專(zhuān)利名稱(chēng)：蛋白酶抑制劑樣品采集系統(tǒng)的制作方法
本申請(qǐng)要求申請(qǐng)日為2002年5月13日的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)流水號(hào)60/379,399的優(yōu)先權(quán)。
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于直接從患者體內(nèi)采集和穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是采集全血樣品的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及其中裝有穩(wěn)定添加劑的樣品采集容器，用于在采集生物學(xué)樣品時(shí)立即穩(wěn)定蛋白酶，并且用于在樣品保存期間抑制蛋白降解和/或分解。
本發(fā)明背景在臨床診斷措施中，經(jīng)常需要在各種容器或試管中采集諸如全血，紅血細(xì)胞濃縮物，血小板濃縮物，白細(xì)胞濃縮物，組織，骨髓吸出物，血漿，血清，腦脊液，糞便，尿液，培養(yǎng)的細(xì)胞，唾液，口腔分泌物，和鼻腔分泌物等的生物學(xué)樣品，以便隨后進(jìn)行測(cè)試和分析。通常，所述樣品隨后必須轉(zhuǎn)移到不同的地方，如實(shí)驗(yàn)室，在這里，由員工對(duì)所述樣品進(jìn)行特定測(cè)試。
一般，在獲得樣品和對(duì)它進(jìn)行分析之間具有很大的時(shí)間跨度。因此，常見(jiàn)的和重復(fù)發(fā)生的問(wèn)題是，以合適的方式保持所述生物學(xué)樣品，以便在作為測(cè)試樣本對(duì)所述生物學(xué)樣品進(jìn)行分析之前，防止在操作和/或制備期間重要材料的降解、改變或分解。所有細(xì)胞都包括多種蛋白酶，并且只要所述細(xì)胞是完整的，這些蛋白酶就不會(huì)破壞細(xì)胞成分。不過(guò)，一旦細(xì)胞被冷凍，破壞或分裂，蛋白酶就開(kāi)始與細(xì)胞蛋白發(fā)生非專(zhuān)一性反應(yīng)，從而很快降解細(xì)胞蛋白。在蛋白分離中，這有可能導(dǎo)致降解的或分解的蛋白。這還有可能導(dǎo)致在生物學(xué)樣品的儲(chǔ)存和運(yùn)輸期間蛋白水平的下降，從而限制了測(cè)試方法的靈敏度。因此，蛋白產(chǎn)量可能急劇降低，并且可能不利于所有進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，例如，蛋白定量，蛋白的2-D凝膠作圖，藥物開(kāi)發(fā)，Western印跡，報(bào)道基因分析，免疫沉淀，表位標(biāo)記，特殊蛋白活性測(cè)定等。
很久以前就已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，在將體液樣品作為測(cè)試樣本進(jìn)行分析之前，必須在操作和/或制備期間對(duì)所述樣品進(jìn)行保持和保護(hù)。為了在制備階段保持測(cè)試樣品的細(xì)胞級(jí)份或非細(xì)胞成分的穩(wěn)定性，業(yè)已開(kāi)發(fā)了多種不同的組合物。例如，所述組合物包括使用諸如ATP的水溶性磷酸鹽，以及螯合劑保存完整細(xì)胞和細(xì)胞成分(公開(kāi)號(hào)EP 431385-A)；將酸，抗細(xì)菌藥物，和含氟化合物組合用于穩(wěn)定尿液中的細(xì)胞(日本專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)05249104-A)；將乙醇，脂族二醇和聚乙二醇的水溶液用于保護(hù)細(xì)胞和血液成分(日本專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)03295465-A)；用于生物學(xué)測(cè)定的試劑組合物，它包括可還原的水溶性三價(jià)鈷復(fù)合物，可金屬絡(luò)合染料，和水溶性聚合物(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,171,669)；用于測(cè)定尿液樣品中的尿膽素原的穩(wěn)定性控制溶液(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,677,075和4,703,013)；將含有磷酸緩沖液，白蛋白，甘氨酸，和半胱氨酸的水溶液用于穩(wěn)定脫氫酶(德國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)DE2629808-A)；用于穩(wěn)定冷凍干燥蛋白組合物的緩沖液，丙氨酸和甘露糖醇的穩(wěn)定組合物(公開(kāi)號(hào)EP682944-A1)；以及將水溶液中的陽(yáng)離子聚電解質(zhì)和環(huán)polyiol用于穩(wěn)定蛋白，以防在干燥時(shí)變性(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,240,843)。業(yè)已商業(yè)化生產(chǎn)和銷(xiāo)售了多種穩(wěn)定制劑，著名的例子是在從動(dòng)物和植物組織中提取期間用于抑制蛋白酶的COMPLETED蛋白酶抑制劑混合物片劑。
盡管穩(wěn)定制劑和組合物業(yè)已開(kāi)發(fā)并且商業(yè)銷(xiāo)售，但其中的絕大多數(shù)因?yàn)樗鼈兊目捎眯院托Яκ鞘钟邢薜?，并且針?duì)特殊的臨床問(wèn)題和多種不同的臨床和分析措施，必須對(duì)它們進(jìn)行重大改進(jìn)和改變。例如，所述組合物不能夠穩(wěn)定樣品中的蛋白酶，因此不能保護(hù)生物學(xué)樣品中的敏感蛋白。
在血液采集領(lǐng)域，在離心將血液分離成細(xì)胞層之前，常用于血液樣品中的常見(jiàn)添加劑是抗凝固添加劑。通常，所述抗凝固添加劑是檸檬酸或肝素的緩沖水溶液。裝有抗凝固劑的血液采集試管是商業(yè)化生產(chǎn)和銷(xiāo)售的。在授予Smith等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,667,963中披露了這種試管的一種例子。
業(yè)已嘗試通過(guò)向樣品中添加EDTA和/或蛋白裂解抑制劑阻止肽的降解。例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,541,116披露了將兩種蛋白酶抑制劑anastatin和亮肽素與EDTA組合用于穩(wěn)定全血，血清或血漿樣品中的肽。不過(guò)，該專(zhuān)利披露了通過(guò)在獲得樣品之后或在采集之后被冷凍的樣品被解凍之后向所述樣品中添加適量的穩(wěn)定組合物。
另外，已知在某些實(shí)驗(yàn)室研究proteomics中，將蛋白酶抑制劑混合物人工吸入注射器，并且隨后注射到血液采集試管中。不過(guò)，這種方法是危險(xiǎn)的，因?yàn)橛锌赡馨l(fā)生針頭刺破損傷。另外，蛋白酶抑制劑混合物的體積會(huì)在不同技術(shù)人員之間發(fā)生波動(dòng)，這是因?yàn)閷⒌鞍酌敢种苿┗旌衔镅b載到所述試管中的人工方法所致。
蛋白酶抑制混合物，即蛋白酶抑制劑的組合的工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題同樣是重要的。首先，不同的公司和不同的研究人員將多種蛋白酶抑制劑導(dǎo)入采集的樣品，特別是血液或血液成分中。所述蛋白酶抑制劑以及它們的組合的效果和性能差異顯然還沒(méi)有進(jìn)行充分研究，因此，要想將一個(gè)研究者的分析結(jié)果與另一個(gè)研究者的分析結(jié)果關(guān)聯(lián)在一起是極其困難的。例如，對(duì)于業(yè)已導(dǎo)入了由Sigma-Aldrich公司提供的蛋白酶抑制劑混合物的血液來(lái)說(shuō)，2-D凝膠能夠提供特定類(lèi)型的信息，而對(duì)于導(dǎo)入了由Becton，Dickinson and Company或由Hoffmann-La Roche，Inc.提供的蛋白酶抑制劑混合物的血液來(lái)說(shuō)，能夠提供不同類(lèi)型的信息。另外，大部分蛋白酶抑制劑的毒性在中等毒性至劇毒性之間變化。目前，對(duì)這些毒素的潛在的接觸還沒(méi)有控制和/或限制，因此使保健和實(shí)驗(yàn)室工作者的安全受到威脅。
為了分離和純化蛋白，必須采取措施來(lái)抑制內(nèi)源蛋白酶。還必須采取會(huì)導(dǎo)致工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化的措施。因此，本行業(yè)對(duì)血液和其他生物學(xué)樣品的采集的改進(jìn)的方法和采集裝置一直存在需求，所述方法和裝置能夠保護(hù)出現(xiàn)在所述生物學(xué)樣品中的蛋白。
發(fā)明概述出人意料的是，現(xiàn)在業(yè)已發(fā)現(xiàn)，從患者體內(nèi)采集生物學(xué)樣品，并且將所述樣品導(dǎo)入裝有穩(wěn)定劑的容器中，能夠有效保持蛋白含量和組成。在立即要與生物學(xué)樣品接觸的采集裝置中添加穩(wěn)定劑，能明顯抑制蛋白的降解和/或分解，這種現(xiàn)象有可能出現(xiàn)在采集樣品的時(shí)間和添加穩(wěn)定劑的時(shí)間之間。其結(jié)果是，大大提高了完整蛋白的百分比。
因此，本發(fā)明涉及用于采集生物學(xué)樣品的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及采集容器并且涉及采集生物學(xué)樣品的方法，該方法包括讓所述樣品立即與穩(wěn)定添加劑接觸，以便抑制內(nèi)源蛋白酶，從而分離和純化蛋白。本發(fā)明的穩(wěn)定劑是合適的制劑，它能夠抑制，阻止或減少在生物學(xué)樣品儲(chǔ)存期間的蛋白降解和/或分解。
因此，本發(fā)明的主要方面是提供用于在存在能夠抑制內(nèi)源蛋白酶的穩(wěn)定劑的情況下直接從患者體內(nèi)采集生物學(xué)樣品的方法和裝置，以便分離和純化蛋白。所述穩(wěn)定添加劑是以能夠穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品并且抑制內(nèi)源蛋白酶的有效量添加的，以便分離和純化蛋白。理想的是，所述樣品是全血或血液成分；不過(guò)，所述樣品可以是任何含有蛋白的樣品。
本發(fā)明的一個(gè)方面是制備在室溫下能長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定的少有或沒(méi)有蛋白降解或分解的生物學(xué)樣品。因此，提供了用于在室溫下能長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定，在儲(chǔ)存期間少有或沒(méi)有蛋白降解或分解發(fā)生的生物學(xué)樣品的方法。
本發(fā)明的另一方面是提供用于抑制生物學(xué)樣品中的蛋白降解或分解的方法和裝置。
本發(fā)明的另一方面是提供用于接收和采集生物學(xué)樣品的采集容器，其中，所述容器事先用一定數(shù)量的穩(wěn)定劑進(jìn)行預(yù)先密封。所述穩(wěn)定劑能夠以任何形式，例如液體，液體或固體氣溶膠，小球，粉末或凝膠形式提供到所述容器的任意表面。
本發(fā)明的另一方面是提供用于在從患者體內(nèi)采集之后立即穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是全血或其成分的方法，以便在各種溫度下保存所述樣品時(shí)抑制或阻止蛋白的降解或分解。
本發(fā)明的另一方面是提供添加了有效量的穩(wěn)定劑的抽真空的容器，其中，所述容器的內(nèi)部壓力低到足以將預(yù)定體積的生物學(xué)樣品吸入該容器。
本發(fā)明的另一方面提供了血液采集容器，用于采集一定量的血液，并且用于在采集點(diǎn)將所述血液與穩(wěn)定劑混合，以便產(chǎn)生能阻制蛋白降解或分解的穩(wěn)定的血液樣品，從而能夠在隨后的時(shí)間對(duì)所述樣品中的蛋白進(jìn)行分離和純化。
通過(guò)提供用于采集生物學(xué)樣品的裝置，基本上實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的以上目的。所述裝置總體上包括一個(gè)容器，它包括至少一個(gè)內(nèi)壁，由它形成一個(gè)儲(chǔ)庫(kù)部分，用于容納一定體積的生物學(xué)樣品，并且包括至少一個(gè)與所述儲(chǔ)庫(kù)部分連通的開(kāi)口。所述容器包括至少一種穩(wěn)定劑，穩(wěn)定劑的用量能有效保護(hù)所述生物學(xué)樣品，并且阻止或抑制蛋白的降解或分解。在采集所述樣品之前，所述容器優(yōu)選用所述穩(wěn)定劑進(jìn)行預(yù)處理。
通過(guò)提供制備穩(wěn)定的生物學(xué)樣品的方法，還可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的所述目的，該方法包括提供樣品采集容器。理想的是，所述容器具有至少一個(gè)側(cè)壁和底部，形成一個(gè)內(nèi)部腔室，其中，該容器的內(nèi)部腔室包括至少一種穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑的使用量足以阻止或抑制蛋白的降解或分解，并且保護(hù)生物學(xué)樣品。獲得生物學(xué)樣品，并且將所述生物學(xué)樣品與所述穩(wěn)定劑混合，以便形成穩(wěn)定化的生物學(xué)樣品。在一種實(shí)施方案中，將所述樣品直接導(dǎo)入包括至少一種穩(wěn)定劑的容器中。
本發(fā)明的以上目的還可以通過(guò)提供采集和穩(wěn)定全血樣品的方法實(shí)現(xiàn)，該方法包括提供樣品采集容器，它具有至少一個(gè)側(cè)壁和底部，形成內(nèi)部腔室。該容器裝填了有效量的穩(wěn)定劑，以便穩(wěn)定全血樣品中的蛋白。所述內(nèi)部腔室中的壓力優(yōu)選低于大氣壓力。將來(lái)自患者的全血樣品直接采集到所述采集容器中，并且將所述血液樣品與所述穩(wěn)定劑混合，以便形成穩(wěn)定的全血樣品。當(dāng)所述生物學(xué)樣品被吸入到所述采集裝置中時(shí)，它能立即接觸所述穩(wěn)定劑，并且保護(hù)蛋白分析物的過(guò)程在導(dǎo)入樣品時(shí)立即開(kāi)始。
本發(fā)明的方法和采集裝置具有若干獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。該采集裝置的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種系統(tǒng)，優(yōu)選封閉系統(tǒng)，它包括所述穩(wěn)定劑，并且能夠保護(hù)所述樣品受到破壞。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以減少人工生產(chǎn)所述采集裝置的勞動(dòng)力。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是用常規(guī)生產(chǎn)線生產(chǎn)所述采集裝置，以便可以對(duì)所述產(chǎn)品實(shí)施質(zhì)量控制措施和方法。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是所述采集裝置的標(biāo)準(zhǔn)化，其中，目前還沒(méi)有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并且，本行業(yè)正在呼吁這樣的標(biāo)準(zhǔn)化。另外，通過(guò)保護(hù)能夠提高蛋白研究和分析的相關(guān)性，并且能夠以盡可能地接近活體狀態(tài)的狀態(tài)表征和研究蛋白。
通過(guò)本發(fā)明的以下詳細(xì)說(shuō)明，特別是結(jié)合附圖閱讀這些說(shuō)明，能夠更好地理解本發(fā)明的上述方面，優(yōu)點(diǎn)和其他潛在特征。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1是典型的血液采集管的透視圖。
圖2檢測(cè)板的透視圖。
圖3a是樣品采集組件的透視圖，而圖3b是所述樣品采集組件的剖視圖。
圖4是注射器的縱剖視圖。
圖5是注射器的另一種實(shí)施方案的縱剖視圖。
圖6a是導(dǎo)管組件的側(cè)視圖，而圖6b是所述導(dǎo)管的部分側(cè)視圖。
圖7是吸液管的透視圖。
圖8是表示血液采集袋的透視圖。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明盡管本發(fā)明能夠通過(guò)多種不同形式的實(shí)施方案實(shí)現(xiàn)，這里將詳細(xì)披露本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)將本說(shuō)明書(shū)視為本發(fā)明原理的典范，而不要將本發(fā)明局限于所示出的和說(shuō)明的實(shí)施方案。在不超出本發(fā)明構(gòu)思的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以進(jìn)行各種改變。本發(fā)明的范圍是由所附權(quán)利要求書(shū)及其等同物所確定的。
本發(fā)明涉及用于穩(wěn)定生物學(xué)樣品，以便能夠更好地分離和純化蛋白的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及用于在儲(chǔ)存期間抑制生物學(xué)樣品中蛋白降解和/或分解的方法和裝置。根據(jù)本發(fā)明，所述裝置包括裝有一定量的穩(wěn)定劑的容器，用于在采集所述樣品時(shí)立即與生物學(xué)樣品混合。另外，根據(jù)本發(fā)明，所述方法包括提供裝有穩(wěn)定劑的樣品采集容器，所述穩(wěn)定劑的量足以阻止或抑制蛋白的降解和/或分解，并且包括向所述容器中添加生物學(xué)樣品。
盡管本發(fā)明可以使用任何含有蛋白的生物學(xué)樣品，但優(yōu)選的生物學(xué)樣品是從患者體內(nèi)抽取的任何體液。最優(yōu)選的是，所述生物學(xué)樣品是全血或其成分。其他生物學(xué)樣品的例子包括含有細(xì)胞的組合物，如血液紅細(xì)胞濃縮物，血小板濃縮物，白細(xì)胞濃縮物，血漿，血清，尿液，骨髓吸出物，腦脊液，組織，細(xì)胞，糞便，唾液和口腔分泌液，鼻腔分泌物，和淋巴液等。
本發(fā)明的樣品采集系統(tǒng)可以包括任何采集裝置，這些裝置包括但不限于管子，如試管和離心管；封閉系統(tǒng)血液采集裝置，如采集袋；注射器，特別是預(yù)先填充的注射器；導(dǎo)管；微量滴定板和其他多孔平板；陣列；管類(lèi)；實(shí)驗(yàn)室容器，如燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶，小瓶，顯微鏡載玻片，顯微鏡載玻片組件，蓋玻片，薄膜和多孔基質(zhì)和組件；吸液管和吸液管頭等；組織和其他生物學(xué)樣品采集容器；以及任何其他適合容納生物學(xué)樣品的容器，以及與轉(zhuǎn)移樣品相關(guān)的容器和部件。在本發(fā)明的特別理想的方面，樣品采集管使用了具有用于分離血液成分的分離部件(例如，機(jī)械分離部件或凝膠)。在以上方面，所述管的內(nèi)部和/或所述分離部件的外部可以用所述穩(wěn)定劑處理。根據(jù)本發(fā)明，所述采集裝置裝有用于穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品的穩(wěn)定劑。
通常將塑料或玻璃用于生產(chǎn)本發(fā)明的采集裝置。用于生產(chǎn)所述采集裝置的某些優(yōu)選的材料包括聚丙烯，聚乙烯，聚乙二醇對(duì)苯二甲酸酯，聚苯乙烯，聚碳酸酯和纖維素制品。還可以使用更昂貴的塑料，如聚四氟乙烯和其他含氟的聚合物。除了上面所提到過(guò)的材料之外，用于本發(fā)明的采集裝置的其他合適材料的例子包括聚烯烴，聚酰胺，聚酯，硅酮，聚亞安酯，環(huán)氧樹(shù)脂類(lèi)，丙烯酸樹(shù)脂，聚丙烯酸酯，聚砜，聚甲基丙烯酸酯，PEEK，聚酰亞胺和含氟聚合物，如PTFE Teflon，F(xiàn)EP Teflon，Tefzel，聚偏二氟乙烯，PVDF和全氟烷氧基樹(shù)脂。包括硅玻璃的玻璃制品也可用于生產(chǎn)所述采集裝置。一種典型的玻璃制品是PYREX(由Corning Glass公司提供，Corning，New York)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，可以使用陶瓷采集裝置。還可以將諸如紙和強(qiáng)化紙容器的纖維素制品用于生產(chǎn)本發(fā)明的采集裝置。
本發(fā)明的穩(wěn)定劑是能夠在生物學(xué)樣品儲(chǔ)存期間抑制蛋白酶(即蛋白酶)活性和蛋白降解的合適的制劑。所述制劑能穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品，如血液樣品，以便生產(chǎn)穩(wěn)定的組合物，它能抑制或阻止存在于所述生物學(xué)樣品中的蛋白的降解和/或分解。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方案，所述采集裝置是用所述穩(wěn)定劑預(yù)處理過(guò)的，優(yōu)選是由生產(chǎn)者預(yù)處理的，并且以可直接使用的形式包裝。通常，對(duì)包裝的采集裝置進(jìn)行消毒，并且同樣是用無(wú)菌包裝材料包裝的。
本發(fā)明可以被醫(yī)藥公司，生物技術(shù)公司，合同研究機(jī)構(gòu)，大學(xué)研究人員，研究醫(yī)院和對(duì)研究蛋白感興趣的任何學(xué)院或個(gè)人所采用。本發(fā)明使得研究者能夠方便地和容易地保護(hù)并且處理蛋白樣品，以便進(jìn)行下游的分析。本發(fā)明的采集裝置可以作為前端樣品采集裝置，它針對(duì)的分析目標(biāo)包括，但不局限于以下所列蛋白庫(kù)，蛋白識(shí)別和表征，蛋白表達(dá)，蛋白定量，蛋白-蛋白相互作用，蛋白功能分析的開(kāi)發(fā)，蛋白目標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證，預(yù)測(cè)性毒理學(xué)，測(cè)定藥物作用，藥物驗(yàn)證，3-D蛋白結(jié)構(gòu)分析和計(jì)算機(jī)模擬。
穩(wěn)定劑優(yōu)選包括或由至少一種蛋白酶抑制劑組成。合適的例子包括，但不局限于蛋白酶抑制劑，如絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，和外肽酶等的抑制劑。其中，特別感興趣的是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制劑，金屬蛋白酶抑制劑也是重要的。絲氨酸蛋白酶抑制劑的非限定性例子包括抗痛素，抑肽酶，抑糜酶素，彈性蛋白酶抑制劑，氟代苯甲基磺酰(PMSF)，APMSF，TLCK，TPCK，亮肽素和大豆胰蛋白酶抑制劑。例如半胱氨酸蛋白酶的抑制劑包括，IAA(吲哚乙酸)和E-64。天冬氨酸蛋白酶抑制劑的合適的例子包括抑胃肽和VdLPFFVdL。金屬蛋白酶抑制劑的非限定性例子包括EDTA，以及1，10-二氮雜菲和膦酰二肽(phosphoramodon)。例如，外肽酶的抑制劑包括抑氨肽酶素，苯丁抑制素，雙肌球吸附蛋白(diprotin)A和雙肌球吸附蛋白B。蛋白酶抑制劑的其他合適的例子包括α-2-巨球蛋白，大豆或利馬豆胰蛋白酶抑制劑，胰蛋白酶抑制劑，卵白抑制素(ovostatin)和卵白半胱氨酸蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的組合通常被所述抑制劑的商業(yè)提供者稱(chēng)作″蛋白酶抑制劑混合物″，還可以將其用作穩(wěn)定劑。所述″蛋白酶抑制混合物″一般是有利的，即它們能提供對(duì)多種感興趣的蛋白的穩(wěn)定作用；因此，含有兩種以上蛋白酶抑制劑的穩(wěn)定劑一般是理想的。
所述穩(wěn)定劑可以是任何合適形式的，包括，但不局限于溶液，懸浮液或其他液體，丸，片劑，膠囊，噴霧干燥材料，冷凍干燥材料，粉末，顆粒，凝膠，結(jié)晶或低溫干燥材料。由于很多蛋白酶抑制劑的半衰期很短，優(yōu)選將所述穩(wěn)定劑以這種形式導(dǎo)入所述采集裝置，以便能夠優(yōu)化所述蛋白酶抑制劑的貨架壽命。冷凍干燥似乎是特別有用的，因?yàn)樗峁┝肆己玫姆€(wěn)定性，并且還能夠進(jìn)行隨后的消毒，這兩個(gè)條件從自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化角度考慮都是重要的。
所述穩(wěn)定劑可位于所述采集裝置的任何表面上。所述穩(wěn)定劑還可以位于用于封閉所述裝置的塞子和密封裝置上，或位于放置在所述裝置中的機(jī)械，或其他插入部件上。所述穩(wěn)定劑優(yōu)選位于所述采集裝置的至少一種內(nèi)壁的任意地方，或位于所述儲(chǔ)庫(kù)部分內(nèi)的任何地方。另外，某些蛋白酶抑制劑具有光敏感性。因此，需要對(duì)所述穩(wěn)定劑實(shí)施蔽光。對(duì)于這樣的抑制劑來(lái)說(shuō)，使用不透明的試管，例如，琥珀色試管是有利的。另外，將所述穩(wěn)定劑放入膠囊，例如以粉末形式放入膠囊，并且防止它接觸光照，然后將所述膠囊放入試管也可以解決這一問(wèn)題。將所述制劑膠囊化還可以避免容器內(nèi)的制劑和其他成分的其他不希望的相互作用。在樣品采集時(shí)能溶解的膠囊材料為本領(lǐng)域所熟知。
可以通過(guò)多種方法中的任意一種將所述穩(wěn)定劑涂在所述采集裝置上。例如，可以在所述采集裝置的內(nèi)壁的表面上對(duì)所述穩(wěn)定劑進(jìn)行噴霧干燥，疏松地分配或冷凍干燥。另外，例如，凝膠或液體形式的穩(wěn)定劑可以放入所述采集裝置的儲(chǔ)庫(kù)部分。為所述采集裝置提供穩(wěn)定劑的其他方法也是可行的。通常，為了將需要數(shù)量的穩(wěn)定劑放入容器，人們重建固體形式的穩(wěn)定劑，然后將合適數(shù)量的液體分配到所述容器中。可以將所述液體噴霧干燥，沉積到所述容器的底部或者隨后冷凍干燥。
穩(wěn)定劑的量和位置是由若干種變量確定的，包括使用形式，所使用的特定穩(wěn)定劑，采集裝置的內(nèi)部體積和內(nèi)部壓力，以及被吸入該容器中的生物學(xué)樣品的體積。
所述穩(wěn)定劑的濃度足以穩(wěn)定所述蛋白酶，并且阻止蛋白降解。每毫升樣本中穩(wěn)定劑的濃度取決于所使用的特定穩(wěn)定劑，為大約1-200μM，0.1-10mM或0.6-25μg。
表I提供了合適蛋白酶抑制劑的非限定性例子，以及可以用作穩(wěn)定劑的每毫升樣本中它們的合適的濃度范圍。
表I
可用于本發(fā)明的穩(wěn)定劑還包括以下化合物表II
除了所述穩(wěn)定劑之外，本發(fā)明的裝置還可以包括載體介質(zhì)(例如，水或醇)，穩(wěn)定介質(zhì)(例如，聚乙烯吡咯烷酮，海藻糖甘露糖醇，等)和/或一種或多種用于處理所述生物學(xué)樣品的其他添加劑。合適的添加劑包括，但不局限于苯酚，苯酚/氯仿混合物，醇，醛，酮，有機(jī)酸，有機(jī)酸鹽，鹵酸的堿金屬鹽，有機(jī)螯合劑，熒光染料，抗體，結(jié)合劑，抗凝固劑，如檸檬酸鈉，肝素，和EDTA鉀等，以及通常被用于處理分析的生物學(xué)樣品的任何其他制劑或制劑的組合。其他潛在的添加劑包括抗氧化劑和還原劑，它們有助于保護(hù)蛋白的證實(shí)，例如巰基基團(tuán)結(jié)合。包括緩沖劑也可能是有利的。所述載體和添加劑優(yōu)選不會(huì)降解蛋白。當(dāng)所述穩(wěn)定劑是片劑形式時(shí)，如果需要的話，可以包括本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的藥物片劑崩解材料。
本發(fā)明的方法包括獲得生物學(xué)樣品，以及將所述生物學(xué)樣品導(dǎo)入裝有所述穩(wěn)定劑的容器。在優(yōu)選實(shí)施方案中，將所述生物學(xué)樣品直接從患者吸入到采集容器，而沒(méi)有任何中間處理步驟。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，直接從患者體內(nèi)采集生物學(xué)樣品，如在采集全血樣品，并且將所述樣品直接導(dǎo)入裝有所述穩(wěn)定劑的容器時(shí)，基本上能阻止蛋白的降解和/或分解，否則有可能在樣品與所述穩(wěn)定劑混合之前的保存期間發(fā)生降解或分解。本發(fā)明的方法可用于開(kāi)放的采集系統(tǒng)和封閉的采集系統(tǒng)，其中，所述開(kāi)口是通過(guò)密封裝置封閉的。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置被用于直接從患者體內(nèi)抽取全血樣品，以便在采集點(diǎn)立即穩(wěn)定所述蛋白。該裝置可以是用于采集血液的抽真空系統(tǒng)。或者，該裝置可以是用于采集血液的部分抽真空的或非抽真空的系統(tǒng)。抽真空系統(tǒng)的合適的例子是封閉的試管。手工注射器抽取是部分抽真空和非抽真空系統(tǒng)的合適的例子。非抽真空系統(tǒng)還可以包括自動(dòng)抽吸系統(tǒng)。抽真空系統(tǒng)是特別優(yōu)選的。
參見(jiàn)附圖，其中，類(lèi)似的附圖標(biāo)記表示若干個(gè)附圖中類(lèi)似的部件，圖1表示典型的血液采集裝置10，它包括形成內(nèi)部腔室14的容器12。在所示出的實(shí)施方案中，容器12是中空的管，它具有側(cè)壁16，封閉的下端18和開(kāi)口的上端20。選擇性地在容器腔室14中提供分離部件13。分離部件13發(fā)揮協(xié)助分離所述樣品成分的作用，例如，通過(guò)離心分離。容器12的尺寸適合采集合適體積的生物學(xué)流體，優(yōu)選血液。在需要消毒制品時(shí)，用于覆蓋開(kāi)口端20以便封閉容器12的密封裝置22是必要的。對(duì)于常規(guī)試管來(lái)說(shuō)，螺紋蓋子通常就足夠了。對(duì)于抽真空的采集管來(lái)說(shuō)，通常采用氣密性彈性體柱塞，以便在需要的儲(chǔ)存時(shí)間內(nèi)保存所述真空。密封裝置22優(yōu)選形成能夠有效密封容器12并且將生物學(xué)樣品保持在腔室14中的密封。密封裝置22可以是多種形式中的任意一種，包括，但不局限于橡膠密封裝置，HEMOGUARD密封裝置，金屬密封裝置，金屬結(jié)合的橡膠密封裝置以及具有不同聚合物和設(shè)計(jì)的密封裝置?？梢栽诿芊庋b置22上覆蓋保護(hù)性護(hù)罩24，容器12還裝有本發(fā)明的穩(wěn)定劑。
容器12可以用玻璃，塑料，或其他合適材料制成。容器12優(yōu)選是透明的。用于容器12的合適的透明熱塑性材料的非限定性例子包括聚碳酸酯，聚乙烯，聚丙烯和聚乙二醇對(duì)苯二甲酸酯。塑性材料可以是氧氣不可滲透的材料或可以包括氧氣不可滲透的或半滲透的層。另外，容器12可以用水和空氣可滲透的塑料材料制成?？梢杂萌魏魏线m的方式將所述穩(wěn)定劑提供給所述容器。在一方面，所述穩(wěn)定劑是液體溶液，并且被放入所述容器。然后，可以通過(guò)本領(lǐng)域所公知的方法對(duì)所述溶液進(jìn)行低溫干燥，例如，冷凍干燥。例如，通過(guò)冷凍所述溶液，然后在冷凍之后緩慢加熱，同時(shí)施加真空，冷凍干燥的粉末留在所述采集管中。在冷凍干燥之前，還可以將添加劑，如賦形劑，例如，PVP或海藻糖添加到所述穩(wěn)定劑溶液中，以便所得到的穩(wěn)定劑能夠在所述容器中形成顆粒。在添加所述穩(wěn)定溶液之后，還可以使用真空干燥。在另一方面，將所述穩(wěn)定劑制成液體或固體氣溶膠，并且噴灑在所述容器內(nèi)部的一個(gè)或多個(gè)表面上。
選擇腔室14的壓力，以便將預(yù)定體積的生物學(xué)樣品吸入腔室14。密封裝置22優(yōu)選是用彈性材料制成，它能夠保持大氣壓力和低于大氣壓力的之間的內(nèi)部壓力差。正如本領(lǐng)域所公知的，密封裝置22是這樣的，它可以用針頭26或其他導(dǎo)管刺破，以便將生物學(xué)樣品導(dǎo)入容器12。密封裝置22優(yōu)選是可以再密封的。例如，密封裝置22的合適材料包括硅酮橡膠，天然橡膠，丁苯橡膠，乙烯-丙烯共聚物和聚氯丁烯。
容器12的合適的例子包括單壁和多層管。合適的容器12的更具體的例子披露于授予Cohen的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,860,937中，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。
本發(fā)明裝置的有用的生產(chǎn)方法包括獲得采集容器；向所述容器中添加至少一種蛋白酶抑制劑；冷凍干燥所述至少一種蛋白酶抑制劑；對(duì)所述容器抽真空；和對(duì)所述容器進(jìn)行消毒?？梢詫⑺鲋辽僖环N蛋白酶抑制劑以溶液形式分配到所述容器中。在將所述蛋白酶抑制劑添加到所述采集容器中之后，如果必要的話可以將分離部件添加在該容器上。合適的冷凍干燥/抽真空方法的一種例子如下在溫度大約-40℃，壓力大約760mm的條件下冷凍所述容器大約6-8小時(shí)；在溫度從-40℃上升到大約25℃，在大約0.05mm的壓力下對(duì)所述容器進(jìn)行干燥大約8-10小時(shí)，以及隨后在大約25℃的溫度和大約120mm的壓力下對(duì)所述容器抽真空大約0.1小時(shí)。所述消毒技術(shù)優(yōu)選是采用鈷60輻射。
正如所指出的，容器12還可以裝有凝膠，機(jī)械或其他分離部件(例如濾紙等)。在這種情況下，所述穩(wěn)定劑可以是在所述分離介質(zhì)的外表面上噴霧干燥和/或低溫干燥的。容器12還可以是用于血漿分離的采集裝置。除了穩(wěn)定劑之外，所述采集裝置包括用于從人或動(dòng)物全血中分離血漿的部件。用于從全血中分離血漿的部件可以是諸如凝膠制劑或機(jī)械介質(zhì)的分離部件。所述凝膠優(yōu)選是觸變聚合凝膠制劑。所述凝膠可以是均聚物或共聚物，并且可以包括硅酮-型凝膠，如聚硅氧烷或有機(jī)烴-型凝膠，例如，聚丙烯酸樹(shù)脂，聚酯，聚烯烴，氧化順聚丁二烯，聚丁烯，環(huán)氧化大豆油和氯代烴類(lèi)的混合物，二酸和丙二醇的共聚物，氫化環(huán)戊二烯和α-烯烴與二烷基馬來(lái)酸酯的共聚物。所述凝膠優(yōu)選通過(guò)發(fā)揮密封分離介質(zhì)的作用將試管中的血液樣品的細(xì)胞與血漿分離。合適的血漿制備試管的例子披露于授予Carroll等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,906,744中，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。這樣，能夠在離心之前，期間和之后提供穩(wěn)定作用，以便從血液中分離血漿。對(duì)于凝膠分離材料來(lái)說(shuō)，可能希望提供穩(wěn)定制劑和凝聚之間的物理/化學(xué)分離，例如，使用上文所討論的膠囊。例如，如果將所述試劑的一部分摻入凝膠或與凝膠起反應(yīng)，可能降低所述制劑的效果。由于相同的原因，在使用機(jī)械分離部件時(shí)，該部件優(yōu)選基本上對(duì)所述穩(wěn)定劑是惰性的，并且這體現(xiàn)了所述離析器的一個(gè)重要優(yōu)點(diǎn)。在血漿試管中提供分離部件，與沒(méi)有分離部件的離心相比是特別有利的。具體地講，由于細(xì)胞裂解釋放了能降解感興趣的蛋白的蛋白酶，所述細(xì)胞(即凝固的血液)和血漿之間的分離越好，所述血漿樣品中蛋白的穩(wěn)定性就越好。例如有用的機(jī)械離析器披露于以下美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,516,953；6,406,671；6,409,528；和6,497,325中，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容被以整體形式收作本文參考。
容器12還可以是一種采集管，用于從全血樣品的較重的相離心分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，除了所述穩(wěn)定劑之外，它還包括液體密度梯度介質(zhì)，和用于在離心之前防止所述液體密度梯度介質(zhì)與血液樣品混合的裝置。合適的淋巴細(xì)胞/單核細(xì)胞采集管的例子披露于授予Luderer等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,053,134中，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。
適用于本發(fā)明的其他可以通過(guò)商業(yè)渠道獲得的血液采集試管包括以下均由Becton，Dickinson and Company(Franklin Lakes，NewJersey)出售的試管，所有的注冊(cè)和商標(biāo)都屬于Becton，Dickinson和CompanyVACUTAINER血液學(xué)試管，目錄號(hào)367650-1，367661，6405，6385，6564，367653，367665，367658，367669，6450-8，6535-37和367662；VACUTAINERK2EDTA試管，目錄號(hào)367841-2，367856和367861；VACUTAINER PST試管，目錄號(hào)367793-4，6698，6595和6672；VACUTAINER CPT試管，目錄號(hào)362753和362760-1；VACUTAINERSST試管，目錄號(hào)367782-89，6509-17和6590-92；和VACUTAINER ACD試管，目錄號(hào)367756，364012和4816。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有至少兩個(gè)容器的試劑盒，包括一種或多種穩(wěn)定劑。例如，所述試劑盒可以包括一個(gè)主采集管，例如，其中具有分離部件的血漿分離管，和輔助管，用于測(cè)試，例如，將采集到的血漿注入或以其他方式分配進(jìn)去。在這兩種容器里面都具有穩(wěn)定劑，以便確保感興趣的蛋白在整個(gè)過(guò)程中保持穩(wěn)定。所述試劑盒可選擇性地包括從試管到試管的轉(zhuǎn)移裝置，以便避免對(duì)傾倒或其他不安全的轉(zhuǎn)移措施的需要，在這種情況下，所述輔助管具有較低的壓力，以便吸入血漿。使用這種試劑盒的人可以將樣品采集到所述主要管中，離心，將感興趣的樣品轉(zhuǎn)移到輔助檢測(cè)管中，并且進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)需要進(jìn)行的檢測(cè)，所述輔助檢測(cè)管可以具有多種尺寸。
在另一種實(shí)施方案中，所述容器是具有兩個(gè)開(kāi)口端的，在它上面具有密封裝置的管。這種管允許人們?nèi)樱?，?duì)于具有分離部件的血漿分離管來(lái)說(shuō)，采集所述血漿樣品或所述凝固樣品。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置包括檢測(cè)板，例如，單孔或多孔平板，微量滴定板，或組織培養(yǎng)平板等。典型的檢測(cè)平板通常包括一個(gè)或多個(gè)孔，這些孔優(yōu)選是圓柱形的。如圖2所示，檢測(cè)板30包括上表面32和下表面34。檢測(cè)板30還包括多個(gè)孔36，每個(gè)孔包括從所述平板的上表面32延伸到所述平板的下表面34的側(cè)壁38。每一個(gè)孔包括一個(gè)頂部40和底部44。頂部40包括延伸到底部44的開(kāi)口端42，它包括閉合端46。底部44可以是扁平的，錐形的(有尖頭的)或圓形的。每個(gè)孔36的容量通常在若干毫升(ml)到少于大約0.5ml范圍內(nèi)?？?6中可分別容納本發(fā)明的穩(wěn)定劑。
檢測(cè)板30上的孔36的數(shù)量是不重要的。可以存在任何數(shù)量的孔，不過(guò)六，十二，二十四，四十八，和九十六孔測(cè)試平板是普遍公知的和可以獲得的。在圖2中示出了六孔檢測(cè)平板，這僅僅是出于舉例目的，本發(fā)明不取決于孔的數(shù)量。大部分標(biāo)準(zhǔn)多孔平板具有排列成矩形行和列的孔，以便能夠清楚地識(shí)別被使用的每一個(gè)孔。當(dāng)然，這些孔在檢測(cè)板30上的排列不是本發(fā)明的重要限制，因?yàn)楸景l(fā)明包括任何孔的排列。
檢測(cè)板30可以通過(guò)真空成型，片材模制，注?；蚱渌?lèi)似技術(shù)用熱塑性材料制成。合適的熱塑性材料包括，但不局限于聚苯乙烯，聚氯乙烯，聚碳酸酯，和聚乙二醇對(duì)苯二甲酸酯等。優(yōu)選的是，平板30是透明的。
環(huán)繞所述孔并且構(gòu)成檢測(cè)板30的外部邊緣的是側(cè)壁38。在本實(shí)施方案中，檢測(cè)板30具有六個(gè)側(cè)壁。眾所周知的檢測(cè)板是矩形的或四邊形的，不過(guò)，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，所述檢測(cè)板可以用任何實(shí)用的形狀生產(chǎn)。包括多個(gè)孔的合適的檢測(cè)板的例子披露于以下專(zhuān)利文獻(xiàn)中授予Tyndorf等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,882,922，授予Henderson的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,801,055和授予Brian等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,681,743，每一份文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置可以是用于采集，轉(zhuǎn)移和分配生物學(xué)樣品的樣品采集組件。該采集組件一般包括多個(gè)用于采集不同生物學(xué)樣品的樣品孔。所述樣品孔沿空間上隔離的方向支撐在樣品盤(pán)中。所述樣品盤(pán)可以支撐在殼體內(nèi)，由該殼體封閉所述樣品盤(pán)，并且可以對(duì)所述樣品孔進(jìn)行安全和有效的運(yùn)輸。將所述樣品盤(pán)可移動(dòng)地容納在所述殼體內(nèi)，以便在封閉多個(gè)樣品孔的第一位置和能夠從外部接觸所述樣品孔之一，以便可以從所述樣品盤(pán)中手工分配所述樣品的第二位置之間運(yùn)動(dòng)。
如圖3a和3b所示，樣品盤(pán)50包括多個(gè)縱向間隔的凹陷，形成樣品采集孔52。樣品盤(pán)50可以用適合的可變形塑料材料制成。孔52具有底部54和開(kāi)口端56。可以認(rèn)為，所述樣品孔可以是開(kāi)口端杯狀部件形式的。將孔52制成具有足夠的深度，以便保持合適體積的生物學(xué)樣品。孔52中可以分別容納本發(fā)明的穩(wěn)定劑。盡管所示出的本發(fā)明的盤(pán)50具有在它上面形成的單排孔52。本發(fā)明涉及以特定測(cè)試場(chǎng)合所需要的任何數(shù)量或任何排列提供的孔。所述樣品采集組件可以包括樣品采集殼體57。在將生物學(xué)樣品采集到孔52中時(shí)，可以將樣品盤(pán)50插入樣品采集殼體57的開(kāi)口端58，然后位于樣品采集殼體57的內(nèi)部59，直到所有的孔52被封閉在里面。在授予Rainen的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,357,583 B1中披露了合適的樣品采集組件，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。
如圖4所示，根據(jù)本發(fā)明的另一種實(shí)施方案，所述采集裝置包括注射器，更優(yōu)選包括用本發(fā)明的穩(wěn)定劑預(yù)先填充的注射器。典型的注射器包括大體上為筒狀的管，它具有相對(duì)的近端和遠(yuǎn)端，在這兩端之間形成至少一個(gè)腔室，用于接納諸如生物學(xué)樣品的物質(zhì)。通常將一個(gè)柱塞可密封地放置在一個(gè)管內(nèi)，并且可以相對(duì)所述管移動(dòng)，并且可以將密封裝置可密封地放置在所述管的遠(yuǎn)端附近。參見(jiàn)圖4，圖4中示出了注射器60，它包括長(zhǎng)形管或筒62，具有開(kāi)口的近端64和遠(yuǎn)端66，具有至少一個(gè)在所述近端和遠(yuǎn)端之間形成的中空的腔室68，以便接納生物學(xué)樣品。在所示出的實(shí)施方案中，遠(yuǎn)端66包括針頭防護(hù)裝置70。所述針頭防護(hù)裝置能在儲(chǔ)存期間保護(hù)注射器，以及所述針頭無(wú)菌。
所述注射器的管包括穩(wěn)定劑。所述注射器的管優(yōu)選是用所述穩(wěn)定劑預(yù)先填充的。作為術(shù)語(yǔ)為本領(lǐng)域所公知的預(yù)先填充的注射器是由所述填充的生產(chǎn)商填充的注射器，并且運(yùn)輸給保健供應(yīng)商，可以直接使用。
可以將柱塞72放置在開(kāi)口的近端64。可以通過(guò)柱塞桿74移動(dòng)柱塞72，所述柱塞桿固定在所述柱塞上，例如，通過(guò)螺紋固定。在安裝所述柱塞的相同一端，所述管可以具有手指抓握部分76，它是按照所謂的保護(hù)帽蓋原理固定在所述管上的。手指抓握部76優(yōu)選由略具彈性的材料，例如塑料構(gòu)成。在另一種實(shí)施方案中(未示出)，所述手指抓握部是所述管的徑向向外突出的凸緣樣部分。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的其他結(jié)構(gòu)也是可行的。
可以將封閉所述管的塞子78放置在所述管的遠(yuǎn)離所述柱塞的末端。所述柱塞和所述塞子優(yōu)選是用彈性材料制成的，更優(yōu)選是用具有藥用品質(zhì)的橡膠制成的。
在所述實(shí)施方案中，通過(guò)針頭固定器82將注射針頭80固定在針管上。針頭固定器具有頸部84，由它固定所述針頭，軸86和軸環(huán)88。針頭固定器優(yōu)選是用略具彈性的材料制成的，例如，用塑料制成，它能夠承受變形，并且通過(guò)保護(hù)帽蓋結(jié)構(gòu)固定在所述管的所述末端。在一個(gè)替代方案中，所述針頭固定器可以通過(guò)螺紋或黏結(jié)劑黏結(jié)固定在所述管上，或者，當(dāng)所述管還包括軸環(huán)時(shí)，通過(guò)加緊環(huán)固定。在后一種實(shí)施方案中，所述針頭固定器還可以安裝在所述管的軸環(huán)周?chē)?br> 盡管在本實(shí)施方案中示出的注射器管包括鎖定Luer-型軸環(huán)88，本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括沒(méi)有軸環(huán)的管，注射器管具有偏心安裝的噴頭和各種其他噴頭樣結(jié)構(gòu)，適合永久性地或可拆卸地接收針頭套管或針頭套管組件。只需要在注射器管遠(yuǎn)端上有一個(gè)孔與所述注射器管的內(nèi)部流體相通。
可以在軸86的內(nèi)壁和頸部84的后面形成一種或多種狹縫。所述狹縫延伸到所述套管的尾端。在橫截面上，所述狹縫可能是圓環(huán)的一部分，不過(guò)，其他形狀也是可行的，它的大小足以讓足夠的注射流體方便地通過(guò)；如果所述狹縫的直徑或所述狹縫的總的橫截面積至少與所述套管一樣大就可以實(shí)現(xiàn)這一目的。將針頭固定器82的軸86設(shè)計(jì)成當(dāng)塞子78軸向向前滑動(dòng)時(shí)，它是通過(guò)摩擦被所述軸接納的；因此，除了凹入所述軸的狹縫90之外，所述軸的內(nèi)徑大體上與管62一樣大。針頭固定器82的軸86略長(zhǎng)于塞子78，以便所述狹縫的靠近所述管的部分92在所述塞子朝向所述針頭固定器的頸部的后壁向前運(yùn)動(dòng)時(shí)是自由的。如果需要，可以制造針頭防護(hù)裝置70，它還起著柱塞桿的作用。在這種情況下，在使用所述注射器之前，將所述針頭保護(hù)裝置從針頭上去掉，并且固定在注射器的與所述柱塞相反的一端。
一般，注射器包括具有安全部件的針頭防護(hù)裝置，它能指示所述針頭防護(hù)裝置是否事先業(yè)已去掉。例如，這種蓋子形狀的安全部件披露于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)3,995,630中。
在其他實(shí)施方案中，所述注射器不在安裝針頭的情況下保存，即正如本領(lǐng)域所公知的，它是無(wú)針頭的注射器。這種情況如圖5所示。對(duì)于這種注射器來(lái)說(shuō)，在使用之前，通過(guò)針頭軸環(huán)將所述針頭固定在針頭固定器82的頸部84。優(yōu)選將所謂的Luer錐體用于這種連接。在本實(shí)施方案中，針頭固定器頸部的孔94從外側(cè)通過(guò)防護(hù)蓋96封閉，該防護(hù)蓋能保護(hù)所述注射器以及針頭固定器的無(wú)菌性。凹入所述針頭固定器的狹縫90突出延伸到所述頸部孔的末端。
在授予Barrelle等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,027,481中披露了合適的注射器的例子，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。例如，合適的注射器的其他例子披露于以下專(zhuān)利文獻(xiàn)中授予Szwarc的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,964,866，授予Imbert等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,986,818，授予Thibault等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,607,400和授予Odell等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,263,641B1，以上每一份文獻(xiàn)均以它的整體形式收作本文參考。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置包括導(dǎo)管。正如本領(lǐng)域所公知的，當(dāng)患者需要反復(fù)使用藥物或其他物質(zhì)時(shí)，通常采用導(dǎo)管。導(dǎo)管可以重復(fù)和連續(xù)地將藥物直接輸送到患者血液中，或輸送到身體的其他部位，而不需進(jìn)行反復(fù)的注射。通常，導(dǎo)管具有中空的管狀腔，近端和遠(yuǎn)端。導(dǎo)管的遠(yuǎn)端可以是開(kāi)口的或封閉的，將它插入患者的靜脈或動(dòng)脈。
圖6a表示典型的導(dǎo)管組件，它包括柔性導(dǎo)管100，它具有筒狀側(cè)壁102，通過(guò)它形成腔104，近端106和閉合的遠(yuǎn)端108，在所示出的本實(shí)施方案中，它具有圓形的外表面110，以便有利于將所述導(dǎo)管插入患者體內(nèi)。如圖6b所示，導(dǎo)管100包括通過(guò)側(cè)壁102靠近遠(yuǎn)端108的槽112，并且是由設(shè)置在所述側(cè)壁上的兩個(gè)相對(duì)的表面114和116形成的。導(dǎo)管100包括本發(fā)明的穩(wěn)定劑，優(yōu)選儲(chǔ)存在所述導(dǎo)管的腔中。
所述導(dǎo)管的近端與具有通過(guò)它的通路120的導(dǎo)管外殼118連接。所述導(dǎo)管中的通路120和所述導(dǎo)管中的腔104是流體連通的。具有通道124的閥控制鈕122是與導(dǎo)管外殼118可旋轉(zhuǎn)地連接的，以便通道124與通路120是流體連通的。通過(guò)所述導(dǎo)管外殼上的近端凸緣126將閥控制鈕122和導(dǎo)管外殼118保持在一起，由它接合所述閥控制鈕中的旋轉(zhuǎn)槽128。該結(jié)構(gòu)使得所述閥控制鈕能相對(duì)所述導(dǎo)管外殼旋轉(zhuǎn)，但防止這兩個(gè)部件分離。在授予Alchas的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,737,152中披露了合適的導(dǎo)管的例子，該文獻(xiàn)被以整體形式收作本文參考。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置包括吸液管。在實(shí)驗(yàn)室設(shè)施中，眾所周知的是利用吸液管從一個(gè)容器中提取特定體積的生物學(xué)流體，并且將所提取體積的某些或全部轉(zhuǎn)移和分配到另一個(gè)容器中。通常，吸液管總體上是真空的管狀部件，它是通過(guò)在開(kāi)口的上端或接口施加吸力而使用的，以便將一定數(shù)量的流體介質(zhì)提取或吸入中空的管。通過(guò)封閉所述接頭部件的開(kāi)口保持的壓力差將所述流體保持在所述吸液管中，以便能夠?qū)⑺隽黧w介質(zhì)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)容器中。選擇性地打開(kāi)所述接口部件可以將裝在該吸液管中的一部分流體介質(zhì)分配出去。通過(guò)采用錐形末端部分，減少由于滴落而造成的流體損失量，可以提供流體分配量的一定程度的精確度。
參見(jiàn)圖7，示出了典型的吸液管200。吸液管200總體上是長(zhǎng)形的管狀部分，它是由具有大體上一致的厚度的管狀壁202形成的。在管狀壁202內(nèi)形成了吸液管內(nèi)部204，以便容納一定體積的流體介質(zhì)，例如生物學(xué)樣品。吸液管200包括長(zhǎng)形的大體上為圓形的主體部分206，它是與內(nèi)部204共同延伸的。吸液管主體206可以用本發(fā)明的穩(wěn)定劑預(yù)先填充。
為了吸出和分配生物學(xué)流體，吸液管200包括位于主體206一端的分配部件208，和位于另一端的接口210。分配部分208和接口210都是與吸液管200的內(nèi)部204連通的，以便能夠通過(guò)利用接口210在吸液管200的內(nèi)部204產(chǎn)生特定的壓力差，通過(guò)分配部分208吸出并且分配所述流體。所述壓力差可以通過(guò)人工打開(kāi)和閉合接口210產(chǎn)生，或者可以通過(guò)使用機(jī)械吸液管輔助裝置產(chǎn)生。
吸液管200可以用玻璃或熱塑性材料制成，如聚碳酸酯，聚乙烯，聚酯，聚苯乙烯，聚丙烯，聚砜，聚亞氨酯，或乙烯基乙酸乙烯酯等。對(duì)于很多用途來(lái)說(shuō)，業(yè)已用熱塑性吸液管大量取代了玻璃吸液管。吸液管200的材料可以是透明的，半透明的或不透明的。
適宜的吸液管的例子披露于授予Stevens的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,280,689B1和授予Zhang等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,343,717 B1中，這兩份專(zhuān)利都以它們的整體形式收作本文參考。
本發(fā)明的采集裝置還可以包括適合容納生物學(xué)樣品的采集袋，例如血液采集袋，血漿袋，白細(xì)胞層袋，或血小板袋等。為了便于描述，下面將結(jié)合圖8說(shuō)明血液采集袋。
圖8表示用于容納采集的血液的血液采集袋300。采集袋300具有主體302，它是通過(guò)疊加一對(duì)以相同切割的用樹(shù)脂制成的片狀材料制成的，將在下文對(duì)它作更具體地說(shuō)明，并且具有柔韌性，在所述每一片材料的密封部分304的周邊將它們彼此融合(即熱融合，或高頻融合等)，或通過(guò)黏結(jié)劑接合在一起。在由主體302的密封部分304環(huán)繞的內(nèi)部形成了容納采集的血液的血液容納部分306。血液采集袋300優(yōu)選裝有本發(fā)明的穩(wěn)定劑。
柔性管308的與血液容納部分306連通的一端在它的上部與主體302連接。通過(guò)插座312將血液采集針頭310安裝在柔性管308的另一端?？梢詫⒂糜诟采w血液采集針頭310的蓋子314安裝在插座312上?？梢栽谥黧w302的上部形成兩個(gè)各自用剝離片密封的開(kāi)口316和318，以便可以將它們打開(kāi)。
構(gòu)成血液采集袋300的主體302的片材的材料的組成，和特征等并不局限于特定類(lèi)型。在這種情況下，作為構(gòu)成血液采集袋300的片材，優(yōu)選使用柔性聚氯乙烯或含有柔性聚氯乙烯作為它的主要成分的材料。例如，可以使用含有所述柔性聚氯乙烯作為它的主要成分，并且含有少量大分子材料的共聚物，聚合物混合物，和聚合物合金等。作為所述柔性聚氯乙烯的增塑劑，可優(yōu)選使用鄰苯二甲酸二辛酯(DEHP，二(2-乙基己基)鄰苯二甲酸酯)和(DnDP，二(n-癸基)鄰苯二甲酸酯)。所述增塑劑在所述聚氯乙烯中的含量?jī)?yōu)選在100份重量的聚氯乙烯中占大約30-70份重量。
可有效用于血液采集袋300的片材的其他例子是聚烯烴，即諸如乙烯，丙烯，丁二烯和異戊二烯的鏈烯烴或二烯烴的均聚或共聚產(chǎn)物。典型的例子包括聚乙烯，聚丙烯，乙烯基乙酸乙烯酯共聚物(EVA)，由EVA和各種熱塑性彈性體組成的聚合物混合物，以及它們的任意組合。還可以使用諸如聚對(duì)苯二甲酸乙二酯(PET)，聚對(duì)苯二甲酸丁二酯(PBT)，聚-1，4-環(huán)己烷對(duì)苯二甲酸二甲酯(PCHT)和聚偏二氯乙烯的聚酯的聚合物。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的采集裝置可以是裝有所述穩(wěn)定劑的實(shí)驗(yàn)室容器。例如，可用于本發(fā)明的特定容器包括，例如，小瓶，燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶，顯微鏡載玻片，顯微鏡載玻片組件，用于分析裝置的樣品室，膠帶，層壓材料，陣列，和管類(lèi)等。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)室容器具有至少一個(gè)可操作的表面。本發(fā)明的很多容器具有至少一個(gè)內(nèi)壁，它形成了用于容納所述生物學(xué)樣品的儲(chǔ)庫(kù)部分，以及至少一個(gè)與所述儲(chǔ)庫(kù)部分連通的開(kāi)口。
通常將塑料或玻璃用于生產(chǎn)所述實(shí)驗(yàn)室容器。用于實(shí)驗(yàn)室容器的某些優(yōu)選材料包括聚丙烯，聚乙烯，聚對(duì)苯二甲酸乙二酯，聚苯乙烯，聚碳酸酯和纖維素制品。由于聚丙烯是廉價(jià)的，它是用于處理和運(yùn)輸少量和精確數(shù)量的生物學(xué)樣品的實(shí)驗(yàn)室容器的特別優(yōu)選的材料。
用于本發(fā)明實(shí)驗(yàn)室容器的其他合適材料的例子包括聚烯烴，聚酰胺，聚酯，硅酮，聚亞安酯，環(huán)氧樹(shù)脂類(lèi)，丙烯酸樹(shù)脂類(lèi)，聚丙烯酸酯類(lèi)，聚酯類(lèi)，聚砜，聚甲基丙烯酸酯類(lèi)，PEEK，聚酰亞胺和含氟聚合物。包括硅玻璃在內(nèi)的玻璃制品也可用于生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室容器。
實(shí)施例根據(jù)本發(fā)明，采集系統(tǒng)是利用以下設(shè)備生產(chǎn)的(1)噴涂機(jī)，(2)干燥器，(3)冷凍干燥機(jī)，(4)用于分配溶液中的穩(wěn)定劑的優(yōu)質(zhì)(one-up)的分配器(或吸液管)，和(5)用于密封阻隔袋的熱密封器。
例1-具有機(jī)械離析器的塑料管用肝素鋰溶液噴涂1,500個(gè)塑料管，并且干燥。通過(guò)將SIGMA蛋白酶抑制劑混合物溶解在去離子水中制備穩(wěn)定劑，每小瓶蛋白酶抑制劑使用大約22ml的去離子水。在每個(gè)管中放入大約300μl的穩(wěn)定劑溶液。將機(jī)械離析器組裝到每個(gè)管的密封裝置(HEMOGUARD外殼，用硅酮潤(rùn)滑)上，然后將所述密封裝置/離析器組件放置在所述管上。然后，對(duì)所述管進(jìn)行冷凍干燥和抽真空。然后將所述管放入阻隔包裝中，每個(gè)袋大約5個(gè)管，使用除濕劑。對(duì)所述袋進(jìn)行熱密封，并且對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行消毒。
例2-具有機(jī)械離析器的玻璃管采用例1的方法，在這里使用的是玻璃管。
例3-具有機(jī)械離析器的塑料管再次采用例1的方法，所不同的是所述穩(wěn)定劑溶液還包括大約0.5-大約20％的海藻糖。
蛋白酶抑制劑混合物配方的合適例子如下大約800μg/ml鹽酸苯甲脒，大約500μg/ml菲咯啉，大約500μg/ml抑肽酶，大約500μg/ml亮肽素，大約500μg/ml抑胃肽A和大約50μg/ml PMSF。所述蛋白酶抑制混合物是冷凍干燥粉末形式的。在使用之前，將大約1ml無(wú)水酒精添加到所述冷凍干燥粉末中，以便獲得50倍的蛋白酶抑制劑混合物。
盡管業(yè)已選擇了各種實(shí)施方案來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，在不超出所附權(quán)利要求書(shū)限定的本發(fā)明范圍的前提下，可以進(jìn)行各種改進(jìn)和補(bǔ)充。
權(quán)利要求
1.一種用于采集生物學(xué)樣品的裝置，包括容器，它具有用于接納所述樣品的儲(chǔ)庫(kù)部分；和在所述容器的儲(chǔ)庫(kù)部分中的至少一種蛋白穩(wěn)定劑。
2.如權(quán)利要求1的裝置，其中，所述容器選自如下試管，封閉系統(tǒng)采血裝置，采集袋，注射器，預(yù)先填充的注射器，導(dǎo)管，微量滴定板，多孔采集裝置，燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶，小瓶，吸液管，吸液管頭以及組織和其他生物學(xué)樣品采集容器。
3.如權(quán)利要求1的裝置，其中，所述容器是具有第一端和第二端的管。
4.如權(quán)利要求3的裝置，還包括位于所述容器中的分離部件。
5.如權(quán)利要求4的裝置，其中，所述分離部件是機(jī)械分離元件。
6.如權(quán)利要求5的裝置，其中，所述機(jī)械分離元件至少部分被至少一種穩(wěn)定劑涂敷。
7.如權(quán)利要求5的裝置，其中，所述機(jī)械分離元件相對(duì)所述穩(wěn)定劑是基本惰性的。
8.如權(quán)利要求4的裝置，其中，所述分離部件是凝膠。
9.如權(quán)利要求8的裝置，其中，所述凝膠分離部件是與所述穩(wěn)定劑物理上分離的。
10.如權(quán)利要求1的裝置，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑是選自下列形式溶液，懸浮液或其他液體，小球，片劑，膠囊，噴霧干燥材料，冷凍干燥材料，粉末，顆粒，凝膠，結(jié)晶或低溫干燥材料。
11.如權(quán)利要求10的裝置，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑是低溫干燥的。
12.如權(quán)利要求1的裝置，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑包括至少一種蛋白酶抑制劑。
13.如權(quán)利要求12的裝置，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑選自絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，外肽酶以及它們的組合。
14.如權(quán)利要求13的裝置，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。
15.如權(quán)利要求14的裝置，其中，所述蛋白酶抑制劑還包括金屬蛋白酶。
16.如權(quán)利要求12的裝置，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括蛋白酶抑制劑混合物。
17.如權(quán)利要求1的裝置，其中，所述穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
18.如權(quán)利要求15的裝置，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。
19.如權(quán)利要求1的裝置，還包括載體介質(zhì)。
20.如權(quán)利要求1的裝置，還包括穩(wěn)定介質(zhì)。
21.如權(quán)利要求20的裝置，其中，所述穩(wěn)定介質(zhì)是海藻糖。
22.如權(quán)利要求1的裝置，還包括至少一種抗氧化劑。
23.如權(quán)利要求1的裝置，還包括至少一種還原劑。
24.如權(quán)利要求1的裝置，還包括至少一種緩沖劑。
25.如權(quán)利要求3的裝置，還包括用于密封所述第一端的密封裝置。
26.如權(quán)利要求25的裝置，其中，所述試管是部分抽真空的。
27.如權(quán)利要求26的裝置，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑是冷凍干燥的。
28.如權(quán)利要求27的裝置，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
29.如權(quán)利要求27的裝置，其中，所述試管還包括抗凝固劑。
30.如權(quán)利要求29的裝置，其中，所述抗凝固劑是在至少一部分內(nèi)壁上噴霧干燥的。
31.如權(quán)利要求29的裝置，其中，所述抗凝固劑包括EDTA的鹽。
32.如權(quán)利要求29的裝置，其中，所述抗凝固劑包括肝素。
33.一種用于采集和穩(wěn)定生物學(xué)樣品的試管，包括第一端，第二端和至少一個(gè)內(nèi)壁，形成用于接納所述樣品的儲(chǔ)庫(kù)部分；在所述容器的儲(chǔ)庫(kù)中的至少一種蛋白穩(wěn)定劑；在所述儲(chǔ)庫(kù)中的觸變聚合凝膠；和用于保持蛋白穩(wěn)定劑和所述凝膠分離的元件。
34.如權(quán)利要求33的試管，其中，所述用于保持分離的元件是膠囊。
35.如權(quán)利要求34的試管，還包括用于密封所述第一端的密封裝置。
36.如權(quán)利要求35的試管，其中，所述密封裝置可以用針頭刺破，以便向所述管中添加樣品。
37.如權(quán)利要求35的試管，其中，所述試管是部分抽真空的。
38.如權(quán)利要求37的試管，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑是冷凍干燥的。
39.如權(quán)利要求38的試管，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
40.如權(quán)利要求38的試管，其中，所述管還包括在所述至少一部分內(nèi)壁上噴霧干燥的抗凝固劑。
41.一種用于采集和穩(wěn)定生物學(xué)樣品的管，包括第一端，第二端和至少一個(gè)內(nèi)壁，形成用于接納所述樣品的儲(chǔ)庫(kù)部分；在所述管的儲(chǔ)庫(kù)中的至少一種蛋白穩(wěn)定劑；和在所述儲(chǔ)庫(kù)中的機(jī)械分離元件。
42.如權(quán)利要求41的試管，其中，所述機(jī)械分離元件相對(duì)所述穩(wěn)定劑基本是惰性的。
43.如權(quán)利要求41的試管，還包括用于密封所述第一端的密封裝置。
44.如權(quán)利要求43的試管，其中，所述密封裝置可以用針頭刺破，以便向所述管中添加樣品。
45.如權(quán)利要求43的試管，其中，所述試管是部分抽真空的。
46.如權(quán)利要求45的試管，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑是冷凍干燥的。
47.如權(quán)利要求46的試管，其中，所述蛋白穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
48.如權(quán)利要求46的試管，其中，所述管還包括在至少一部分內(nèi)壁上噴霧干燥的抗凝固劑。
49.一種用于培養(yǎng)細(xì)胞的檢測(cè)板，包括具有上表面和下表面的基本扁平的基座；從上表面延伸到下表面的至少一個(gè)孔；和在所述至少一個(gè)孔中的蛋白穩(wěn)定劑。
50.如權(quán)利要求49的檢測(cè)板，其中，所述檢測(cè)板選自單孔板或多孔板，微量滴定板和組織培養(yǎng)板。
51.如權(quán)利要求49的檢測(cè)板，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
52.一種樣品采集組件，包括具有多個(gè)樣品孔的樣品盤(pán)，所述孔由在空間上分離的所述盤(pán)支撐，以便用于采集離散的生物學(xué)樣品；用于支撐和封閉所述樣品盤(pán)的樣品盤(pán)殼體；以及在所述樣品孔中的蛋白穩(wěn)定劑。
53.如權(quán)利要求52的樣品采集組件，其中，所述樣品盤(pán)被可移動(dòng)地容納在所述樣品盤(pán)殼體內(nèi)，以便在封閉所述多個(gè)孔的第一位置和使得能夠從外面接觸至少一個(gè)樣品孔的第二位置之間運(yùn)動(dòng)。
54.如權(quán)利要求52的樣品采集組件，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
55.一種注射器組件，包括柱狀管，它具有近端，遠(yuǎn)端的開(kāi)口，和位于近端和遠(yuǎn)端之間的中空的腔室，用于接納生物學(xué)樣品；位于所述近端開(kāi)口中的柱塞；固定在所述管上的針頭；和裝在所述腔室中的蛋白穩(wěn)定劑。
56.如權(quán)利要求55的注射器組件，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
57.一種導(dǎo)管組件，包括適合插入血管系統(tǒng)的柔性導(dǎo)管，它具有筒狀側(cè)壁形成的貫通的腔體，近端和封閉的遠(yuǎn)端；以及裝在所述腔體內(nèi)的蛋白穩(wěn)定劑。
58.如權(quán)利要求57的導(dǎo)管組件，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
59.一種吸液管，包括筒狀主體部分，具有第一和第二端，管狀壁和吸液管內(nèi)部；位于所述主體的第一端的分配部分，和位于所述主體的第二端的接口；以及裝在所述吸液管主體內(nèi)的蛋白穩(wěn)定劑。
60.如權(quán)利要求59的吸液管，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
61.一種用于容納采集的血液的采血袋，包括具有上部的主體；具有內(nèi)部和外部的血液容納部分，與所述主體的上部連接；環(huán)繞所述血液容納部分的外部的密封部分；以及裝在所述血液容納部分內(nèi)部的蛋白穩(wěn)定劑。
62.如權(quán)利要求61的采血袋，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
63.一種實(shí)驗(yàn)室裝置，包括至少一個(gè)可操作的表面；和位于所述至少一個(gè)可操作的表面上的蛋白穩(wěn)定劑。
64.如權(quán)利要求63的實(shí)驗(yàn)室容器，其中，所述容器選自顯微鏡載玻片，顯微鏡載玻片組件，用于分析裝置的樣品室，膠帶，層壓材料，陣列和管。
65.如權(quán)利要求64的實(shí)驗(yàn)室容器，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
66.如權(quán)利要求3的實(shí)驗(yàn)室容器，還包括至少一個(gè)形成儲(chǔ)庫(kù)部分的內(nèi)壁，和與儲(chǔ)庫(kù)部分連通的至少一個(gè)開(kāi)口。
67.如權(quán)利要求66的實(shí)驗(yàn)室容器，其中，所述容器選自小瓶，燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶以及組織和其他生物學(xué)樣品采集容器。
68.如權(quán)利要求67的實(shí)驗(yàn)室容器，其中，所述穩(wěn)定劑包括一種或多種蛋白酶抑制劑。
69.一種用于采集和儲(chǔ)存生物學(xué)樣品以便隨后測(cè)試的試劑盒，包括主采集管，其內(nèi)具有離析器元件；和輔助管；其中，所述主采集管和輔助管裝有一種或多種蛋白穩(wěn)定劑。
70.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述一種或多種穩(wěn)定劑具有選自如下的形式溶液，懸浮液或其他液體，小球，片劑，膠囊，噴霧干燥材料，冷凍干燥材料，粉末，顆粒，凝膠，結(jié)晶或低溫干燥材料。
71.如權(quán)利要求70的試劑盒，其中，所述一種或多種穩(wěn)定劑是冷凍干燥的。
72.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述離析器元件是機(jī)械分離元件。
73.如權(quán)利要求72的試劑盒，其中，所述機(jī)械分離元件用一種或多種穩(wěn)定劑至少部分涂敷。
74.如權(quán)利要求73的試劑盒，其中，所述機(jī)械分離元件相對(duì)所述一種或多種穩(wěn)定劑基本上是惰性的。
75.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述離析器元件是凝膠。
76.如權(quán)利要求75的試劑盒，其中，所述凝膠與所述穩(wěn)定劑是物理上分離的。
77.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述穩(wěn)定劑包括至少一種蛋白酶抑制劑。
78.如權(quán)利要求77的試劑盒，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑選自如下絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，外肽酶以及它們的組合。
79.如權(quán)利要求78的試劑盒，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。
80.如權(quán)利要求79的試劑盒，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑還包括金屬蛋白酶。
81.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
82.如權(quán)利要求81的試劑盒，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。
83.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述主管或輔助管或這兩者還包括載體介質(zhì)。
84.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述主管或輔助管或這兩者還包括穩(wěn)定介質(zhì)。
85.如權(quán)利要求84的試劑盒，其中，所述穩(wěn)定介質(zhì)是海藻糖。
86.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述主管或輔助管或這兩者還包括至少一種抗氧化劑。
87.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述主管或輔助管或這兩者還包括至少一種還原劑。
88.如權(quán)利要求69的試劑盒，其中，所述主管或輔助管或這兩者還包括至少一種緩沖劑。
89.如權(quán)利要求69的試劑盒，還包括管到管的轉(zhuǎn)移裝置。
90.如權(quán)利要求89的試劑盒，其中，所述第二個(gè)管保持在一定壓力下，以便通過(guò)所述管到管的轉(zhuǎn)移裝置將所述樣品從所述第一個(gè)管吸入第二個(gè)管。
91.一種穩(wěn)定生物學(xué)樣品的方法，包括提供樣品采集容器；和將所述生物學(xué)樣品放入所述采集容器，以便所述樣品與蛋白穩(wěn)定劑接觸。
92.如權(quán)利要求91的方法，其中，在采集所述生物學(xué)樣品之前，所述樣品采集容器包括所述穩(wěn)定劑。
93.如權(quán)利要求91的方法，其中，將所述生物學(xué)樣品放入所述容器，以及所述樣品與所述穩(wěn)定劑的接觸是在相同的采集容器中完成的。
94.如權(quán)利要求93的方法，其中，所述采集容器是抽真空的，并且具有足以將預(yù)定體積的樣品吸入所述采集容器的預(yù)定的內(nèi)部壓力。
95.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述穩(wěn)定劑是選自如下的形式溶液，懸浮液或其他液體，小球，片劑，膠囊，噴霧干燥材料，冷凍干燥材料，粉末，顆粒，凝膠，結(jié)晶和低溫干燥材料。
96.如權(quán)利要求95的方法，其中，所述穩(wěn)定劑是低溫干燥的。
97.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器選自如下試管，封閉系統(tǒng)采血裝置，采集袋，注射器，微量滴定板，多孔采集裝置，燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶和小瓶。
98.如權(quán)利要求97的方法，其中，所述采集容器是試管。
99.如權(quán)利要求98的方法，其中，所述采集容器包括分離部件。
100.如權(quán)利要求99的方法，其中，所述分離部件至少部分被所述穩(wěn)定劑涂敷。
101.如權(quán)利要求99的方法，其中，所述分離部件是機(jī)械分離元件。
102.如權(quán)利要求101的方法，其中，所述機(jī)械分離元件相對(duì)所述穩(wěn)定劑是惰性的。
103.如權(quán)利要求99的方法，其中，所述分離部件是凝膠。
104.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述穩(wěn)定劑包括至少一種蛋白酶抑制劑。
105.如權(quán)利要求104的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑選自如下絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，外肽酶以及它們的組合。
106.如權(quán)利要求105的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。
107.如權(quán)利要求106的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑還包括金屬蛋白酶。
108.如權(quán)利要求104的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括蛋白酶抑制劑混合物。
109.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
110.如權(quán)利要求109的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶抑制劑。
111.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器包括載體介質(zhì)。
112.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器包括穩(wěn)定介質(zhì)。
113.如權(quán)利要求112的方法，其中，所述穩(wěn)定介質(zhì)是海藻糖。
114.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器包括至少一種抗氧化劑。
115.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器包括至少一種還原劑。
116.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述采集容器包括至少一種緩沖劑。
117.如權(quán)利要求91的方法，其中，所述生物學(xué)樣品選自如下全血或它的成分，紅細(xì)胞濃縮物，血小板濃縮物，白細(xì)胞濃縮物，血漿，血清，尿液，骨髓吸出物，腦脊液，組織，細(xì)胞，糞便，唾液和口腔分泌物，鼻腔分泌物和淋巴液。
118.如權(quán)利要求117的方法，其中，所述生物學(xué)樣品是全血。
119.如權(quán)利要求118的方法，其中，所述全血是從患者體內(nèi)直接采集到所述采集容器中的。
120.如權(quán)利要求119的方法，其中，在從患者體內(nèi)采集血液之前，所述采集容器中包括所述穩(wěn)定劑。
121.一種用于制備用來(lái)采集生物學(xué)樣品的采集容器的方法，包括提供采集容器；將至少一種蛋白酶抑制劑放入所述容器；對(duì)所述至少一種蛋白酶抑制劑進(jìn)行冷凍干燥；對(duì)所述容器進(jìn)行抽真空和密封；對(duì)所述容器進(jìn)行消毒。
122.如權(quán)利要求121的方法，其中，所述采集容器是試管。
123.如權(quán)利要求121的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑選自如下絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，外肽酶以及它們的組合。
124.如權(quán)利要求123的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。
125.如權(quán)利要求124的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑還包括金屬蛋白酶。
126.如權(quán)利要求121的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括蛋白酶抑制劑混合物。
127.如權(quán)利要求126的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑混合物包括絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。
128.如權(quán)利要求122的方法，還包括將分離部件放入所述管。
129.如權(quán)利要求128的方法，其中，所述分離部件是機(jī)械分離部件。
130.如權(quán)利要求129的方法，其中，所述分離部件是凝膠。
131.如權(quán)利要求122的方法，還包括將抗凝固劑放入所述管。
132.如權(quán)利要求131的方法，其中，通過(guò)噴霧干燥將所述抗凝固劑裝入所述管。
133.如權(quán)利要求131的方法，其中，所述抗凝固劑包括EDTA的鹽。
134.如權(quán)利要求131的方法，其中，所述抗凝固劑包括肝素。
135.一種用于分離蛋白的方法，包括提供包括一種或多種蛋白酶抑制劑的蛋白穩(wěn)定劑的容器；將生物學(xué)樣品添加到所述容器中；和從所述生物學(xué)樣品中分離所述蛋白。
136.如權(quán)利要求135的方法，其中，所述采集容器是試管。
137.如權(quán)利要求136的方法，還包括位于所述容器中的分離部件。
138.如權(quán)利要求137的方法，其中，所述分離部件是機(jī)械分離元件。
139.如權(quán)利要求138的方法，其中，所述機(jī)械分離元件至少部分被至少一種穩(wěn)定劑涂敷。
140.如權(quán)利要求138的方法，其中，所述機(jī)械分離元件相對(duì)所述穩(wěn)定劑基本上是惰性的。
141.如權(quán)利要求137的方法，其中，所述分離部件是凝膠。
142.如權(quán)利要求141的方法，其中，所述凝膠分離部件是與所述穩(wěn)定劑物理上分離的。
143.如權(quán)利要求136的方法，其中，所述穩(wěn)定劑包括至少一種蛋白酶抑制劑。
144.如權(quán)利要求143的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑選自如下絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，外肽酶以及它們的組合。
145.如權(quán)利要求143的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。
146.如權(quán)利要求145的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑還包括金屬蛋白酶。
147.如權(quán)利要求143的方法，其中，所述至少一種蛋白酶抑制劑包括蛋白酶抑制劑混合物。
148.如權(quán)利要求136的方法，其中，所述穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
149.如權(quán)利要求148的方法，其中，所述蛋白酶抑制劑包括絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。
150.如權(quán)利要求136的方法，其中，所述試管是部分抽真空的。
151.如權(quán)利要求150的方法，其中，所述穩(wěn)定劑是冷凍干燥的。
152.如權(quán)利要求151的方法，其中，所述穩(wěn)定劑包括兩種以上蛋白酶抑制劑。
153.如權(quán)利要求151的方法，其中，所述試管還包括抗凝固劑。
154.如權(quán)利要求153的方法，其中，所述抗凝固劑是在所述管的至少一部分內(nèi)壁上噴霧干燥的。
155.如權(quán)利要求153的方法，其中，所述抗凝固劑包括EDTA的鹽。
156.如權(quán)利要求153的方法，其中，所述抗凝固劑包括肝素。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于采集生物學(xué)樣品，特別是全血的采集容器和方法。所述采集容器包括能穩(wěn)定和抑制蛋白降解和/或分解的有效量的至少一種穩(wěn)定劑。所述穩(wěn)定劑能夠通過(guò)在儲(chǔ)存生物樣品時(shí)抑制樣品中的蛋白質(zhì)的降解和/或分解來(lái)穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是在采血點(diǎn)生物學(xué)樣品中的蛋白酶。所述穩(wěn)定劑包括或由一種或多種蛋白酶抑制劑構(gòu)成。
文檔編號(hào)A61J7/00GK1662307SQ03812712
公開(kāi)日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2003年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月13日
發(fā)明者T·史蒂文斯, B·海伍德, A·達(dá)斯塔尼, F-C·林 申請(qǐng)人:貝克頓·迪金森公司