專利名稱：用于抑制血小板凝集的修飾氨基酸的制作方法
血小板的活化和凝集與不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死、溶血栓治療和血管成形術(shù)后的再阻塞、短暫性腦缺血發(fā)作以及各種其它心血管病癥有關(guān)。當(dāng)血管由于急性介入如血管成形術(shù)或更慢性地由于動(dòng)脈粥樣硬化病理生理過程而受到損傷時(shí)，血小板被活化，粘附于損傷表面并相互粘結(jié)。該血小板的活化、粘附和凝集可導(dǎo)致血管腔內(nèi)的閉塞性血栓形成。
多年以來已經(jīng)將多種物質(zhì)作為抑制血小板凝集和血栓形成的可能目標(biāo)進(jìn)行了研究。例如，阿司匹林因具有抑血小板凝集的能力而已經(jīng)被用作預(yù)防性抗血栓形成藥。
美國(guó)專利No.5,773,647(‘647)和5,866,536(‘536)描述了用于口服遞送含修飾氨基酸的藥理學(xué)活性劑如N-(5-氯水楊酰基)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、N-(10-[2-羥基苯甲酰基]氨基)癸酸(SNAD)和N-(8-[2-羥基苯甲?；鵠氨基)辛酸(SNAC)的組合物。另外，WO 00/059863(‘863)公開了式I的二鈉鹽 其中R1、R2、R3和R4獨(dú)立地為氫、-OH、-NR6R7、鹵素、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基；R5為取代或未取代的C2-C16亞烷基、取代或未取代的C2-C16亞烯基、取代或未取代的C1-C12烷基(亞芳基)或者取代或未取代的芳基(C1-C12亞烷基)；且R6和R7獨(dú)立地為氫、氧或C1-C4烷基；及其水合物和溶劑合物，其用于口服遞送活性劑特別有效。
令人驚奇的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)‘647、‘536和‘863中的修飾氨基酸是有效的血小板凝集抑制劑。因此，用‘647、‘536和‘863中的修飾氨基酸作為藥理學(xué)活性劑的載體的藥物組合物具有抑制血小板凝集的額外優(yōu)點(diǎn)。
因此，本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人血小板凝集的方法，該方法包括施用血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人血小板凝集的方法，該方法包括施用包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制接受藥理學(xué)活性劑的哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人血小板凝集的方法，該方法包括施用包含所述的藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
此外，本發(fā)明還涉及一種抑制哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)血小板凝集的方法，該方法包括向所述患者施用血小板凝集抑制量的N-(5-氯水楊?；?-8-氨基辛酸(5-CNAC)或其可藥用鹽。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人血小板凝集的方法，該方法包括施用包含血小板凝集抑制量的5-CNAC或其可藥用鹽的藥物組合物。
在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制接受藥理學(xué)活性劑的哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人血小板凝集的方法，該方法包括施用包含所述的藥理學(xué)活性劑和5-CNAC或其可藥用鹽的藥物組合物，其中5-CNAC或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
應(yīng)當(dāng)理解在本發(fā)明的包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸的實(shí)施方案中，血小板凝集抑制活性是修飾氨基酸的功能。該血小板凝集活性并非藥理學(xué)活性劑的功能。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制接受肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素治療的哺乳動(dòng)物血小板凝集的方法，該方法包括施用包含所述的肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素以及修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物，其中修飾氨基酸以抑制血小板凝集的有效量存在。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的抑制血小板凝集的方法，其中的降鈣素是鮭降鈣素。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的抑制血小板凝集的方法，其中修飾氨基酸以約25mg至約400mg的量、優(yōu)選以約100mg至約200mg的量存在。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的抑制血小板凝集的方法，其中藥理學(xué)活性劑存在的量為相對(duì)于藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.05％至70％。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抑制接受肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素治療的哺乳動(dòng)物血小板凝集的方法，該方法包括施用包含所述的肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素以及5-CNAC或其可藥用鹽的藥物組合物，其中5-CNAC以抑制血小板凝集的有效量存在。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的抑制血小板凝集的方法，其中藥物組合物包含降鈣素和5-CNAC或其可藥用鹽，并且所述的哺乳動(dòng)物是人。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的抑制血小板凝集的方法，其中的降鈣素為鮭降鈣素。
本發(fā)明涉及包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物在制備用于抑制血小板凝集的藥物中的用途。
本發(fā)明還涉及包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物在制備用于抑制血小板凝集的藥物中的用途，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物在制備用于抑制血小板凝集的藥物中的用途，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在，所述的修飾氨基酸為N-(5-氯水楊?；?-8-氨基辛酸(5-CNAC)或其可藥用鹽。
本發(fā)明還涉及包含肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素以及修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物在制備用于抑制接受肝素、胰島素、甲狀旁腺激素(PTH)或降鈣素治療的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)血小板凝集的藥物中的用途，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的藥物組合物的用途，其中的降鈣素為鮭降鈣素。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的藥物組合物的用途，其中修飾氨基酸以約25mg至約400mg的量存在。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的藥物組合物的用途，其中修飾氨基酸以約100mg至約200mg的量存在。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的藥物組合物的用途，其中藥理學(xué)活性劑存在的量為相對(duì)于藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.05％至70％。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的藥物組合物的用途，其中藥物組合物包含降鈣素和5-CNAC或其可藥用鹽，并且所述的哺乳動(dòng)物是人。
本發(fā)明還涉及用于抑制血小板凝集、包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物。
此外，本發(fā)明還涉及用于抑制血小板凝集、包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將由本發(fā)明的以下詳細(xì)說明和所附的權(quán)利要求而變得顯而易見。
用5μM二磷酸腺苷(ADP)作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在來自12名健康個(gè)體的富血小板血漿(PRP)中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由5μM ADP刺激的三名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用5μM二磷酸腺苷(ADP)作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在來自12名健康個(gè)體的富血小板血漿(PRP)中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由5μM ADP刺激的三名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用3μM ADP作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由3μM ADP刺激的兩名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用2μM ADP作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由2μM ADP刺激的四名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用5μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由5μg/mL膠原蛋白刺激的兩名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用2.5μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由2.5μg/mL膠原蛋白刺激的兩名單獨(dú)個(gè)體的血小板凝集曲線。
用2.0μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由2.0μg/mL膠原蛋白刺激的個(gè)體的血小板凝集曲線。
用1μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由1μg/mL膠原蛋白刺激的個(gè)體的血小板凝集曲線。
用0.75μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。用0.5μg/mL膠原蛋白作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。建立由0.5μg/mL膠原蛋白刺激的個(gè)體的血小板凝集曲線。
可用于本發(fā)明的修飾氨基酸包括上文提及的‘536中所公開的123種修飾氨基酸中的任何一種或上文提及的‘647中所公開的193種修飾氨基酸中的任何一種或其任何組合。在此將上文提及的‘647和‘536中的內(nèi)容全部引入作為參考，尤其是權(quán)利要求及相應(yīng)工作實(shí)施例的主題內(nèi)容。另外，修飾氨基酸可以是上文提及的氨基酸中任何一種的二鈉鹽及其乙醇溶劑合物和水合物。適宜的化合物包括以下式I的化合物 其中R1、R2、R3和R4獨(dú)立地為氫、-OH、-NR6R7、鹵素、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基；R5為取代或未取代的C2-C16亞烷基、取代或未取代的C2-C16亞烯基、取代或未取代的C1-C12烷基(亞芳基)或者取代或未取代的芳基(C1-C12亞烷基)；且R6和R7獨(dú)立地為氫、氧或C1-C4烷基；及其水合物和醇溶劑合物。式I化合物以及它們的二鈉鹽和其醇溶劑合物和水合物連同制備它們的方法在WO 00/059863中有描述。
二鈉鹽可通過用本領(lǐng)域已知的方法蒸發(fā)或干燥乙醇溶劑合物以形成無水二鈉鹽而由乙醇溶劑合物制備。干燥通常在約80℃至約120℃、優(yōu)選約85℃至約90℃的溫度下、且最優(yōu)選在約85℃下進(jìn)行。干燥步驟通常在26”Hg或更大壓力下進(jìn)行。無水二鈉鹽通常含有以重量計(jì)少于約5％的乙醇，優(yōu)選以重量計(jì)少于約2％的乙醇，以無水二鈉鹽的總重量為100％。
修飾氨基酸的二鈉鹽也可以通過制備修飾氨基酸在水中的漿液并加入兩摩爾當(dāng)量的含水氫氧化鈉、醇鈉等來制備。適宜的醇鈉包括但不限于甲醇鈉、乙醇鈉和其混和物。
制備二鈉鹽的更進(jìn)一步的方法是通過使修飾氨基酸與一摩爾當(dāng)量的氫氧化鈉反應(yīng)以得到二鈉鹽。
固體形式的二鈉鹽可通過將含有二鈉鹽的溶液真空蒸餾至粘稠糊狀物而被分離。可將該糊狀物在真空干燥箱內(nèi)干燥以獲得固體形式的修飾氨基酸的二鈉鹽。該固體也可以通過將二鈉鹽的水性溶液噴霧干燥而被分離。
修飾氨基酸可以用本領(lǐng)域已知的方法制備，例如如以上所提及的那樣，用‘647和‘536中所述的方法制備。
上文提及的‘863中所述的乙醇溶劑合物包括但不限于溶劑乙醇的分子或離子與修飾氨基酸二鈉鹽的分子或離子形成的分子或離子絡(luò)合物。典型地，對(duì)于每分子修飾氨基酸的二鈉鹽而言，乙醇溶劑合物含有約一個(gè)乙醇分子或離子。
修飾氨基酸二鈉鹽的乙醇溶劑合物可通過將修飾氨基酸溶解在乙醇中來制備。典型地，每克修飾氨基酸溶解在約1mL至約50mL乙醇中，通常溶解在約2mL至約10mL乙醇中。然后使修飾氨基酸/乙醇溶液與相對(duì)于修飾氨基酸而言摩爾過量的含鈉鹽如單鈉鹽反應(yīng)，即對(duì)于每摩爾修飾氨基酸而言存在一摩爾以上的鈉陽(yáng)離子，得到乙醇溶劑合物。適宜的單鈉鹽包括但不限于氫氧化鈉；醇鈉，如甲醇鈉和乙醇鈉；以及它們的任何組合。優(yōu)選地，向乙醇溶液中加入至少約兩摩爾當(dāng)量的單鈉鹽，即對(duì)于每摩爾修飾氨基酸而言存在至少約兩摩爾的鈉陽(yáng)離子。通常，反應(yīng)在或低于混合物回流溫度下、如在環(huán)境溫度下進(jìn)行。然后用本領(lǐng)域已知的方法回收乙醇溶劑合物，如常壓蒸餾濃縮得到的漿液，將濃漿液冷卻并濾出固體。然后可將回收的固體真空干燥，得到乙醇溶劑合物。
修飾氨基酸二鈉鹽的水合物可以通過如上所述的干燥乙醇溶劑合物以形成無水二鈉鹽并將無水二鈉鹽水合來制備。優(yōu)選地，形成二鈉鹽的單水合物。由于無水二鈉鹽具有強(qiáng)吸濕性，所以暴露于大氣濕度下即可形成水合物。通常，水合步驟在約環(huán)境溫度至約50℃、優(yōu)選環(huán)境溫度至約30℃下進(jìn)行并且環(huán)境的相對(duì)濕度為至少50％?；蛘?，無水二鈉鹽也可以用蒸汽水合。
優(yōu)選的修飾氨基酸是又稱為8-(N-2-羥基-5-氯苯甲?；?氨基辛酸的5-CNAC、SNAD、SNAC以及它們的單鈉鹽和二鈉鹽、它們的鈉鹽的乙醇溶劑合物和它們的鈉鹽的單水合物，及其任何組合。最優(yōu)選的修飾氨基酸是5-CNAC的二鈉鹽及其單水合物。
適合用于本發(fā)明的藥理學(xué)活性劑包括治療性和預(yù)防性活性劑。藥理學(xué)活性劑包括但不限于蛋白質(zhì)、多肽、激素、包括粘多糖混合物在內(nèi)的多糖、碳水化合物、脂類及其組合。
藥理學(xué)活性劑的具體實(shí)例包括但不限于以下物質(zhì)，包括合成、天然或重組來源的以下物質(zhì)生長(zhǎng)激素，包括人生長(zhǎng)激素、重組人生長(zhǎng)激素、牛生長(zhǎng)激素和豬生長(zhǎng)激素；生長(zhǎng)激素釋放激素；干擾素，包括α、β和γ-干擾素；白細(xì)胞介素-1；白細(xì)胞介素-2；胰島素，包括豬胰島素、牛胰島素、人胰島素和重組人胰島素，任選含有包括鈉、鋅、鈣和銨在內(nèi)的抗衡離子；胰島素樣生長(zhǎng)因子，包括IGF-1；肝素，包括未分級(jí)肝素、類肝素、皮膚素、軟骨素、低分子量肝素、極低分子量肝素和超低分子量肝素；降鈣素，包括鮭降鈣素、豬降鈣素、鰻降鈣素、雞降鈣素和人降鈣素；紅細(xì)胞生成素；心房利鈉因子；抗原；單克隆抗體；促生長(zhǎng)素抑制素；蛋白酶抑制劑；促腎上腺皮質(zhì)激素；促性腺素釋放激素；催產(chǎn)素；促黃體生成激素釋放激素；促卵泡激素；葡糖腦苷脂酶；血小板生成素；非格司亭；前列腺素；環(huán)孢素；加壓素；色甘酸鈉(色甘酸鈉或色甘酸二鈉)；萬(wàn)古霉素；去鐵胺；甲狀旁腺激素，包括其片段；抗微生物劑，包括抗真菌劑；維生素；這些化合物的類似物、片段、擬似物或聚乙二醇修飾的衍生物，或其任何組合。
優(yōu)選的藥理學(xué)活性劑是藥理學(xué)活性肽，特別是降鈣素。作為一類已知的藥理學(xué)活性劑，降鈣素具有多種藥理學(xué)功效，通常用于治療例如佩吉特病、高鈣血癥和經(jīng)絕后骨質(zhì)疏松。各種降鈣素，包括鮭降鈣素、豬降鈣素和鰻降鈣素可商購(gòu)獲得，并且通常用于治療例如佩吉特病、惡性高鈣血癥和骨質(zhì)疏松。降鈣素可以是任何降鈣素，包括天然、合成或重組來源的降鈣素，以及降鈣素衍生物，如1，7-Asu-鰻降鈣素。組合物可以包含單一的降鈣素或者兩種或多種降鈣素的任何組合。優(yōu)選的降鈣素是合成的鮭降鈣素。降鈣素可商購(gòu)獲得或可通過已知方法合成。
其它優(yōu)選的藥理學(xué)活性劑是肝素、胰島素和PTH。
藥理學(xué)活性劑的量通常為實(shí)現(xiàn)預(yù)期目的有效量，例如治療有效量。然而，當(dāng)施用多個(gè)組合物時(shí)，用量可以低于有效量，即可以以累積劑量單位施用總有效量。當(dāng)組合物持續(xù)釋放藥理學(xué)活性劑時(shí)，活性劑的量也可以高于有效量。所用的活性劑總量可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法確定。然而，由于組合物較先前的組合物可更有效地遞送活性劑，所以可以向所述個(gè)體施用較先前的劑量單位形式所用的量更小量的活性劑，而且仍可達(dá)到相同的血藥濃度和/或治療效果。
當(dāng)藥理學(xué)活性劑為鮭降鈣素時(shí)，適宜的劑量當(dāng)然應(yīng)依據(jù)例如宿主和所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度而改變。然而，通常，以約0.5μg/kg至約10μg/kg動(dòng)物體重、優(yōu)選1μg/kg至約6μg/kg體重的日劑量全身性施用可獲得令人滿意的結(jié)果。
藥理學(xué)活性劑的含量通常為相對(duì)于整個(gè)藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.05％至70％，優(yōu)選為相對(duì)于整個(gè)藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.01％至50％，更優(yōu)選為相對(duì)于整個(gè)藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.3％至30％。
典型地，用于本發(fā)明的藥物組合物包含血小板凝集抑制量的一種或多種修飾氨基酸，即足以抑制血小板凝集的量。通常，修飾氨基酸以約25mg至約400mg的劑量存在。最優(yōu)選修飾氨基酸以約100mg至約200mg的劑量存在。
典型地，用于本發(fā)明的藥物組合物包含藥理學(xué)活性劑和血小板凝集抑制量的一種或多種修飾氨基酸，即足以抑制血小板凝集的量。
用于本發(fā)明的藥物組合物可以以包括軟膠囊在內(nèi)的膠囊劑、片劑、膠囊形片劑或其它固體口服劑型提供，其中所有劑型均可以用本領(lǐng)域公知的方法制備。
用于本發(fā)明的藥物組合物還可以包含常規(guī)用量的添加劑，包括但不限于pH調(diào)節(jié)劑；防腐劑；矯味劑；掩味劑；芳香劑；濕潤(rùn)劑；張力調(diào)節(jié)劑(tonicifier)；著色劑；表面活性劑；增塑劑；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂；助流劑；助壓劑(compression aid)；增溶劑；賦形劑；稀釋劑，如微晶纖維素，例如FMC公司提供的Avicel PH102；或其任何組合。其它添加劑可以包括磷酸緩沖鹽、檸檬酸、乙二醇和其它分散劑。
用于本發(fā)明的藥物組合物還可以任選地包含交聯(lián)聚維酮，其可以是任何交聯(lián)聚維酮。交聯(lián)聚維酮是一種人工合成的又稱為1-乙烯基-2-吡咯烷酮的N-乙烯基-2-吡咯烷酮的交聯(lián)均聚物，分子量為1,000,000或更大。可商購(gòu)獲得的交聯(lián)聚維酮包括ISP的Polyplasdone XL、Polyplasdone XL-10、Polyplasdone INF-10、BASF公司的Kollidon CL。
聚維酮是一種由直鏈1-乙烯基-2-吡咯烷酮基團(tuán)組成的合成聚合物，分子量通常為2,500至3,000,000?？缮藤?gòu)獲得的聚維酮包括BASF公司的Kollidon K-30、Kollidon K-90F和ISP的Plasdone K-30和PlasdoneK-29/32。
如上所述，交聯(lián)聚維酮和聚維酮均可商購(gòu)獲得?；蛘?，它們也可以通過已知方法合成。
交聯(lián)聚維酮、聚維酮或其組合通常在組合物中存在的量為相對(duì)于整個(gè)藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.5％至50％，優(yōu)選為相對(duì)于整個(gè)藥物組合物的總重量以重量計(jì)2％至25％，更優(yōu)選為相對(duì)于藥物組合物的總重量以重量計(jì)5％至20％。
藥物組合物還可以包含一種或多種酶抑制劑，如放線酰胺素或表放線酰胺素(epiactinonin)及其衍生物；抑酶肽、抑肽酶和包曼-畢爾克抑制劑。
另外，在本發(fā)明的組合物中可以存在轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，即ρ-糖蛋白，如Ketoprofin。
優(yōu)選地，本發(fā)明的固體藥物組合物包含稀釋劑，如微晶纖維素；和潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂。
本發(fā)明的固體藥物組合物可以通過常規(guī)方法制備，例如通過將一種或多種活性劑、遞送劑和其它成分的組合進(jìn)行混合，捏和并裝入膠囊，或者不裝入膠囊而是模塑、然后進(jìn)一步壓片或壓縮模塑以得到片劑。另外，可通過已知方法形成固體分散體，然后進(jìn)一步加工成片劑或膠囊劑。
優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物中的成分在整個(gè)固體劑型中是均勻或均質(zhì)混合的。
本發(fā)明的藥物組合物可以被施用于任何有需要的哺乳動(dòng)物以遞送藥理學(xué)活性劑，所述的哺乳動(dòng)物包括但不限于嚙齒類動(dòng)物、牛、豬、狗、貓和靈長(zhǎng)類動(dòng)物，特別是人。
實(shí)驗(yàn)操作方法PRP(富血小板血漿)的制備采集來自健康志愿者的新鮮抽取的靜脈血放入0.1vol.mmol/L的檸檬酸鈉中。血液供體在采血前兩周內(nèi)未服用過任何藥物。通過將新鮮抽取的血液離心(150g，在22℃下15分鐘)制備PRP，通過用經(jīng)離心(1200g，在22℃下10分鐘)制備的自身無血小板血漿稀釋將血小板終濃度標(biāo)化為200,000個(gè)細(xì)胞/μL。收集上清液。將PRP樣品與在鹽水中的不同濃度的5-CNAC溶液(在-20℃下貯存)一起預(yù)溫育1分鐘(22℃)。
血小板凝集研究為了評(píng)價(jià)5-CNAC對(duì)血小板凝集的抑制作用，進(jìn)行了以下研究。如上所述制備含有5-CNAC的0.400mL PRP樣品。向這些樣品中加入0.005mL凝集刺激劑，所述的凝集刺激劑為ADP(Roche Molecular Biochemicals，Mannheim)或膠原蛋白(Horm Chemie，Munich)。ADP或膠原蛋白的終濃度如“結(jié)果”部分所述。凝集研究在Chronolog 4 channel凝集計(jì)(型號(hào)CH570VS-CH810)中進(jìn)行。凝集計(jì)自動(dòng)校正與供體有關(guān)的無血小板血漿(光密度為0％)和特定供體的PRP(光密度為100％)之間的光密度差異。通過表達(dá)光密度的最大差異(與加入凝集刺激劑、即ADP或膠原蛋白后的時(shí)間無關(guān))測(cè)定凝集程度并進(jìn)行標(biāo)化，將對(duì)照曲線(無5-CNAC)作為內(nèi)標(biāo)，設(shè)定為100％。
結(jié)果5-CNAC對(duì)由ADP誘導(dǎo)的血小板凝集的作用注意到向PRP中僅加入5-CNAC不引起血小板凝集。
用5μM ADP作為血小板凝集刺激劑并用不同濃度的5-CNAC作為血小板凝集抑制劑在來自12名健康個(gè)體的PRP中進(jìn)行劑量-抑制實(shí)驗(yàn)。所試驗(yàn)的濃度包括0.1、1、2、5、10、25、100、200和500μM?？梢杂^察到隨著5-CNAC濃度的增加，對(duì)血小板凝集的抑制作用在約2μM 5-CNAC或更高時(shí)變得明顯。建立由5μM ADP誘導(dǎo)的三名單獨(dú)個(gè)體的凝集曲線。注意到5μM ADP刺激產(chǎn)生最大程度的血小板凝集。
為了研究在低于最佳ADP刺激下5-CNAC的抑制效果，用被不同濃度的5-CNAC對(duì)抗的更低濃度的ADP重復(fù)該研究。用3μM ADP進(jìn)行劑量-抑制研究。建立各單獨(dú)個(gè)體的相應(yīng)的凝集曲線。用2μM ADP作為刺激劑進(jìn)行相同實(shí)驗(yàn)。建立各單獨(dú)個(gè)體的凝集曲線。結(jié)果顯示隨著血小板凝集刺激劑(ADP)濃度的降低，血小板凝集被更低濃度的5-CNAC所抑制。此外，還觀察到在所試驗(yàn)的所有ADP濃度中，5-CNAC的血小板凝集抑制作用在凝集曲線的第二階段中明顯，但在凝集曲線的開始階段中未觀察到。該作用與干擾血小板-血小板偶聯(lián)的整聯(lián)蛋白IIb 3(糖蛋白IIb-IIIa)拮抗劑類似。
5-CNAC對(duì)由膠原蛋白刺激的血小板凝集的作用與ADP相比，膠原蛋白是一種更有效的血小板凝集誘導(dǎo)劑。存在其中血小板于活化前與膠原蛋白不溶性纖維相結(jié)合的粘附階段。結(jié)果顯示當(dāng)使用高濃度凝集刺激劑膠原蛋白(5μg/mL)刺激血小板時(shí)，血小板對(duì)凝集抑制作用具有相對(duì)抗性。血小板不受100μM 5-CNAC影響。然而，在約1mM 5-CNAC下，即可檢測(cè)到對(duì)血小板凝集的抑制作用。
在更低的膠原蛋白濃度(2.5μg/mL)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在一名個(gè)體的富血小板血漿中，200μM的5-CNAC對(duì)血小板凝集具有一定的抑制作用，但在更低濃度的5-CNAC下沒有抑制作用。在2μg/mL膠原蛋白下，有一名個(gè)體顯示在約1mM 5-CNAC下對(duì)血小板凝集有抑制作用，而在更低的膠原蛋白濃度(1μg/mL)下，5-CNAC在50μM或更高濃度時(shí)有明顯抑制作用。更低濃度的刺激劑膠原蛋白顯示出相似的被5-CNAC抑制的模式。與用ADP刺激的凝集類似，5-CNAC對(duì)膠原蛋白刺激的凝集的抑制作用也在凝集曲線的第二階段中變得明顯，而在開始的凝集曲線中未觀察到凝集抑制作用。另外，當(dāng)膠原蛋白的濃度降低時(shí)，血小板對(duì)5-CNAC的抑制作用更為敏感。
進(jìn)一步的觀察包括以下內(nèi)容i)5-CNAC不改變血小板的形態(tài)學(xué)，因?yàn)榧?xì)胞的“漩渦(swirling)”保持完整不變；(ii)加入ADP后，光密度增加。該向下模式(downward pattern)的原因是細(xì)胞形狀的改變，其是對(duì)血小板凝集的最初響應(yīng)。該響應(yīng)不被5-CNAC的存在所干擾；(iii)5-CNAC劑量依賴性地抑制凝集曲線的后期部分(又稱為第二階段凝集)；(iv)PRP對(duì)5-CNAC的敏感性存在個(gè)體差異；以及(v)5-CNAC的作用顯示出與干擾血栓烷A2產(chǎn)生的阿司匹林類藥物的抑制作用或患有先天性分泌缺陷(所謂的“貯存池不足”)的患者的血小板具有相似性。
由上述內(nèi)容可見，本發(fā)明的修飾氨基酸可有效抑制血小板凝集。
權(quán)利要求
1.包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物在制備用于抑制血小板凝集的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，用于制備抑制血小板凝集的藥物，其中藥物組合物包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中的修飾氨基酸是N-(5-氯水楊?；?-8-氨基辛酸(5-CNAC)或其可藥用鹽。
4.權(quán)利要求2的用途，用于制備抑制接受肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素治療的哺乳動(dòng)物血小板凝集的藥物，其中藥理學(xué)活性劑包括肝素、胰島素、甲狀旁腺激素或降鈣素和修飾氨基酸或其可藥用鹽，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
5.權(quán)利要求4的用途，其中的哺乳動(dòng)物是人且降鈣素是鮭降鈣素。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的用途，其中修飾氨基酸以約25mg至約400mg的量存在。
7.權(quán)利要求6的用途，其中修飾氨基酸以約100mg至約200mg的量存在。
8.權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)的用途，其中藥理學(xué)活性劑存在的量為相對(duì)于藥物組合物的總重量以重量計(jì)0.05％至70％。
9.權(quán)利要求2至8中任一項(xiàng)的用途，其中藥物組合物包含降鈣素和5-CNAC或其可藥用鹽。
10.用于抑制血小板凝集的藥物組合物，其包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽。
11.權(quán)利要求10的用于抑制血小板凝集的組合物，其包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
12.抑制哺乳動(dòng)物血小板凝集的方法，該方法包括向所述的哺乳動(dòng)物施用包含血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物。
13.權(quán)利要求12的方法，該方法包括施用包含藥理學(xué)活性劑和修飾氨基酸或其可藥用鹽的藥物組合物，其中修飾氨基酸或其鹽以抑制血小板凝集的有效量存在。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動(dòng)物血小板凝集的方法。該方法包括施用血小板凝集抑制量的修飾氨基酸或其可藥用鹽。
文檔編號(hào)A61K31/609GK1668290SQ03816923
公開日2005年9月14日 申請(qǐng)日期2003年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月17日
發(fā)明者S·D·貝特曼, M·阿茲里亞 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司