專利No.2003/0003469A1中有所描述，每一篇都結(jié)合在此作為參考。相應的，本申請涉及一種催化性RNA分子，其結(jié)合臂上包括一個具有8-19個連續(xù)核堿基的反義RNA，這些核堿基對應于表1，2，6和7中任意一個序列。在本發(fā)明的優(yōu)選的實施例中，催化的核苷酸分子構(gòu)成錘頭型或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，也可以形成肝炎δ病毒的基序，組I內(nèi)含子或RNA酶PRNA(與RNA引導序列聯(lián)合)或鏈孢霉屬VSRNA。這種錘頭基序的例子在Rossi等，AidsResearchandHumanRetroviruses，8183，1992中有所描述。發(fā)夾結(jié)構(gòu)基序的例子在Hampel等，″RNACatalystforCleavingSpecificRNASequences，″filedSep.20，1989中有所描述，該文獻是U.S.Ser.No.07/247,100filedSept.20，1988，Hampel和Tritz，Biochemistry，284929，1989及Hampel等，NucleicAcidsResearch，18299，1990的連續(xù)。肝炎δ病毒基序的例子在Perrotta和Been，Biochemistry，3116，1992中有所描述。鏈孢霉屬VS核酶基序在Collins等的(Saville和Collins，Cell61685-696，1990；SavilleandCollins，Proc.Natl.Acad.Sci.USA888826-8830，1991；Collins和Olive，Biochemistry322795-2799，1993)中有所描述。這些特殊的基序不是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知重要的是本發(fā)明中的酶核酸分子具有與一或多個靶基因RNA區(qū)域互被的特異的底物結(jié)合位點，并且具有賦予分子RNA裂解活性的位于底物結(jié)合位點中或環(huán)繞底物結(jié)合位點的核苷酸序列。RNA干擾本發(fā)明的核堿基寡聚物可以用于雙鏈RNA中用于RNA干擾(RNAi)-介導的IAP表達的減少(knockdown)。RNAi是一種降低感興趣的特定蛋白質(zhì)細胞表達的方法(綜述Tuschl，Chembiochem2239-245，2001；Sharp，Genes&Devel.15485-490，2000；Hutvagner和Zamore，Curr.Opin.Genet.Devel.12225-2322002；Hannon，Nature418244-251，2002)。在RNAi中，基因沉默通常由于細胞中雙鏈RNA(dsRNA)的存在而在轉(zhuǎn)錄后激發(fā)。這些雙鏈RNA被細胞內(nèi)處理為被稱作小干擾RNA(siRNA)的短鏈片段。通過dsRNA轉(zhuǎn)染或通過使用基于質(zhì)粒表達系統(tǒng)的siRNA表達而使siRNA進入細胞逐漸的用來在哺乳動物細胞中產(chǎn)生功能喪失表型。本發(fā)明的一個實施方案中，制成包括八個至十九個連續(xù)的核堿基的本發(fā)明的核堿基寡聚物的雙鏈RNA(dsRNA)分子。dsRNA可以是形成雙鏈的兩個不同RNA鏈或自身形成雙鏈的單RNA鏈(小發(fā)夾結(jié)構(gòu)(sh)RNA)。典型的，dsRNA是大約21或22個堿基對，如果需要可以更短或更長(直到大約29個堿基對)。dsRNA可由標準的技術(shù)制備(如，化學合成或體外轉(zhuǎn)錄)。例如可從Ambion(Austin，TX)和Epicentre(Madison，WI)得到試劑盒。哺乳動物細胞中的dsRNA表達的方法在Brummelkamp等Science296550-553，2002；Paddison等Genes&Devel.16948-958，2002.Paul等NatureBiotechnol.20505-508，2002；Sui等Proc.Natl.Acad.Sci.USA995515-5520，2002；Yu等Proc.Natl.Acad.Sci.USA996047-6052，2002；Miyagishi等NatureBiotechnol.20497-500，2002；Lee等NatureBiotechnol.20500-5052002中有所描述，這些都合并在此作為參考。小發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA由一個具有可選的3’UU-突出的莖環(huán)結(jié)構(gòu)組成。雖然存在差異，莖的范圍是21至31bp(優(yōu)選25至29bp)，環(huán)的范圍是4至30bp(優(yōu)選4至23bp)。對于細胞內(nèi)shRNA的表達，可使用包含多聚酶IIIH1-RNA或U6啟動子、莖環(huán)結(jié)構(gòu)插入的克隆位點，和4-5-脫氧胸腺嘧啶苷轉(zhuǎn)錄終止信號的質(zhì)粒載體。多聚酶III啟動因子通常具有界限清楚的起始和終止位點，它們的轉(zhuǎn)錄物缺少聚(A)尾部。這些啟動子的終止信號被定義為聚脫氧胸腺嘧啶苷束，轉(zhuǎn)錄物典型的在第二尿嘧啶核苷后裂開。在這個位置的剪切產(chǎn)生一個在表達的shRNA中的3’UU突出，與合成的siRNA的3’突出相似。其它的在哺乳動物細胞中表達shRNA的方法在上面引用的參考文獻中有所描述。下面的例子用來解釋本發(fā)明。但這不意味本發(fā)明僅限于此。實施例1核堿基寡聚物的選擇按照下面列出的選擇標準，我們分別選擇大部分不重疊的人XIAP和HIAP1的96和98個19-姆核堿基序列。例如XIAP，我們從互補脫氧核糖核酸序列的起始密碼子上游大約1kb至終止密碼子下游大約1kb的區(qū)域中選擇96個序列(每個序列含有19個核堿基)(SEQIDNOs1至96；表1)。這包括了大約50％的編碼區(qū)和附近的5’和3’端非翻譯區(qū)序列(例如，96個19-姆序列跨越1.8kb，盡管目標區(qū)域大約長3.5kb，包括1.5kb的編碼區(qū)和兩邊各1kb的非翻譯區(qū)的序列)。表1上面提到的任何核堿基寡聚物或此處描述的任何其它核堿基寡聚體，每種核堿基可以獨立地是DNA殘基或RNA殘基，例如2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。例如，SEQIDNO3的核堿基序列可以是5’-CAGATATATATGTAACACT-3’，5’-CAGATATATATGTAACACU-3’或5’-mCmAGATATATATGTAACAmCmU-3’(其中mX代表2’-O-甲基X殘基)。其他修飾的核堿基在本領(lǐng)域中已知。連接鍵可以是磷酸二酯(PO)，硫代磷酸酯(PS)，或甲基膦酸酯(MP)鍵，或者混合骨架(MB)。骨架可以是能使核堿基寡聚物靶IAP多聚核苷酸雜交的任何合適的骨架。特別是此處描述的骨架。其它實施方案中，核堿基寡聚物包括丫啶保護鍵，膽固醇或補骨酯內(nèi)酯成分，C5-丙炔基嘧啶，或C5-甲基嘧啶。本發(fā)明中對核堿基寡聚體的合適的修飾除了U.S.PatentApplicationPublicationNo.US2002/0128216A1中的例子，還包括上面描述的例子。下面的表2提供了具體的核堿基寡聚物(其中X代表2’-O-甲基XRNA殘基)。PCT專利申請No.FR91/00444描述了Penetratin以及其在介導寡核苷酸進入細胞過程中的應用。采用類似的鑒定方法設(shè)計抗HIAP1的核堿基寡聚物。首先，選擇98個19-姆核堿基寡聚體(SEQIDNOs163-260；表3)。在靶向HIAP1序列的98個核堿基寡聚體中選擇15個進一步評價(SEQIDNOs163-170，173，179，202，222，223，247和259)。這15個候選核堿基寡聚體包括4個編碼區(qū)靶向(SEQIDNOs202，222，223和247)的核堿基寡聚體，1個3’-UTR靶向的核堿基寡聚體(SEQIDNO259)，7個5’-UTR靶向的核堿基寡聚體(SEQIDNOs166-170，173和179；7個中有1個核堿基寡聚體與起始密碼子是重疊的)，其余3個寡核苷酸(SEQIDNOs163-165)設(shè)計成以5’-UTR內(nèi)含子片段為作用靶。表3核堿基寡聚物的選擇標準使用計算機程序OLIGO(先前由NationalBiosciencesInc發(fā)行)篩選候選核堿基寡聚體基于下列標準1)GC含量少于75％或者AT含量少于75％；2)核堿基寡聚體最好不包含4個或4個以上連續(xù)的G殘基(雖然可以選擇1個作為毒性對照，但鑒于已報道的毒性作用不選為好)；3)不選擇能夠形成穩(wěn)定二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)的核堿基寡聚體；4)優(yōu)選翻譯起始區(qū)域附近的序列。此外，當檢測方法很靈敏時(例如TaqMan定量PCR，或ELISA)，利用RNA二級結(jié)構(gòu)折疊程序MFOLD來預測目標mRNA的可進入?yún)^(qū)域(M.ZukerD.H.Mathews&D.H.Turner，AlgorithmsandThermodynamicsforRNASecondaryStructurePredictionAPracticalGuide.InRNABiochemist7)andBiotechnology，J.Barciszewski&B.F.C.Clark，eds.，NATOASISeries，KluwerAcademicPublishers，(1999)。利用具有200個堿基的窗(其中殘基能找到形成堿基對的互補堿基)，來預測亞最佳折疊，其游離能量值在預測的mRNA的最穩(wěn)定折疊的5％范圍內(nèi)。沒有形成堿基對的開放區(qū)域和次穩(wěn)定折疊相加，一直被預期為開放的區(qū)域更容易和寡核苷酸結(jié)合。其它的只能部分滿足上面的選擇標準的寡核苷酸如果識別目標mRNA的預測的開放區(qū)域，也可能被選擇為可能的候選mRNA。實施例2寡核苷酸的合成使用寡核苷酸作為典型的核堿基寡聚體檢測核堿基寡聚體抑制IPA表達的能力。使用IDT(integratedDNAtechnologies，USA)合成寡核苷酸作為嵌合的，第二代的寡核苷酸，其由任一側(cè)連有兩個2’-O-甲基RNA殘基的磷酸二酯DNA殘基核心組成，RNA殘基間由硫代磷酸酯鍵連接。寡核苷酸和至少12ODs的核堿基寡聚體(保證為轉(zhuǎn)染提供充足的原料)放在96孔板中或配對管中，當檢測方法很靈敏時，例如TaqMan定量PCR或ELISA(在96孔板模式下超過100次測量)。一旦陽性結(jié)果被認定(見下面)，寡核苷酸與3個，而非2個，側(cè)接的RNA殘基再合成以便增加穩(wěn)定性/核酸酶抗性。此外，為了驗證目的，為能夠產(chǎn)生最高活性的目標核堿基寡聚體合成適當?shù)膶φ掌?例如，無序的，4-堿基不匹配和反極性寡核苷酸)。實施例3核堿基寡聚體的篩選測定和優(yōu)化我們鑒定能夠抑制IAP表達的核堿基寡聚體的方法是篩選上面描述的寡核苷酸庫，尋找以特異IAP基因為靶，能夠特異的降低其RNA和/或蛋白的寡核苷酸?？梢詰迷S多標準測定法檢測細胞中RNA和蛋白的水平。例如，使用標準RNA印跡分析法或RT-PCR技術(shù)檢測RNA水平。使用標準蛋白質(zhì)印跡分析法或免疫沉淀技術(shù)檢測蛋白水平。也結(jié)合文獻，例如依照U.S.PatentNos.5,919,912，6,156,535，and6,133,437中描述的方法通過檢測給予反義IAP核苷酸的細胞活力。使用TaqMan定量PCR(下面描述)測定給予寡核苷酸后mRNA水平的變化。采用ELISA確定XIAP蛋白水平，采用蛋白印跡法確定HIAP1蛋白水平。以來源于XIAP的跨越起始密碼子的熒光標記的有義寡核苷酸(5′-mGmAGAAGATGACTGGTAAmCmA-3′；SEQIDNO.261)作為對照，Lipofectamine或Lipofectamine2000(LifeTechnologies，Canada)對T24膀胱癌細胞或H460非小細胞肺癌細胞，或者Lipofectamine對SF-295膠質(zhì)母細胞瘤細胞的轉(zhuǎn)染條件可以得到優(yōu)化。結(jié)果可以通過epi-熒光顯微鏡觀察和計量。至于T24細胞，在已經(jīng)公布的能夠下調(diào)sunivin表達的寡核苷酸基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)染可以進一步的優(yōu)化(Lietal.，Nat.CellBiol.1461-466，1999)(5′-U/TGTGCTATTCTGTGAAU/TU/T-3′SEQIDNO.262)。下面詳細描述了在采用PCR引物和熒光探針檢測survivinRNA水平降低的TaqMan結(jié)果的基礎(chǔ)上對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化。對于細胞攝取寡核苷酸的優(yōu)化條件是940nM寡核苷酸和4uLPLUS試劑和0.8uLLipofectamine共70uL持續(xù)3小時。我們采用這些條件在寡聚物庫中篩選能夠降低T24細胞中XIAP蛋白的寡核苷酸。在SF-295細胞中研究HIAP1水平降低是由于這些細胞含有易于檢測和辨別的70kDaHIAPI蛋白，而許多細胞系沒有高水平的表達這種蛋白，或者表達的該蛋白不能和大量大小相似的68kDaHIAP2蛋白相區(qū)別。實時PCRRNA從溶解于RLT緩沖液(QIAGEN，Valencia，CA)中的細胞中提取，使用QIAGENRN簡易柱/試劑盒純化。在Perkin-ElmerABI7700PrismPCR儀器上執(zhí)行實時定量PCR分析。依據(jù)PE生物系統(tǒng)TaqManUniversalPCRMasterMix協(xié)議，使用特異性識別XIAP，HIAPI，survivin或GAPDH的引物和探針來反轉(zhuǎn)錄和擴增RNA。對于人類survivin，正向的引物是5′-TCTGCTTCAAGGAGCTGGAA-3′(SEQIDNO.263)，反向引物是5′-GAAAGGAAAGCGCAACCG-3′(SEQIDNO.264)，探針是5′-(FAM)AGCCAGATGACGACCCCATAGAGGAACATA(TAMRA)-3′(SEQIDNO.265)。對于人類HIAP1，正向的引物是5′-TGGAGATGATCCATGGGTTCA-3′(SEQIDNO.266)，反向引物是5′-GAACTCCTGTCCTTTAATTCTTATCAAGT-3′(SEQIDNO.267)，探針是5’-(FAM)CTCACACCTTGGAAACCACTTGGCATG(TAMRA)-3’(SEQIDNO.268)。對于人XIAP，正向引物是5’-GGTGATAAAGTAAAGTGCTTTCACTCT-3’(SEQIDNO269)，反向引物是5’-TCAGTAGTTCTTACCAGACACTCCTCAA-3’-(SEQIDNO270)，探針是5’-(FAM)CAACATGCTAAATGGTATCCAGGGTGCAAATATC(TAMRA)-3’-(SEQIDNo.271)。對于人GAPDH，正向引物是5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’(SEQIDNO272)，反向引物是5’-GAAGATGGTGATGGGATTC-3’(SEQIDNO273)，探針是5’-(JOE)CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC(TAMRA)-3’(SEQIDNO274)。FAM是6-羧基熒光素，JOE是6-羧基-4，5-二氯-2，7-二甲氧基熒光素和TAMRA是6-羧基-N，N，N’，N’-四甲基羅丹明。FAM和JOE是5’報告染料，而TAMRA是3’猝滅染料。如PE生物系統(tǒng)手冊所述使用GAPDH作為內(nèi)參照對基因表達進行相對量化。使用相對Ct(循環(huán)閾值)的方法對IAPmRNA相對于GAPDHmRNA的水平進行相對量化。簡而言之，每個PCR循環(huán)進行實時熒光檢測，通過測定熒光超過基線標準差30倍閾限值的點計算每個樣品的循環(huán)閾值(Ct)。從第三個循環(huán)基線值開始計算平均基線值和基線SD直至信號開始出現(xiàn)指數(shù)上升前的基線值三個周期。設(shè)計跨越至少一個由1kb或更多基因組DNA分開的外顯子-內(nèi)含子區(qū)域的特異IAPsPCR引物和/或探針，以降低擴增和檢測基因組DNA污染的可能性。在進行逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應之前，用DNA酶或RNA酶處理RNA樣品驗證信號的特異性和DNA污染的可能性。XIAPELISA和HIAP1蛋白免疫印跡標準比色XIAPELISA測定法應用親和純化的家兔多克隆XIAP抗體作為捕獲抗體，用XIAP單克隆抗體(MBL，Japan)和生物素化的抗小鼠免疫球蛋白抗體、辣根過氧化物酶偶聯(lián)的鏈親合素和TMB底物進行檢測。或者，可以使用多克隆XIAP或HIAP1抗體分別來檢測XIAP或HIAP1的蛋白水平。HIAP1使用親和純化的抗大鼠HIAP1家兔多克隆抗體采用蛋白免疫印記法進行測定，也可使用第二辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗家兔免疫球蛋白抗體和化學發(fā)光底物在X光膠片上用ECL進行測定。產(chǎn)生抗大鼠HIAP1GST-融合的抗-HIAP1多克隆抗體。這種抗體與人和小鼠的HIAP1和HIAP2能交叉反應。實施例4反義XIAP寡核苷酸降低XIAPRNA和多肽表達首先從含96個反義寡核苷酸的XIAP合成庫中篩選使XIAP的蛋白水平降低的寡核苷酸。具體是，第一天將T24細胞(1.5×104個/孔)接種于96孔板的孔內(nèi)，在沒有抗生素的McCoy’s培養(yǎng)基中培育24小時。第二天，用上面描述的XIAP反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染細胞(寡核苷酸依據(jù)它們的放置位置進行標記，例如，A1至H12，還包括兩個重復標記，A13和B13含有吸附于密封膜上的凍干DNA沉淀)。簡要地講，將核堿基寡聚體稀釋于10ul/孔的無血清，無抗生素McCoy’s培養(yǎng)基中，然后加入PLUS試劑。Lipofectamine稀釋于10ul/孔的無血清，無抗生素MoCoy’s培養(yǎng)基中，兩種混合物在室溫條件孵育15分鐘。然后兩種混合物在室溫條件下混合，孵育15分鐘。同時，從細胞中去除完全培養(yǎng)基，再向細胞中加入50μl/孔的無血清，無抗生素培養(yǎng)基。然后，將轉(zhuǎn)染混合物加入孔中，將細胞孵育3個小時。然后向每個孔加入30μl/孔的無血清，無抗生素培養(yǎng)基和100ul/孔含有20％胎牛血清的無抗生素完全培養(yǎng)基。第三天，按照上面描述的方法，使用定量實時PCR技術(shù)測定XIAPRNA水平。第四天，用ELISA測定XIAP的蛋白水平(圖.1A，1C，IE，1G，1I，和1K)，采用生物化學方法測定整個細胞的蛋白水平(圖.1B，1D，IF，1H，1J，和1L；用來標準化XIAP的蛋白水平)。結(jié)果與模擬轉(zhuǎn)染樣品(經(jīng)過轉(zhuǎn)染試劑處理并不加寡核苷酸DNA，然后按照其它樣品一樣處理)相比較。反應進程試驗確定了降低蛋白的最佳時間是12至24小時。在適當?shù)淖罴褧r間使用TaqMan-特異PCR引物和熒光探針，使用上面描述的引物和探針篩選寡核苷酸庫以期能夠降低RNA水平。反應進程實驗確定反應進行到6至9小時，mRNA降低的最顯著。這些結(jié)果和蛋白的結(jié)果完全符合。首次篩選(雖然是在次佳時間點篩選，可能是由于非轉(zhuǎn)染細胞增生導致XIAP恢復正常水平)從96種核堿基寡聚體中鑒定了16種反義寡核苷酸(表1C2，E2，E3，F(xiàn)3，C4，D4，E4，F(xiàn)4，G4，C5，D5，B6，F(xiàn)6，D7，D8，F(xiàn)8)，與模擬組的轉(zhuǎn)染水平相比，它們能夠使XIAP的蛋白水平相對于整體蛋白水平有所降低(圖1A，1C，IE，1G，1I，和1K)。16種核堿基寡聚體均能使整體蛋白水平降低，表明這些核堿基寡聚體具有毒性或細胞生長抑制活性(圖1B，1D，IF，1H，1J，1L)。核堿基寡聚體B9和C9D使整體蛋白水平顯著降低，卻沒有相對降低XIAP蛋白水平。在上面描述的反應進程研究基礎(chǔ)上，相對于模擬轉(zhuǎn)染組，能使XIAP蛋白水平相對下降的16個反義核堿基寡聚體，在更佳的時間點(12小時)單獨或與一種對照核堿基寡聚體(D2)一起再次檢測，觀察其降低XIAP蛋白水平的能力(圖2B)。12小時，檢測這些核堿基寡聚體降低XIAP的mRNA水平的能力，以GAPDH水平為標準，與模擬轉(zhuǎn)染相比較。同時在12小時測定整體蛋白濃度(圖2C)。核堿基寡聚體降低XIAP蛋白水平的能力(圖2B)和降低XIAPmRNA水平的能力(圖2A)之間存在良好的相關(guān)性。此外，實驗初期整體蛋白水平?jīng)]有大的降低，后來XIAP的mRNA和蛋白水平的降低優(yōu)先于整體蛋白水平的降低。使XIAP蛋白或mRNA水平降低50％以上的核堿基寡聚體或以1∶1比例混合的兩種核堿基寡聚體被認為是最好的核堿基寡聚體并得到進一步的確證。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染條件或聯(lián)合用藥(例如C5和G4)，16個核堿基寡聚體中的10種(E2，E3，F(xiàn)3，E4，F(xiàn)4，G4，C5，B6，D7，F(xiàn)8)均能將XIAP的蛋白和mRNA水平降低50％以上。此外，這16種反義寡核苷酸集中作用于XIAPmRNA的四個不同的目標區(qū)域，其相鄰的核堿基寡聚體活性降低。以這些敏感區(qū)域或部分之間序列為作用靶的核堿基寡聚體幾乎沒有反義活性。初步推測這些敏感區(qū)域是細胞內(nèi)能和核堿基寡聚體結(jié)合的mRNA的開放區(qū)域。核堿基寡聚體E3和F3對XIAP起作用時作用于插入?yún)^(qū)域中啟動子的上游，該區(qū)域介于IRES和翻譯起始點之間，與IRES的末端部分重疊。C2，D2和E2作用于XIAP的最小IRES元件的上游部分，進一步證明最小IRES區(qū)域是RNA的高度結(jié)構(gòu)化的區(qū)域，在體內(nèi)該區(qū)域不易和核堿基寡聚體結(jié)合。其它核堿基寡聚體與編碼區(qū)的一部分互補，包括XIAP序列(E4，F(xiàn)4和G4)的活性連續(xù)區(qū)域856-916和較小的分散區(qū)域，這一點被核堿基寡聚體C5和D5所證明。表1描述的96種核堿基寡聚體的一部分再次篩選，觀察它們能否將NCI-H460細胞中的XIAPmRNA水平在轉(zhuǎn)染9小時后降下來。數(shù)據(jù)總結(jié)在下面的表4中。表4我們還測定了4×4MBOs(所有PS，DNA殘基兩側(cè)都連接有4個2’-O-甲基RNA殘基)能否降低H460細胞中XIAP蛋白的水平。如圖3和4所示，E12的4×4MBs和另一種寡核苷酸，F(xiàn)G8，僅在31nM就表現(xiàn)出活性。實施例5XIAP反義核堿基寡聚體增加細胞毒性和化學致敏作用。我們研究了XIAP反義核堿基寡聚體能否使對傳統(tǒng)的化學治療劑，例如阿霉素或順鉑，具有很強耐藥性的T24細胞化學致敏。選擇反義寡核苷酸代表XIAP的不同的目標區(qū)域，檢測它們本身或和其它寡核苷酸或藥物連用時的細胞毒性。檢測了5種XIAP反義寡核苷酸殺死或致敏T24膀胱癌細胞的能力，并與3種相應無序的對照寡核苷酸的活性比較。用XIAP反義寡核苷酸、無序寡核苷酸、非寡核苷酸(模擬轉(zhuǎn)染)轉(zhuǎn)染T24細胞，或者對T24細胞不處理。細胞在用WST-1四唑染料方法轉(zhuǎn)染(未處理對照組除外)后的20小時內(nèi)檢測其活力，在新陳代謝活躍的細胞中WST-1四唑染料被還原為有色物質(zhì)(圖5A)。觀察未處理的、模擬轉(zhuǎn)染的、用E4、E4無序、E4反向極性或E4非匹配的寡核苷酸轉(zhuǎn)染的T24細胞，檢測寡核苷酸E4誘導的細胞毒性的發(fā)生。轉(zhuǎn)染20小時后，檢測細胞的形態(tài)學變化(圖5D)。只有用反義E4寡核苷酸轉(zhuǎn)染的細胞有中毒跡象。為了檢測核堿基寡聚體影響T24細胞對順鉑或阿霉素化學敏感性的效果，檢測寡核苷酸在固定劑量阿霉素(0.5μg/ml)存在時殺死細胞的能力。首先用寡核苷酸轉(zhuǎn)染細胞，再加入阿霉素保持20小時。給藥20小時結(jié)束時用WST-1檢測細胞的活力(圖5B)。結(jié)果如圖5C所示，給出了相對于核堿基寡聚體單獨給藥的活力百分比。相對于模擬(非寡核苷酸)轉(zhuǎn)染的細胞、或用三個F3(5′-mCmAmGAGATTTCATTTAAmCmGmU-3′；SEQIDNO275)，E4(5′-mCmUmACGCTCGCCATCGTmUmCmA-3′；SEQIDNO276)和C5(5′-mUmGmCCCAAGAATACTAGmUmCmA-3′；SEQIDNO277)(圖SA和5C)對應無序?qū)φ掌忿D(zhuǎn)染的細胞，所有檢測的5個核堿基寡聚體(F3，E4，G4，C5，D7)與E4+C5和G4+C5的聯(lián)合用藥一樣能夠殺死T24細胞，給藥24小時后僅有10-15％的細胞存活。因此，總的來說，降低XIAP水平的核堿基寡聚體的毒性具有序列特異性，而不是非序列特異性。這種細胞毒性可能來源于XIAP蛋白水平降低(和預期的由XIAP提供的抗細胞凋亡蛋白的喪失)和轉(zhuǎn)染本身毒性的聯(lián)合作用。對于一些檢測的寡核苷酸，在三個小時轉(zhuǎn)染周期結(jié)束時加入固定劑量的阿霉素或順鉑導致細胞存活數(shù)量進一步下降，與相應的寡核苷酸治療值相比(圖5C)，核堿基寡聚體F3，D7和G4+C5給藥20小時后存活細胞數(shù)量進一步下降40％(圖5B)。圖5B中的數(shù)值(寡核苷酸加藥物)是相對于圖5C中寡核苷酸單獨給藥的數(shù)值，對每個ODN該值設(shè)為100％。只列出了阿霉素的化學致敏結(jié)果；當用順鉑化學致敏細胞時可以得到相似的結(jié)果，當使用固定劑量的阿霉素(圖5B)時，模擬組和無序?qū)φ辙D(zhuǎn)染組的細胞存活數(shù)量并沒有減少。當特異性反義寡核苷酸使XIAP水平降低時才會發(fā)生化學致敏作用。實施例6反義寡核苷酸對H460細胞中XIAPmRNA的下調(diào)作用。使用實時PCR檢測反義寡核苷酸對H460細胞中XIAPmRNA的活性(2×2MBO，由每一側(cè)連接有兩個通過硫代磷酸酯鍵連接的2’-O-甲基RNA組成，核心部分是15個磷酸二酯DNA殘基)。這種情況下，相對于未處理，核堿基寡聚體F3，G4，C5，AB6和DE4將mRNA水平降低50-70％，而核堿基寡聚體D7AS將mRNA水平降低30％(圖6)。相反，對照核堿基寡聚體和單獨轉(zhuǎn)染試劑(LFA)只能將未處理組的mRNA水平降低不到20％(圖6)。核堿基寡聚體F3，G4和C5進一步進行體外體內(nèi)研究。圖7和8描述了用Taqman分析法觀察到的XIAPmRNA的降低。實施例7反義寡核苷酸對XIAP蛋白的下調(diào)作用通過蛋白質(zhì)印跡分析從寡核苷酸結(jié)構(gòu)上明確了核堿基寡聚體對XIAP蛋白表達影響能力(圖9，10A和10B)。G4AS寡核苷酸對于XIAP蛋白表現(xiàn)出最強的下調(diào)作用，在濃度是1.2μM轉(zhuǎn)染24小時后，XIAP蛋白水平下降62％(圖10A和10B)。F3AS寡核苷酸在濃度是1.2μM時可以將XIAP蛋白水平降低50％，而C5AS寡核苷酸相對于對照組并沒有顯示出序列特異性活性(圖10B)。此外研究表明E12和FG8AS寡核苷酸能夠顯著降低XIAP蛋白水平(圖9)。實施例8XIAPAS寡核苷酸誘導細胞凋亡證明XIAPAS核堿基寡聚體能夠降低H460細胞和T24膀胱癌細胞存活率我們可以確證細胞死亡是否由細胞凋亡引起。如圖11A所示，F(xiàn)3或G4AS核堿基寡聚體以1.2μM給藥的H460細胞可以激活和降解前-半胱天冬酶-3蛋白，可以分別使蛋白水平相對于未處理組降低40％或60％。PARP也是預期的由半胱天冬酶-3生成的片段(圖11A)。相反，F(xiàn)3和G4SC寡核苷酸對照組在1.2μM時對半胱天冬酶-3或PARP的蛋白表達并沒有影響(圖11A)。當F3和G4AS寡核苷酸和各自的對照組給藥濃度是1.2μM時，H460細胞中的Bcl-2Bax比率沒有變化。經(jīng)G4AS寡核苷酸給藥和PI染色處理后，使用流式細胞分析方法檢測H460細胞中亞二倍體DNA的含量(圖12A)。當H460細胞經(jīng)G4AS寡核苷酸或無序?qū)φ展押塑账嵋?.2uM給藥后，細胞中亞二倍體DNA的含量分別為40.8％和22.1％，未處理的含量是16.6％。使用DAPI染色法檢測H460細胞經(jīng)G4AS寡核苷酸或?qū)φ展押塑账嵩?.2uM濃度處理后其細胞核形態(tài)的變化。如圖12B所示，經(jīng)G4AS寡核苷酸處理的細胞形態(tài)上發(fā)生了類似凋亡的變化染色質(zhì)凝聚和細胞核DNA碎裂。而在由G4SC處理的對照組細胞中少有這些形態(tài)上的變化。實施例9由AS寡核苷酸引起的細胞生長抑制和使H460細胞對抗腫瘤藥物敏感。為了分析核堿基寡聚體下調(diào)XIAP表達和引起細胞凋亡的生物活性，用MTT測定法研究給予G4AS寡核苷酸的H460細胞的生長。轉(zhuǎn)染48小時后，G4AS寡核苷酸劑量依賴性的抑制了H460細胞的生長，在1.2μM濃度時相對于未處理組表現(xiàn)出55％的抑制率(圖13A)。相反，G4SC寡核苷酸或單獨的轉(zhuǎn)染子試劑的生長抑制活性相對較低，是未處理對照組的低于10％。為了研究下調(diào)XIAP的表達是否能夠使H460細胞對化學療法致敏，將G4AS寡核苷酸和下列抗腫瘤藥物聯(lián)合給藥阿霉素(DOX)、紫杉醇、長春烯堿(VNB)和依托泊甙(Etop)。圖13B表明相對于G4AS寡核苷酸或抗腫瘤藥物單獨給藥，每種聯(lián)合給藥至少都會給細胞死亡造成附加的細胞毒性作用。實施例10G4AS寡核苷酸對H460和LCC6腫瘤移植物的抗腫瘤活性。首先要確證將XIAP反義2×2-MBOs腫瘤內(nèi)注射進皮下接種H460人類肺癌移植物的小鼠體內(nèi)能否抑制腫瘤的生長。腫瘤細胞接種(s.c.肩部注射106細胞)14天后給腫塊注射MBOs(50ug2′-O-甲基RNA寡核苷酸每克腫瘤塊)，每周三次，持續(xù)兩周。在第17和24天注射長春烯堿(VNB；亦可稱為諾維本(NVB))(15mg/kgi.p.)。用測徑器測量腫瘤大小，每周三次。治療周期結(jié)束后(24天)，C5+G4ASMBOs和VNB聯(lián)合給藥使得小鼠腫瘤平均相對生長得到抑制，比MBOs和VNB對照組降低了約70％。C5ASMBO和VNB給藥組相對于無序?qū)φ战M使得腫瘤大小減少約60％(圖14)。起初對PS-寡核苷酸的系統(tǒng)研究并沒有設(shè)計任何化療劑。SCID-RAG2小鼠接種H460人類肺癌細胞(s.c.肩部注射106個細胞)三天后，給予G4和F3ASPS-寡核苷酸以及無序?qū)φ?。腹腔注射核堿基寡聚體，12.5mg/kg，每周三次，持續(xù)三周。治療期結(jié)束后，G4或F3AS寡核苷酸給藥組的腫瘤平均大小比對照寡核苷酸給藥組減小約50％(圖15)。接種MDA-MB-435/LCC6人類乳腺癌細胞的雌性SCID-RAG2小鼠采用相同的研究方法檢測。末次治療后兩周(35天)，服用F3，C5或G4AS寡核苷酸的小鼠的腫瘤體積比對照組分別減小了70％，60％和45％(圖16)。我們還用皮下移植了H460人非小細胞肺癌細胞的SCID-RAG2小鼠檢測了G4AS寡核苷酸的抗腫瘤活性。生理鹽水對照組的腫瘤在大約24天內(nèi)繁殖增長到0.75cm3(圖17)。腫瘤細胞接種3天之后開始服用寡核苷酸。G4AS寡核苷酸(5至15mg/kg)采用腹腔注射，每日一次，分別在第3-7天，10-14天和17-21天給藥。給予5或15mg/kgG4AS寡核苷酸極大的延遲了腫瘤的生長給藥24天后，對照組，5和15mg/kg給藥組的腫瘤平均大小分別是0.75，0.45和0.29cm3(圖18A)。抑制腫瘤生長具有劑量依賴性。15mg/kgG4AS寡核苷酸給藥小鼠的腫瘤比對照組小很多，是對照組平均腫瘤大小的39％。相反，G4SC寡核苷酸以15mg/kg給藥并沒有治療活性(圖17)。寡核苷酸給藥的小鼠沒有顯示任何中毒跡象，寡核苷酸的兩種劑量都具有很好的耐受性。劑量15mg/kg被用來和抗腫瘤藥物聯(lián)合給藥。實施例11經(jīng)G4AS寡核苷酸處理的H460腫瘤的XIAP蛋白表達減少體內(nèi)給予15mg/kgG4AS和SC寡核苷酸后檢測XIAP表達的變化觀察G4AS寡核苷酸的腫瘤生長抑制活性和XIAP蛋白表達之間的相關(guān)性。腫瘤接種后的第21或24天腫瘤達到1cm3大小(圖17)，收集腫瘤，用蛋白質(zhì)印跡法分析腫瘤勻漿的裂解物。使用XIAP和人β-肌動蛋白抗體確證腫瘤細胞標本中人XIAP的水平，這些細胞標本沒有被小鼠細胞的XIAP所污染。G4AS寡核苷酸給藥的腫瘤的XIAP蛋白水平相對于對照組腫瘤顯著降低約85％(P＜0.005)(圖18A和18B)。G4SC寡核苷酸給藥的腫瘤比對照組腫瘤減小24％。這些結(jié)果表明G4AS寡核苷酸對H460腫瘤生長抑制作用與XIAP蛋白表達的下調(diào)具有相關(guān)性。實施例12腫瘤標本的組織病理學檢測給藥后檢測腫瘤組織學形態(tài)和泛素免疫染色，評價XIAPAS寡核苷酸是否能夠直接殺死腫瘤細胞(圖19A和19B)。接種腫瘤后的第21天或24天，對15mg/kgG4AS寡核苷酸，SC寡核苷酸給藥組或生理鹽水對照組腫瘤進行切除、切片以及蘇木素和伊紅染色。結(jié)果證明XIAPAS寡核苷酸給藥的動物的腫瘤細胞的死亡數(shù)量增加了，形態(tài)學上可以由它們的無定性形狀濃縮核內(nèi)物質(zhì)所證明(圖19A)。蛋白的降解主要依賴于泛素-蛋白體；泛素的表達在細胞凋亡過程中增加了。因此，我們檢測蘇木素和伊紅染色的腫瘤部分的泛素表達。如圖19B所示，XIAPAS寡核苷酸給藥的小鼠的腫瘤相對于對照組SCODN給藥的小鼠的腫瘤表現(xiàn)出更強的免疫組織化學染色。這些數(shù)據(jù)顯示，在XIAPAS核堿基寡聚體給藥的腫瘤細胞中有比對照組腫瘤更多的游離泛素和/或泛素蛋白化蛋白。實施例13G4AS寡核苷酸和長春烯堿的聯(lián)合用藥為了評價G4AS核堿基寡聚體和長春烯堿(VNB)(一種治療肺癌的化學藥物)聯(lián)合用藥是否具有協(xié)同作用，我們比較了VNB在G4AS寡核苷酸或G4SC寡核苷酸存在和不存在條件下的治療效果。在腫瘤接種后第3天開始治療方案。圖20A顯示了5mg/kg和10mg/kg劑量的長春烯堿在接種H460腫瘤細胞的小鼠體內(nèi)的活性以及與生理鹽水對照組的比較結(jié)果。每一個方案都產(chǎn)生了顯著的劑量依賴性的腫瘤生長抑制效應，同時沒有明顯的毒副作用(例如，體重減輕)。當G4AS寡核苷酸(15mg/kg)和VNB(5mg/kg)聯(lián)合用藥治療H460腫瘤時，相對于單獨給藥會產(chǎn)生更為顯著的抑制H460腫瘤生長的作用(圖20B)。而且小鼠沒有顯示任何明顯的中毒跡象(例如，體重減輕)。以5mg/kgVNB單獨給藥或和G4AS或SC寡核苷酸聯(lián)合給藥的小鼠在給藥第29天比較其腫瘤的平均大小(圖20A和20B)。長春烯堿和G4AS寡核苷酸給藥組的腫瘤平均大小是0.22±0.03cm3，比5mg/kgVNB單獨給藥或VNB和G4SC寡核苷酸聯(lián)合給藥組(0.59±0.04和0.48±0.05cm3)小很多。方法實施例5-13所得結(jié)果使用的是下面的方法。寡核苷酸的合成合成含有96種以上非重疊嵌合或混合骨架(MBO)19-姆反義寡核苷酸庫，例如2×2MBO寡核苷酸，由側(cè)接于任一側(cè)通過硫代磷酸酯鍵連接的兩個2′-O-甲基RNA殘基和15個磷酸二酯DNA殘基的核心構(gòu)成。每一個終產(chǎn)物通過SephadexG-25色譜柱(IDTInc.，Coralville，IA)除去鹽分。這種嵌合連接構(gòu)型和硫代磷酸酯鍵和磷酸二酯鍵(參照2×2PS/PO)給分子提供了充足的穩(wěn)定性，同時減小了硫代磷酸酯殘基的非特異性毒性。用于體內(nèi)和體外研究的完全硫代磷酸酯化的非嵌合(DNA)反義寡核苷酸由TrilinkBiotech合成，由RP-HPLC純化。反義寡核苷酸篩選T24膀胱癌細胞經(jīng)1-1.2μM寡核苷酸-脂質(zhì)體復合物轉(zhuǎn)染24-48小時后，評價確定每一種寡核苷酸降低XIAP蛋白水平的能力。利用T24膀胱癌細胞和H460肺癌細胞，用蛋白印跡分析法測定轉(zhuǎn)染12-18小時之間寡核苷酸降低XIAP蛋白水平的能力，用定量RT-PCR(見下面)測定轉(zhuǎn)染6-9小時之間寡核苷酸降低XIAPmRNA水平的能力，從而再次確定陽性結(jié)果。候選寡核苷酸得到進一步鑒定和檢測。鑒定的2×2PS/PO嵌合寡核苷酸在400-1200nM濃度范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染6-9小時能夠劑量依賴性的降低XIAPmRNA水平。示例性的寡核苷酸列于表5。表5*粗體殘基＝含有硫代磷酸酯鍵的DNA殘基，下劃線殘基＝2′-O-甲基RNA堿基，普通型＝磷酸二酯DNA殘基。腫瘤細胞系和動物異種移植物模型人非小細胞肺癌細胞系(大細胞形)NCI-H460(H460)來源于ATCC，于37度，含有5％CO2的潮濕空氣條件下保存在含有10％牛胎血清的RPMI1640中。在指數(shù)生長期使用細胞，體外傳代達到25。雄性SCID-RAG2小鼠(7-9周，23-26g)來源于BritishColumbiaCancerAgencyJointAnimalFacility，在無菌環(huán)境中群體飼養(yǎng)。通過在小鼠背部皮下移植1×106NCI-H460細胞建立SCID-RAG2小鼠NCI-H460細胞腫瘤模型。用反義寡核苷酸和抗腫瘤藥物處理細胞轉(zhuǎn)染前一天，將H460細胞接種于6或96孔組織培養(yǎng)皿中。硫代磷酸酯反義寡核苷酸和Lipofectamine2000以脂質(zhì)體-寡核苷酸復合物的形式轉(zhuǎn)移至細胞中(生命技術(shù))。轉(zhuǎn)染4.5或6個小時后，由含有10％胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基代替轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基，細胞繼續(xù)孵育24或48小時。實時定量RT-PCR由脂質(zhì)體-寡核苷酸復合物轉(zhuǎn)染6小時的H460細胞的總RNA經(jīng)RNeasy最小旋轉(zhuǎn)柱和DNA酶(QIAGEN，Valencia，CA)處理立刻分離出來。使用實時定量RT-PCR方法檢測特異性XIAPmRNA。設(shè)計跨越外顯子3-4和4-5連接的XIAP正向和反向引物(600nM)和探針(200nM)(5′-GGTGATAAAGTAAAGTGCTTTCACTGT-3′(SEQIDNO.293)，6FAM-CAACATGCTAAATGGTTCCAGGGTGCAAATATC-TAMRA(SEQIDNO294)，5′-TCAGTAGTTCTTACCAGACACTCCTCAA-3′(SEQIDNO295)。設(shè)計的引物或探針與內(nèi)含子和外顯子的分界點重疊，避免檢測到任何可能的基因組DNA污染。逆轉(zhuǎn)錄RNA并使用TaqManEZRT-PCR試劑盒(PE/ABI，F(xiàn)osterCity，CA)在ABI棱鏡7700序列檢測系統(tǒng)(PE/ABI)中進行擴增。RT步驟中的熱循環(huán)條件是50℃2分鐘，60℃30分鐘，和95℃5分鐘，然后進行45次PCR(每個循環(huán)94℃20秒，60℃1分鐘)檢測。每個樣品的XIAPmRNA水平以未處理細胞為參照進行計算。使用循環(huán)閾值(Ct)用30X基線SD的閾值確定XIAPmRNA的水平，XIAPmRNA水平以GAPDH含量校正，使用PE/ABI提供的引物和探針。蛋白質(zhì)印跡分析細胞或腫瘤組織樣品用含有蛋白酶抑制劑(Complete-Miniproteaseinhibitortablets；BoehringerMannheimGmBH，Mannheim，Germany)冰裂解緩沖液(50mMTris，150mMNaCl，2.5mMEDTA，0.1％SDS，0.5％去氧膽酸鈉，1％NP-40，0.02％疊氮化鈉)裂解。樣品在冰浴條件下孵育30分鐘，然后以10000rpm高速冷凍離心15分鐘，在-20C保存。使用去污劑兼容的BioRad測定法(Bio-RadLabs，Hercules，CA)確定溶解提取物的蛋白含量。用12％SDS-聚丙酰胺凝膠或4-15％梯度SDS-聚丙酰胺凝膠(Bio-Rad)分離等量的蛋白(40，ug/道)，將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。XIAP的一級抗體，Bcl-2(DAKO，Glostrup，Denmark)，Bax(Sigma，St.Louis，MO)，(β-肌動蛋白(Sigma)，半胱天冬酶-3(BDPharMingen，SanDiego，CA)，和PARP(BDPharMingen)。次級抗體是合適的辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗小鼠或抗兔IgG(Promega，Madison，WI)。蛋白用增強的化學發(fā)光(ECL；AmershamPharmaciaBiotech，Buckinghamshire，England)檢測并用Kodak放射自顯影膠片曝光成像。使用掃描密度測定法(MolecularDynamics，Sunnyvale，CA)通過體積/面積積分定量測定帶的強度。細胞中XIAP，caspase-3，Bcl-2和Bax的數(shù)量分別用各自道上的p-肌動蛋白水平校正。細胞生長和存活或死亡的測量使用比色MTT細胞活力/增殖分析確定H460細胞的生長抑制。簡單的講，細胞經(jīng)脂質(zhì)體-寡核苷酸混合物處理4.5小時后，在無轉(zhuǎn)染試劑或寡核苷酸的介質(zhì)中，在有或無抗腫瘤藥物時，37度孵育48小時。將MTT(25ug/孔)加進每一個孔中，培養(yǎng)皿在37C孵育3小時。孵育之后，加入200ulDMSO溶解有色產(chǎn)物。使用微量滴定法培養(yǎng)皿讀取器在570nm波長處讀取培養(yǎng)皿。給予寡核苷酸的孔中的細胞存活百分比都以未處理為標準。所有測定重復三次。細胞凋亡流式細胞分析測定法細胞給予脂質(zhì)體-寡核苷酸混合物4.5小時后，室溫環(huán)境在無轉(zhuǎn)染試劑的介質(zhì)中孵育48小時。孵育之后，收集細胞，用樣品緩沖液(含有0.5％葡萄糖的無鈣鎂的PBS)洗滌兩次，在4度70％的冷乙醇中保存至少18小時。樣品在3000rpm速度下冷凍離心10分鐘，然后混懸于含有50ug/ml碘化丙錠(PI)和400U/mlRNA酶A的樣品緩沖液中。樣品先在室溫條件下孵育30分鐘，再在冰浴條件下孵育30分鐘，然后進行流式細胞分析。使用EXPO軟件(AppliedCytometrySystems，Sacramento，CA)繪制直方圖確定排除碎屑后細胞循環(huán)相分布。亞G1/G0細胞部分被認為是凋亡細胞的典型特征。細胞核形態(tài)學檢測細胞給藥脂質(zhì)體-寡核苷酸混合物4.5小時后，將其接種于沒有轉(zhuǎn)染試劑或寡核苷酸的介質(zhì)中，37度保持48小時。收集細胞并在室溫條件下用0.10ug/mlDAPI(4′，6-二脒-2-2-苯基吲哚)染色30分鐘。將細胞放置于載玻片上，甩片，使用Leica顯微鏡，在紫外熒光照射下通過40X物鏡觀察。使用ImagedatabaseV.4.01軟件(Leica，Germany)獲取數(shù)字圖像。體內(nèi)抗腫瘤活性用接種NCI-H460腫瘤細胞的雄性RAG2免疫缺陷小鼠或接種LCC6腫瘤細胞的雌性RAG2小鼠進行活性評價實驗。腫瘤接種后第三天開始給藥治療。每天皮下注射生理鹽水(對照)，G4AS寡核苷酸(5或15mg/kg)，或G4SC寡核苷酸(5或15mg/kg)，每周五次，持續(xù)3周。腫瘤接種后的第3，7，11和17天尾靜脈注射長春烯堿(VNB，5或10mg/kg)或?qū)⑵渑c寡核苷酸聯(lián)合給藥。當寡核苷酸和VNB聯(lián)合給藥時，在ODN治療4小時后再給藥。每日觀察小鼠。通過體重測量和應激體征(例如，嗜睡，有褶飾邊緣的表皮，共濟失調(diào))檢測可能的毒性。當腫瘤潰爛或腫瘤體積達到1cm3或更大時殺死小鼠。使用公式1/2[長度(cm)]×[寬度(cm)]2將數(shù)字測徑器測量值換算成腫瘤平均大小(cm3)。腫瘤和組織處理腫瘤接種和給藥后的第21和24天收集小鼠腫瘤。將一部分腫瘤組織浸泡于福爾馬林溶液。將石蠟包埋的組織切片，通過蘇木素和伊紅染色進行整體組織病理學和免疫組織化學檢查測定泛素表達。腫瘤的其它部分在溶解緩沖液中經(jīng)過均勻加工處理進行蛋白質(zhì)印跡分析(見上面)。統(tǒng)計學分析應用Student′sT檢驗檢測兩個處理組之間的統(tǒng)計學差異。使用單向ANOVA和用Shelle檢驗標準(Statisticarelease4.5，StatSoftInc.，Tulsa，OK)比較不同組的post-hoc檢驗進行多重比較。具有P＜0.05的數(shù)據(jù)具有顯著性差異。實施例14反義HIAP1寡核苷酸降低HIAP1RNA和多肽表達使用上面例3中描述的引物和探針，在兩種不同的條件下用蛋白質(zhì)印跡分析法篩選含15個HIAP反義核堿基寡聚體的寡核苷酸庫，鑒定能夠降低蛋白的寡核苷酸，用TaqMan方法篩選鑒定能夠降低RNA的寡核苷酸?？梢允褂脴藴实鞍踪|(zhì)印跡分析或RT-PCR技術(shù)檢測HIAP1RNA水平。在堿性條件或環(huán)己酰亞胺(CHX)誘導條件下，向細胞給予反義寡核苷酸(以亞中毒劑量給藥24小時)。依據(jù)給藥細胞系的不同，環(huán)己酰亞胺能夠誘導10到200倍的HIAP1mRNA生成。如蛋白質(zhì)印記(70kDa帶)所示，這進而導致HIAP1蛋白的增加。CHX的這種活性是通過兩種不同的作用機制起作用的。首先，CHX通過阻礙不穩(wěn)定蛋白IkB(NFkB抑制劑)的從頭合成激活NFkB(已知的HIAP1轉(zhuǎn)錄誘導劑)。另一種蛋白合成抑制劑嘌羅霉素和TNF-α也產(chǎn)生類似作用，其中TNF-α通過誘導信號級聯(lián)導致IkB的磷酸化，泛化和降解。與放線菌素D和嘌羅霉素或和TNF-α聯(lián)合用藥相反，只有CHX能夠使HIAPmRNA進一步穩(wěn)定從而阻礙從頭轉(zhuǎn)錄，這一點可以由在放線菌素D存在下HIAP1mRNA消失的速度降低看到，CHX的作用與放線菌素D和嘌羅霉素或THF-α組合的作用不同。SF295膠質(zhì)母細胞瘤細胞用脂質(zhì)體和寡核苷酸(無序survivin，非寡核苷酸，反義APO1至APO15)轉(zhuǎn)染或不經(jīng)任何處理。轉(zhuǎn)染6小時后將RNA從細胞中分離出來，用定量PCR(TaqMan分析)檢測HIAP1mRNA水平，用GAPDHmRNA校正，將無序survivin寡核苷酸轉(zhuǎn)染結(jié)果設(shè)為1.0。這個實驗包括3個單獨實驗，結(jié)果列于圖21?；旌瞎押塑账幔M轉(zhuǎn)染和未處理(未轉(zhuǎn)染)細胞都具有相似的HIAP1mRNA水平。在15個反義寡核苷酸中，和模擬轉(zhuǎn)染組或無序?qū)φ展押塑账徂D(zhuǎn)染組(5′-mUmAmAGCTGTTCTATGTGmUmUmC-3′；SEQIDNO.296)(圖21)相比，7個(APO1，2，7，8，9，12，15)顯示出使HIAPmRNA降低50％的活性。一些寡核苷酸誘導產(chǎn)生HIAP1mRNA，這可能是對非特異性毒性寡核苷酸的應激反應。如果寡核苷酸能夠干擾翻譯過程，即使增加HIAPmRNA，反義寡核苷酸可能還具有降低HIAP1蛋白水平的活性。用誘導表達HIAP1的細胞檢測HIAP1反義核堿基寡聚體影響HIAP1蛋白和mRNA表達的活性。用寡核苷酸轉(zhuǎn)染SF295細胞或模擬轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染的細胞用10μg/mlCHX處理24小時以便誘導70kDaHIAP1mRNA和蛋白的表達。采用蛋白質(zhì)印跡分析法用抗HIAP1單克隆抗體檢測蛋白水平，通過對同一點的再探察用肌動蛋白校正。蛋白質(zhì)印跡的掃描結(jié)果顯示于圖22A。密度掃描結(jié)果以模擬結(jié)果(設(shè)置為100％)為標準繪制于圖22B。在50％處繪制一條線以便容易識別活性最高的反義寡核苷酸。正如蛋白免疫印跡所示，相對于未處理樣品轉(zhuǎn)染過程本身(例如，模擬或無序survivin)誘導HIAP1蛋白表達。在15個檢測的核堿基寡聚體中，6個(APO1，2，7，8，12，和15)顯示高度活性，或在蛋白或RNA測定中都顯示出高度活性，沒有產(chǎn)生由應激誘發(fā)的HIAP1mRNA的增加，而相對與APO2(不匹配或相反極性，見下面的文本和圖23和24)，APO4，6，11，13，14(圖21)和對照寡核苷酸都導致了HIAPmRNA的增加。整體蛋白水平的普遍降低證實APO6也具有毒性(圖23)。為了進一步研究在環(huán)己酰亞胺誘導的條件下HIAP1反義寡核苷酸的活性，用TaqMan實時PCR在轉(zhuǎn)染APO26小時后檢測HIAP1mRNA的變化，其中APO2以HIAP1的內(nèi)含子中Alu重復序列為靶，最大限度的阻礙CHX誘導的HIAP1mRNA和蛋白的提高。這個實驗的對照是3個針對APO2的寡核苷酸一個混合序列(堿基組分相同但序列隨機，5′-AAGGGCGGCGGAGTGAGAC-3′；SEQIDNO297)一個極性相反序列(堿基組分相同，連接順序相同但方向相反，5′-AGAGGACGGAGTCGGAGGC-3′；SEQIDNO298)，還有一個不匹配序列(19個堿基中有4個堿基不匹配，5′-CGGAGCGTGAGGATGGAGA-3′；SEQIDNO299)。APO2反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染進入細胞導致mRNA相對于無序survivin對照組降低50％，這與蛋白結(jié)果完全匹配。而APO2的無序?qū)φ战M(H1scapo2)根本不會改變HIAP1mRNA的水平(這里在兩個不同的實驗中重復兩次)。然而，不匹配對照ODN(HImmapo2)和反極性對照寡核苷酸(HIRVapo2)在轉(zhuǎn)染6小時后能夠誘導6至7倍的HIAP1mRNA的生成。正如預期的那樣，這些寡核苷酸不再以HIAP1為作用靶，但由于Alu重復序列的簡并性和重復性，這些寡核苷酸仍然以這些序列為靶。因此，這兩個對照品可能對細胞具有毒性，造成應激反應誘導HIAP生成。APO2寡核苷酸也會產(chǎn)生這種作用，但相對于無序survivin對照品，APO2還造成誘導生成的HIAP1mRNA降解，導致HIAP1mRNA的相對降低，相對于無序survivin對照寡核苷酸，APO2還能使經(jīng)過轉(zhuǎn)染和CHX處理細胞而誘導生成的HIAP1蛋白相對倍數(shù)降低。6個反義HIAP1核堿基寡聚體除了一個內(nèi)含子序列外(APO1，和APO2，其中APO2具有更好的活性)包括兩個非常高效的寡核苷酸。這些寡核苷酸可以用來治療癌癥或自身免疫病。相對于內(nèi)含子序列寡核苷酸似乎只作用于前信使RNA(存活很短的靶標)而不是HIAP1的成熟的加工的形式。典型的是，反義寡核苷酸不以內(nèi)含子為靶除非想修改剪接以內(nèi)含子-外顯子分界線或分歧點為作用靶。這通常導致跳過外顯子而不是核糖核酸酶介導的mRNA降解。兩種機制均有利于增強細胞凋亡，跳過外顯子會導致編碼HIAP1的頭兩個重要的BIR區(qū)域的外顯子的缺失。APO2反義ODN以survivin內(nèi)含子的19個堿基中的18個連續(xù)的堿基為作用靶，但我們并沒有觀察到survivin蛋白的任何減少；給予寡聚物后只有HIAP1減少了，這證明了HIAP1反義寡核苷酸的特異性。這些反義寡核苷酸命中HIAP1內(nèi)含子或可能許多其它基因中的Alu序列，導致癌細胞死亡(見下面)，這可能是降低HIAP1或其它決定基因水平的結(jié)果，如果對正常細胞沒有太大的毒性就具有治療價值。據(jù)報道癌細胞中有更多的含有Alu的轉(zhuǎn)錄，因而在以Alu為靶的核堿基寡聚體存在下對細胞凋亡的誘導更為敏感。此外，核堿基寡聚體APO1和APO2的致死活性可能是由于目標Alu序列和HIAP1同時聯(lián)合作用的結(jié)果。當細胞受到某種毒性藥物作用時，這種雙重作用為阻止由HIAP1通過NFkB途徑誘導的正常應激反應提供了有效途徑。這種應激反應很可能是腫瘤細胞抗細胞凋亡過程的一部分。通過阻礙HIAP1的表達，我們計數(shù)了這種抗細胞凋亡的應激反應，沉淀癌細胞的死亡。實施例15HIAP1反義寡核苷酸增加細胞毒性和化學致敏性。對于HIAP1反義核堿基寡聚體對SF295細胞的化學致敏效果也進行了評價。用下列三種不同的反義寡核苷酸(APO7，APO15，和SCAPO2(對照))之一轉(zhuǎn)染細胞。寡核苷酸轉(zhuǎn)染細胞24小時后，細胞給予阿霉素再孵育24小時，然后應用分析實驗WST-1分析存活的細胞。經(jīng)上面描述的HIAP1寡核苷酸轉(zhuǎn)染，再給予增加濃度的阿霉素的SF295細胞的WST-1存活曲線見圖25。相對于給予沒有降低HIAPmRNA水平活性的寡核苷酸的細胞，能夠降低HIAPmRNA水平的兩種寡核苷酸和阿霉素聯(lián)用還顯示出降低細胞存活數(shù)的作用。因此，通過反義或其它方法降低HIAP1水平可以使得對許多化學治療藥物的細胞毒性高度耐受的膠質(zhì)母細胞瘤細胞系化學致敏。其它89個可按照本發(fā)明的方法應用的HIAP1反義序列列于表6。人HIAP1和HIAP2序列100％相同或有一到兩處不匹配用粗體表示表6我們還分析了人HIAP2以期找到可以作為反義核堿基寡聚體的序列。鑒定的序列列于表7中。表7其它實施方案本說明中提到的所有出版物和專利申請，包括U.S.PatentNos.5,919,912，6,156,535，和6,133,437，都以與單獨引用同等程度的引入作為參考。盡管本發(fā)明通過其特異的實施方案進行了描述，但是應當理解其可以進一步修飾，本申請覆蓋任何遵從本發(fā)明的原理而進行的變化、應用或改進，本申請還包括偏離本發(fā)明的公開但落在本發(fā)明所屬領(lǐng)域已知或慣例并可以用于上文提到的基本特征的變化。序列表<110>AEGERATherapeutics，Inc.etal.<120>反義IAP核堿基寡聚物及其用途<130>07891/025CN4<150>PCT/IB2003/001670<151>2003-03-27<150>US60/367,853<151>2002-03-27<160>460<170>FastSEQforWindowsVersion4.0<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，12，16<223>n＝T或U<400>1aaaanncnaagnaccngca19<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，10，14<223>n＝T或U<400>2ncnagagggnggcncagga19<210>3<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，7，9，11，13，19<223>n＝T或U<400>3caganananangnaacacn19<210>4<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，10，11，12，13，14，15，16，18，19<223>n＝T或U<400>4ngagagcccnnnnnnngnn19<210>5<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，10，12，13，14，16，19<223>n＝T或U<400>5agnangaaanannncngan19<210>6<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，6，7，12，14，16，17，19<223>n＝T或U<400>6annggnnccaangngnncn19<210>7<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，10，12，14，15，16，17<223>n＝T或U<400>7nnagcaaaanangnnnnaa19<210>8<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，5，6，9，10，11，12，13，16，18<223>n＝T或U<400>8ngaannaannnnnaananc19<210>9<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，11，17，18<223>n＝T或U<400>9anncaaggcancaaagnng19<210>10<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，7，10，11，14，15<223>n＝T或U<400>10gncaaancannaannagga19<210>11<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，7，12，14，17<223>n＝T或U<400>11aanangnaaacngngangc19<210>12<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，13，16，19<223>n＝T或U<400>12gcagaanaaaacnaanaan19<210>13<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，9，11，12，13<223>n＝T或U<400>13gaaagnaanannnaagcag19<210>14<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，9，12，13，18<223>n＝T或U<400>14nnaccacancanncaagnc19<210>15<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，6，9，14，15<223>n＝T或U<400>15cnaaanacnagagnncgac19<210>16<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>11<223>n＝T或U<400>16acacgaccgcnaagaaaca19<210>17<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，8，9，11，16<223>n＝T或U<400>17nanccacnnangacanaaa19<210>18<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，5，12，19<223>n＝T或U<400>18gnnanaggagcnaacaaan19<210>19<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5<223>n＝T或U<400>19aangngaaacacaagcaac19<210>20<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，5，7，9，10，17<223>n＝T或U<400>20acannanannaggaaancc19<210>21<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，5，11，12，13，14，16<223>n＝T或U<400>21cnngnccaccnnnncnaaa19<210>22<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>22ancnncncnngaaaanagg19<210>23<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，11，13，14<223>n＝T或U<400>23ccnncaaaacngnnaaaag19<210>24<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，6，12<223>n＝T或U<400>24angncngcaggnacacaag19<210>25<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，6，7，12，14，15，17<223>n＝T或U<400>25ancnannaaacncnncnac19<210>26<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，14，15<223>n＝T或U<400>26acaggacnaccacnnggaa19<210>27<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，7，9，10，13，16<223>n＝T或U<400>27ngccagngnngangcngaa19<210>28<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，15，18<223>n＝T或U<400>28gnanaaagaaacccngcnc19<210>29<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，10，12，15，16<223>n＝T或U<400>29cgcacggnancnccnncac19<210>30<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，8，12，19<223>n＝T或U<400>30cnacagcngcangacaacn19<210>31<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>31gcngagncnccananngcc19<210>32<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，5，6，7，10，12，14，16，17<223>n＝T或U<400>32anacnnnccngngncnncc19<210>33<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，14，15，16<223>n＝T或U<400>33ganaaancngcaannnggg19<210>34<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，4，9，13，19<223>n＝T或U<400>34nngnagacngcgnggcacn19<210>35<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，6，8，12<223>n＝T或U<400>35accanncngganaccagaa19<210>36<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，5，6，11，12，13，15，18<223>n＝T或U<400>36agnnnncaacnnngnacng19<210>37<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，5，7，9，12，13<223>n＝T或U<400>37angancncngcnncccaga19<210>38<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，9，11，13<223>n＝T或U<400>38aganggccngncnaaggca19<210>39<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，6，14，17，19<223>n＝T或U<400>39agnncncaaaaganagncn19<210>40<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，6，9，11，13，15<223>n＝T或U<400>40gngncngananancnacaa19<210>41<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，6，8，10，13，15，17<223>n＝T或U<400>41ncgggnananggngncnga19<210>42<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，7，10，15，17，19<223>n＝T或U<400>42cagggnnccncgggnanan19<210>43<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，6，7，13，17<223>n＝T或U<400>43gcnncnncacaanacangg19<210>44<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，8，10，19<223>n＝T或U<400>44ggccagnncngaaaggacn19<210>45<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，11，12，17，18<223>n＝T或U<400>45gcnaacncncnnggggnna19<210>46<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，7，12<223>n＝T或U<400>46gngnagnagagnccagcac19<210>47<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，12，13，16<223>n＝T或U<400>47aagcacngcacnnggncac19<210>48<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，6，7，8，9<223>n＝T或U<400>48nncagnnnnccaccacaac19<210>49<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，13，14<223>n＝T或U<400>49acgancacaaggnncccaa19<210>50<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，6，8，10，11，13<223>n＝T或U<400>50ncgccngngnncngaccag19<210>51<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<400>51ccggcccaaaacaaagaag19<210>52<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，9，14，16，17<223>n＝T或U<400>52ganncacnncgaanannaa19<210>53<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，10，18<223>n＝T或U<400>53nancagaacncacagcanc19<210>54<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，8，9，11，12，16，17，18<223>n＝T或U<400>54ggaagannngnngaannng19<210>55<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，8，12，16，17，18<223>n＝T或U<400>55ncngccangganggannnc19<210>56<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，10，14，17，18<223>n＝T或U<400>56aagnaaaganccgngcnnc19<210>57<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，6，8，10，14，16<223>n＝T或U<400>57cngagnananccangnccc19<210>58<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，10，13，14，16，17<223>n＝T或U<400>58gcaagcngcnccnngnnaa19<210>59<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，12，18<223>n＝T或U<400>59aaagcanaaaanccagcnc19<210>60<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>9，10，11，14，15，16，18<223>n＝T或U<400>60gaaagcacnnnacnnnanc19<210>61<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，8，9，14，18，19<223>n＝T或U<400>61acngggcnnccaancagnn19<210>62<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，5，6，15，17，18<223>n＝T或U<400>62gnngnncccaagggncnnc19<210>63<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，9，14，15，16<223>n＝T或U<400>63acccngganaccannnagc19<210>64<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，4，6，13，15，16，17<223>n＝T或U<400>64ngnncnaacaganannngc19<210>65<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，5，7，8，10，11，13，17，18<223>n＝T或U<400>65nanananncnngncccnnc19<210>66<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，12，14，15，17，18，19<223>n＝T或U<400>66agnnaaangaananngnnn19<210>67<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，9，14，18<223>n＝T或U<400>67gacacnccncaagngaang19<210>68<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，3，5，9，12，13，15，16<223>n＝T或U<400>68nnncncagnagnncnnacc19<210>69<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，6，9，12，14，15，16，17，19<223>n＝T或U<400>69gnnagnganggngnnnncn19<210>70<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，7，9，12，16，17，19<223>n＝T或U<400>70aganggnancancaanncn19<210>71<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，8，13，14，15，16<223>n＝T或U<400>71ngnaccanaggannnngga19<210>72<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，7，10，12，16，17，19<223>n＝T或U<400>72ccccanncgnanagcnncn19<210>73<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，5，6，7，8，10，11，14，16，19<223>n＝T或U<400>73annannnncnnaangnccn19<210>74<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，8，9，10，12，15，16，19<223>n＝T或U<400>74caagngannnanagnngcn19<210>75<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，5，7<223>n＝T或U<400>75nagancngcaaccagaacc19<210>76<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，6，10，13，15，17，18，19<223>n＝T或U<400>76cancnngcanacngncnnn19<210>77<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，11，13，14，18<223>n＝T或U<400>77ccnnagcngcncnncagna19<210>78<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，6，8，11，13，14<223>n＝T或U<400>78aagcnncnccncnngcagg19<210>79<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，6，8，10，14<223>n＝T或U<400>79anannncnanccanacaga19<210>80<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，6，8<223>n＝T或U<400>80cnagangnccacaaggaac19<210>81<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，8，10，11，12，18<223>n＝T或U<400>81agcacanngnnnacaagng19<210>82<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，15，16，18<223>n＝T或U<400>82agcacangggacacnngnc19<210>83<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，9，12，16，18<223>n＝T或U<400>83cnngaaagnaangacngng19<210>84<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，6，8，13，14，18，19<223>n＝T或U<400>84ccnacnanagagnnagann19<210>85<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，7，13，16<223>n＝T或U<400>85anncaancagggnaanaag19<210>86<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，8，9，14<223>n＝T或U<400>86aagncagnncacancacac19<210>87<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，13，17<223>n＝T或U<400>87cagnaaaaaaaangganaa19<210>88<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，6，7，9，12，14，17<223>n＝T或U<400>88nncagnnanagnangangc19<210>89<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，6，7，13，14，18<223>n＝T或U<400>89nacacnnagaaannaaanc19<210>90<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，5，7，9，10，11<223>n＝T或U<400>90ncncnancnnnccaccagc19<210>91<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，8<223>n＝T或U<400>91agaanccnaaaacacaaca19<210>92<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，12，16，18，19<223>n＝T或U<400>92anncgcacaagnacgngnn19<210>93<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，7，11，13，14，18<223>n＝T或U<400>93ngncagnacangnnggcnc19<210>94<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，7，9，10，11，12，18，19<223>n＝T或U<400>94acanagngnnnngccacnn19<210>95<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，4，7，9，13，19<223>n＝T或U<400>95cnnngancnggcncagacn19<210>96<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>10，11，12，18，19<223>n＝T或U<400>96gaaaccacannnaacagnn19<210>97<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，7，10，11，18<223>n＝T或U<400>97ggnancnccnncaccagna19<210>98<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，9，10，13，15，17<223>n＝T或U<400>98angaccacnnccncnangg19<210>99<211>15<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，11，12，13，15<223>n＝T或U<400>99ganaccagaannngn15<210>100<211>15<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，4，5，13<223>n＝T或U<400>100ngnnnaagaccanag15<210>101<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，7，9，13，16<223>n＝T或U<400>101gcngagncnccanacngcc19<210>102<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，6，8，15，19<223>n＝T或U<400>102ggcncncngcccacngaan19<210>103<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>103ancnncncnngaaaanagg19<210>104<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，8，9，12，13，14，19<223>n＝T或U<400>104cagagannncannnaacgn19<210>105<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，9，10，13，14，16<223>n＝T或U<400>105ancnngacnngannanagg19<210>106<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，10，11，13，15，16，18<223>n＝T或U<400>106gganaaaagnncncnncna19<210>107<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，10，12，15，16<223>n＝T或U<400>107cgcacggnancnccnncac19<210>108<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，7，13，16，17<223>n＝T或U<400>108cnacgcncgccancgnnca19<210>109<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，5，8，10，12<223>n＝T或U<400>109cacnnccncnanggcacgc19<210>110<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，10，12，15，16<223>n＝T或U<400>110cgcacccnancnggnncac19<210>111<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>111gcngagncnccananngcc19<210>112<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，6，7，8，15，19<223>n＝T或U<400>112ggcncnnncgccacngaan19<210>113<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，5，7，11，13，17<223>n＝T或U<400>113ccgnnanaccncngagncg19<210>114<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，9，14，15，16<223>n＝T或U<400>114gcngacacnccaannngcc19<210>115<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，6，8，11<223>n＝T或U<400>115accanncnggnaaccagaa19<210>116<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，11，14，17<223>n＝T或U<400>116ngcccaagaanacnagnca19<210>117<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，8，12，13<223>n＝T或U<400>117accanagngganngcagaa19<210>118<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，12，14，15<223>n＝T或U<400>118aagaccanaggncnnacca19<210>119<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，9，11，12，17，19，20<223>n＝T或U<400>119ganncacnncnncgaanannaa22<210>120<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，6，8，12，15，17，18<223>n＝T或U<400>120ngaaangnaaancancnnc19<210>121<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，6，8，9，13，16，17<223>n＝T或U<400>121ganncngnncganaannaa19<210>122<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，6，11，12，16，17<223>n＝T或U<400>122aannanaagcnncacnnag19<210>123<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>123gcngagncnccananngcc19<210>124<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，6，7，8，15，19<223>n＝T或U<400>124ggcncnnngcccacngaan19<210>125<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，6，8，12<223>n＝T或U<400>125accanncngganaccagaa19<210>126<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，12，14，15<223>n＝T或U<400>126aagaccanaggncnnacca19<210>127<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>127ancnncncnngaaaanagg19<210>128<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，10，11，13，15，16，18<223>n＝T或U<400>128gganaaaagnncncnncna19<210>129<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，7，10，11，18<223>n＝T或U<400>129ggnancnccnncaccagna19<210>130<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，9，10，13，15，17<223>n＝T或U<400>130angaccacnnccncnangg19<210>131<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，7，15，16，17，19<223>n＝T或U<400>131ncngganaccagaannngn19<210>132<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，4，5，13，17，19<223>n＝T或U<400>132ngnnnaagaccanaggncn19<210>133<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，5，8，13，15，17<223>n＝T或U<400>133gggnnccncgggnanangg19<210>134<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，7，12，15，16<223>n＝T或U<400>134ggnananggcgnccnnggg19<210>135<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，9，14，16，17<223>n＝T或U<400>135ganncacnncgaanannaa19<210>136<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，6，11，12，16，17<223>n＝T或U<400>136aannanaacgnncacnnag19<210>137<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>137ancnncncnngaaaanagg19<210>138<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>138gcngagncnccananngcc19<210>139<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，4，8，9，14，16，17<223>n＝T或U<400>139ganncacnncgaanannaa19<210>140<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，11，14，17<223>n＝T或U<400>140ngcccaagaanacnagnca19<210>141<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>141gcngagncnccananngcc19<210>142<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，6，7，8，15，19<223>n＝T或U<400>142ggcncnnngcccacngaan19<210>143<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，7，10，11，18<223>n＝T或U<400>143ggnancnccnncaccagna19<210>144<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，9，10，13，15，17<223>n＝T或U<400>144angaccacnnccncnangg19<210>145<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，9，11，12，13<223>n＝T或U<400>145gaaagnaanannnaagcag19<210>146<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，8，9，11，14<223>n＝T或U<400>146gagcaannnanaangaaag19<210>147<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>6，15，16，18<223>n＝T或U<400>147accgcnaagaaacanncna19<210>148<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，4，5，14<223>n＝T或U<400>148ancnnacaaagaanccgca19<210>149<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，8，9，11，16<223>n＝T或U<400>149nanccacnnangacanaaa19<210>150<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，9，11，12，17，19<223>n＝T或U<400>150aaanacagnanncaccnan19<210>151<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，8，12，17，18，19<223>n＝T或U<400>151ngcacccngganaccannn19<210>152<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，2，3，8，12，19<223>n＝T或U<400>152nnnaccanaggncccagcn19<210>153<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，7，9，13，16<223>n＝T或U<400>153gcngagncnccanacngcc19<210>154<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，6，8，15，19<223>n＝T或U<400>154ggcncncngcccacngaan19<210>155<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，3，6，7，12，14，16，17，19<223>n＝T或U<400>155annggnnccaangngnncn19<210>156<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，4，6，8，13，14，17，18<223>n＝T或U<400>156ncnngngnaaccnnggnna19<210>157<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8，14，15<223>n＝T或U<400>157acaggacnaccacnnggaa19<210>158<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>5，6，12<223>n＝T或U<400>158aaggnncaccancaggaca19<210>159<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>7，12，13，16<223>n＝T或U<400>159aagcacngcacnnggncac19<210>160<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>4，7，8，13<223>n＝T或U<400>160cacnggnngaccncacaag19<210>161<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，3，7，11，13，14，18<223>n＝T或U<400>161ngncagnacangnnggcnc19<210>162<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>2，6，7，9，13，17，19<223>n＝T或U<400>162cnaggnngnccangacngn19<210>163<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>1，4，5，6，12，19<223>n＝T或U<400>163ncannngagccngggaggn19<210>164<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>8<223>n＝T或U<400>164cggaggcngaggcaggaga19<210>165<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分。<221>misc_特征<222>3，5，8，11，19<223>n＝T或U<400>165ggngnggnggnacgcgccn19<210>166<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，16<223>n＝T或U<400>166acccangcacaaaacnacc19<210>167<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，13<223>n＝T或U<400>167agaangngccagnaggaga19<210>168<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，12，13，18，19<223>n＝T或U<400>168ncncacagacgnngggcnn19<210>169<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，8，9，10，18<223>n＝T或U<400>169ccagnggnnngcaagcang19<210>170<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，7，10<223>n＝T或U<400>170gaaannnagnggccaggaa19<210>171<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，13，14<223>n＝T或U<400>171agaaanacacaanngcacc19<210>172<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，7，11，12，13，14<223>n＝T或U<400>172nacnganacannnnaagga19<210>173<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，8，14，15，17<223>n＝T或U<400>173nncaacanggaganncnaa19<210>174<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，4，6，8，12，13，14，19<223>n＝T或U<400>174annncnangcannnagagn19<210>175<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，6，11<223>n＝T或U<400>175aanacnaggcngaaaagcc19<210>176<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，6，9，10，11，12，14，18，19<223>n＝T或U<400>176ggcnnngcnnnnancagnn19<210>177<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，11，14，15，16，17，19<223>n＝T或U<400>177ncnagggaggnagnnnngn19<210>178<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>16<223>n＝T或U<400>178gggaagaaaagggacnagc19<210>179<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，6，9，14，18<223>n＝T或U<400>179gnncanaangaaangaang19<210>180<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，8，10，13，15，16，17，18<223>n＝T或U<400>180anaagaanangcngnnnnc19<210>181<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，9，11，12，18，19<223>n＝T或U<400>181nncaaacgngnnggcgcnn19<210>182<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，9，12，14，15，16<223>n＝T或U<400>182angacaagncgnannncag19<210>183<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，9，13，19<223>n＝T或U<400>183aagnggaanacgnagacan19<210>184<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<400>184agacaggaaccccagcagg19<210>185<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>11，14，15，16，18<223>n＝T或U<400>185cgagcaagacnccnnncng19<210>186<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，8<223>n＝T或U<400>186agngnaanagaaaccagca19<210>187<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，7，9，12，13<223>n＝T或U<400>187ngaccnngncanncacacc19<210>188<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，11<223>n＝T或U<400>188nnanccagcancaggccac19<210>189<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，7，10，12，13，14，15<223>n＝T或U<400>189acngncnccncnnnnccag19<210>190<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，4，6，9，10，11，12，16<223>n＝T或U<400>190nnnnangcnnnncagnagg19<210>191<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，8，14，19<223>n＝T或U<400>191acgaancngcagcnaggan19<210>192<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，9，17，18，19<223>n＝T或U<400>192caagnngnnaacggaannn19<210>193<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，13，17，18<223>n＝T或U<400>193naggcngagaggnagcnnc19<210>194<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，6<223>n＝T或U<400>194gnnacngaagaaggaaaag19<210>195<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，8，10，12，17，19<223>n＝T或U<400>195gaangagngngnggaangn19<210>196<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，4，5，6，8，10<223>n＝T或U<400>196ngnnnncngnacccggaag19<210>197<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>13，15<223>n＝T或U<400>197gagccacggaaananccac19<210>198<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，11，12，13，17<223>n＝T或U<400>198nganggagagnnngaanaa19<210>199<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，8，10，15，16，17<223>n＝T或U<400>199gannngcncnggagnnnac19<210>200<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>10，11，13，14，17，18，19<223>n＝T或U<400>200ggcagaaaanncnngannn19<210>201<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>10，17，18<223>n＝T或U<400>201ggacaggggnaggaacnnc19<210>202<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，6，7，10，11，13，14，17，18<223>n＝T或U<400>202gcannnncgnnanncanng19<210>203<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，9，13，16，18<223>n＝T或U<400>203cngaaaagnaagnaancng19<210>204<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>14，18<223>n＝T或U<400>204ggcgacagaaaagncaang19<210>205<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，9，11，17<223>n＝T或U<400>205ccacncngncnccaggncc19<210>206<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<400>206ccaccacaggcaaagcaag19<210>207<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，6，7，13，14，17<223>n＝T或U<400>207nncggnncccaanngcnca19<210>208<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，9，14，15，17<223>n＝T或U<400>208nncngacanagcannancc19<210>209<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，9，11，13，18<223>n＝T或U<400>209ngggaaaangncncaggng19<210>210<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，7，13，14，15<223>n＝T或U<400>210nanaaangggcannnggga19<210>211<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，5，6，12，15，16，17，18<223>n＝T或U<400>211ngncnngaagcngannnnc19<210>212<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，8，10，12，14，15<223>n＝T或U<400>212gaaacngngnancnngaag19<210>213<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，5，9，12，17，18<223>n＝T或U<400>213ngncngcangcncaganna19<210>214<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，6，7，8，9，19<223>n＝T或U<400>214gaangnnnnaaagcgggcn19<210>215<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，15，16<223>n＝T或U<400>215cacnagagggccagnnaaa19<210>216<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，8，15，18<223>n＝T或U<400>216ccgcacnngcaagcngcnc19<210>217<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，6，10，12，13<223>n＝T或U<400>217cancancacngnnacccac19<210>218<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7<223>n＝T或U<400>218ccaccancacagcaaaagc19<210>219<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，7，8，18<223>n＝T或U<400>219nccaganncccaacaccng19<210>220<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，9，12，14<223>n＝T或U<400>220cccanggancancnccaga19<210>221<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，8，13，15，16<223>n＝T或U<400>221aaccacnnggcangnngaa19<210>222<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，8，15，16<223>n＝T或U<400>222caagnacncacaccnngga19<210>223<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，8，9，10，13，14，16，17，19<223>n＝T或U<400>223ccngnccnnnaanncnnan19<210>224<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，7，14，19<223>n＝T或U<400>224ngaacnngacggangaacn19<210>225<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，11，15，19<223>n＝T或U<400>225nagangagggnaacnggcn19<210>226<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，12，14，15<223>n＝T或U<400>226ngganagcagcngnncaag19<210>227<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，6，9，11，14，19<223>n＝T或U<400>227cannnncancnccngggcn19<210>228<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，8，9，12，16，18<223>n＝T或U<400>228ngganaanngangacncng19<210>229<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，7，13，14<223>n＝T或U<400>229gncnncnccaggnncaaaa19<210>230<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，4，7，10，13，14，18<223>n＝T或U<400>230nanncancanganngcanc19<210>231<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，17，18<223>n＝T或U<400>231cannnccacggcagcanna19<210>232<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，8，10，13<223>n＝T或U<400>232ccaggcnncnacnaaagcc19<210>233<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，8，9，10，11，12，14，16<223>n＝T或U<400>233gcnaggannnnncncngaa19<210>234<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，5，8，9，11，13，18，19<223>n＝T或U<400>234ncnanaanncncnccagnn19<210>235<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，12，13，17<223>n＝T或U<400>235acacaagancanngacnag19<210>236<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，7，8，12，16，18<223>n＝T或U<400>236ncngcanngagnaagncna19<210>237<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，9，10，12，13，14，17，19<223>n＝T或U<400>237cncnncccnnannncancn19<210>238<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，8，9，12，14，15，16，18<223>n＝T或U<400>238nccncagnngcncnnncnc19<210>239<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，10，11，13，14<223>n＝T或U<400>239gccanncnanncnnccgga19<210>240<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，8，10，11，19<223>n＝T或U<400>240agncaaangnngaaaaagn19<210>241<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，8，13，14<223>n＝T或U<400>241ccaggannggaannacaca19<210>242<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，11，12，15<223>n＝T或U<400>242annccggcagnnagnagac19<210>243<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，9，11，12，14，15，17，18<223>n＝T或U<400>243naacancangnncnngnnc19<210>244<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，6，8，10，11，13，15，16，17<223>n＝T或U<400>244gncngngncnncngnnnaa19<210>245<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，6，7，10，11，13<223>n＝T或U<400>245nncncnngcnngnaaagac19<210>246<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，7，10，12，16<223>n＝T或U<400>246cnaaaancgnancaancag19<210>247<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，9，11，12，13，16，17，18，19<223>n＝T或U<400>247ggcngcaanannnccnnnn19<210>248<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，7，8，10，14，19<223>n＝T或U<400>248gagagnnncngaanacagn19<210>249<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，7，12，13，15，16<223>n＝T或U<400>249acagcnncagcnncnngca19<210>250<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，8，11，14，16<223>n＝T或U<400>250aaanaaangcncananaac19<210>251<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，9，10，12，14<223>n＝T或U<400>251gaaacancnncngngggaa19<210>252<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，5，6，11，14，18<223>n＝T或U<400>252gnncnnccacnggnaganc19<210>253<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，5，6，8，11，13<223>n＝T或U<400>253cnncnngnagncnccgcaa19<210>254<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，8，15，16，17<223>n＝T或U<400>254nngnccanacacacnnnac19<210>255<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>8，9，14<223>n＝T或U<400>255aaccaaannagganaaaag19<210>256<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，8，10，13，14，15，19<223>n＝T或U<400>256angnncananggnnnagan19<210>257<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，6，7，8，11，12，16，17<223>n＝T或U<400>257naagnnnnacnncacnnac19<210>258<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，11，13，14，17<223>n＝T或U<400>258angnncccggnannagnac19<210>259<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，10，13，14，16，18，19<223>n＝T或U<400>259gggcncaagnaanncncnn19<210>260<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，13，14<223>n＝T或U<400>260gcccaggangganncaaac19<210>261<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。DNA/RNA雜交體<400>261gagaagatgactggtaaca19<210>262<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。DNA/RNA雜交體<221>misc_特征<222>1，17，18<223>n＝T或U<400>262ngtgctattctgtgaann18<210>263<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>263tctgcttcaaggagctggaa20<210>264<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>264gaaaggaaagcgcaaccg18<210>265<211>30<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>265agccagatgacgaccccatagaggaacata30<210>266<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>266tggagatgatccatgggttca21<210>267<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>267gaactcctgtcctttaattcttatcaagt29<210>268<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>268ctcacaccttggaaaccacttggcatg27<210>269<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>269ggtgataaagtaaagtgctttcactgt27<210>270<211>28<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>270tcagtagttcttaccagacactcctcaa28<210>271<211>34<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>271caacatgctaaatggtatccagggtgcaaatatc34<210>272<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>272gaaggtgaaggtcggagtc19<210>273<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>273gaagatggtgatgggattc19<210>274<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>274caagcttcccgttctcagcc20<210>275<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。Eachnucleobaseispartofadcoxyribonucleotide或ribonucleotide。<400>275cagagatttcatttaacgu19<210>276<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。Eachnucleobasemaybepartofadeoxyribonucleotide或ribonucleotide<400>276cuacgctcgccatcgtuca19<210>277<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。Eachnucleobaseispartofadeoxyribonucleotide或ribonucleotide<400>277ugcccaagaatactaguca19<210>278<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>278ancnncncnngaaaanagg19<210>279<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，7，9，10，16<223>n＝T或U<400>279ancnncncnngaaaanagg19<210>280<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，10，11，13，15，16，18<223>n＝T或U<400>280gganaaaagnncncnncna19<210>281<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>281gcngagncnccananngcc19<210>282<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，7，9，13，15，16<223>n＝T或U<400>282gcngagncnccananngcc19<210>283<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，6，7，8，15，19<223>n＝T或U<400>283ggcncnnngcccacngaan19<210>284<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，12<223>n＝T或U<400>284accanncngganaccagaa19<210>285<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，12<223>n＝T或U<400>285accanncngganaccagaa19<210>286<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>8，12，14，15<223>n＝T或U<400>286aagaccanaggncnnacca19<210>287<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，8，13，15，17<223>n＝T或U<400>287gggnnccncgggnanangg19<210>288<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，7，12，15，16<223>n＝T或U<400>288ggnananggcgnccnnggg19<210>289<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，7，10，11，18<223>n＝T或U<400>289ggnancnccnncaccagna19<210>290<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，9，10，13，15，17<223>n＝T或U<400>290angaccacnnccncnangg19<210>291<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，8，9，14，16，17<223>n＝T或U<400>291ganncacnncgaanannaa19<210>292<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，6，11，12，16，17<223>n＝T或U<400>292aannanaacgnncacnnag19<210>293<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>293ggtgataaagtaaagtgctttcactgt27<210>294<211>33<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>294caacatgctaaatggttccagggtgcaaatatc33<210>295<211>28<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>295tcagtagttcttaccagacactcctcaa28<210>296<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。DNA/RNA雜交體<400>296uaagctgttctatgtguuc19<210>297<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>297aagggcggcggagtgagac19<210>298<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>298agaggacggagtcggaggc19<210>299<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。<400>299cggagcgtgaggatggaga19<210>300<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>18<223>n＝T或U<400>300agcaaggacaagcccagnc19<210>301<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，9，12<223>n＝T或U<400>301ngnaaaccngcngcccaga19<210>302<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，9，10，11，12，15，18，19<223>n＝T或U<400>302agaagncgnnnnccnccnn19<210>303<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，8，13，17<223>n＝T或U<400>303ccgagannagacnaagncc19<210>304<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，6，9，10，11，13，14，15<223>n＝T或U<400>304acnnnnccnnnannnccac19<210>305<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，14，17，19<223>n＝T或U<400>305ncccaaacacaggnacnan19<210>306<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，6，13<223>n＝T或U<400>306canncncagcggnaacagc19<210>307<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，8，9，11，14，17<223>n＝T或U<400>307accancanncncanccnca19<210>308<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，10，11，18<223>n＝T或U<400>308aangnaaccnncaaccanc19<210>309<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，5，7，8，11，15，17<223>n＝T或U<400>309nnngnanncancacngnc18<210>310<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，8，11，12<223>n＝T或U<400>310ncacancncannaccaac18<210>311<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6<223>n＝T或U<400>311ccaggnggcaggagaaaca19<210>312<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，8，9，13，16，17，18<223>n＝T或U<400>312ngcagacnncaangcnnng19<210>313<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，9，13，15，19<223>n＝T或U<400>313naagcaagncacngnggcn19<210>314<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，6，10，13，16<223>n＝T或U<400>314cngagncganaanacnagc19<210>315<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，9，10，13<223>n＝T或U<400>315acnagccannagnaaagag19<210>316<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>15，16，18<223>n＝T或U<400>316caacagcagagaccnngnc19<210>317<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，7，11，12<223>n＝T或U<400>317anagcanaccnngaaccag19<210>318<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，7，12，17<223>n＝T或U<400>318cancngnaggcnaagangg19<210>319<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，11，16，18<223>n＝T或U<400>319agnnaccagangccancng19<210>320<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，8，10，13，16<223>n＝T或U<400>320aancnacncnganagngga19<210>321<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，4，6，17<223>n＝T或U<400>321gnnncngaagccaacanca19<210>322<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，7，9，14，17<223>n＝T或U<400>322ncaacnnancaccnccnga19<210>323<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，12，13，15<223>n＝T或U<400>323aagaacnaacanngnagag19<210>324<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，13，16<223>n＝T或U<400>324gnagacaacaggngcngca19<210>325<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，7，9，11，14，15，17<223>n＝T或U<400>325angnccncngnaannangg19<210>326<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，5，9，16<223>n＝T或U<400>326nacnnggcnagaacangga19<210>327<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，13，15，16<223>n＝T或U<400>327gaagcaacncaangnnaag19<210>328<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，6，8，9，10，11，16<223>n＝T或U<400>328nnnggncnnnnggacncag19<210>329<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，8，11，18<223>n＝T或U<400>329ccanagancancaggaana19<210>330<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，11，18<223>n＝T或U<400>330caggacnggcnaacacanc19<210>331<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，6，15，17<223>n＝T或U<400>331nnnaanggcaggcancncc19<210>332<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，9，15<223>n＝T或U<400>332nnaagccancaggangcca19<210>333<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，10，15，17，19<223>n＝T或U<400>333gcnacagagnaagcngngn19<210>334<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，12，15，16，17，18<223>n＝T或U<400>334cncnagggaggnagnnnng19<210>335<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>13，18，19<223>n＝T或U<400>335aagaaaagggacnagccnn19<210>336<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，10，17<223>n＝T或U<400>336cagnncacangacaagncg19<210>337<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，7，8，9，11<223>n＝T或U<400>337gacnccnnncngagacagg19<210>338<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，12，14，17<223>n＝T或U<400>338anncacaccagngnaanag19<210>339<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，10，11，16，17，19<223>n＝T或U<400>339cagaagcannngaccnngn19<210>340<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7<223>n＝T或U<400>340ccagcancaggccacaaca19<210>341<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，7，13，15，17<223>n＝T或U<400>341nnncagnaggacngncncc19<210>342<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，7，12，18，19<223>n＝T或U<400>342ngcagcnagganacaacnn19<210>343<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，10，11，17，18<223>n＝T或U<400>343agaggnagcnnccaagnng19<210>344<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，8，12，14，16<223>n＝T或U<400>344gaagnaangagngngngga19<210>345<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，6，9，16，17，18<223>n＝T或U<400>345ggannnganggagagnnng19<210>346<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，8，11<223>n＝T或U<400>346gaacnncncancaaggcag19<210>347<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，7，9，11，14<223>n＝T或U<400>347aggnccnangnagnaaaag19<210>348<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，6，7<223>n＝T或U<400>348caannnnccaccacaggca19<210>349<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，6，9，10，14，15<223>n＝T或U<400>349cannanccnncggnnccca19<210>350<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，7，9，10，12，17<223>n＝T或U<400>350cncaggngnncngacanag19<210>351<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，8，9，16，18<223>n＝T或U<400>351gcncagannagaaacngng19<210>352<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，6，8，10，12，16，19<223>n＝T或U<400>352cngcangngncngcangcn19<210>353<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，6，14<223>n＝T或U<400>353nnaacnagaacacnagagg19<210>354<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，6，19<223>n＝T或U<400>354canaanaaaaacccgcacn19<210>355<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6<223>n＝T或U<400>355caccancacagcaaaagca19<210>356<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，8，9，19<223>n＝T或U<400>356cnccaganncccaacaccn19<210>357<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>10，11，16，18，19<223>n＝T或U<400>357ggaaaccacnnggcangnn19<210>358<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，8，12，18<223>n＝T或U<400>358gnncaagnagangagggna19<210>359<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，6，7，10，14，16<223>n＝T或U<400>359ganaanngangacncngca19<210>360<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，5，7，8，10，16，17<223>n＝T或U<400>360anggncnncnccaggnnca19<210>361<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，8，17，19<223>n＝T或U<400>361gcannaancacaggggnan19<210>362<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，10，11，12<223>n＝T或U<400>362naaagcccannnccacggc19<210>363<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，9，15<223>n＝T或U<400>363nnaagccancaggangcca19<210>364<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，6，7，9，11，16，18<223>n＝T或U<400>364gannnnncncngaacngnc19<210>365<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，7，8，10，12，17，18<223>n＝T或U<400>365cnanaanncncnccagnng19<210>366<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，12，13，17<223>n＝T或U<400>366acacaagancanngacnag19<210>367<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，7，8，12，16，18<223>n＝T或U<400>367ncngcanngagnaagncna19<210>368<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，4，5，6，7，10，14，15，18<223>n＝T或U<400>368ncnnnnnccncagnngcnc19<210>369<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，7，8，10，12，13，15，16<223>n＝T或U<400>369gngccanncnanncnnccg19<210>370<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，7，9，16，17<223>n＝T或U<400>370gnagacnanccagganngg19<210>371<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，6，8，9，12，13，15<223>n＝T或U<400>371agnncncnngcnngnaaag19<210>372<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，6，10，14，15，17，19<223>n＝T或U<400>372ncgnancaancagnncncn19<210>373<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，10，11，13，17<223>n＝T或U<400>373gcagagagnnncngaanac19<210>374<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，7，9，10，18<223>n＝T或U<400>374angnccngnngcacaaana19<210>375<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，9，11，12，14，16<223>n＝T或U<400>375cngaaacancnncngnggg19<210>376<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，5，6，8，9，11，14，16<223>n＝T或U<400>376nnncnncnngnagncnccg19<210>377<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，5，6，7，9，13<223>n＝T或U<400>377cnncnnngnccanacacac19<210>378<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，12，14<223>n＝T或U<400>378ggaanaaacacnanggaca19<210>379<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，6，9，13<223>n＝T或U<400>379canacnacnagangaccac19<210>380<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，8，9，12，13，15，18<223>n＝T或U<400>380ngnacccnnganngnacnc19<210>381<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，14，16<223>n＝T或U<400>381gaaangnacgaacngnacc19<210>382<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，6，7，8，11，12，14，15，17，18<223>n＝T或U<400>382gangnnnnggnncnncnnc19<210>383<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，7，8，10，12，13，16，17，18<223>n＝T或U<400>383cnancanncncnnagnnnc19<210>384<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，10，11，14，16，17<223>n＝T或U<400>384acaccnggcnncangnncc19<210>385<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，14<223>n＝T或U<400>385gacnacaggcacanaccac19<210>386<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，11，17<223>n＝T或U<400>386ngccncagccngggacnac19<210>387<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，9，10，16，19<223>n＝T或U<400>387aggangganncaaacnccn19<210>388<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，9，11，15，18<223>n＝T或U<400>388gagaaangngncccnggng19<210>389<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>16，17，18<223>n＝T或U<400>389gccacaacagaagcannng19<210>390<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，11，13，14，18<223>n＝T或U<400>390nncngaaaacncnncaang19<210>391<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，8，13，15，19<223>n＝T或U<400>391cnnagcanaaagnancagn19<210>392<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，12，15，16<223>n＝T或U<400>392caaaaaagnacngcnnagc19<210>393<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，12，13，15，18，19<223>n＝T或U<400>393caaganaaaacnngnccnn19<210>394<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，7，10，12，13，15<223>n＝T或U<400>394nancagncangnngnaaac19<210>395<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，6，11，13，14，17<223>n＝T或U<400>395cnaaanaaccngnncanca19<210>396<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>8，9，10，11，12，17<223>n＝T或U<400>396agcacacnnnnnacacngc19<210>397<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，8，9，11，12，14，15，18<223>n＝T或U<400>397accacnannanncnnganc19<210>398<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，3，5，6，7，9，10，11，15，16，17<223>n＝T或U<400>398ngnannngnnnccannncc19<210>399<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，10，12，14，16，17，18<223>n＝T或U<400>399acngnaaacncnancnnng19<210>400<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，7，12，16，17<223>n＝T或U<400>400cnnaagngggcnaaannac19<210>401<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，7，9，12，18<223>n＝T或U<400>401ccnncananggncacacna19<210>402<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，11，13<223>n＝T或U<400>402ggnnacaagcnangaagcc19<210>403<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，10，12，17<223>n＝T或U<400>403cnaagcaacnanagaanac19<210>404<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，5，8，9，10，11，12<223>n＝T或U<400>404nccnngannnnncacagag19<210>405<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，5，9，10，18<223>n＝T或U<400>405anacnaacnnaaagcccng19<210>406<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，7，10，14，16，17，18<223>n＝T或U<400>406gggnngnagnaacncnnnc19<210>407<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，12，14，15，16<223>n＝T或U<400>407nagaacacaacncnnnggg19<210>408<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，8，9，10，17<223>n＝T或U<400>408cncngaannnccaaganac19<210>409<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，6，10，11，12，14，16<223>n＝T或U<400>409nnnacnggannnancncag19<210>410<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，5，9，15，18<223>n＝T或U<400>410ngagnaggngacagngcng19<210>411<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，10，11，12，14，18<223>n＝T或U<400>411ggaggcagnnnngngcang19<210>412<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，6，7，11，12，14，17，19<223>n＝T或U<400>412cnancnnccannanacncn19<210>413<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，5，6，8，9，12，14，15，16，18<223>n＝T或U<400>413nngnnngnngcngnnngnc19<210>414<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，5，6，8<223>n＝T或U<400>414nccnnncngagacaggcac19<210>415<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>18<223>n＝T或U<400>415accagcacgagcaagacnc19<210>416<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，7，10，11<223>n＝T或U<400>416accnngncanncacaccag19<210>417<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，7，9，16<223>n＝T或U<400>417nccagnnanccagcancag19<210>418<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，4，5，6，10，16，18<223>n＝T或U<400>418gcnnnngaanaggacngnc19<210>419<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，9，10，15，18<223>n＝T或U<400>419gagangncnncaacngcnc19<210>420<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，9，12，16<223>n＝T或U<400>420ggggnnagnccncgangaa19<210>421<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，5，9，13，15<223>n＝T或U<400>421ncanngcanaacngnaggg19<210>422<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，6，12，13，15，18<223>n＝T或U<400>422gcncnngccaanncngang19<210>423<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，9，15，18<223>n＝T或U<400>423acccnancnccaggnccna19<210>424<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>16<223>n＝T或U<400>424acaggcaaagcaggcnacc19<210>425<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，3，5，10，15，18<223>n＝T或U<400>425gnncngacanagcancanc19<210>426<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，8，9，10，12，19<223>n＝T或U<400>426cncagagnnncnagagaan19<210>427<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，5，7，10，11，17<223>n＝T或U<400>427angnncncanncgagcngc19<210>428<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，6，14，18<223>n＝T或U<400>428ngaacnggaacacnagang19<210>429<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，9，14<223>n＝T或U<400>429gcncaggcngaacnggaac19<210>430<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，7，10，13，14<223>n＝T或U<400>430nngacancancanngcgac19<210>431<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，19<223>n＝T或U<400>431accancacaacaaaagcan19<210>432<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，6，11，13，14，16<223>n＝T或U<400>432ccacnnggcangnncnacc19<210>433<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，4，6，14<223>n＝T或U<400>433ncgnancaagaacncacac19<210>434<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，7，12，13<223>n＝T或U<400>434ggnancngaagnngacaac19<210>435<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，5，6，8，13，16，18<223>n＝T或U<400>435nnncnncnccagnggnanc19<210>436<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，10，17<223>n＝T或U<400>436nncnccaggnccaaaanga19<210>437<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，9，10，12<223>n＝T或U<400>437acagcancnncngaagaac19<210>438<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7，9，11，12，15，18<223>n＝T或U<400>438cacaggngnanncancang19<210>439<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，8，10，12，13<223>n＝T或U<400>439ccaggncncnannaaagcc19<210>440<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，4，6，11，12，14<223>n＝T或U<400>440nncncnccagnngncagga19<210>441<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，8，16，18<223>n＝T或U<400>441gaagngcngacacaananc19<210>442<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，2，3，4，7，8，10，13，16，18<223>n＝T或U<400>442nnnnccnncnccnccncnc19<210>443<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，5，8，13，14，15，17，18<223>n＝T或U<400>443cancngangccannncnnc19<210>444<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，7，9，11，12，14，15<223>n＝T或U<400>444agccanncngnncnnccga19<210>445<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>7<223>n＝T或U<400>445ccagganaggaagcacaca19<210>446<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，5，7，11，15，16，18<223>n＝T或U<400>446anggnancaancagnncnc19<210>447<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，10，11，14，15，16<223>n＝T或U<400>447ccgcagcannnccnnnaac19<210>448<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，5，6，7，8，14，16，17<223>n＝T或U<400>448cagnnnnngaagangnngg19<210>449<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，11，18<223>n＝T或U<400>449gngacagaccngaaacanc19<210>450<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，7，8，9，11，12<223>n＝T或U<400>450gggcannnncnnagagaag19<210>451<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>3，8，9，12，13，15<223>n＝T或U<400>451agnacccnngannanaccc19<210>452<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>5，7，16<223>n＝T或U<400>452gaaangnacgaacagnacc19<210>453<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>1，9，12，15，16<223>n＝T或U<400>453ngaaaaacncanaannccc19<210>454<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>4，6，7，8，9<223>n＝T或U<400>454ccancnnnncagaaacaag19<210>455<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，4，7，8，10，12，17，18<223>n＝T或U<400>455cnanaanncncnccagnng19<210>456<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，6，7，11，17<223>n＝T或U<400>456cncccnnaggnacacanac19<210>457<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>9，15，18<223>n＝T或U<400>457acaagcagngacacnacnc19<210>458<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>2，6，9，14，17<223>n＝T或U<400>458gnaacnccngaaangangc19<210>459<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>8，13，17<223>n＝T或U<400>459caacaaanccagnaacncc19<210>460<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>基于人類。每個核堿基可以是核苷酸、脫氧核苷酸或核苷酸類似物的一部分<221>misc_特征<222>6，10，12，15<223>n＝T或U<400>460caccanaacncngangaac19權(quán)利要求1.長度達30個核堿基的基本上純的核堿基寡聚物，所述的核堿基寡聚物包含選自SEQIDNOs97，98，99，143，147，151，287，289和300-460中的序列的至少8個連續(xù)核堿基。2.權(quán)利要求1的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物基本上由選自SEQIDNOs97，98，99，143，147，151，287，289和300-460的序列組成。3.權(quán)利要求2中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由選自SEQIDNOs97，98，99，143，147，151，287，289和300-460的序列組成。4.權(quán)利要求1-3中任一項的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物是寡核苷酸。5.權(quán)利要求1-4中任一項的核堿基寡聚物，其中所述的寡核苷酸包括至少一個修飾鍵。6.權(quán)利要求5中的核堿基寡聚物，其中所述的修飾鍵選自硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、磷酸三酯、二硫代磷酸酯和磷酸硒酸酯鍵。7.權(quán)利要求1-6中任一項的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物包含至少一個修飾的糖部分。8.權(quán)利要求7中的核堿基寡聚物，其中所述的修飾的糖部分是2’-O-甲基基團或2’-O-甲氧乙基基團。9.權(quán)利要求1-8中任一項的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物包括至少一個修飾的核堿基。10.權(quán)利要求9中的核堿基寡聚物，其中所述的修飾過的核堿基是5-甲基胞嘧啶。11.權(quán)利要求1-10中任一項的核堿基寡聚物，其中所述核堿基寡聚物是嵌合的核堿基寡聚物。12.權(quán)利要求11中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物包括由硫代磷酸酯鍵連接的DNA殘基，所述的DNA殘基每一側(cè)連接有至少一個2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。13.權(quán)利要求12中的核堿基寡聚物，其中所述的DNA殘基每一側(cè)連接有至少3個2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。14.權(quán)利要求13中的核堿基寡聚物，其中所述DNA殘基每一側(cè)連接有4個2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。15.權(quán)利要求12-14中任一項的核堿基寡聚物，其中所述RNA殘基之間由硫代磷酸酯鍵相連接，并且所述RNA殘基通過硫代磷酸酯鍵與所述DNA殘基連接。16.權(quán)利要求11中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物包含由磷酸二酯鍵連接的DNA殘基，所述的DNA殘基每一側(cè)連接有至少兩個由硫代磷酸酯鍵連接的2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。17.權(quán)利要求16中的核堿基寡聚物，其中所述的DNA殘基每一側(cè)連接有至少3個2’-O-甲基或2’-O-甲氧乙基RNA殘基。18.包含11個每一側(cè)都連接4個2’-O-甲基RNA殘基的DNA殘基的核堿基寡聚物，所述的核堿基寡聚物由下列序列之一組成5’-AUUGGTTCCAATGTGUUCU-3’(SEQIDNO155)；5’-ACACGACCGCTAAGAAACA-3’(SEQIDNO16)；5’-ACAGGACTACCACTTGGAA-3’(SEQIDNO157)；5’-UGCCAGTGTTGATGCUGAA-3’(SEQIDNO27)；5’-GCUGAGTCTCCATATUGCC-3’(SEQIDNO141)；5’-UCGGGTATATGGTGTCUGA-3’(SEQIDNO41)；5’-AAGCACTGCACTTGGUCAC-3’(SEQIDNO47)；5’-CCGGCCCAAAACAAAGAAG-3’(SEQIDNO51)；5’-ACCCTGGATACCATTUAGC-3’(SEQIDNO63)；5’-UGUCAGTACATGTTGGCUC-3’(SEQIDNO161)；和5’-UGCACCCTGGATACCAUUU-3’(SEQIDNO151)，所述的殘基由硫代磷酸酯鍵連接。19.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO155的序列組成。20.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO16的序列組成。21.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述核堿基寡聚物由SEQIDNO157的序列組成。22.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO27的序列組成。23.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO141的序列組成。24.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO41的序列組成。25.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO47的序列組成。26.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO51的序列組成。27.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO63的序列組成。28.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO161的序列組成。29.權(quán)利要求18中的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物由SEQIDNO151的序列組成。30.權(quán)利要求1-29中任一項的核堿基寡聚物，其中所述的核堿基寡聚物抑制所述細胞中IAP的表達。31.增強動物細胞中程序性細胞死亡的方法，該方法包括在一定條件下給予所述動物權(quán)利要求1-29中任一項的核堿基寡聚物以便所述核堿基寡聚物抑制所述細胞中IAP的表達。32.權(quán)利要求31中的方法，其進一步包括給予所述動物化療劑。33.權(quán)利要求32中的方法，其中所述化療劑是細胞生長抑制劑。34.權(quán)利要求32中的方法，其中所述化療劑是細胞毒性劑。35.權(quán)利要求31-34中任一項的方法，其進一步包括給予所述動物化學致敏劑。36.權(quán)利要求31-35中任一項的方法，其進一步包括給予所述動物生物反應調(diào)節(jié)劑。37.權(quán)利要求31-36中任一項的方法，其中所述的核堿基寡聚物通過靜脈或腫瘤內(nèi)施用于所述動物。38.權(quán)利要求31-37中任一項的方法，其中所述的動物是人類。39.治療患癌癥或淋巴組織增生性障礙的動物的方法，該方法包括給予所述動物治療有效量的權(quán)利要求1-30中任一項的核堿基寡聚物。40.權(quán)利要求39中的方法，其中所述的癌癥是急性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病、急性原粒細胞白血病、急性早幼粒細胞白血病、急性骨髓單核細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性紅白血病、慢性白血病、慢性骨髓細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、慢性淋巴細胞白血病、真性紅細胞增多癥、淋巴瘤、何杰金氏病、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、頸癌、子宮癌、睪丸癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜細胞瘤、松果體瘤、成血管細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤、黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤或視網(wǎng)膜母細胞瘤。41.權(quán)利要求39或40中的方法，其進一步包括給予所述動物化療劑。42.權(quán)利要求41中的方法，其中所述的核堿基寡聚物和所述的化療劑各自在5天內(nèi)給予所述動物。43.權(quán)利要求42中的方法，其中所述的核堿基寡聚物和所述的化療劑各自在24小時內(nèi)給予所述動物。44.權(quán)利要求41-43中任一項的方法，其中所述的化療劑選自由阿霉素、長春烯堿、依托泊甙、紫杉醇和順鉑組成的組。45.權(quán)利要求41中的方法，其中所述化療劑是細胞生長抑制劑。46.權(quán)利要求41中的方法，其中所述化療劑是細胞毒性劑。47.權(quán)利要求39-46中任一項的方法，其進一步包括給予所述動物化學致敏劑。48.權(quán)利要求39-47中任一項的方法，其進一步包括給予所述動物生物反應調(diào)節(jié)劑。49.權(quán)利要求39-48中任一項的方法，其中所述的核堿基寡聚物通過靜脈或腫瘤內(nèi)施用給所述動物。50.權(quán)利要求39-49中任一項的方法，其中所述的動物是人類。51.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-30中任一項的核堿基寡聚物和藥學可接受的載體。52.權(quán)利要求51中的藥物組合物，其進一步包括膠體分散系統(tǒng)。53.能夠剪切XIAP、HIAP1或HIAP2mRNA的催化性RNA分子。54.權(quán)利要求53中的催化性RNA分子，其結(jié)合臂包含對應于表1，2，6和7中任意一個序列的至少8個連續(xù)的核堿基。55.權(quán)利要求53或54中的催化性RNA分子，其中所述的RNA分子為錘頭狀基序。56.權(quán)利要求53或54中的催化性RNA分子，其中所述的RNA分子位于發(fā)夾結(jié)構(gòu)、肝炎δ病毒、組1內(nèi)含子、VSRNA或RNA酶PRNA基序中。57.一種表達載體，其包括編碼權(quán)利要求53-56中任一項的一種或多種催化性RNA分子并且位置適當?shù)暮怂幔糜谠诓溉閯游锛毎斜磉_。58.治療患癌癥或淋巴組織增生性障礙的動物的方法，該方法包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求53-56中任一項的催化性RNA分子。59.由21至29個核堿基組成的雙鏈RNA分子，所述的RNA分子包括與表1，2，6和7中任一序列相應的至少8個連續(xù)的核堿基。60.由50至70個核堿基組成的雙鏈發(fā)夾式RNA分子，所述的RNA分子包含21至29個核堿基的第一結(jié)構(gòu)域，所述核堿基包括對應于表1，2，6和7中任一序列的至少8個連續(xù)的核堿基；與所述的第一結(jié)構(gòu)域互補的第二結(jié)構(gòu)域，以及位于所述第一和第二結(jié)構(gòu)域之間的環(huán)形結(jié)構(gòu)域，以便所述第一結(jié)構(gòu)域和所述第二結(jié)構(gòu)域能夠復合形成所述雙鏈發(fā)夾式RNA分子。61.表達載體，其包括編碼權(quán)利要求60中的雙鏈RNA分子并且位置適當?shù)暮怂岱肿?，用于在哺乳動物細胞中表達。62.治療患癌癥或淋巴組織增生性障礙的動物的方法，該方法包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求59或60中的雙鏈RNA分子。63.由選自SEQIDNO97，98，99，143，147，151，287，289和300-460中的序列組成的寡核苷酸。全文摘要本發(fā)明涉及與IAP多核苷酸雜交的核堿基寡聚物以及應用它們來增強程序性細胞死亡和治療增殖性疾病的方法。文檔編號A61K31/337GK1656222SQ03812424公開日2005年8月17日申請日期2003年3月27日優(yōu)先權(quán)日2002年3月27日發(fā)明者E·拉卡斯,D·麥克馬努斯,J·P·杜爾金申請人:艾格拉治療公司