專利名稱：緩釋組合物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及緩釋組合物的制備方法，該組合物包括生理活性物質以及可生物降解聚合物，并涉及由此制備的緩釋組合物，等等。
背景技術：
JP-A 57-118512、JP-A 57-150609和JP-A 6-145046公開了使用可生物降解聚合物由W/O型乳劑制備緩釋微囊的方法。
緩釋的可生物降解聚合物適用作例如包封生物活性物質的微囊等的基底物質。已知聚乳酸、乳酸和羥基乙酸的共聚物等適用作這種可生物降解聚合物(例如，JP-A 11-269094)。
JP-A 7-97334公開了緩釋制劑和緩釋制劑的制備方法，該緩釋制劑包含生理活性物質或其鹽和具有末端羧基的可生物降解聚合物。
本發(fā)明的目的是提供緩釋組合物的制備方法，其能穩(wěn)定形成W/O型乳劑，以及由所述方法制備的緩釋組合物，等等。

發(fā)明內容
在這樣的技術背景中，為了開發(fā)能穩(wěn)定形成W/O型乳劑的緩釋組合物的制備方法，發(fā)明人進行了深入的研究。結果，他們發(fā)現(xiàn)使用包含相對于生理活性物質過量的酸或堿的水溶液可以穩(wěn)定W/O型乳劑?；谶@一發(fā)現(xiàn)，他們深入研究并最終完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明提供(1)一種緩釋組合物的制備方法，包括混合包含生理活性物質、摩爾量至少為1.5倍生理活性物質的酸或堿的水溶液以及可生物降解聚合物，并且干燥所得混合物；(2)根據(jù)上述(1)中的方法，其中使用生理活性物質與酸或堿的鹽獲得水溶液；(3)根據(jù)上述(1)中的方法，其中生理活性物質在緩釋組合物中比例是約0.001至約50％重量；(4)一種穩(wěn)定包含生理活性物質的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的方法，包括加入摩爾量約為生理活性物質1.5mol或更多的酸或堿；(5)一種使包含生理活性物質的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的粘度約為3,000cp或更低的方法，包括加入摩爾量約為生理活性物質1.5mol或更多的酸或堿；(6)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中生理活性物質是生理活性肽；(7)根據(jù)上述(6)的方法，其中生理活性肽是LH-RH衍生物；(8)根據(jù)上述(7)的方法，其中LH-RH衍生物是由如下通式表示的化合物5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)且Z表示NH-C2H5或Gly-NH2；(9)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中使用的酸或堿的摩爾量為生理活性物質的約1.5至約5倍；(10)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中使用的酸或堿的摩爾量為生理活性物質的約1.65至約3倍；(11)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中酸是有機酸；(12)根據(jù)上述(11)的方法，其中有機酸是脂肪酸；(13)根據(jù)上述(12)的方法，其中脂肪酸是乙酸；(14)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中可生物降解聚合物是α-羥基羧酸聚合物；(15)根據(jù)上述(14)的方法，其中α-羥基羧酸聚合物是乳酸-羥基乙酸聚合物；(16)根據(jù)上述(15)的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物中乳酸與羥基乙酸的摩爾比是100∶0至50∶50；(17)根據(jù)上述(16)的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物中乳酸與羥基乙酸的摩爾比是100∶0；(18)根據(jù)上述(15)的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量是5,000至50,000；(19)根據(jù)上述(15)的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量是17,000至30,000；(20)根據(jù)上述(1)的方法，其中可生物降解聚合物是重均分子量為15,000至50,000的乳酸聚合物，并且在所述乳酸聚合物中重均分子量為5,000或更低的聚合物含量為5％重量或更低；(21)根據(jù)上述(1)的方法，其中可生物降解聚合物是每單位質量(克)的聚合物具有約20至約1,000μmol末端羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物；(22)根據(jù)上述(1)的方法，其中生物降解聚合物的末端羧基的摩爾含量為生理活性物質的約0.1至約5倍；(23)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中使用低水溶性有機溶劑制備可生物降解聚合物溶液；(24)根據(jù)上述(23)的方法，其中低水溶性有機溶劑是二氯甲烷；(25)根據(jù)上述(1)、(4)和(5)任一項的方法，其中化合物是均勻混合物；(26)根據(jù)上述(25)的方法，其中均勻混合物是乳劑；(27)根據(jù)上述(26)的方法，其中乳劑是W/O型乳劑；(28)根據(jù)上述(27)的方法，其中W/O型乳劑的粒徑非常??；(29)根據(jù)上述(1)的方法，其中混合物的干燥是在水中干燥(in-water drying)；(30)根據(jù)上述(29)的方法，其中在水中干燥時滲透壓調節(jié)劑的水溶液用作外部含水相；(31)根據(jù)上述(30)的方法，其中滲透壓調節(jié)劑是甘露醇；(32)根據(jù)上述(1)的方法，其中緩釋組合物是微粒形式；(33)根據(jù)上述(32)的方法，其中微粒是微球或微囊；(34)一種緩釋組合物的制備方法，包括混合水溶液和可生物降解聚合物溶液以及然后干燥混合物，水溶液包含1)生理活性物質和2)含量約為所述水溶液0.1至約20％重量的酸或堿；(35)根據(jù)上述(34)的方法，其中使用生理活性物質與酸或堿的鹽制得水溶液；
(36)根據(jù)上述(1)的方法制備的緩釋組合物；(37)包含生理活性物質和含量為此生理活性物質摩爾量約1.5倍或更多倍的酸或堿的水溶液用于制備包含生理活性物質的緩釋制劑；附圖簡介

圖1的照片顯示了實驗性的實施例2中所制備的W/O型乳劑的表觀。照片下的數(shù)值表示乙酸與藥物的摩爾比。
圖2顯示了在實驗性的實施例6中所用乙酸的摩爾量為肽A的1.5倍或更多倍的情況下，乳化時間和W/O型乳劑粘度的關系。
從左向右顯示乙酸與藥物的摩爾比為1.4、1.6、1.8、2.3和2.8的情況。
用于本發(fā)明的生理活性物質沒有特別的限定，只要其是藥學上有用的即可，可以是非肽類化合物或肽類化合物。非肽類化合物的例子包括激動劑、拮抗劑和具有抑酶活性的化合物。肽類化合物可以是激動劑或拮抗劑并且可以優(yōu)選例如生理活性肽，適宜的生理活性肽的分子量約為300至40,000，優(yōu)選約400至約30,000，更優(yōu)選約500至約20,000。
本發(fā)明組合物中生理活性物質的比例依據(jù)所用生理活性物質的種類、所需的生理效果、效果的持續(xù)時間等而變化，并沒有特別的限定。例如，可以是組合物總重的約0.001至約50％重量，優(yōu)選約0.02至約40％重量，更優(yōu)選約0.1至約30％重量，甚至更優(yōu)選約0.1至約24％重量，最優(yōu)選約5至約24％重量。
生理活性物質的例子包括，但不限于，生理活性肽、抗腫瘤藥物、抗生素、解熱藥、鎮(zhèn)痛藥、消炎藥、止咳祛痰藥、鎮(zhèn)靜藥、肌肉松弛藥、抗癲癇劑、抗?jié)儎?、抗抑郁藥、抗過敏劑、強心藥、抗心律失常藥、血管擴張劑、降壓利尿劑、抗糖尿病藥、抗凝血劑、止血藥、抗結核藥、激素藥物、麻醉藥拮抗劑、骨再吸收抑制劑以及血管生成抑制劑。
生理活性肽的例子包括促黃體激素釋放激素(LH-RH)、胰島素、促生長素抑制素、生長激素、生長激素-釋放激素(GH-RH)、催乳素、紅細胞生成素、腎上腺皮質激素、促黑素細胞激素、甲狀腺激素-釋放激素(TRH)、促甲狀腺激素、促黃體生成激素、促卵泡激素、抗利尿激素、催產素、降鈣素、促胃液素、分泌素、胰酶分泌素、縮膽囊素、血管緊張素、人胎盤催乳激素、人絨毛膜促性腺激素、腦啡肽、內啡肽、京都啡肽、吞噬細胞增強激素、胸腺生成素、胸腺素、胸腺刺激素、胸腺體液因子、血液胸腺素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、胃動素、強啡肽、鈴蟾素、神經降壓素、雨蛙肽、緩激肽、心鈉素、神經生長因子、細胞生長因子、神經營養(yǎng)因子、具有內皮素拮抗作用的肽和其衍生物，以及其片段和這些片段的衍生物。
該生理活性肽還可以是LH-RH拮抗劑(參見美國專利US 4,086,219，4,124,577，4,253,997，和4,317,815)。
該生理活性肽的其它例子包括胰島素、促生長素抑制素、促生長素抑制素衍生物(參見US 4,087,390，4,093,574，4,100,117，和4,253,998)、生長激素、催乳素、促腎上腺皮質激素(ACTH)、促黑素細胞激素(MSH)、甲狀腺激素-釋放激素[由如下結構式表示(Pyr)Glu-His-ProNH2，在下文還稱為促甲狀腺素釋放激素(TRH)]及其鹽和衍生物(參見JP-A 50-121273和JP-A52-116465)、促甲狀腺激素(TSH)、促黃體生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、抗利尿激素、抗利尿激素衍生物[去氨加壓素，參見ENDOCRINE JOURNALVol.54，No.5，676-691頁(1978)]、催產素、降鈣素、甲狀旁腺素、胰高血糖素、促胃液素、分泌素、胰酶分泌素、縮膽囊素、血管緊張素、人胎盤催乳激素、人絨毛膜促性腺激素(絨膜促性腺激素)、腦啡肽、腦啡肽衍生物(參見US 4,277,394和歐洲專利公開號31567)、內啡肽、京都啡肽、干擾素(例如，α-，β-，和γ-干擾素)，白細胞介素(例如，I，II，和III)、吞噬細胞增強激素、胸腺生成素、胸腺素、胸腺刺激素、胸腺體液因子(THF)、血液胸腺因子(FTS)和其衍生物(參見US.4,229,438)、其它胸腺素[Igaku no AyumiVol.125、No.10，835-843頁(1983)]、腫瘤壞死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、胃動素、強啡肽、韓蛙皮素、神經降壓素、蛙皮素、緩激肽、尿激酶、天冬酰胺酶、激肽釋放酶、P物質、神經生長因子、細胞生長因子、神經營養(yǎng)因子、凝血因子VIII和IX、氯化溶菌酶制劑、多粘菌素B、粘菌素、短桿菌肽、桿菌肽、紅細胞生成素(EPO)和拮抗內皮肽的肽(參見歐洲專利公開號436189，457195，以及496452和JP-A 3-94692和JP-A 3-130299)。
抗腫瘤劑的例子包括博來霉素、氨甲喋呤、放線菌素D、絲裂霉素C、binblastin硫酸鹽、bincrystin硫酸鹽、柔紅霉素、阿霉素、新制癌菌素、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、四氫呋喃基-5-氟尿嘧啶、云芝多糖、溶鏈菌、蘑菇多糖、左旋四咪唑、貝他定、疊氮美克、甘草甜素、多聚肌苷酸胞苷酸、腺苷酸尿苷酸共聚核苷酸和polyICLC。
抗生素的例子包括慶大霉素、地貝卡星、卡那霉素B、青紫霉素、托普霉素、氨丁卡那霉素、新霉素、紫蘇霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸土霉素、吡咯甲基四環(huán)素、鹽酸強力霉素、氨必西林、哌拉西林、替卡西林、頭孢噻吩、頭孢噻啶、噻乙胺唑頭孢菌素、頭孢磺啶、頭孢甲肟、頭孢美唑、頭孢唑啉、氨噻肟頭孢菌素、頭孢哌酮、頭孢唑肟、拉氧頭孢、噻嗯霉素、磺酰胺菌素和氨曲南。
解熱藥、止痛藥和消炎藥的例子包括水楊酸、安乃近、氟滅酸、雙氯芬酸、消炎痛、嗎啡、鹽酸哌替啶、酒石酸羥甲左嗎南和氧嗎啡酮。
止咳祛痰藥的例子包括鹽酸麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、鹽酸諾司卡品、磷酸可待因、磷酸二氫可待因、丙烯氯丙胺、鹽酸氯苯達諾、鹽酸哌吡苯胺、咳平、鹽酸胡椒喘定、鹽酸異丙腎上腺素、硫酸雙異丁硫胺和硫酸叔丁腎上腺素。
鎮(zhèn)靜劑的例子包括氯丙嗪、丙氯拉嗪、三氟拉嗪、硫酸阿托品和溴化甲基東莨菪堿。
肌松藥的例子包括哌二苯丙醇甲磺酸酯、氯化筒箭毒堿和溴化雙哌雄雙酯。
抗癲病藥的例子包括苯妥英、乙琥胺、乙酰唑胺鈉和利眠寧。
抗?jié)兯幍睦影缤蚂`和鹽酸組氨酸。
抗抑郁藥的例子包括丙咪嗪、氯丙咪嗪、諾昔替林和硫酸苯乙基肼。
抗過敏藥的例子包括鹽酸苯海拉明、馬來酸氯非那敏、鹽酸苯吡二胺、鹽酸甲吡咯嗪、鹽酸克立咪唑、鹽酸二苯拉林和喘咳寧。
強心劑的例子包括反-π-氧化樟腦、茶堿醋酸鈉、氨茶堿和鹽酸乙苯福林。
抗心律失常藥的例子包括心得安、心得舒、布非洛爾和心得平。
血管擴張劑的例子包括鹽酸麻黃苯丙酮、地爾硫卓、鹽酸妥拉唑林、克冠二胺和硫酸丁酚胺。
降壓利尿劑的例子包括溴化已烷雙胺、血安定、鹽酸美加明、鹽酸乙肼苯噠嗪和可樂寧。
抗糖尿病藥的例子包括糖降嘧啶鈉、格列甲嗪、苯乙雙胍鹽酸鹽、丁雙胍鹽酸鹽和二甲雙胍。
抗凝血劑的例子包括肝素鈉和檸檬酸鈉。
止血劑的例子包括促凝血酶原激酶、凝血酶、維生素K亞硫酸氫鈉、乙酰甲萘醌、ε-氨基己酸、凝血酸、腎上腺色素縮氨脲鈉磺酸鹽和腎上腺素單胺胍甲磺酸酯。
抗結核藥的例子包括異煙肼、乙胺丁醇和對氨基水楊酸。
激素藥物的例子包括predonisolone、predonisolone磷酸鈉、地塞米松硫酸鈉、倍他米松磷酸鈉、己雌酚磷酸鹽、己雌酚醋酸鹽和甲巰咪唑。
麻醉拮抗劑的例子包括灑石酸利瓦洛凡、鹽酸烯丙嗎啡和鹽酸納洛酮。
骨吸收抑制劑的例子包括(含硫的烷基)氨基亞甲基二膦酸。
血管生成抑制劑的例子包括血管生成-抑制甾體[參見Science，Vol.221，719(1983)]，煙曲霉素(參見歐洲專利申請公開號為325199)，和fumagillol衍生物(參見歐洲專利申請公開號為357061，359036，386667和415294)。
生理活性肽的優(yōu)選例子包括有效抗激素依賴性疾病的LH-RH衍生物，尤其是依賴性激素的癌癥(比如前列腺癌、子宮癌癥、乳腺癌、和垂體腫瘤)或依賴性激素的疾病比如前列腺肥大、子宮內膜異位、子宮肌瘤、青春期早熟、痛經、無月經、經前期綜合征和多囊卵巢綜合癥；對于避孕(或不孕，如果休藥期后使用了反跳作用)有效的LH-RH衍生物；在預防絕經前乳腺癌手術后乳腺癌復發(fā)中有效的LH-RH衍生物；和有效抗阿爾茨海默病或免疫缺乏病的LH-RH衍生物；或其鹽。其它的例子包括有效抗良性或惡性腫瘤的LH-RH衍生物，該腫瘤為非性激素-依賴性但是對LH-RH敏感。
LH-RH衍生物的具體例子包括如The Parthenon Publishing Group Ltd.于1996年發(fā)表的“Treatment with GnRH analogsControversies andperspectives”以及JP-A 3-503165、JP-A 3-101695、JP-A 7-97334和JP-A8-259460中公開的肽。
LH-RH衍生物可以是LH-RH激動劑或LH-RH拮抗劑。LH-RH拮抗劑的例子包括由通式[I]表示的肽X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH2其中X代表N(4H2-糠酰)Gly或NAc，A代表選自NMeTyr、Tyr、Aph(Atz)和NMeAph(Atz)的殘基，B代表選自DLys(Nic)、DCit、DLys(AzaglyNic)、DLys(AzaglyFur)、DhArg(Et2)、DAph(Atz)和DhCi的殘基，以及C代表Lys(Nisp)、Arg或hArg(Et2)、阿巴瑞克、degarelix、安雷利克斯、伊妥瑞克、orntide、西曲瑞克或加尼瑞克，或其鹽。
非肽LH-RH拮抗劑的例子包括在WO 95/28405(JP-A 8-295693)、WO97/14697(JP-A 9-169767)、WO 97/14682(JP-A 9-169735)或WO 96/24597(JP-A 9-169768)中描述的非肽LH-RH拮抗劑，噻吩并吡啶化合物(例如，描述于WO 00/00493中的3-(N-芐基-N-甲氨甲基)4，7-二氫-5-異丁酰基-7-(2，6-二氟芐基)-2-[4-[(1-羥基環(huán)丙基)羰基氨基]苯基]-4-氧代噻吩并[2，3-b]吡啶)，噻吩并嘧啶化合物(例如，描述于WO 00/56739中的5-(N-芐基-N-甲氨甲基)-1-(2，6-二氟芐基)-6-[4-(3-甲氧脲基)苯基]-3-苯基噻吩并[2，3-D]嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮)，以及5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘基)甲基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺(美國癌癥研究協(xié)會(AACR)，2002.4.6-10)。
LH-RH激動劑的例子包括由通式[II]表示的生理活性肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y代表選自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的殘基且Z代表NH-C2H5或Gly-NH2，等等。特別優(yōu)選的肽中Y是DLeu且Z是NH-C2H5(也就是說，表示為下式的肽A5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5)或鹽，特別其醋酸鹽(醋酸亮丙瑞林)。
除了上述的亮丙瑞林外優(yōu)選的LH-RH激動劑的具體例子包括(1)布舍瑞 (US 4,024,248、DE 2438352、JP-A 51-41359)；(2)曲普瑞
(US 4010125，JP-A 52-31073)；(3)納發(fā)阮 (US 4234571，JP-A 55-164663，JP-A 63-264498，JP-A 64-25794)；(4)組氨瑞林 (5)地洛瑞林(US 4569967和4218439)；
(6)美替瑞林(WO 91/18016)； (7)血清促性素(DE 2213737)； (8)戈舍瑞林(US 4100274，JP-A 52-136172)； (9)Lecireli(比利時專利號897455，JP-A 59-59654)；和其鹽。

此說明書中所用縮寫的定義如下縮寫 名稱N(4H2-furoyl)GlyN-四氫糠酰甘氨酸殘基NAc N-乙?；鵇2NalD-3-(2-萘基)丙氨酸殘基D4ClPhe D-3-(4-氯)苯丙氨酸殘基D3PalD-3-(3-吡啶基)丙氨酸殘基NmeTyr N-甲基酪氨酸殘基Aph(Atz) N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基NMeAph(Atz) N-甲基-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基DLys(Nic)D-(e-N-煙?；?賴氨酸殘基Dcit D-瓜氨酸殘基DLys(AzaglyNic) D-(氮雜氨基乙?；鶡燉；?賴氨酸殘基DLys(AzaglyFur) D-(氮雜氨基乙酰呋喃基)賴氨酸殘基DhArg(Et2) D-(N，N’-二乙基)高精氨酸殘基DAph(Atz)D-N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸殘基DhCi D-高瓜氨酸殘基Lys(Nisp)(e-N-異丙基)賴氨酸殘基hArg(Et2)(N，N’-二乙基)高精氨酸殘基這些氨基酸的縮寫根據(jù)IUPAC-IUB生物化學命名委員會的定義或European Journal of Biochemistry Vol.138，9-37頁，1984的定義或根據(jù)本領域的常規(guī)縮寫。雖然氨基酸可以有光學異構體，除非另有說明，它們表現(xiàn)為L-構型。
本發(fā)明“包含生理活性物質和含量為此生理活性物質摩爾量約1.5倍或更多倍的酸或堿的水溶液”以及“含量約為所述水溶液0.1至20％重量的酸或堿”中的“酸或堿”是指通常用于制備的任何酸或堿，可以是無機酸、有機酸、無機堿、有機堿、酸性或堿性氨基酸，等等?！八峄驂A”優(yōu)選酸，更優(yōu)選有機酸。
無機酸的優(yōu)選例子包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸和磷酸。有機酸的優(yōu)選例子包括磺酸例如甲磺酸、苯磺酸和對甲苯磺酸；脂肪酸比如甲酸、乙酸和丙酸；脂肪族的二羧基酸比如草酸、丙二酸和琥珀酸；不飽和脂肪酸比如丙烯酸、富馬酸和馬來酸；碳環(huán)的羧酸類比如酞酸、間苯二酸和對苯二甲酸；和取代羧酸類比如三氟乙酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸和羥基乙酸。其中，更優(yōu)選使用脂肪酸、乳酸和羥基乙酸，并且特別優(yōu)選使用乙酸。酸性氨基酸的優(yōu)選例子包括天冬氨酸和谷氨酸。堿性氨基酸的優(yōu)選例子包括精氨酸、賴氨酸和鳥氨酸。無機堿的優(yōu)選例子包括堿金屬比如鈉和鉀；堿土金屬比如鈣和鎂；堿金屬氫化物比如氫化鋰、氫化鉀和氫化鈉；無機氫氧化物比如氧化鋰，氫氧化鉀，氫氧化鈉和氫氧化鈣；碳酸鹽比如碳酸鈉，碳酸鉀和碳酸氫鈉；鋁，以及銨。有機堿的優(yōu)選例子包括金屬醇化物具有1至6碳原子，比如乙醇鋰、叔丁氧鋰、甲醇鈉、乙醇鈉和叔丁氧鉀金屬；金屬酚鹽比如苯酚鉀和苯酚鈉；醋酸鹽比如醋酸鈉和乙酸鉀；有機鋰鹽比如正丁基鋰、叔丁基鋰和二乙氨基鋰；肼比如苯肼和對甲苯肼；脒；季銨堿；锍堿；和胺比如三甲胺、三乙胺、吡啶、皮考啉、2，6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環(huán)己胺、二環(huán)己胺和N，N’-二芐基亞乙基二胺。
當該酸是有機酸時，并不特別地限制其pKa，其pKa例如，優(yōu)選在約0.1至約6.0之間，更優(yōu)選在約1.0至約6.0之間，更加優(yōu)選在約3.5至約6.0之間。
在本發(fā)明中，該水溶液中包含的“酸或堿”可獨立于生理活性物質或以與生理活性物質形成鹽的形式存在?；蛘撸撍芤嚎梢约劝砘钚晕镔|與“酸或堿”的鹽又包含獨立于生理活性物質的酸或堿。
如上所述，本發(fā)明中可以使用生理活性物質自身或其藥學上可接受的鹽。
當生理活性物質具有堿性基團比如氨基時，所述鹽包括與無機酸(也被稱為無機游離酸)(例如，碳酸、碳酸氫酸(bicarbonic acid)、鹽酸、硫酸、硝酸、硼酸，等等)以及有機酸(還稱為有機游離酸)(例如，琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸，等等)成鹽。當生理活性物質是LH-RH衍生物時，這樣的鹽優(yōu)選是醋酸鹽。例如，優(yōu)選醋酸亮丙瑞林等。
當生理活性物質具有酸性基團比如羧基時，所述鹽包括與無機堿(還稱為無機游離堿)(例如，堿金屬比如鈉和鉀；堿土金屬比如鈣和鎂，等等)以及與有機堿(還稱為有機游離堿)(例如，有機胺比如三乙胺，堿性氨基酸比如精氨酸，等等)成鹽。生理活性肽還可形成金屬絡合的化合物(例如，銅絡合的、鋅絡合的，等等)。
這些化合物或鹽其可以按照上述提及的文獻或專利公報中的方法或類似的方法制備。
每1mol“生理活性物質”所用“酸或堿”的量約為的1.5mol或更多，優(yōu)選約1.5mol至約5mol，更優(yōu)選約1.65mol至約3mol。
在本發(fā)明中，并不特別限制“水溶液”中“酸或堿”的比例(％重量)，只要其能夠發(fā)揮本發(fā)明的效果即可，但比例優(yōu)選約0.1至約20％重量，更優(yōu)選地約1至約15％重量，更優(yōu)選地約3至約10％重量。
如上所述，“酸或堿”可以獨立地或以與生理活性物質成鹽的形式加入水溶液中?；蛘?，獨立地加入“酸或堿”以及加入生理活性物質與“酸或堿”等等的鹽可以合用。
用于本發(fā)明的可生物降解聚合物優(yōu)選是可生物降解聚合物。這樣可生物降解聚合物的例子包括脂族聚酯[比如兩個或更多的α-羥基酸(例如，羥基乙酸、乳酸、2-羥基丁酸、2-羥基戊酸、2-羥基-3-甲基丁酸、羥基己酸、2-羥基異己酸、2-羥基辛酸，等等)、α-羥基酸環(huán)狀二聚物(例如，乙交酯、丙交酯，等等)、羥基二羧酸(例如，蘋果酸)和羥基三羧酸(例如，檸檬酸)的均聚物(例如，乳酸聚合物)或共聚物(例如，乳酸/羥基乙酸共聚物和2-羥丁酸/羥基乙酸共聚物)，或該均聚物和/或該共聚物的混合物(例如，乳酸聚合物和2-羥丁酸/羥基乙酸共聚物的混合物，等等)]；聚-α-氰基丙烯酸酯，聚氨基酸(例如，聚-γ-芐基-L-谷氨酸、聚-L-丙氨酸、聚-γ-甲基-L-谷氨酸，等等)，以及馬來酐共聚物(例如，苯乙烯/馬來酸共聚物，等等)。優(yōu)選是脂族聚酯和聚-α-氰基丙烯酸酯。特別優(yōu)選脂族聚酯。在脂族聚酯中，優(yōu)選具有游離末端羧基的聚合物或共聚物或者這些聚合物和/或共聚物的混合物，這些聚合物或共聚物由一種或多種α-羥基酸(比如，α-羥基單羧酸(例如，羥基乙酸、乳酸，等等)，α-羥基二羧酸(例如，蘋果酸)和α-羥基三羧酸(例如，檸檬酸)合成；聚(α-氰基丙烯酸酯)；聚氨基酸(例如，聚(γ-芐基-L-谷氨酸)，等等)；和基于馬來酐的共聚物(例如，苯乙烯-馬來酸共聚物)。
單體的聚合反應類型可以是任何的無規(guī)、嵌段和接枝型。當上述α-羥基單羧酸、α-羥基二羧酸和α-羥基三羧酸的分子結構中具有光學活性中心時，它們可以任為D-、L-和DL-型。其中優(yōu)選乳酸-羥基乙酸聚合物[在下文，也稱為聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(乳酸-共-羥基乙酸)或乳酸-羥基乙酸共聚物；除非具體指明，一般是指乳酸均聚物、羥基乙酸均聚物以及乳酸-羥基乙酸共聚物；或乳酸均聚物還被稱為乳酸聚合物、聚乳酸或聚交酯，以及羥基乙酸均聚物還被稱為羥基乙酸聚合物，聚羥基乙酸或聚乙交酯]，和聚(α-氰基丙烯酸酯)。更優(yōu)選乳酸-羥基乙酸聚合物，以及更加優(yōu)選具有游離末端羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物。
可生物降解聚合物可以是鹽形式。這些鹽的例子包括與無機堿(例如，堿金屬比如鈉和鉀；堿土金屬比如鈣和鎂，等等)形成的鹽，與有機堿(例如，有機胺比如三乙胺，堿性氨基酸比如精氨酸，等等)形成的鹽，與過渡金屬(例如，鋅、鐵、銅，等等)形成的鹽以及絡合鹽。
當乳酸-羥基乙酸聚合物用作可生物降解聚合物時，組成比例(mol％)優(yōu)選在100/0至約40/60之間，更優(yōu)選地在100/0至約50/50之間。當本發(fā)明的緩釋組合物是在2個月或者更長時間內釋放生理活性物質的長期緩釋微囊時，也優(yōu)選使用組成比例為100/0的乳酸聚合物。
作為“乳酸-羥基乙酸聚合物”中的一個最小重復單元，乳酸的光學異構體的比例[D型/L型(mol/mol％)]優(yōu)選在約75/25至約25/75之間。特別地，通常使用D型/L型(mol/mol％)比例在約60/40至約30/70之間的乳酸-羥基乙酸聚合物。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”的重均分子量通常在約3,000至約100,000之間，優(yōu)選在約5,000至約50,000之間，更優(yōu)選在約8,000至約30,000之間，更加優(yōu)選在約17,000至約30,000之間。
分散度(重均分子量/數(shù)均分子量)通常在約1.1至約4.0之間，優(yōu)選在約1.2至約3.5之間。在此，通過凝膠滲透色譜法(GPC)測定重均分子量和分散度。具體地說，重均分子量是指基于由凝膠滲透色譜法(GPC)測定的聚苯乙烯的重均分子量，測定中使用單分散聚苯乙烯作為標準，并使用所獲得的重均分子量計算各聚合物的含量。使用高效GPC儀(HLC-8120 GPC，由Tosoh Corporation制造)(柱子Super H4000 x 2和Super H2000(由ToshoCorportaion制造)；流動相四氫呋喃；流速0.6mL/min)進行測量。通過微分折射法進行檢測。
單位質量(g)的“乳酸-羥基乙酸聚合物”中包含游離末端羧基量優(yōu)選約20至約1,000μmol，更優(yōu)選約40至約300μmol。
在本發(fā)明中，可生物降解聚合物的游離末端羧基的摩爾數(shù)量優(yōu)選為“生理活性物質的”約0.1至約5倍，更優(yōu)選約0.2至約4倍，更優(yōu)選約0.3至約3.5倍。
通過標記法測定上述的游離末端羧基量(以下稱為″由標記法測定的羧基量″)。具體地說，就聚乳酸而言，W mg的聚乳酸溶于2mL的一種5N鹽酸/乙腈(V/V＝4/96)混合物，并且加入2mL 0.01M鄰-硝基苯肼鹽酸鹽(ONPH)溶液(5N鹽酸/乙腈/乙醇＝1.02/35/15)和2mL 0.15M 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽溶液(吡啶/乙醇＝4v/96v)使其在40℃反應30分鐘。除去溶劑后，殘余物用水(x4)洗滌，然后溶于2mL的乙腈中，并加入1mL的0.5mol/L氫氧化鉀的乙醇溶液使其在60℃反應30分鐘。該反應混合物經1.5N氫氧化鈉水溶液稀釋至Y mL。使用1.5N的氫氧化鈉水溶液作為對照在544nm處測定吸收度A(/cm)。使用DL-乳酸的水溶液作為標準物經堿量滴定確定游離羧基量(C mol/L)。當通過ONPH標記法測定的DL-乳酸酰肼在544納米處吸收度定義為B(/cm)時，單位重量(克)聚合物中游離末端羧基的摩爾量可以由下式計算[COOH](mol/g)＝(AYC)/(WB)。
雖然“羧基量”還可通過將可生物降解聚合物溶解在甲苯-丙酮-甲醇混合溶劑中并以酚酞作為指示劑使用氫氧化鉀的乙醇溶液滴定該溶液而測定(下文中，此方法的測定值將被稱為“由堿滴定法測定的羧基量”)，但是優(yōu)選上述的標記法測定，因為在堿滴定法的滴定期間聚酯主鏈水解的競爭可以導致滴定終點的不確定。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”可以通過乳酸和羥基乙酸的無催化劑的脫水縮聚作用(JP-A61-28521)制備，或通過環(huán)狀二酯化合物例如丙交酯和乙交酯在催化劑作用下的開環(huán)聚合制備(Encyclopedic Handbook of Biomaterials andBioengineering Part AMaterials，Volume 2，Marcel Dekker，Inc.(1995))。雖然由上述已知的開環(huán)聚合方法獲得的聚合物可能不具有游離末端羧基，但是它可以經改性從而使每單位物質具有一定的羧基，例如，如EP-A-0839525中的描述進行水解，然后可將所得聚合物用于本發(fā)明。
上述“具有游離末端羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物”可以通過已知的方法制備(例如，無催化劑的脫水縮聚作用法；參見JP-A 61-28521)或依照它的方法。
用于本發(fā)明的聚合物優(yōu)選乳酸聚合物(在下文，也稱為“本發(fā)明的乳酸聚合物”)，其例子包括乳酸均聚物和乳酸與其它單體的共聚物(例如，乳酸和羥基乙酸的共聚物)。在本發(fā)明的乳酸聚合物中，重均分子量為5,000或更小的聚合物的含量通常約為10wt％或更低，優(yōu)選約5wt％或更低，但不局限于此。
本發(fā)明乳酸聚合物的重均分子量通常在15,000至50,000之間，優(yōu)選在15,000至40,000之間，更優(yōu)選在17,000至30,000之間。
用作本發(fā)明乳酸聚合物原料的高分子量乳酸聚合物是商業(yè)可得的或可通過已知的聚合反應方法制備。高分子量乳酸聚合物的重均分子量通常在15,000至500,000之間，優(yōu)選在20,000至100,000之間。已知的聚合反應方法包括乳酸，如果必要的話與羥基乙酸，的縮聚；使用催化劑比如路易斯酸(例如，二乙基鋅、三乙基鋁、辛酸錫，等等)或金屬鹽的丙交酯，如果必要的話與乙交酯，的開環(huán)聚合；上述在羧基保護的羥基羧酸衍生物存在下的丙交酯的開環(huán)聚合(例如，WO00/35990)；在加熱下使用催化劑的丙交酯開環(huán)聚合(例如J.Med.Chem，16，897(1973))；以及丙交酯和乙交酯的共聚。
聚合反應可通過本體聚合或溶液聚合而實現(xiàn)，整體聚合包括融化丙交酯等物質然后使其進行聚合反應，溶液聚合包括在合適的溶劑中溶解丙交酯等物質然后使其進行聚合反應。從工業(yè)生產率的觀點來看，優(yōu)選由溶液聚合獲得的聚合物用作本發(fā)明乳酸聚合物的原料。
在溶液聚合中用于溶解丙交酯溶劑的例子包括芳香烴比如苯、甲苯和二甲苯、十氫化萘、以及二甲基甲酰胺。
所獲得的高分子量乳酸聚合物的水解是通過本身已知的水解方法而實現(xiàn)。例如，高分子量乳酸聚合物可以溶于合適的溶劑然后在水，如果必要的話，和酸存在下反應。
用于溶解高分子量乳酸聚合物的溶劑的例子包括鹵代烴比如氯仿和二氯甲烷；芳香烴比如甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯和對二甲苯；環(huán)醚比如四氫呋喃；丙酮；和N，N-二甲基甲酰胺。當使用還可以用于水解高分子量乳酸聚合物的溶劑通過聚合制備高分子量乳酸聚合物時，可以連續(xù)地進行聚合和水解，在聚合后無需分離該高分子量乳酸聚合物。
溶解高分子量乳酸聚合物的溶劑用量通常為作為溶質的高分子量乳酸聚合物重量的約0.1至約100倍，優(yōu)選約1至約10倍。
加入的水量通常為高分子量乳酸聚合物的約0.001至約1倍，優(yōu)選約0.01至約0.1倍。
如果必要的話，加入的酸的例子包括無機酸比如鹽酸、硫酸和硝酸，以及有機酸比如乳酸、乙酸和三氟乙酸。優(yōu)選使用三氟乙酸。
加入的酸量通常約為高分子量乳酸聚合物重量的0至10倍，優(yōu)選約0.1至約1倍。
水解溫度通常約為0至150℃，優(yōu)選約20至約80℃。
水解時間的變化取決于所用高分子量乳酸聚合物的重均分子量和反應溫度，但是通常約為10分鐘至100小時，優(yōu)選約1至約20小時。
根據(jù)水解產物的重均分子量判斷水解完成。具體地說，在水解期間適當?shù)厥占瘶悠凡⑼ㄟ^凝膠滲透色譜法GPC測定樣品中水解產物的重均分子量。當重均分子量在約15,000至約50,000之間，優(yōu)選在約15,000至約40,000之間，更優(yōu)選地在約17,000至約30,000之間時，終止水解。
高分子量乳酸聚合物如上所述水解后，獲得包含水解產物的溶液。為了從溶液中沉淀目標乳酸聚合物，使用的方法包括用能沉淀包含于溶液中的目標乳酸聚合物的溶劑接觸包含水解產物的溶液，等等。
這些包含水解產物的溶液的優(yōu)選狀況是，例如，約10至約50wt％的乳酸聚合物溶液，其中乳酸聚合物的重均分子量為15,000至50,000，優(yōu)選15,000至40,000，更優(yōu)選17,000至30,000，所用溶劑能夠溶解高分子量乳酸聚合物，比如鹵代烴(例如，氯仿、二氯甲烷，等等)，芳香族烴(例如，甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯，等等)，環(huán)醚(例如，四氫呋喃，等等)，丙酮或N，N-二甲基甲酰胺。
用于沉淀包含水解產物的溶液中所包含的目標乳酸聚合物的溶劑的例子包括醇比如甲醇和乙醇，線性醚比如異丙醚，脂肪族烴比如己烷，以及水。
用于沉淀目標乳酸聚合物的溶劑量通常為包含水解產物的溶液中溶劑重量的約0.1至約100倍，優(yōu)選約1至約10倍。
在所述溶劑及其用量結合的優(yōu)選例子中，包含水解產物的溶液的溶劑是二氯甲烷，其為溶質重量的約1至約5倍，用于降低溶液溶解度的溶劑是異丙醚，其約為二氯甲烷重量的約2至約10倍。
當能夠沉淀目標乳酸聚合物溶質的溶劑與包含水解產物的溶液相接觸時，該溶劑的溫度通常約為-20至約60℃，優(yōu)選約0至約40℃，包含水解產物的溶液溫度通常約為0至約40℃，優(yōu)選約10至約30℃。
通過將包含水解產物的溶液一步加入溶劑中、將包含水解產物的溶液逐滴加入溶劑中、將溶劑一步加入包含水解產物的溶液中、將溶劑逐滴加入包含水解產物的溶液中等方式使得溶劑與包含水解產物的溶液相接觸。
這樣獲得的本發(fā)明的乳酸聚合物具有用作緩釋制劑基質材料的優(yōu)選量的末端羧基，因此其優(yōu)選用作緩釋制劑的基質材料。生物相容的聚合物的其它例子包括聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚胺酸、右旋糖酐硬脂酸鹽、乙基纖維素、乙酰纖維素、硝酸纖維素、基于馬來酐的共聚物、基于乙烯乙酸乙烯酯的共聚物、聚醋酸乙烯酯和聚丙烯酰胺。
這些聚合物可以單獨使用，或其中兩種或更多種以共聚物或簡單混合物的形式使用，或使用其任何鹽。
在下文，將舉例說明一種制備緩釋組合物(例如，微囊)的方法，該組合物包含根據(jù)本發(fā)明的生理活性物質或其鹽和乳酸聚合物或其鹽。
在如下所述的方法中，如果必要的話可以通過本身已知的方法加入下列組分(1)至(4)(1)藥物載體白蛋白、明膠、檸檬酸、水楊酸、乙烯二氨基四乙酸鈉、糊精、亞硫酸氫鈉、多元醇化合物比如聚乙二醇、瓊脂、褐藻酸、聚乙烯醇、堿性氨基酸，等等；(2)保持生理活性物質或其鹽的穩(wěn)定性和溶解度的pH調節(jié)劑碳酸、乙酸、草酸、檸檬酸、磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、精氨酸、賴氨酸，其鹽，等等；(3)生理活性物質或其鹽的穩(wěn)定劑白蛋白、明膠、檸檬酸、乙烯二氨基四乙酸鈉、糊精、亞硫酸氫鈉、多元醇化合物比如聚乙二醇，等等；(4)防腐劑對羥基苯酸酯(例如，羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯，等等)、芐醇、氯代丁醇、硫柳汞，等等。
(I)W/O/W的方法在此方法中，首先，制備可生物降解聚合物的溶液，優(yōu)選在有機溶劑中，更優(yōu)選在低水溶性有機溶劑中制備。用于制備本發(fā)明的緩釋組合物(優(yōu)選為微粒形式，更優(yōu)選為微球或微囊)的溶液優(yōu)選是沸點約為120℃或更低的低水溶性溶劑的溶液。
這樣的有機溶劑的例子包括鹵代烴(例如，二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳，等等)，醚(例如，乙醚、異丙醚，等等)，脂肪酸酯(例如，乙酸乙酯、乙酸丁酯，等等)，芳香烴(例如，苯、甲苯、二甲苯，等等)，醇(例如，乙醇、甲醇，等等)和乙腈。其中，優(yōu)選鹵代烴并特別優(yōu)選二氯甲烷。這些有機溶劑可以以合適的比例混合使用。在使用有機溶劑的混合物的情況中，優(yōu)選使用鹵代烴和醇的混合物，特別優(yōu)選使用二氯甲烷和乙醇的混合物。
溶液中可生物降解聚合物的濃度的改變取決于該可生物降解聚合物的分子量和該溶劑的種類。例如，當二氯甲烷用作溶劑時，可生物降解聚合物的濃度通常約為0.5至70wt％，優(yōu)選約1至約60wt％，更優(yōu)選約2至約50wt％。
當二氯甲烷和乙醇的混合物用作有機溶劑時，二氯甲烷與乙醇的體積比通常約為0.01至50％(V/V)，優(yōu)選約0.05至約40％(V/V)，更優(yōu)選約0.1至約30％(V/V)。
接著，如上所述，將生理活性物質溶于包含酸或堿的摩爾量約為生理活性物質1.5倍或更多的水溶液，或溶于包含約0.1至約20wt％的酸或堿的水溶液。生理活性物質還可以與合適的酸或堿以鹽的形式溶解。該水溶液的溶劑可以是水或水和醇(例如，甲醇、乙醇，等等)的混合物。
加入生理活性物質或其鹽以致它在溶液中的濃度通常在約0.001mg/mL至約10g/mL之間，優(yōu)選約0.1mg/mL至約5g/mL，更優(yōu)選約10mg/mL至約3g/mL。
此外，可以使用公知的增溶劑或穩(wěn)定劑。為了溶解或分散生理活性物質和添加劑，可以在不損害活性的程度上進行加熱、搖動、攪拌等。所獲得的水溶液稱為內水相。
所獲得的油相和內水相經公知方法比如均化或超聲處理而乳化形成W/O型乳劑。
混合可生物降解聚合物和生理活性物質，使每單位質量(g)可生物降解聚合物的末端羧基量(mol)通常約為生理活性物質摩爾量的0.01至10倍，優(yōu)選約0.1至約5倍。
混合的油相的重量為內水相重量的約1至約1,000倍，優(yōu)選約2至約100倍，更優(yōu)選約3至約30倍。
在大約12至約25℃下，所獲得的W/O型乳劑的粘度通常在約10至約10,000cp之間，優(yōu)選在約100至約5,000cp之間，更優(yōu)選在約200至約3,000cp之間，更加優(yōu)選在約300至約2,000cp之間。
當本發(fā)明的方法應用工業(yè)生產時，在大約12至約25℃下，W/O型乳劑優(yōu)選在約3,000cp或更低范圍內，更優(yōu)選在約2,000cp或更低范圍內，更加優(yōu)選在約300至約2,000cp范圍內。
接著，將所獲得的W/O型乳劑加至水相形成W(內水相)/O(油相)/W(外水相)型乳劑。此后，油相中的溶劑經揮發(fā)或擴散進入外水相從而制備微囊。在這時候，外水相的重量通常為油相重量的約1至約10,000倍，優(yōu)選約5至約5,000倍，更優(yōu)選約10至約2,000倍，特別優(yōu)選約20至約500倍。
可以將乳化劑加入外水相中。乳化劑通常可以是能夠形成穩(wěn)定的W/O/W型乳劑的任何乳化劑。這樣的乳化劑的具體例子包括陰離子表面活性劑(例如，油酸鈉、硬脂酸鈉、月桂基硫酸鈉，等等)，非離子型表面活性劑[例如，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯(例如，由Atlas powder制造的吐溫80和吐溫60)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如，由Nikko Chemicals制造的HCO-60和HCO-50)]、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、卵磷脂、明膠和透明質酸。這些乳化劑可單獨使用或結合兩種或更多種一起使用。加入乳化劑以致它在外水相的濃度優(yōu)選在約0.01至約10wt％之間，更優(yōu)選在約0.05至約5wt％之間。
可以將滲透壓調節(jié)劑加入外水相中。可使用能在水溶液中產生滲透壓的任何滲透壓調節(jié)劑。
這樣的滲透壓調節(jié)劑的例子包括多元醇、一元醇、單糖、二糖、低聚糖、氨基酸，及其衍生物。
多元醇的例子包括三元醇比如甘油，五元醇比如阿糖醇、木糖醇和阿東糖醇，以及六元醇比如甘露醇、山梨醇和衛(wèi)矛醇。其中，優(yōu)選六元醇且特別優(yōu)選甘露醇。
一元醇的例子包括甲醇、乙醇和異丙醇。其中，優(yōu)選乙醇。
單糖的例子包括戊糖比如阿糖、木糖、核糖和2-脫氧核糖，以及己糖比如葡萄糖、左旋糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖和巖藻糖。其中，優(yōu)選己糖。
低聚糖的例子包括三糖比如麥芽三糖和棉子糖，以及四糖比如水蘇糖。其中，優(yōu)選三糖。
單糖、二糖或低聚糖衍生物的例子包括葡糖胺、軟骨糖胺、葡糖醛酸和半乳糖醛酸。
氨基酸可以是任何L-氨基酸，其例子包括甘氨酸、亮氨酸和精氨酸。其中，優(yōu)選L-精氨酸。
滲透壓調節(jié)劑可以單獨使用或結合兩種或更多種一起使用。所用的滲透壓調節(jié)劑應達到這樣的濃度使得外水相的滲透壓約為生理鹽水的約1/50至約5倍，優(yōu)選約1/25至約3倍。當甘露醇用作滲透壓調節(jié)劑時，它的濃度是優(yōu)選約為0.5至1.5％。
通過本身已知的方法或與其一致的方法除去有機溶劑。這樣的方法的例子包括使用螺旋槳式攪拌器或磁力攪拌器等攪拌的同時，在標準大氣壓或逐漸減壓下蒸發(fā)有機溶劑的方法，或使用旋轉蒸發(fā)器在受調節(jié)的真空下蒸發(fā)有機溶劑的方法，等等。
通過離心或過濾收集所獲得的微膠囊，用蒸餾水洗滌若干次至除去游離的生理活性物質、乳化劑、滲透壓調節(jié)劑等粘附在它們的表面的物質，在蒸餾水等溶劑中再次分散，然后冷凍干燥。
可以加入防絮凝劑以預防在制備微囊的工藝過程中微粒的絮凝。這樣的防絮凝劑的例子包括甘露醇、乳糖、葡萄糖、水溶性多糖比如淀粉(例如玉米淀粉)、氨基酸比如甘氨酸，以及蛋白比如血纖維蛋白和膠原蛋白。特別優(yōu)選甘露醇。
所加入的防絮凝劑比如甘露醇的量通常約為微囊總重量的0至24wt％。
冷凍干燥以后，如果需要，可以在微囊不相互熔接的條件下加熱從而從微囊中除去水和有機溶劑。優(yōu)選地，在大約微囊的中間玻璃態(tài)轉變溫度或比微囊的該中間玻璃態(tài)轉變溫度稍高的溫度加熱微囊，使用差示掃描量熱計以每分鐘10℃至20℃的溫度上升速率測定該中間玻璃態(tài)轉變溫度。更優(yōu)選地，在大約它們的中間玻璃態(tài)轉變溫度至約比該中間玻璃態(tài)轉變溫度高30℃的溫度之間加熱微囊。特別當可生物降解聚合物是乳酸-羥基乙酸聚合物時，優(yōu)選在大約它們的中間玻璃態(tài)轉變溫度至約比該中間玻璃態(tài)轉變溫度高10℃的溫度之間加入微囊，更優(yōu)選在大約它們的中間玻璃態(tài)轉變溫度至約比該中間玻璃態(tài)轉變溫度高5℃的溫度之間。
加熱時間的改變取決于微囊的數(shù)量等因素。微囊達到所要求的溫度后通常加熱約12小時至約168小時，優(yōu)選約24小時至約120小時，特別優(yōu)選約48小時到約96小時。
加熱微囊的方法可以是任何能夠均勻加熱全部微囊的方法，并沒有特別的限制。
加熱干燥方法的例子包括在恒溫浴、流化床浴、移動浴或爐中加熱干燥的方法，以及使用微波加熱干燥的方法。優(yōu)選在恒溫浴中加熱干燥的方法。
(II)相分離的方法使用此方法制備微囊時，在攪拌下，向如上(I)水中干燥法所述的包含由生理活性物質和可降解的聚合物組成的組合物的W/O型乳劑中緩慢加入團聚劑并沉淀出微囊，并使其固化。加入的團聚劑的量為油相體積的約0.01至約1,000倍，優(yōu)選約0.05至約500倍，特別優(yōu)選約0.1至約200倍。
團聚劑包括基于聚合物的、基于礦物油的或基于植物油的化合物，其可與有機溶劑混合且不溶解本發(fā)明的可生物降解聚合物。這樣的團聚劑的具體例子包括硅油、芝麻油、豆油、玉米油、棉子油、椰子油、亞麻子油、礦物油、正己烷和正庚烷?？梢越Y合使用兩種或多種一起使用。
收集所獲得的微囊，用庚烷等溶劑反復沖洗以除去團聚劑等物質，而留下由生理活性物質和可生物降解聚合物組成的組合物，然后減壓干燥?；蛘撸梢圆捎萌缟?I)水中干燥法所述的方式洗滌微囊，然后冷凍干燥并進一步加熱干燥。
(III)噴霧干燥法當使用此方法制備微囊時，如上(I)水中干燥法所述的包含由生理活性物質和可降解的聚合物組成的組合物的W/O型乳劑經噴嘴噴入干燥室中，包含于霧化液滴中的有機溶劑在非常短的時期內揮發(fā)而獲得微囊。管口的例子包括雙相噴嘴，壓力噴嘴和旋轉的可調圓盤式噴嘴。此后，可以采用如上(I)所述的在水中干燥法的方式洗滌微囊，然后冷凍干燥并進一步加熱干燥。
作為除上述微囊之外的劑型，可以提及微粒。這樣的微粒可以經如下所述的方式制備。首先，使用例如旋轉蒸發(fā)器等儀器真空干燥包含如上(I)水中干燥法所述的由生理活性物質和可生物降解聚合物組成的組合物，從而蒸發(fā)有機溶劑和水。接著，使用噴射磨等儀器研磨殘余物從而獲得微粒。
此外，可以以上述(I)中制備微囊方法同樣的方式水洗微粒，然后冷凍干燥并進一步加熱干燥。
在本發(fā)明中，優(yōu)選使用摩爾量為生理活性物質約1.5至約5倍的酸或堿。
當生理活性物質是由下面通式表示的化合物時5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中每個縮寫代表如上所述的相同含義，優(yōu)選使用摩爾量為此生理活性物質約1.5至約5倍的酸。該酸優(yōu)選為有機酸，特別是乙酸。
該可生物降解聚合物優(yōu)選是乳酸-羥基乙酸聚合物。乳酸-羥基乙酸聚合物的組成比例(摩爾比)優(yōu)選100∶0至約50∶50，更優(yōu)選地100∶0。該可生物降解聚合物優(yōu)選是重均分子量為15,000至50,000的乳酸聚合物，其中重均分子量為5,000或更低的聚合物的含量約為5wt％或更低。
優(yōu)選使用低水溶性有機溶劑特別優(yōu)選二氯甲烷制備可生物降解聚合物的溶液。
在本發(fā)明中，優(yōu)選1)包含生理活性物質和酸或堿的水溶液和2)均勻混合可生物降解聚合物的溶液。更優(yōu)選地，所獲得的混合物是乳劑。
更優(yōu)選地，這樣的乳劑是的W/O型乳劑，其中的粒徑微細。
混合物的干燥優(yōu)選使用水中干燥法進行。特別地，水中干燥法中優(yōu)選向外水相中加入滲透壓調節(jié)劑。
滲透壓調節(jié)劑優(yōu)選甘露醇。
本發(fā)明的緩釋組合物可以按原樣施用，或作為原料配制成各種劑型比如施用于肌肉、下皮層、器官等內部的注射劑或植入物；施用于鼻腔、直腸、子宮等內部的經粘膜制劑(transmucosal agent)；或口服劑(比如膠囊(例如硬膠囊和軟膠囊)，固體制劑比如顆粒劑和粉劑，以及液體制劑比如糖漿劑、乳劑和懸浮劑)。
例如，本發(fā)明的緩釋組合物可以與分散介質比如分散劑(例如，表面活性劑比如吐溫80或HCO-60；多糖比如透明質酸鈉，羧甲基纖維素或海藻酸鈉，等等)、防腐劑(例如，羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯，等等)以及等滲劑(例如，氯化鈉、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、脯氨酸，等等)混合從而制備水懸浮劑或與分散介質比如植物油例如芝麻油或玉米油混合從而制備油懸浮劑，由此制備實用的緩釋注射劑。
用作懸浮注射劑的本發(fā)明緩釋組合物的粒徑應該在具有令人滿意的分散性并具有令人滿意的透過針管的能力的范圍內。例如，平均粒子直徑在約0.1至300μm之間，優(yōu)選約0.5至150μm之間，更優(yōu)選約1至100μm之間。
本發(fā)明的緩釋組合物可以經任何方法配制成無菌制劑，該方法包括但不限于在所有生成步驟中使用γ射線滅菌以及加入抗菌劑。
對于上述緩釋組合物的緩釋注射劑，可以向上述懸浮劑組分中加入賦形劑(例如，甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖，等等)，所得懸浮液可經再分散并隨后冷凍干燥或噴霧干燥從而獲得固體。在給藥的時候，可向該固體中加入注射用水和任何合適的分散介質從而獲得更加穩(wěn)定的緩釋注射劑。
在向緩釋組合物的緩釋注射劑中加入賦形劑例如甘露醇的情況中，賦形劑的含量約為全部注射劑重量的0至50％重量，優(yōu)選約1到20％重量。
在緩釋組合物的緩釋注射劑分散于注射用水或任何合適的分散介質的情況中，在給藥的時候，該緩釋組合物的含量約為分散介質和緩釋組合物總重的1至80％重量，優(yōu)選10到60％重量。
本發(fā)明的緩釋組合物可以根據(jù)本身已知的方法配制成口服制劑。例如，本發(fā)明的緩釋組合物可以與賦形劑(例如，乳糖、白糖、淀粉，等等)，崩解劑(例如，淀粉、碳酸鈣，等)，粘結劑(例如，淀粉、阿拉伯樹膠、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素，等等)，潤滑劑(例如，滑石粉、硬脂酸鎂、聚乙二醇6000，等等)等等進行混合，壓模，然后，如果必要的話，為掩蔽味道或獲得腸溶或緩釋性質的目的由本身已知的方法進行包衣。包衣劑的例子包括羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚氧乙二醇、吐溫80、Pluronic F68、醋酞纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥甲基乙酸纖維素琥珀酸鹽、Eudragit(由RohmCompany制造，德國，甲基丙烯酸-丙烯酸酯共聚物)和色素比如二氧化鈦或鐵丹。
根據(jù)本發(fā)明方法制備的緩釋組合物可以通過本身已知的方法配制成固體、半固體或液體形式的鼻制劑。例如，固體鼻制劑可以是由緩釋組合物單獨制成的粉末組合物或通過混合緩釋組合物和賦形劑(例如，葡萄糖、甘露醇、淀粉、微晶纖維素，等等)、增稠劑(例如，天然膠、纖維素衍生物、丙烯酸聚合物，等等)等等并接著進行粉碎而制備的粉末組合物。液體鼻制劑可以以上述注射劑類似的方式制備成油或水懸浮劑。半固體制劑優(yōu)選制備成水或油的凝膠或軟膏。這些鼻制劑可以包含酸堿度調節(jié)劑(例如，碳酸、磷酸、檸檬酸、鹽酸、氫氧化鈉，等等)，抗菌劑(例如，對羥基苯酸酯、氯代丁醇、苯扎氯銨，等等)等等。
本發(fā)明的緩釋組合物可以根據(jù)本身已知的方法配制成含油的或含水的固體或半固體或液體形式的栓劑。用于上述栓劑的含油基質可以是任何不溶解微囊的含油基質。這樣的含油基質的例子包括高級脂肪酸的甘油酯[例如，可可脂，Witepsol-系列產品(Dynamite Nobel)，等等]，中級脂肪酸[例如，Witepsol-系列產品(Dynamite Nobel)，等等]和植物油(例如，芝麻油、豆油、棉子油，等等)。含水基質的例子包括聚乙二醇和丙二醇。含水凝膠基質的例子包括天然樹膠、纖維素衍生物、乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。
本發(fā)明的緩釋組合物優(yōu)選用作注射劑。
本發(fā)明的緩釋組合物毒性較低并由此能被用作對于哺乳動物(例如，人類，牛、豬、狗、貓、小鼠、大鼠、兔，等等)安全的藥物等等。
本發(fā)明緩釋組合物的劑量的改變取決于作為主藥的生理活性物質或其鹽的類型和含量、劑型、釋放生理活性物質或其鹽的持續(xù)時間、目標疾病、目標動物等等，但是應是有效量的生理活性物質或其鹽。當緩釋組合物是6個月的制劑時，對于成年人，作為主藥的生理活性物質或其鹽的劑量例如可以選自約0.01mg至約10mg/公斤體重之間，更優(yōu)選地約0.05mg至約5mg/公斤體重。
對于成年人，緩釋組合物的劑量可以優(yōu)選約0.05mg至約50mg/公斤體重之間，更優(yōu)選約0.1mg到約30mg/公斤體重。
給予的頻率可以是幾周一次、一月一次、幾月一次(例如，三個、四個或六個月)等等，其恰當?shù)倪x擇取決于作為主藥的生理活性物質或其鹽的類型或含量、劑型、釋放生理活性物質或其鹽的持續(xù)時間、目標疾病、目標動物，等等。
本發(fā)明的緩釋組合物可以用作預防或治療各種的疾病的藥物，其預防或治療的疾病取決于包含其中的生理活性物質或其鹽的類型。在生理活性物質或其鹽是LH-RH衍生物的情況中，本發(fā)明的緩釋組合物可以用作例如預防或治療依賴激素的疾病的藥物，尤其是依賴激素的癌癥(例如，前列腺癌、子宮癌癥、乳腺癌、垂體腫瘤，等等)或依賴性激素的疾病比如前列腺肥大、子宮內膜異位、子宮肌瘤、早熟青春期、痛經、無月經、經前期綜合征或多囊卵巢綜合癥；避孕藥物(或者如果在休藥期后使用反跳作用，用于預防或治療不孕)；或預防或治療疾病比如阿爾茨海默病原或免疫缺陷的藥物。本發(fā)明的緩釋組合物還可以用作于預防或治療與性激素無關但對LH-RH敏感的良性或惡性腫瘤的藥物。
人們已經相信，給予絕經前患者包括醋酸亮丙瑞林的激素治療藥物難以預防手術后乳腺癌的復發(fā)，這是因為一些乳腺癌細胞對激素敏感并因雌激素而生長。但是，根據(jù)上述方法或與其一致的方法制備的包含LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的藥物，優(yōu)選包含亮丙瑞林或其鹽(優(yōu)選地醋酸亮丙瑞林)的緩釋微囊的藥物，出人預料的可以用作預防或抑制手術后的絕經前乳腺癌復發(fā)的藥物。
包括上述含LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)[優(yōu)選該藥物包含亮丙瑞林或其鹽(優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的緩釋微囊]的藥物的緩釋組合物可以作為注射劑或植入物的形式(優(yōu)選注射劑)方便地皮下、肌內或血管內給予(優(yōu)選皮下)。這樣的緩釋組合物可以配制成上述各種劑型或還可以用作制備這樣的劑型中的原料。
包含LH-RH激動劑或拮抗劑的緩釋組合物的劑量的改變取決于目標疾病、LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的含量、劑型、釋放LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的持續(xù)時間、目標動物[例如，溫血哺乳動物(例如，人類，小鼠、大鼠、兔、綿羊、豬、牛、馬，等等)]等等，但是應是有效量的LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)。對于溫血哺乳動物，LH-RH濕度激動劑或拮抗劑(優(yōu)選地亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的劑量例如可以為約0.01mg至約100mg/公斤體重之間，優(yōu)選約0.02mg至約50mg/公斤體重，更優(yōu)選約0.05mg至約20mg/公斤體重。
在包含LH-RH激動劑或拮抗劑的緩釋組合物以注射劑形式給予的情況下，該LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)可以皮下或肌內給予成年人(60公斤體重)，每月劑量通常為約0.01至約50mg，優(yōu)選約0.1至約20，g，更優(yōu)選約0.1至約15mg。
包含LH-RH激動劑或拮抗劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)[優(yōu)選該劑包含緩釋微囊包含亮丙瑞林或其鹽(優(yōu)選地醋酸亮丙瑞林)]的藥物的給藥期沒有特別地限制，但通常為約1至約5年，優(yōu)選約2年。
給予其它動物時，上述每60公斤體重的劑量可以根據(jù)其體重而轉化。
LH-RH激動劑或拮抗劑[優(yōu)選由下式表示的肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5或其鹽(在下文，也稱為“亮丙瑞林或其鹽”]，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林可以以下列方式給予任選有糖包衣的片劑、膠囊、酏劑或緩釋制劑的口服形式，或在水中或藥學上可接受的除水外的液體中的注射劑，例如，無菌溶液或懸浮液，的胃腸外形式，或緩釋制劑(特別地，緩釋微囊)，植入物(例如，使用可生物降解聚合物作為基質材料而成型的植入物，或通過向由生物相容金屬比如鈦制成的管中填充活性成分以便恒速釋放活性成分從而制備的植入物)，通過將可生物降解聚合物和藥物溶解于或分散于活體可接受的有機溶劑中從而制備的注射劑，或鼻制劑，例如溶液或懸浮液。優(yōu)選給予緩釋制劑的形式，特別優(yōu)選緩釋注射劑的形式。此外，在該緩釋制劑是緩釋微囊的情況中，該緩釋微囊優(yōu)選是能夠在2個月或更長時間內釋放LH-RH激動劑或拮抗劑的長期緩釋微囊。
上述制劑可以通過在通常藥物使用中所需要的單位劑型中混合亮丙瑞林或其鹽優(yōu)選醋酸亮丙瑞林與已知的生理學可接受的載體而制備，其中載體包括調味劑、賦形劑、賦形劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑，等等。
可以結合入片劑、膠囊等等的添加劑包括粘合劑比如明膠、玉米淀粉、黃蓍膠或阿拉伯樹膠，賦形劑比如結晶纖維素，膨脹劑比如玉米淀粉、明膠或褐藻酸，潤滑劑比如硬脂酸鎂，甜味劑比如蔗糖、乳糖或糖精，以及調味劑比如薄荷、akamono油或櫻桃。在單位劑型是膠囊的情況中，液體載體比如油脂可以進一步與上述組分相結合?？梢愿鶕?jù)常規(guī)的藥物慣例配制注射劑的無菌組合物，例如，通過將活性成分溶解或懸浮于賦形劑比如注射用水中或天然存在的植物油例如芝麻油或椰子油中。
用于注射液的水溶液包括生理鹽水和包含葡萄糖或其他的助劑(例如，D-山梨醇，D-甘露醇，氯化鈉，等等)的等滲溶液并可以與合適的增溶劑比如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非離子表面活性劑(例如，聚山梨酸酯80(TM)、HCO-50)等等合用。注射用油包括芝麻油和豆油并可以與增溶劑比如苯甲酸芐酯或芐醇合用。
上述制劑還可包含緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖液、醋酸鈉緩沖液，等等)、安撫劑(例如，苯扎氯銨、鹽酸普魯卡因，等等.)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白，聚乙二醇，等等.)、防腐劑(例如，芐醇、酚，等等.)、抗氧化劑，等等。所制備的注射劑通常被填入合適的密封容器比如一種安瓿或瓶中。
實施例下文中本發(fā)明將參考實施例進行更加詳細的描述。
實施例1將DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(206.6g)的二氯甲烷(354.8g)溶液調節(jié)至約30℃。該溶液(381.5g)與預先加熱至約55℃的溶于含水乙酸(通過在31.75g蒸餾水中溶解0.6g冰乙酸而制備)(16.6g)中的醋酸亮丙瑞琳(15.8g)水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物從而獲得W/O型乳劑。接著，冷卻W/O型乳劑至約18℃并傾入含有0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由Nippon SyntheticChemical Industry Co.，Ltd制造)和1％甘露醇的水溶液中(25L)，該溶液已預先調至18℃，經HOMOMIC LINE FLOW(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)使溶液二次乳化從而形成W/O/W型乳劑(渦流旋轉速率，約7,000rmp；旋轉泵轉速，約2,000rmp)。該W/O/W型乳劑在水中干燥約3小時，經75μm孔徑的標準篩過篩，然后離心(H-600S，由Kokusan Enshinki K.K.制造)(轉速，約2,000rmp；流速，約600mL/min)從而允許微球持續(xù)沉降而收集。收集的微球再次分散于少量蒸餾水中然后經90μm孔徑的標準篩過篩。向分散體中加入甘露醇(18.9g)并使用冷凍干燥機(TRIOMASTER，由KyowaShinku K.K.制造)進行冷凍干燥從而獲得粉末(微球粉末)。所獲得的微球中醋酸亮丙瑞琳的含量為8.2％，收率約為75％。
加入乙酸使得可獲得令人滿意的W/O型乳劑，向外部水相中加入甘露醇使得可改善所得微球的分散性。
實驗性實施例1調節(jié)DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(151.3g)的二氯甲烷(259.9g)溶液至約30℃。該溶液(373.7g)與預先加熱至約55℃的溶于含水乙酸(通過在31.75g蒸餾水中溶解0.6g冰乙酸而制備)(16.2g)中的醋酸亮丙瑞琳(15.5g)水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物從而獲得W/O型乳劑。在開始乳化2，5和8分鐘后，取部分W/O型乳劑，然后進行粘度測量(使用振動粘度計)。結果示于表1。


如表1所示，獲得了穩(wěn)定的W/O型乳劑。乳化8分鐘后的W/O型乳劑具有稍高的粘度。盡管乳化5分鐘后W/O型乳劑的粘度也增加了，但該水平并不會給制備帶來問題。
比較實施例1調節(jié)DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(151.1g)的二氯甲烷(259.8g)溶液至約30℃。該溶液(374.6g)與預先加熱至約55℃的醋酸亮丙瑞琳(15.5g)溶于蒸餾水(15.9g)的水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika KogyoCo.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物從而獲得W/O型乳劑。在開始乳化2和4分鐘后，取部分W/O型乳劑，然后進行粘度測量(使用振動粘度計)。結果示于表2。


W/O型乳劑的粘度在乳化4分鐘后增加了。與加入乙酸的實驗性實施例1相比，W/O型乳劑的粘度顯著增加。
實驗性實施例2醋酸亮丙瑞琳(藥物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分別為0.2061g)溶于不同濃度的乙酸水溶液中(分別為0.2116g)，向其中加入DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物經渦流混合器攪拌約30秒從而獲得W/O型乳劑。比較所獲得的W/O型乳劑的表觀。結果示于圖1中。在使用摩爾量約為藥物1.8倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，似乎形成了小乳劑顆粒。在使用摩爾量約為藥物1.4倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，藥物凝膠化。在使用摩爾量約為藥物1.6倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，藥物輕微凝膠化。使用摩爾量約為藥物1.8、2.3或2.8倍的乙酸，獲得了均一乳劑。使用摩爾量約為藥物1.8倍的乙酸所制備的W/O型乳劑呈藍色透明。另一方面，使用摩爾量約為藥物2.3倍或更多的乙酸所制備的W/O型乳劑呈乳白色。使用摩爾量約為藥物1.7倍的乙酸所制備的W/O型乳劑呈藍色透明。從這些結果中發(fā)現(xiàn)，使用摩爾量為藥物1.7至1.8倍的乙酸所制備的藍色透明的W/O型乳劑形成了最小的乳劑顆粒。
實驗性實施例3醋酸亮丙瑞琳(藥物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分別為0.2g)溶于不同濃度的乙酸水溶液中(分別為0.2116g)，向其中加入乳酸-羥基乙酸共聚物(重均分子量10,500)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物經渦流混合器攪拌約30秒從而獲得W/O型乳劑。比較所獲得的W/O型乳劑的表觀。結果，在使用摩爾量約為藥物1.8倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，似乎形成了均一乳劑顆粒。在使用摩爾量約為藥物1.3和1.4倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，油相和內水相分離。
實驗性實施例4醋酸亮丙瑞琳(藥物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分別為0.2g)溶于不同濃度的乙酸水溶液中(分別為0.2116g)，向其中加入DL-乳酸聚合物(重均分子量14,500)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物經渦流混合器攪拌約30秒從而獲得W/O型乳劑。比較所獲得的W/O型乳劑的表觀。結果，在使用摩爾量約為藥物1.8倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，似乎形成了均一乳劑顆粒。在使用摩爾量約為藥物1.3和1.4倍的乙酸所制備的W/O型乳劑中，油相和內水相分離。
實驗性實施例5將實施例1中獲得的微球(110mg)分散于分散媒介(0.3mL)(通過將0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80和15mg甘露醇溶解于蒸餾水中而制備)中，然后使用22G注射針皮下給藥至7周齡雄性SD大鼠背部。自給藥開始經過預定的時間后，處死大鼠。切除留在給藥位點的微球。確定微球內肽A的量，定量數(shù)值除以起始含量從而確定殘留率。結果示于表3。


從表3中可見，僅配制肽A所制備的實施例1的微球可以以高包封率(trapping rate)包含生理活性物質，并且具有出色的分散性。此外，實施例1的微球抑制了生理活性物質開始時的過度釋放，并在非常長的時間內以恒速釋放生理活性物質。
實驗性實施例6肽A(0.6g)的乙酸鹽溶于2wt％的乙酸水溶液中(0.65g)(肽A摩爾量的1.5倍或更多)。對于此溶液，加入聚乳酸(重均分子量為21,000)(5.4g)的二氯甲烷(9.45g)溶液。通過用手震動輕微分散所得混合物，然后使用Polytron(由Kinematica制造)乳化預定的時間從而獲得W/O型乳劑。在除了將乳化時間改變至不同的長度外的相同方式下，形成各種乳劑。測量所獲得W/O型乳劑的粘度。結果示于圖2中。
在上述相同方式下，肽A(0.6g)溶于2wt％的乙酸水溶液中(0.635g)(小于肽A摩爾量的1.5倍)。對于此溶液，加入聚乳酸(重均分子量為21,000)(5.4g)的二氯甲烷(9.45g)溶液。通過用手震動輕微分散所得混合物，然后使用Polytron(由Kinematica制造)乳化預定的時間從而獲得W/O型乳劑。
當乳化時間相對短時，使用摩爾量小于肽A 1.5倍的乙酸所制備的W/O型乳劑的粘度增加了。另一方面，使用摩爾量為肽A 1.5倍或更多的乙酸所制備的W/O型乳劑是穩(wěn)定的，而且即使乳化時間短其粘度也不增加，如表2所示，因此可以容易地制備W/O型乳劑。
從這些實驗結果中發(fā)現(xiàn)，使用摩爾量約為藥物1.5或更多倍的乙酸所制備的W/O型乳劑可以獲得穩(wěn)定的W/O型乳劑，使用摩爾量約為藥物1.6倍或更多的乙酸所制備的W/O型乳劑使得可以獲得相對小的粒徑。此外，已證實乳酸聚合物或乳酸-羥基乙酸聚合物可被用作油相聚合物，其改善了最終藥物的產率。
工業(yè)應用根據(jù)本發(fā)明緩釋制劑的制備方法，可以穩(wěn)定地形成W/O型乳劑并抑制藥物在制備過程中的滲漏，因此提高了緩釋組合物的產率。還可以獲得其中結合了大量藥物的緩釋組合物，其可以以恒速釋放藥物。此外，由于本發(fā)明方法獲得的緩釋組合物具有高含量的藥物和穩(wěn)定的藥物釋放性質，因而可用作藥物。
根據(jù)本發(fā)明的方法，可以穩(wěn)定包含生理活性物質和可生物降解聚合物溶液的水溶液組合物，并在正常條件下獲得粘度為3,000cp或更低的混合物。
本發(fā)明基于日本專利申請No.2002-185352，在此全部引入作為參考。
權利要求
1.一種緩釋組合物的制備方法，包括將包含生理活性物質、摩爾量為生理活性物質1.5倍或更多的酸或堿的水溶液與可生物降解聚合物溶液混合，并且干燥所得混合物。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中水溶液是通過使用生理活性物質與酸或堿的鹽而獲得。
3.根據(jù)權利要求1的方法，其中生理活性物質在緩釋組合物中比例約是約0.001至約50％重量。
4.一種穩(wěn)定包含生理活性物質的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的方法，包括加入摩爾量約為生理活性物質1.5mol或更多倍的酸或堿。
5.一種使包含生理活性物質的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的粘度約為3,000cp或更低的方法，包括加入摩爾量約為生理活性物質1.5mol或更多的酸或堿。
6.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中生理活性物質是生理活性肽。
7.根據(jù)權利要求6的方法，其中生理活性肽是LH-RH衍生物。
8.根據(jù)權利要求7的方法，其中LH-RH衍生物是由如下通式表示的化合物5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)且Z表示NH-C2H5或Gly-NH2。
9.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中使用的酸或堿的摩爾量為生理活性物質的約1.5至約5倍。
10.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中使用的酸或堿的摩爾量為生理活性物質的約1.65至約3倍。
11.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中酸是有機酸。
12.根據(jù)權利要求11的方法，其中有機酸是脂肪酸。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中脂肪酸是乙酸。
14.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中可生物降解聚合物是α-羥基羧酸聚合物。
15.根據(jù)權利要求14的方法，其中α-羥基羧酸聚合物是乳酸-羥基乙酸聚合物。
16.根據(jù)權利要求15的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物中乳酸與羥基乙酸的摩爾比是100∶0至50∶50。
17.根據(jù)權利要求16的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物中乳酸與羥基乙酸的摩爾比是100∶0。
18.根據(jù)權利要求15的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量是5,000至50,000。
19.根據(jù)權利要求15的方法，其中乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量是17,000至30,000。
20.根據(jù)權利要求1的方法，其中可生物降解聚合物是重均分子量為15,000至50,000的乳酸聚合物，并且在所述乳酸聚合物中重均分子量為5,000或更低的聚合物含量為5％重量或更低。
21.根據(jù)權利要求1的方法，其中可生物降解聚合物是每單位質量(克)的聚合物具有約20至約1,000μmol末端羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物。
22.根據(jù)權利要求1的方法，其中生物降解聚合物的末端羧基的摩爾量為生理活性物質的約0.1至約5倍。
23.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中可生物降解聚合物溶液是通過使用低水溶性有機溶劑而制備。
24.根據(jù)權利要求23的方法，其中低水溶性有機溶劑是二氯甲烷。
25.根據(jù)權利要求1，4和5任一項的方法，其中混合物是均勻混合物。
26.根據(jù)權利要求25的方法，其中均勻混合物是乳劑。
27.根據(jù)權利要求26的方法，其中乳劑是W/O型乳劑。
28.根據(jù)權利要求27的方法，其中W/O型乳劑的粒徑非常小。
29.根據(jù)權利要求1的方法，其中混合物的干燥是在水中干燥。
30.根據(jù)權利要求29的方法，其中在水中干燥時滲透壓調節(jié)劑的水溶液用作外水相。
31.根據(jù)權利要求30的方法，其中滲透壓調節(jié)劑是甘露醇。
32.根據(jù)權利要求1的方法，其中緩釋組合物是微粒形式。
33.根據(jù)權利要求32的方法，其中微粒是微球或微囊。
34.一種緩釋組合物的制備方法，包括混合水溶液和可生物降解聚合物溶液以及然后干燥混合物，其中水溶液包含1)生理活性物質和2)含量為所述水溶液約0.1至約20％重量的酸或堿。
35.根據(jù)權利要求34的方法，其中水溶液是通過使用生理活性物質與酸或堿的鹽制得。
36.根據(jù)權利要求1的方法制備的緩釋組合物。
37.含生理活性物質和酸或堿的水溶液在制備含該生理活性物質的緩釋制劑中的應用，其中酸或堿含量為所述生理活性物質摩爾量約1.5倍或更多倍。
全文摘要
一種制備緩釋組合物的方法，包括混合包含生理活性物質、摩爾量至少為1.5倍生理活性物質的酸或堿的水溶液以及可生物降解聚合物，并且干燥所得混合物。
文檔編號A61K9/16GK1662260SQ0381491
公開日2005年8月31日 申請日期2003年6月24日 優(yōu)先權日2002年6月25日
發(fā)明者山本一路, 齋藤和宏, 星野哲夫 申請人:武田藥品工業(yè)株式會社