專利名稱：新的嘌呤衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新的2，6，9-取代的嘌呤衍生物及其生物學(xué)應(yīng)用。具體地說，本發(fā)明涉及具有抗增殖特性的嘌呤衍生物，它在例如癌癥、白血病、牛皮癬等增殖性疾病的治療中有用。
背景技術(shù)：
哺乳動(dòng)物細(xì)胞周期的啟動(dòng)、進(jìn)行和完成是通過各種依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDK)復(fù)合物來調(diào)節(jié)的，它們對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)具有重要作用。這些復(fù)合物至少含有催化活性(CDK自身)和調(diào)節(jié)活性(細(xì)胞周期蛋白)亞單元。對(duì)于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)顯得尤其重要的某些復(fù)合物包括細(xì)胞周期蛋白A(CDK1-也被稱作cdc2和CDK2)、細(xì)胞周期蛋白B1-B3(CDK1)、細(xì)胞周期蛋白D1-D3(CDK2、CDK4、CDK5、CDK6)、細(xì)胞周期蛋白E(CDK2)。上述的每一種復(fù)合物均與細(xì)胞周期中的某一特定期相關(guān)。然而，并非CDK家族的所有成員均專一地與細(xì)胞周期的控制相關(guān)。因此，CDK7、8、和9與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)有關(guān)，而CDK5在神經(jīng)元和分泌細(xì)胞功能中具有重要作用。
CDK通過短暫結(jié)合其它蛋白、同時(shí)改變其在細(xì)胞內(nèi)的分布水平而調(diào)節(jié)CDK活性向后平移。腫瘤惡化與基因變異和CDK及其調(diào)節(jié)劑的失調(diào)有密切關(guān)系，這說明CDK抑制劑在抗癌治療中有用。實(shí)際上早期研究結(jié)果表明，變形細(xì)胞和正常細(xì)胞的區(qū)別就在于兩者對(duì)例如細(xì)胞周期蛋白A/CDK2的要求不一樣，因此完全有可能開發(fā)出一類新的不具有傳統(tǒng)細(xì)胞毒素和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥所觀察到的一般宿主毒性的抗腫瘤藥物。盡管與細(xì)胞周期相關(guān)的CDK的抑制作用明顯地與例如腫瘤學(xué)應(yīng)用有關(guān)，但是這并非是抑制RNA聚合酶-調(diào)節(jié)CDK的情形。另一方面，最近發(fā)現(xiàn)抑制CDK9/細(xì)胞周期T功能與防止HIV的復(fù)制有關(guān)，該CDK生物學(xué)新發(fā)現(xiàn)從此揭開了CDK抑制劑新治療應(yīng)用的序幕(Sausville，E.A.Trends Molec.Med.2002，8，S32-S37)。
CDK的功能是使某些蛋白質(zhì)磷酸化從而將其活化或鈍化，這些蛋白質(zhì)包括例如眼癌蛋白、核纖層蛋白、組蛋白H1、以及有絲分裂紡錘體的各種成分。通過CDK調(diào)節(jié)的催化步驟包括從ATP到大分子酶底物的磷轉(zhuǎn)移反應(yīng)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)化合物的某些基團(tuán)(參見綜述例如Fischer，P.M.Curr.Opin.DrugDiscovery Dev.2001，4，623-634)通過借助于CDK-特定ATP拮抗作用而具有抗增殖活性。
WO 98/05335(CV Therapeutics Inc)公開了一類2，6，9-三取代的嘌呤衍生物，它是細(xì)胞周期激酶的選擇性抑制劑。這類化合物可用于治療自身免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、I型糖尿病、多發(fā)性硬發(fā)癥；治療癌癥、心血管疾病例如再狹窄、宿主v移植疾病、痛風(fēng)、多囊腎性疾病以及其它發(fā)病機(jī)理與細(xì)胞增殖異常相關(guān)的增殖性疾病。
WO 99/07705(The Regents of the University of California)公開了一類抑制包括蛋白激酶、G-蛋白和聚合酶在內(nèi)的嘌呤類似物。更具體地說，該發(fā)明涉及使用這類嘌呤類似物治療細(xì)胞內(nèi)增殖疾病和神經(jīng)變性疾病的方法。
WO 97/20842(CNRS)也公開了一類顯示出抗增殖活性的嘌呤衍生物，其可用于治療癌癥、牛皮癬、和神經(jīng)變性疾病。
本發(fā)明著眼于提供一類新的特別是具有抗增殖特性的2，6，9-取代的嘌呤衍生物。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面涉及式1的化合物或其可藥用鹽， 其中R1和R2中的一個(gè)是甲基、乙基或異丙基，另一個(gè)是H；R3和R4各自獨(dú)立地是H、支鏈或直鏈C1-C6烷基、或芳基，并且其中至少R3和R4中的一個(gè)不是H；R5是支鏈或直鏈C1-C5烷基或C1-C6環(huán)烷基，其中的每個(gè)可以任選被一個(gè)或多個(gè)OH基團(tuán)取代；R6、R7、R8和R9各自獨(dú)立地是H、鹵素、NO2、OH、OMe、CN、NH2、COOH、CONH2或者SO2NH2。
本發(fā)明第二方面涉及一種藥物組合物，它含有式1化合物以及可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。
本發(fā)明第三方面涉及式1化合物在制備用于治療一種或多種下述疾病的藥物中的用途增殖性疾??；病毒性疾病；中風(fēng)；脫發(fā)癥；CNS疾病；神經(jīng)變性疾病；以及糖尿病。
本發(fā)明第四方面涉及式1化合物作為抗有絲分裂藥物的用途。
本發(fā)明第五方面涉及式1化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
本發(fā)明第六方面涉及一種治療增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物施用治療有效量的式1化合物。
本發(fā)明第七方面涉及本發(fā)明的化合物在用于識(shí)別可影響一種或多種CDK酶活性的其它候選化合物的測(cè)定方法中的用途。
詳細(xì)描述如上所述，本發(fā)明第一方面涉及上文中所定義的式1化合物。
本領(lǐng)域已知，試驗(yàn)抗增殖CDK抑制藥物roscovitine(PCT國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO 97/20842；Wang，S.，McClue，S.J.，F(xiàn)erguson，J.R.，Hull，J.D.，Stokes，S.，Parsons，S.，Westwood，R.，以及Fischer，P.M.TetrahedronAsymmetry 2001，12，2891-2894)的主要體內(nèi)代謝失活途徑包括將甲醇基團(tuán)氧化為羧基，然后再排泄出該代謝產(chǎn)物[Nutley，B.P.，Raynaud，F(xiàn).I.，Wilson，S.C.，F(xiàn)ischer，P.，McClue，S.，Goddard，P.M.，Jarman，M.，Lane，D.，以及Workman，P.Clin.Cancer Res.2000，6 Suppl.(Proc.11thAACR-NCI-EORTC Intl.Conf.#318)]。與該代謝產(chǎn)物完全相同的真正的合成原料在體外顯示出降低了的生物活性。因此，roscovitine和該羧基衍生物抑制CDK2/細(xì)胞周期蛋白E活性所具有的IC50值分別為0.08和0.24μM。類似地，在人類轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系的典型儀器盤(panel)中，roscovitine和該羧基衍生物的平均抗增殖IC50值分別為大約10和＞50μM。
Roscovitine 羧基代謝產(chǎn)物因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明著眼于提供一類新的嘌呤衍生物，其具有改善了的耐代謝失活特性。
在本發(fā)明一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R2中的一個(gè)是乙基或異丙基，另一個(gè)是H。
在本發(fā)明另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5是異丙基或環(huán)戊基。
在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R6、R7、R8和R9都是H。
在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1或R2是乙基，另一個(gè)是H。
在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、丙基、丁基或者苯基。
因此，在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基、正丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或者苯基。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、丙基或者丁基。
因此，在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基、正丙基、正丁基、仲丁基或者叔丁基。
在進(jìn)一步更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基或者叔丁基。
在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述式1化合物選自下面的化合物(2S3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；(2R3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；(3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；以及(3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述式1化合物是(2R3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇。
藥物組合物本發(fā)明第二方面涉及一種藥物組合物，它含有與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體、或者它們的混合物相混合的式1化合物。雖然本發(fā)明的化合物(包括其可藥用鹽類、酯類以及可藥用溶劑化物)可以單獨(dú)施用，但是通常特別是在用于人的治療時(shí)，它們是與藥物載體、賦形劑或稀釋劑混合施用的。該藥物組合物可以以人藥或獸藥的形式用于人或動(dòng)物。
這類適合用于本文所描述的各種不同形式的藥物組合物的賦形劑實(shí)例可以參見由A Wade和PJ Weller編著的“Handbook of PharmaceuticalExcipients”，第二版，(1994)。
適合于醫(yī)療應(yīng)用的可接受載體或稀釋劑是藥物領(lǐng)域眾所周知的，其描述在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack出版公司(A.R.Gennaro編著.1985)。
適宜載體的實(shí)例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。適宜稀釋劑的實(shí)例包括乙醇、甘油和水。
對(duì)藥物載體、賦形劑或稀釋劑的選擇可以根據(jù)所希望的給藥方式和常規(guī)藥物操作經(jīng)驗(yàn)來選擇。藥物組合物除了可以含有載體、賦形劑或稀釋劑之外，還可以含有任意適宜的粘合劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、包衣劑、助溶劑。
適宜粘合劑的實(shí)例包括淀粉、明膠、天然糖類例如葡萄糖、無水乳糖、自由流動(dòng)的乳糖、β-乳糖、玉米甜味劑、天然和合成樹膠例如阿拉伯樹膠、西黃芪膠或海藻酸鈉、羧甲基纖維素和聚乙二醇。
適宜潤(rùn)滑劑的實(shí)例包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
藥物組合物中可以含有防腐劑、穩(wěn)定劑、染料甚至調(diào)味劑。防腐劑的實(shí)例包括苯甲酸鈉、山梨酸以及對(duì)-羥基苯甲酸酯。還可以使用抗氧化劑和助懸劑。
鹽/酯類本發(fā)明化合物可以以鹽或酯，特別是可藥用鹽或酯的形式存在。
本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括其適宜的酸加成鹽或堿鹽。有關(guān)適宜的可藥用鹽的綜述可以參見Berge等人，J Pharm Sci，66，1-19(1977)?？梢耘c例如下面的物質(zhì)形成鹽強(qiáng)的無機(jī)酸，例如無機(jī)酸如硫酸、磷酸或鹽酸；強(qiáng)的有機(jī)羧酸，例如未被取代或被取代(例如被鹵素取代)的具有1-4個(gè)碳原子的烷基羧酸如乙酸；飽和或不飽和二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、反丁烯二酸、鄰苯二甲酸或四酞酸(tetraphthalic)；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有機(jī)磺酸，例如未被取代或被取代(例如被鹵素取代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸如甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br> 使用有機(jī)酸或醇/氫氧化物可以形成酯，這取決于被酯化的官能團(tuán)。有機(jī)酸包括羧酸，例如未被取代或被取代(例如被鹵素取代)的具有1-12個(gè)碳原子的烷基羧酸如乙酸；飽和或不飽和二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、反丁烯二酸、鄰苯二甲酸或四酞酸；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有機(jī)磺酸，例如未被取代或被取代(例如被鹵素取代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸如甲磺酸或?qū)妆交撬?。適宜的氫氧化物包括無機(jī)氫氧化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括未被取代或被取代(例如被鹵素取代)的具有1-12個(gè)碳原子的烷醇。
對(duì)映異構(gòu)體/互變異構(gòu)體在前面所討論的本發(fā)明各個(gè)方面中，本發(fā)明包括式1化合物所有適宜的對(duì)映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以識(shí)別出那些具有光學(xué)特性(一個(gè)或多個(gè)手性碳原子)或互變異構(gòu)特性的化合物。相應(yīng)的對(duì)映異構(gòu)體和/或互變異構(gòu)體可以按照本領(lǐng)域已知的方法分離/制備。
立體和幾何異構(gòu)體某些本發(fā)明化合物可能存在立體異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體-例如它們可能具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱和/或幾何中心，因而可能存在兩種或更多種立體異構(gòu)和/或幾何異構(gòu)形式。本發(fā)明對(duì)這些化合物的所有單獨(dú)立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體、以及它們的混合物的應(yīng)用進(jìn)行了預(yù)期。在權(quán)利要求書中所使用的術(shù)語(yǔ)均包括上述這些形式，只要所述形式仍然具有適宜的功能活性(雖然不必達(dá)到相同的程度)。
本發(fā)明還包括這些化合物或其可藥用鹽的所有適宜的同位素變化。將本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的同位素變化定義為其中至少一個(gè)原子被具有相同原子序數(shù)但是原子質(zhì)量不同于自然界通常發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量的原子所取代。可并入本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的同位素實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟以及氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的某些同位素變化，例如那些合并有具有放射活性的同位素如3H或14C的同位素變化，可用于藥物和/或底物組織分布研究。含氚即3H、和碳-14即14C的同位素由于易于制備和檢測(cè)因而尤其優(yōu)選。另外，被同位素例如氘即2H取代，由于更高的代謝穩(wěn)定性從而可以提供某些治療優(yōu)勢(shì)，例如延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期或降低所需劑量，因此在某些情形下可能優(yōu)選這種情況。本發(fā)明所述的本發(fā)明化合物及其可藥用鹽的各種同位素變化通?？梢园凑粘Ｒ?guī)方法使用適宜試劑的適宜同位素變化制備得到。
溶劑化物本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的溶劑化物形式。權(quán)利要求書中所使用的術(shù)語(yǔ)包括這些形式在內(nèi)。
多晶型物此外，本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的各種晶型、多晶型以及無水/含水形式。在制藥工業(yè)領(lǐng)域應(yīng)該很容易理解，那就是這類化合物通過稍微改變純化方法和/或這些化合物的合成制備過程中所使用的分離溶劑，就可以分離得到其任意一種上述形式。
前藥本發(fā)明另外還包括本發(fā)明化合物的前藥形式。前藥通常是指其中一個(gè)或多個(gè)適宜基團(tuán)被結(jié)構(gòu)修飾過的式1化合物，這種結(jié)構(gòu)修飾在被給藥至人或哺乳動(dòng)物客體之后可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)。這種逆轉(zhuǎn)通常是通過天然存在于這類客體中的酶來完成，當(dāng)然為了在體內(nèi)完成這種逆轉(zhuǎn)也可以與前藥一起服用第二藥物。這種結(jié)構(gòu)修飾的實(shí)例包括酯化(例如上文所述的任意一種情形)，其中逆轉(zhuǎn)可以通過酯酶等來完成。其它的此類體系對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言也是眾所周知的。
給藥方案本發(fā)明的藥物組合物適合口服給藥、直腸給藥、陰道給藥、腸胃外給藥、肌肉內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、膜內(nèi)給藥、支氣管內(nèi)給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、鼻腔給藥、口腔給藥或者舌下給藥。
對(duì)于口服給藥，優(yōu)選使用的是制成壓制片劑、丸劑、片劑、gellules、滴劑、以及膠囊劑。這些組合物每個(gè)劑量?jī)?yōu)選含有1-250mg、更優(yōu)選含有10-100mg活性成分。
其它的給藥形式包括溶液劑或乳劑，它們可以通過靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或者肌肉內(nèi)注射給藥，并且可以由無菌或滅菌溶液制備得到。本發(fā)明的藥物組合物還可以是栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳劑、洗劑、軟膏劑、乳膏、凝膠劑、噴霧劑、溶液劑或者撲粉的形式。
經(jīng)皮給藥的替代方式就是使用皮膚貼片(skin patch)。例如，可以將活性成分合并入由聚乙二醇的含水乳液或者液體石蠟組成的乳膏中。還可以將活性成分按照1-10重量％的濃度合并入軟膏中，該軟膏由白蠟或者混合有所需穩(wěn)定劑和防腐劑的白色軟石蠟基質(zhì)組成。
可注射制劑每個(gè)劑量可含有10-1000mg、優(yōu)選含有10-250mg活性成分。
可以將組合物制成單位劑量形式，也就是含有單位劑量的單個(gè)部分或者是單位劑量的多單元或亞單元形式。
劑量本領(lǐng)域普通技術(shù)人員未經(jīng)過度試驗(yàn)完全可以很容易確定施用給客體的任意一種即時(shí)組合物的適宜劑量。典型的是，醫(yī)生可以確定最適合用于個(gè)體患者的實(shí)際劑量，其取決于各種因素包括所使用具體化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)間長(zhǎng)短、年齡、體重、身體概況、性別、飲食、給藥方式和時(shí)間、排泄速度、聯(lián)合用藥情況、具體癥狀的嚴(yán)重程度、以及該個(gè)體正在接受的治療情況。本文所述的劑量可被解釋成一般情形下使用的劑量。當(dāng)然出現(xiàn)某些更高或者更低劑量范圍的個(gè)別情形也是應(yīng)該的，其也落入本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
根據(jù)需要，本發(fā)明藥物可以按照0.01-30mg/kg體重，例如0.1-10mg/kg，更優(yōu)選0.1-1mg/kg體重的劑量給藥。
在示例性實(shí)施方案中，為了治療惡性腫瘤向患者施用一個(gè)或多個(gè)10-150mg/天的劑量。
醫(yī)療用途已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有抗增殖活性，因而據(jù)信它們可用于治療增殖性疾病例如癌癥、白血病或者其它與細(xì)胞任意增殖相關(guān)的疾病例如牛皮癬和再狹窄。
在本發(fā)明范圍內(nèi)所定義的抗增殖活性可以通過例如使用A549、HeLa、HT-29、MCF7、Saos-2、CCRF-CEM、HL-60以及K-562中的任意一種細(xì)胞系在體外全細(xì)胞測(cè)定法中抑制細(xì)胞增殖的能力得到證明，或者通過在適宜的測(cè)定法中顯示出激酶抑制活性而證實(shí)。這些測(cè)定方法包括評(píng)價(jià)其效能的方法，其在后面的實(shí)施例中有更詳細(xì)的描述。利用這些測(cè)定方法可以確定化合物是否具有本發(fā)明意義上的抗增殖活性。
因此，本發(fā)明一優(yōu)選的實(shí)施方案涉及一種或多種本發(fā)明化合物在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。
本文所使用的短語(yǔ)“藥物制備”除了包括本發(fā)明化合物在其它治療藥物的篩選程序中或者在制造這類藥物的任意步驟中的用途之外，還包括其直接作為藥物的用途。
本文所使用的術(shù)語(yǔ)“增殖性疾病”廣義上包括任意一種需要控制細(xì)胞周期的疾病，例如心血管疾病如再狹窄和心肌癥、自身免疫疾病如腎小球腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮膚學(xué)疾病例如牛皮癬、抗炎、抗真菌、抗寄生物疾病例如瘧疾、肺氣腫和脫發(fā)癥。在這些疾病中，本發(fā)明化合物在目標(biāo)細(xì)胞中可以如所希望的那樣誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或者維持停滯(stasis)。該增殖性疾病優(yōu)選為癌癥或白血病。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，該增殖性疾病是牛皮癬。
本發(fā)明的化合物可以抑制細(xì)胞周期中的任意一個(gè)步驟或階段，例如核被膜的形成、從細(xì)胞周期的靜止期(G0)退出、進(jìn)入Gl、染色體的脫縮合、核被膜破裂、START、啟動(dòng)DNA復(fù)制、進(jìn)行DNA復(fù)制、終止DNA復(fù)制、中心體復(fù)制、進(jìn)入G2、激活有絲分裂或減數(shù)分裂功能、染色體縮合、中心體分離、微管成核、紡錘體生成和作用、與微管啟動(dòng)蛋白的相互作用、染色單體分離(separation)和隔離(segregation)、有絲分裂功能的失活、收縮環(huán)的形成、以及胞質(zhì)分裂作用。具體地說，本發(fā)明的化合物可以影響某些基因功能，例如染色質(zhì)結(jié)合、復(fù)制復(fù)合體的形成、復(fù)制許可、磷酸化或者其它的二次修飾活性、蛋白水解性降解、微管結(jié)合、肌動(dòng)蛋白結(jié)合、隔蛋白結(jié)合、微管組織中心成核活性以及與細(xì)胞周期信號(hào)途徑組分的結(jié)合。
本發(fā)明另一方面涉及一種治療增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物施用治療有效量的式1化合物。
在該方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，該增殖性疾病是癌癥或白血病。
在該方面更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物按照足以抑制至少一種CDK酶的用量施用。
優(yōu)選地，本發(fā)明化合物按照足以抑制至少一種CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9的用量施用。
更優(yōu)選地，本發(fā)明化合物按照足以抑制至少一種CDK2和/或CDK4的用量施用。
進(jìn)一步更優(yōu)選地，該CDK酶是CDK2。
在該方面一優(yōu)選的實(shí)施方案中，該化合物是口服給藥。
本發(fā)明又一方面涉及式1化合物作為抗有絲分裂藥物的用途。
本發(fā)明再一方面涉及式1化合物用于治療神經(jīng)變性疾病的用途。
優(yōu)選地，該神經(jīng)變性疾病是神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。
本發(fā)明又一方面涉及式1化合物作為抗病毒藥物的用途。
因此，本發(fā)明又一方面涉及本發(fā)明化合物在制備用于治療病毒性疾病例如人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1-型單純皰疹病毒(HSV-1)、1-型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)、以及水痘帶狀皰疹病毒(VZV)的藥物中的用途。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物按照足以抑制一種或多種與病毒復(fù)制有關(guān)的宿主細(xì)胞CDK，即CDK2、CDK7、CDK8以及CDK9的用量施用[Wang D，De la Fuente C，Deng L，Wang L，Zilberman I，Eadie C，Healey M，Stein D，Denny T，Harrison LE，Meijer L，Kashanchi F.Inhibition ofhuman immunodeficiency virus type 1 transcription by chemicalcyclin-dependent kinase inhibitors.J.Virol.2001；757266-7279]。
如本文所定義的那樣，可以通過抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的能力來證實(shí)本發(fā)明所指的抗病毒效果。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種本發(fā)明化合物在治療CDK依賴性或敏感性病毒性疾病中的用途。CDK依賴性疾病與一種或多種CDK酶的活性高于正常水平有關(guān)。這類疾病優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9活性的異常水平有關(guān)。CDK敏感性疾病是這樣一種疾病，其中CDK水平的異常不是主要原因，而是在主要代謝異常的下游。在這樣的假設(shè)條件下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9可以被認(rèn)為是敏感性代謝途徑的一部分，因而CDK抑制劑可有效地用于治療這類疾病。
本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該糖尿病為II型糖尿病。
GSK3是幾種使糖原合成酶(GS)磷酸化的蛋白激酶中的一種。骨骼肌中的胰島素由于使GS脫磷酸并活化，從而刺激糖原的合成。因此，GSK3對(duì)GS的作用導(dǎo)致后者失活，進(jìn)而抑制肌肉中葡萄糖向糖原的轉(zhuǎn)化。
II型糖尿病(非胰島素依賴性糖尿病)是由多種病因引起的疾病。血糖過高是由胰島素在肝臟、肌肉、以及其它組織中的耐藥性，外加胰島素的分泌水平受損引起的。骨骼肌是攝取刺激葡萄糖的胰島素的主要位點(diǎn)，在那里或者從循環(huán)中排出或者轉(zhuǎn)化為糖原。在葡萄糖調(diào)節(jié)平衡作用中肌糖原沉積是主要決定因素，因此II型糖尿病具有受損的肌糖原貯存能力。其證據(jù)是GSK3活性增加在II型糖尿病中顯得很重要[Chen，Y.H.；Hansen，L.；Chen，M.X.；Bjorbaek，C.；Vestergaard，H.；Hansen，T.；Cohen，P.T.；Pedersen，O.Diabetes，1994，43，1234]。此外，已經(jīng)證實(shí)GSK3在II型糖尿病的肌細(xì)胞中被過度表達(dá)，并且在骨骼肌GSK3活性和胰島素作用之間存在可逆的相互關(guān)系[Nikoulina，S.E.；Ciaraldi，T.P.；Mudaliar，S.；Mohideen，P.；Carter，L.；Henry，R.R.Diabetes，2000，49，263]。
因此，GSK3抑制劑在糖尿病尤其是II型糖尿病、和糖尿病性神經(jīng)病的治療方面具有治療學(xué)意義。
需要說明的是，已知GSK3磷酸化多種底物而不是GS，因此它涉及對(duì)多種生化途徑進(jìn)行調(diào)節(jié)。例如，GSK高度表達(dá)于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中。
因此，本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽在制備用于治療CNS疾病例如神經(jīng)變性疾病的藥物中的用途。
優(yōu)選地，該CNS疾病是阿耳茨海默氏病。
Tau是與阿耳茨海默氏病病因相關(guān)的GSK-3底物。在健康的神經(jīng)細(xì)胞中，Tau與微管蛋白結(jié)合形成微管。然而在阿耳茨海默氏病中，tau形成破壞神經(jīng)細(xì)胞中的微管結(jié)構(gòu)的大團(tuán)纖絲(large tangles of filaments)，從而削弱養(yǎng)分的運(yùn)輸以及神經(jīng)元信息的傳輸。
不希望局限于任何理論，據(jù)信GSK3抑制劑能夠防止和/或逆轉(zhuǎn)微管相關(guān)蛋白tau的異常的高度磷酸化，其為阿耳茨海默氏病以及諸多其它神經(jīng)變性疾病例如進(jìn)行性核上麻痹、皮質(zhì)基底核變性癥(corticobasal degeneration)和皮克氏病所具有的不變特征。Tau基因突變導(dǎo)致出現(xiàn)遺傳形式的額顳葉失智癥(fronto-temporal dementia)，這進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了tau蛋白功能異常對(duì)于神經(jīng)變性過程的相關(guān)性[Goedert，M.Curr.Opin.Gen.Dev.，2001，11，343]。
本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽在制備用于治療雙相性精神障礙的藥物中的用途。
本發(fā)明又一方面涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
在頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、癲癇、以及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病領(lǐng)域，減少神經(jīng)元細(xì)胞凋亡是很重要的治療目標(biāo)[Mattson，M.P.Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.，2000，1，120]。因此，對(duì)于設(shè)計(jì)用于治療上述疾病的抑制藥物而言，GSK3作為神經(jīng)元細(xì)胞中的促凋亡因子使得這種蛋白激酶成為一個(gè)相當(dāng)吸引人的治療靶。
本發(fā)明又一方面涉及本發(fā)明化合物或其可藥用鹽在制備用于治療脫發(fā)癥的藥物中的用途。
毛發(fā)的生長(zhǎng)受Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑特別是Wnt-3控制。在皮膚的組織培養(yǎng)模型體系中，β-聯(lián)蛋白的非降解突變體的表達(dá)導(dǎo)致具有更高增殖潛能的推定的干細(xì)胞的群體(population)猛增[Zhu，A.J.；Watt，F(xiàn).M.Development，1999，126，2285]。這個(gè)干細(xì)胞群體表示更高水平的非鈣粘著蛋白相關(guān)的β-聯(lián)蛋白[DasGupta，R.；Fuchs，E.Development，1999，126，4557]，這可能就是它們具有高增殖潛能的原因。此外，在皮膚中過度表達(dá)截短的(truncated)β-聯(lián)蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠重新經(jīng)歷毛囊形態(tài)發(fā)生，而毛囊形態(tài)發(fā)生通常只是在胚胎形成過程中建立。因此，GSK3抑制劑的這種異位應(yīng)用在治療脫發(fā)以及在因化療引起脫發(fā)癥之后恢復(fù)毛發(fā)生長(zhǎng)方面具有治療上的用途。
本發(fā)明再一方面涉及一種治療GSK3依賴性疾病的方法，所述方法包括向需要接受該治療的患者按照如上所定義的足以抑制GSK3的用量施用本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽。
優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽按照足以抑制GSK3β的用量施用。
在本發(fā)明一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物按照足以抑制至少一種PLK酶的用量施用。
Polo樣激酶(PLK)組成了絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族。有絲分裂的黑腹果蠅在polo部位的突變體顯示紡錘體異常[Sunkel等人，J.Cell Sci.，1988，89，25]，并且還發(fā)現(xiàn)polo編碼有絲分裂激酶[Llamazares等人，Genes Dev.，1991，5，2153]。人類存在三種密切相關(guān)的PLK[Glover等人，Genes Dev.，1998，12，3777]。它們含有高度同源的氨基末端催化激酶域，并且它們的羧基末端含有兩個(gè)或三個(gè)保守區(qū)即polo盒(polo boxes)。對(duì)于polo盒的功能目前尚未完全理解，但是發(fā)現(xiàn)它們與PLK對(duì)亞細(xì)胞間隔的靶向作用[Lee等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95，9301；Leung等人，Nat.Struct.Biol.，2002，9，719]、調(diào)節(jié)與其它蛋白的相互作用[Kauselmann等人，EMBO J.，1999，18，5528]有關(guān)、或者它們還可以構(gòu)成部分自調(diào)節(jié)區(qū)[Nigg，Curr.Opin.Cell Biol.，1998，10，776]。此外，polo盒依賴性PLK1活性對(duì)于適當(dāng)?shù)闹衅?后期轉(zhuǎn)換和胞質(zhì)分裂也是必需的[Yuan等人，Cancer Res.，2002，62，4186；Seong等人，J.Biol.Chem.，2002，277，32282]。
已有研究表明，人類PLK調(diào)節(jié)有絲分裂的某些基本方面[Lane等人，J.Cell.Biol.，1996，135，1701；Cogswell等人，Cell Growth Differ.，2000，11，615]。具體地說，據(jù)認(rèn)為PLK1活性對(duì)于處于G2晚期/早前期(early prophase)的中心體功能成熟以及隨后兩極紡錘體的建立是必需的。通過這種小干擾RNA(siRNA)技術(shù)消耗細(xì)胞PLK1已經(jīng)證實(shí)了這種蛋白對(duì)于多重有絲分裂過程以及胞質(zhì)分裂的完成是必需的[Liu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2002，99，8672]。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物按照足以抑制PLK1的用量施用。
在三種人類PLK中，PLK1是最具特點(diǎn)的；它調(diào)節(jié)大量細(xì)胞分裂周期效應(yīng)，包括有絲分裂的啟動(dòng)[Toyoshima-Morimoto等人，Nature，2001，410，215；Roshak等人，Cell.Signalling，2000，12，405]、DNA損傷檢測(cè)點(diǎn)活化[Smits等人，Nat.Cell Biol.，2000，2，672；van Vugt等人，J.Biol.Chem.，2001，276，41656]、促后期復(fù)合體的調(diào)節(jié)[Sumara等人，Mol.Cell，2002，9，515；Golan等人，J.Biol.Chem.，2002，277，15552；Kotani等人，Mol.Cell，1998，1，371]、蛋白酶體的磷酸化[Feng等人，Cell Growth Differ.，2001，12，29]、以及中心體復(fù)制和成熟[Dai等人，Oncogene，2002，21，6195]。
具體地說，有絲分裂的啟動(dòng)需要對(duì)細(xì)胞成熟促進(jìn)因子(MPF)、依賴周期蛋白的激酶CDK1與B型細(xì)胞周期蛋白之間的復(fù)合物進(jìn)行活化[Nurse，Nature，1990，344，503]。后者在細(xì)胞周期的S和G2期產(chǎn)生積累，通過WEE1、MIK1和MYT1激酶增強(qiáng)對(duì)MPF復(fù)合物磷酸化的抑制。在G2期末期，通過與雙特異性磷酸酶CDC25C相對(duì)應(yīng)的脫磷酸化引發(fā)MPF的活化[Nigg，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.，2001，2，21]。在分裂間期，細(xì)胞周期蛋白B定位于(localizes)細(xì)胞質(zhì)[Hagting等人，EMBO J.，1998，17，4127]，然后使其在前期被磷酸化，這一活動(dòng)導(dǎo)致核轉(zhuǎn)位[Hagting等人，Curr.Biol.，1999，9，680；Yang等人，J.Biol.Chem.，2001，276，3604]?；钚訫PF在前期產(chǎn)生核積累被認(rèn)為對(duì)于啟動(dòng)M期活動(dòng)是重要的[Takizawa等人，Curr.Opin.Cell Biol.，2000，12，658]。然而，除非受CDC25C阻礙，核MPF可以保持不被WEE1活化。在分裂間期使定位于細(xì)胞質(zhì)的磷酸酶CDC25C自身在分裂前期堆積于細(xì)胞核中[Seki等人，Mol.Biol.Cell，1992，3，1373；Heald等人，Cell，1993，74，463；Dalal等人，Mol.Cell.Biol.，1999，19，4465]。細(xì)胞周期B[Toyoshima-Morimoto等人，Nature，2001，410，215]以及CDC25C[Toyoshima-Morimoto等人，EMBO Rep.，2002，3，341]進(jìn)入細(xì)胞核均通過PLK1磷酸化得到加強(qiáng)[Roshak等人，Cell.Signalling，2000，12，405]。這種激酶是啟動(dòng)M期的重要調(diào)節(jié)劑。
在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物是PLK1的ATP拮抗性抑制劑。
在本文上下文中，ATP拮抗作用是指抑制劑化合物降低或者抑止PLK催化活性的能力，也就是以修補(bǔ)或消除ATP結(jié)合的方式通過可逆或不可逆結(jié)合于酶活性位點(diǎn)而將磷酸從ATP轉(zhuǎn)移至大分子PLK底物上的能力。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物按照足以抑制PLK2和/或PLK3的用量施用。
哺乳動(dòng)物PLK2(又被稱作SNK)和PLK3(又被稱作PRK和FNK)最初被認(rèn)為是直接的早期基因產(chǎn)物。PLK3激酶活性似乎在S和G2晚期達(dá)到最大。它在DNA損傷檢測(cè)點(diǎn)活化期間也被活化以及顯著的氧化應(yīng)激。PLK3在調(diào)節(jié)微管動(dòng)力學(xué)和細(xì)胞中心體功能方面也具有重要作用，而PLK3表達(dá)失調(diào)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡[Wang等人，Mol.Cell.Biol.，2002，22，3450]。PLK2是三種PLK中最沒有得到清楚認(rèn)識(shí)的同族體。PLK2和PLK3都還具有其它重要的有絲分裂后功能[Kauselmann等人，EMBO J.，1999，18，5528]。
本發(fā)明另一方面涉及式1化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
在該方面優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白激酶是細(xì)胞周期依賴性激酶。優(yōu)選地，該蛋白激酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8或CDK9，更優(yōu)選是CDK2。
本發(fā)明又一方面涉及一種抑制蛋白激酶的方法，所述方法包括使所述蛋白激酶與式1化合物相接觸。
在該方面優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白激酶是細(xì)胞周期依賴性激酶，更優(yōu)選是CDK2。
測(cè)定方法本發(fā)明另一方面涉及上述的化合物在用于識(shí)別可影響一種或多種CDK酶的活性的其它候選化合物的測(cè)定方法中的用途。
優(yōu)選地，該測(cè)定方法能夠識(shí)別出可抑制一種或多種CDK酶的候選化合物。
更優(yōu)選的是，該測(cè)定方法是競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定方法。
優(yōu)選地，該候選化合物是通過對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行常規(guī)SAR修飾得到的。
本文所使用的術(shù)語(yǔ)“常規(guī)SAR修飾”是指本領(lǐng)域已知的通過化學(xué)衍生化手段對(duì)給定化合物進(jìn)行變型的常規(guī)方法。
因此，一方面該被識(shí)別的化合物可以作為改良其它化合物的模型(例如模板)。在這類測(cè)試中所使用的化合物可以游離在溶液中、粘附于固體載體上、荷載于細(xì)胞表面上、或者定位于細(xì)胞內(nèi)。可以對(duì)活性消除或者該化合物與被測(cè)試物質(zhì)之間結(jié)合復(fù)合物的形成進(jìn)行測(cè)試。
本發(fā)明的測(cè)定方法可以用于篩選測(cè)試許多的化合物。一方面，本發(fā)明的測(cè)定方法屬于高通量篩選。
本發(fā)明還預(yù)期了競(jìng)爭(zhēng)性藥物篩選測(cè)定方法在中和能夠結(jié)合某化合物，特別是能夠與測(cè)試化合物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合某化合物的抗體中的用途。
另一篩選技術(shù)提供了對(duì)底物具有合適的結(jié)合親和力的化合物的高通量篩選(HTS)，該技術(shù)基于WO 84/03564中所具體描述的方法。
據(jù)期望，本發(fā)明的測(cè)定方法可適合于小規(guī)模和大規(guī)模篩選測(cè)試化合物以及定量分析。
優(yōu)選地，該競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定方法包括在所述CDK酶的已知底物存在下，使式1化合物與CDK酶接觸，并檢測(cè)所述CDK酶和所述已知底物之間的相互作用中所出現(xiàn)的任何變化。
本發(fā)明第六方面提供了一種檢測(cè)配體對(duì)CDK酶結(jié)合力的方法，所述方法包括下述步驟(i)在所述CDK酶的已知底物存在下，使配體與CDK酶接觸；(ii)檢測(cè)所述CDK酶與所述已知底物之間的相互作用中所出現(xiàn)的任何變化；并且其中所述配體是式1的化合物。
本發(fā)明一方面涉及一種包括下述步驟的方法(a)完成上面所述的測(cè)定方法；(b)識(shí)別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；和(c)制備一定量的所述一種或多種配體。
本發(fā)明另一方面提供了一種包括下述步驟的方法(a)完成上文所述的測(cè)定方法；(b)識(shí)別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；和(c)制備含有所述一種或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面提供了一種包括下述步驟的方法(a)完成上文所述的測(cè)定方法；(b)識(shí)別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；(c)對(duì)所述一種或多種能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的配體進(jìn)行修飾；(d)完成上文所述的測(cè)定方法；(e)任選制備含有所述一種或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及通過上文所述方法識(shí)別出來的配體。
本發(fā)明再一方面涉及含有通過上文所述方法識(shí)別出來的配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及通過上文所述方法識(shí)別出來的配體在制備用于治療增殖性疾病的藥物組合物中的用途。
上述方法可用于篩選用作一種或多種CDK酶抑制劑的配體。
方法本發(fā)明另一方面涉及制備上述式I化合物的方法，所述方法包括將式V化合物與式VI化合物反應(yīng)
其中R1-9如上定義，X是Cl或F。
優(yōu)選地，所述式V化合物通過下述步驟制備 (i)將式II化合物與式III化合物反應(yīng)，形成式IV化合物；(ii)所述式IV化合物用烷基鹵化物R5-X’烷基化，形成式V化合物。
該烷基鹵化物R5-X’優(yōu)選為烷基溴化物。
優(yōu)選地，所述式VI化合物通過下述步驟制備 (i)將式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保護(hù)基團(tuán)；(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；
(iii)除去所述式X化合物上的保護(hù)基團(tuán)PG，形成式IX化合物，其相當(dāng)于其中R3或R4中的一個(gè)是H的式VI。
或者，所述式VI化合物也可以通過下述步驟制備(i)將式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保護(hù)基團(tuán)；(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；(iii)氧化所述式X化合物，形成式XI化合物；(iv)烷基化所述式XI化合物，形成式XII化合物；(v)除去所述式XIII化合物上的保護(hù)基團(tuán)PG，形成式VI化合物。
更優(yōu)選的是，在上述方法步驟(i)和(iii)中的氧化是通過Swern氧化的方式完成的。
優(yōu)選地，上述方法的步驟(ii)和(iv)的烷基化反應(yīng)是通過將該化合物使用烷基鋰試劑在溴化銅/二甲基硫化物絡(luò)合催化劑存在下進(jìn)行處理而實(shí)現(xiàn)的。
適宜的保護(hù)基團(tuán)對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是熟悉的。通過示例的方式，優(yōu)選保護(hù)基團(tuán)PG是三苯甲基。
關(guān)于制備本發(fā)明化合物更具體的細(xì)節(jié)概述在標(biāo)題為“合成”的實(shí)施例中。
通過下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。
實(shí)施例與roscovitine相反，本發(fā)明化合物含有修飾的嘌呤C-2取代基。特別地，本發(fā)明化合物所含有的C-2取代基具有仲醇或叔醇基團(tuán)而不是伯醇基團(tuán)。不希望局限于任何理論，據(jù)認(rèn)為該修飾的C-2取代基的存在使得醇-羧基代謝轉(zhuǎn)化率降低。
為了彌補(bǔ)因?yàn)樵贑-2取代基位置上引入另外的烷基取代基而可能引起其水溶性降低，將roscovitine的C-6芐基氨基替換為(吡啶-2-基)-甲基氨基。后面的實(shí)施例證明這樣的結(jié)構(gòu)修飾在生物活性方面是可以接受的(CDK2/細(xì)胞周期蛋白E或A、CDK1/細(xì)胞周期蛋白B抑制作用以及對(duì)人類腫瘤細(xì)胞系的抗增殖活性)。
因此，本發(fā)明證實(shí)對(duì)roscovitine的嘌呤C-2和C-6取代基進(jìn)行修飾可以得到治療活性增加的新化合物。實(shí)際上已經(jīng)表明，在存在于roscovitine中的嘌呤C-2取代基中的甲醇C上使用一個(gè)或兩個(gè)低級(jí)烷基取代基進(jìn)行取代不僅在保留所希望的生物活性方面(蛋白激酶抑制作用的效能和選擇性；細(xì)胞毒性)是可以接受的，而且在某些情形下還提供了更有效的化合物。另外，用來替代芐基氨基的(吡啶-2-基)-甲基氨基的引入還保證了本發(fā)明化合物相對(duì)于roscovitine而言，其親水性和水溶性曲線得到了改善(計(jì)算出的正辛醇/水分布系數(shù)2.5＜ClogP＜3.8，相比之下roscovitine的ClogP＝3.7)。此外，利用適宜的體外模型系統(tǒng)，本文所例舉的所選化合物還顯示出具有更高的耐代謝性降解。
合成可以通過本領(lǐng)域已知的方法制備通式結(jié)構(gòu)1的化合物(參見綜述Fischer，P.M.和Lane，D.P.Curr.Med.Chem.2001，7，1213-1245)。常規(guī)合成路線如下面的流程

圖1所示，它由可商購(gòu)得到的2，6-二氯嘌呤(2，X＝Cl)或2-氨基-6-氯嘌呤(2，X＝NH2)開始。在后一種情形中，將氨基轉(zhuǎn)化得到特別適宜的6-氯-2-氟-嘌呤起始原料(2，X＝F；Gray，N.S.，Kwon，S.，以及Schultz，P.G.Tetrahedron Lett.1997，38，1161-1164.)。然后在更具反應(yīng)活性的C-6位置上使用適宜的吡啶基甲基胺3進(jìn)行選擇性氨化得到中間體4。例如通過使用適宜的烷基鹵化物R5-X進(jìn)行親核取代，將其在N-9位置上烷基化。產(chǎn)物5最后在升高的溫度下使用羥乙胺6氨化。
流程圖1
取代的氨基醇6(R1或R2＜＞H)可以由α-氨基醇7(R1或R2＜＞H)按照下面流程圖2所示的方法合成。許多α-氨基醇7可以商購(gòu)得到；或者它們也可以很方便地通過還原相應(yīng)的α-氨基酸而制備得到。所采用合成方法的起始反應(yīng)是將氨基官能團(tuán)用三苯甲基保護(hù)得到中間體8(R1或R2＜＞H；Evans，P.A.，Holmes，A.B.，以及Russell，K.J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，1994，3397-3409)。將其經(jīng)Swern氧化得到相應(yīng)的醛9(R1或R2＜＞H；Takayama，H.，Ichikawa，T.，Kuwajima，T.，Kitajima，M.，Seki，H.，Aimi，N.，以及Nonato，M.G.J.Am.Chem.Soc.2000，122，8635-8639)。使用適宜的烷基鋰試劑和溴化銅/二甲基硫化物絡(luò)合物催化劑在二乙基醚中通過螯合控制烷基化反應(yīng)(Reetz，M.T.，Roelfing，K.，以及Griebenow，N.Tetrahedron Lett.1994，35，1969-1972)完成取代基R3(如果R2＜＞H)或者R4(如果R1＜＞H)的引入。根據(jù)所引入的取代基，上述步驟得到非對(duì)映體過量50-80％的中間體10?；蛘咭部梢允褂檬中苑椒?，然后任選將光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行分離/拆分。為了制備R3和R4均不是H的氨基醇，中間體10再經(jīng)Swern氧化反應(yīng)得到相應(yīng)的酮12，隨后通過烷基化反應(yīng)引入第二個(gè)取代基。對(duì)于所有的氨基醇而言，其合成方法中的最后一步是使用三氟乙酸除去三苯甲基得到6或者11。
流程圖2在其中氨基醇的甲醇C上含有兩個(gè)相同取代基的情形中(6，R1或R2＜＞H；R3＝R4，不是H)，它們可以直接由適宜的相應(yīng)α-氨基酸例如通過雙Grignard烷基化制備得到(Guenther，B.R.，和Kirmse，W.Liebigs Ann.Chem.1980，518-532)。
激酶測(cè)定測(cè)試了來自下面實(shí)施例中的化合物對(duì)于CDK2/細(xì)胞周期蛋白E、CDK1/細(xì)胞周期蛋白B、CDK4/細(xì)胞周期蛋白D1和CDK7/細(xì)胞周期蛋白H、ERK-2、以及PKA的抑制活性。使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)將His6-標(biāo)記的重組人類依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶CDK1/細(xì)胞周期蛋白B1、CDK2/細(xì)胞周期蛋白E、CDK4以及CDK7/細(xì)胞周期蛋白H表達(dá)于sf9細(xì)胞中。將重組細(xì)胞周期蛋白D1表達(dá)于E.coli中。這些蛋白通過金屬螯合物親和色譜法純化至同質(zhì)性高于90％。使用重組CDK/細(xì)胞周期蛋白、重組活性ERK-2(UpstateBiotechnology)、或者環(huán)AMP依賴性激酶(PKA)催化亞單元(Calbiochem Cat.539487)在96孔板中完成激酶測(cè)定。測(cè)定是在測(cè)定緩沖液(25mMβ-甘油磷酸酯，20mM MOPS，5mM EGTA，1mM DTT，1mM Na3VO3，pH7.4)中完成的，向其中加入具有適宜底物的2-4μg活性酶(CDK2使用純化組蛋白H1、CDK4使用重組GST-成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(殘留物773-928)、CDK7使用生物素基-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)4肽、ERK-2使用髓鞘堿性蛋白、PKA使用肽肯普肽(Kemptide)(Fluka Biochemika Cat.60645))。通過加入Mg/ATP混合組分(具有每孔30-50kBq的[γ-32P]-ATP的15mM MgCl2+100μM ATP)啟動(dòng)反應(yīng)，混合物視需要在30℃下孵育10分鐘(CDK2/細(xì)胞周期蛋白E，ERK-2，PKA)或45分鐘(CDK4/細(xì)胞周期蛋白D1，CDK7/細(xì)胞周期蛋白H)。除CDK7的情形以外，其余情形均在冰上終止反應(yīng)，接著通過p81濾板或GF/C濾板(對(duì)于CDK4)(Whatman Polyfiltronics，Kent，UK)過濾，而對(duì)于CDK7的情形，在冰上終止反應(yīng)之后，向每個(gè)孔中加入10μl的10mg/mL抗生物素蛋白，繼續(xù)孵育10分鐘，接著如每個(gè)CDK2測(cè)定方法那樣過濾。用75mM正磷酸水溶液洗滌3次后，將平板干燥，加入閃爍劑，在閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount，PackardInstruments，Pangbourne，Berks，UK)中測(cè)量結(jié)合的放射性。用于激酶測(cè)定方法的化合物被制備成10mM的DMSO儲(chǔ)備液，然后稀釋成10％的DMSO測(cè)定緩沖液。數(shù)據(jù)用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析測(cè)得IC50值(抑制激酶活性達(dá)到50％的測(cè)試化合物的濃度)。本發(fā)明化合物的這些值如表1所示。
MTT細(xì)胞毒性測(cè)定使用下述人類腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)549、HeLa、HT-29、MCF7、Saos-2、CCRF-CEM、HL-60、以及K-562對(duì)來自下面的實(shí)施例中的化合物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞增殖測(cè)定。這些細(xì)胞系由ATCC(American Type Culture Collection，10801University Boulevard，Manessas，VA 20110-2209，USA)獲得。完成標(biāo)準(zhǔn)的72-hMTT(噻唑基藍(lán)；3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)測(cè)定(Haselsberger，K.；Peterson，D.C.；Thomas，D.G.；Darling，J.L.Anti CancerDrugs 1996，7，331-8；Loveland，B.E.；Johns，T.G.；Mackay，I.R.；Vaillant，F(xiàn).；Wang，Z.X.；Hertzog，P.J.Biochemistry International 1992，27，501-10)。簡(jiǎn)而言之按照倍增時(shí)間將細(xì)胞接種于96孔板中，并在37℃下培養(yǎng)過夜。測(cè)試化合物被制備成DMSO溶液，然后在100μL細(xì)胞介質(zhì)中制備得到1/3連續(xù)稀釋液，將其加入至細(xì)胞(分成三份)中在37℃下培養(yǎng)72小時(shí)。將MTT在細(xì)胞介質(zhì)中被制備成5mg/mL的儲(chǔ)備液，并過濾滅菌。從細(xì)胞中除去介質(zhì)，然后用200μL PBS洗滌。然后按照20μL每孔加入MTT溶液，在37℃下置于暗處培養(yǎng)4小時(shí)。除去MTT溶液，細(xì)胞再次用200μL PBS洗滌。將MTT染料用200μL每孔的DMSO攪拌溶解。在540nm處讀取吸光率，數(shù)據(jù)用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析測(cè)得IC50值(抑制細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到50％的測(cè)試化合物的濃度)。本發(fā)明化合物的這些值如表2所示。
比較體內(nèi)代謝測(cè)定微粒體培養(yǎng)以及分析樣本的制備微粒體由Totem Biologicals，Northampton，England獲得。將微粒體蛋白(0.2mg)和roscovitine或者本發(fā)明的測(cè)試化合物(最終濃度為10μM)混合于含有NADPH(20mM)、MgCl2(10mM)和EDTA(1.5mM)的磷酸鹽緩沖溶液(100μL)中。按照內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，樣本孵育30分鐘，加入含有抑止酶素(Vesely，J.，Havlicek，L.，Strnad，M.，Blow，J.J.，Donella-Deana，A.，Pinna，L.，Letham，D.S.，Kato，J.，Detivaud，L.，Leclerc，S.，Meijer，L.Eur.J.Biochem.1994，224，771-786)的冰冷甲醇(300μL)以終止反應(yīng)。利用預(yù)先孵育30分鐘的0、1、和10μM微粒體(它們也用含抑止酶素的甲醇處理)得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后全部樣本經(jīng)離心分離，上清液通過液相色譜-質(zhì)譜分析。
液相色譜-質(zhì)譜色譜柱為Supelco LC-ABZ，50×4.6mm，5μm兩性離子柱(Supelco Inc.，Supelco Park，Bellefonte，PA，USA)。梯度洗脫液由甲醇(A)和0.1％甲酸的水溶液(B)組成。梯度由10∶90(A∶Bv/v)開始，均勻保持0.5分鐘，接著在6分鐘內(nèi)線性升至90∶10(A∶Bv/v)，然后在上述條件下繼續(xù)保持4分鐘。流速始終為1mL/分鐘。使用負(fù)載于Thermoseparations P4000四溶媒泵(quaternarypump)上的Gilson 215自動(dòng)取樣器(Anachem Ltd.，Bedfordshire，UK)引入LC-UV-MS樣本，將柱(如上所述)和Thermoseparations UV1000檢測(cè)器調(diào)至254nm(Thermoquest Ltd.，Hemel Hempstead，Hertfordshire，UK)。將來自檢測(cè)器的未經(jīng)分離的洗脫液通入裝備有以陽(yáng)極模式操作的電噴射源的Thermoquest LCQ離子阱質(zhì)譜中。質(zhì)譜條件為sheath gas 80、輔助氣(auxiliarygas)20(都為任意單位)、毛細(xì)管電壓4-4.5kV、加熱后毛細(xì)管溫度250-280℃。質(zhì)量范圍為50-750。掃描時(shí)間由離子阱控制，離子阱被設(shè)定為最大離子注入時(shí)間為200ms或者注入2×108離子所需要的時(shí)間；對(duì)于每次掃描，自動(dòng)操作系統(tǒng)的時(shí)間都是最先達(dá)到的。
數(shù)據(jù)分析為了對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，采用了選擇離子痕量的測(cè)試化合物和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的MH+離子，并得到了相關(guān)峰的面積。然后將測(cè)試孵育物的峰面積比(測(cè)試化合物/內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn))與由測(cè)試化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的峰面積比進(jìn)行對(duì)比。根據(jù)這些數(shù)值測(cè)得在微粒體蛋白培養(yǎng)30分鐘之后所殘留的測(cè)試化合物的濃度。對(duì)于本發(fā)明的代表性化合物其結(jié)果匯總在表3中，這些化合物的代謝穩(wěn)定性還與roscovitine就下述項(xiàng)目進(jìn)行了對(duì)比代謝作用(A欄)、體外CDK2抑制作用(B欄)、以及對(duì)腫瘤細(xì)胞系的體外細(xì)胞毒性(C欄)。另外還示出了比較體外效能(A×C欄)和細(xì)胞接觸時(shí)間(cellular exposure)(A×C欄)。上述結(jié)果表明，相對(duì)于roscovitine而言本發(fā)明的化合物具有提高了的體內(nèi)活性。表3中還包括計(jì)算出來的正辛醇/水分布系數(shù)(ClogP)?？梢钥闯?，這些具有改良細(xì)胞活性和代謝穩(wěn)定性的化合物同時(shí)還具有比roscovitine更低的ClogP，這表明它們的水溶性得到提高，因而更容易制成供體內(nèi)服用的藥物制劑。
(2R)-2-(6-芐基氨基-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁酸 將芐基-(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-胺(151mg，0.5mmol)溶解于NMP(5mL)和DBU(1.5mL，10mmol)中。然后加入(R)-(-)-2-氨基丁酸(99％ee/GLC；1.03g，10mmol)，混合物在N2下、于160℃攪拌1小時(shí)。冷卻之后，混合物用檸檬酸(10％水溶液)和CH2Cl2(各25mL)稀釋。分離各相，有機(jī)部分用鹽水萃取(2×10mL)，MgSO4干燥，過濾，然后蒸發(fā)。將殘余物再次溶解于MeCN中，通過制備型RP-HPLC分餾(Vydac 218TP1022，9mL/分鐘，22.5-32.5％MeCN的含0.1％CF3COOH的H2O溶液，持續(xù)40分鐘)。收集合適的餾分并凍干得到純的為無定形白色固體的標(biāo)題化合物(137mg，74.4％)。分析RP-HPLC(Vydac 218TP54，1mL/分鐘)tR＝16.04分鐘(0-60％MeCN)，15.95分鐘(22.5-32.5％MeCN的含0.1％CF3COOH的H2O溶液，持續(xù)20分鐘)，純度＞98％(λ＝214nm)。1H-NMR(d6-DMSO，300MHz)δ0.95(t，J＝7.3Hz，3H，CH2CH3)；1.51(d，J＝6.7Hz，6H，CH(CH3)2)；1.78(m，J＝7.3Hz，2H，CH2CH3)；4.27(m，1H，CHCH2)；4.64(七重峰，J＝6.7Hz，1H，CH(CH3)2)；4.69(m，2H，CH2Ph)；7.25-7.41(m，6H，ArH)。DE-MALDI-TOF MS(α-氰基-4-羥基肉桂酸基體)[M+H]+＝369.41。FAB-MS[M+H]+＝369.2033(C19H25N6O2實(shí)際值369.2039)。
(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(R)-(-)-2-氨基丁-1-醇(10g，1當(dāng)量，112.18mmol)的DCM(500mL)溶液中先后加入DIEA(30mL，1.54當(dāng)量，172.22mmol)和三苯甲基氯(35.4mL，1.13當(dāng)量，126.98mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚∶MeOH；55∶40∶5)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(900mL)在攪拌下使殘余物從丙酮(50mL)中沉淀析出。過濾除去沉淀，濾液真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于己烷(1L)中，過濾，濾液真空蒸發(fā)得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率32g(86％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.56(t，3H，J＝7.41Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，1.10(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.22(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.38(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.72+3.00(2×m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，4.28(t，1H，J＝5.26Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，7.14-7.49(m，15H，3×Ph)。
(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(S)-(+)-2-氨基丁-1-醇(10g，1當(dāng)量，112.18mmol)的DCM(500mL)溶液中先后加入DIEA(30mL，1.54當(dāng)量，172.22mmol)和三苯甲基氯(35.4mL，1.13當(dāng)量，126.98mmol)。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌48小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚∶MeOH；55∶40∶5)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(900mL)在攪拌下使殘余物從丙酮(50mL)中沉淀析出，過濾除去沉淀，濾液真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于己烷(1L)中，過濾，濾液真空蒸發(fā)得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率33g(89％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.58(t，3H，J＝7.26Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，1.10(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.24(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.76&3.03(2×m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，4.32(t，1H，J＝4.97Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛
在氬氣下、于-45℃向攪拌的DMSO(3.0mL，2.8當(dāng)量，42.28mmol)的DCM(30mL)溶液中逐滴加入乙二酰氯(2M的DCM溶液，10.56mL，1.40當(dāng)量，21.12mmol)。反應(yīng)混合物在-45℃下攪拌1小時(shí)，之后在攪拌下逐滴加入(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇(5g，1當(dāng)量，15.08mmol)的DCM(30mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌3小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向該反應(yīng)混合物中加入TEA(10.5mL，5當(dāng)量，75.33mmol)的DCM(30mL)溶液，將所得到的溶液在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍７磻?yīng)混合物用更多的DCM(200mL)稀釋，再用水(250mL)洗滌。水相用DCM(3×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于乙醚(30mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)，將殘余物溶解于己烷(50mL)中，過濾除去固體沉淀，并將濾液真空蒸發(fā)，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率2.59g(52％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.77(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，1.34-1.61(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，2.92(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，3.62(d，1H，J＝8.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，7.16-7.46(m，15H，3×Ph)，8.77(d，1H，J＝3.00Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)。
(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛 在氬氣下、于-45℃向攪拌的DMSO(2.4mL，2.8當(dāng)量，33.82mmol)的DCM(30mL)溶液中逐滴加入乙二酰氯(2M的DCM溶液，8.45mL，1.40當(dāng)量，16.9mmol)。反應(yīng)混合物在-45℃下攪拌1小時(shí)，之后在攪拌下逐滴加入(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇(4g，1當(dāng)量，12.07mmol)的DCM(30mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌3小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向反應(yīng)混合物中加入TEA(8.4mL，5當(dāng)量，60.27mmol)的DCM(30mL)溶液，將所得到的溶液在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用更多的DCM(100mL)稀釋，再用水(250mL)洗滌。水相用DCM(3×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于乙醚(30mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)。殘余物溶解于己烷(50mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率3.64g(91％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.77(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，1.37-1.59(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，2.93(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，3.62(d，1H，J＝5.84Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，7.16-7.46(m，15H，3×Ph)，8.77(d，1H，J＝3.00Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)。
(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇 在氬氣下、于-70℃向攪拌的CuBr.SMe2(2.74g，2.2當(dāng)量，13.33mmol)的Et2O(100mL)懸浮液中逐滴加入甲基鋰(1.6M的Et2O溶液，16.6mL，4.4當(dāng)量，26.56mmol)，溶液溫?zé)嶂潦覝亍⒒旌衔镏匦吕鋮s至-70℃，攪拌下向其中逐滴加入(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(2g，1當(dāng)量，6.05mmol)的Et2O(25mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌2小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，然后將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用乙醚(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(80∶20)洗脫，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率1.91g(91％)。(80％de 2S，3R20％de 2R，3R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.47&0.55(2×t，J＝7.43&7.27Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99-1.12(m，5H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.03(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.32-3.51(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.40(d，1H，J＝3.79Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.14-7.51(m，15H，3×Ph)。
(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇 在氬氣下、于-70℃向攪拌的CuBr.SMe2(2.74g，2.2當(dāng)量，13.33mmol)的乙醚(100mL)懸浮液中逐滴加入甲基鋰(1.6M的乙醚溶液，15.13mL，4.0當(dāng)量，24.21mmol)，溶液溫?zé)嶂潦覝?。將混合物重新冷卻至-70℃，攪拌下向其中逐滴加入(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(2g，1當(dāng)量，6.05mmol)的Et2O(25mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌2小時(shí)，再在-55℃下攪拌4小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶Et2O；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，然后將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用Et2O(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶Et2O(80∶20)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率1.37g(66％)。(80％de 2R，3S20％de2S，3S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.0.47&0.55(2×t，J＝7.50&7.26Hz -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99-1.12(m，5H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.01(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.22-3.43(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.41(d，1H，J＝3.31Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.14-7.56(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇 在氬氣下、于-78℃向攪拌的(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1.5g，1當(dāng)量，4.53mmol)的Et2O(150mL)溶液中逐滴加入乙基溴化鎂(3M的Et2O溶液，1.51mL，1當(dāng)量，4.53mmol)。溶液在-78℃下攪拌2小時(shí)，然后將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍；旌衔镏匦吕鋮s至0℃，加入H2O(150mL)，分離出有機(jī)相。水相用更多的Et2O(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率1.13g(69％)。(57％de 3S，4R43％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.45&0.69(t&m，6H，J＝7.43Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.12-1.29(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.16(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.54(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.21-3.40(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.29+4.39(2×d，1H，J＝4.42&5.37Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇 在氬氣下、于-78℃向攪拌的(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1.5g，1當(dāng)量，4.53mmol)的Et2O(150mL)溶液中逐滴加入乙基溴化鎂(3M的Et2O溶液，1.51mL，1當(dāng)量，4.53mmol)。溶液在-78℃攪拌2小時(shí)，然后將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍；旌衔镏匦吕鋮s至0℃，加入H2O(150mL)，分離出有機(jī)相。水相用更多的Et2O(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率1.19g(73％)。(65％de 3R，4S35％dr 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.46+0.69(t&m，6H，J＝7.34Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.13-1.29(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.17(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.55(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.20-3.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHCH2CH3)OH)，4.29&4.39(2×d，1H，J＝4.74&5.53Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
在氬氣下、于-78℃向攪拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2當(dāng)量，6.66mmol)的Et2O(100mL)懸浮液中逐滴加入異丙基鋰(0.7M戊烷溶液，17.29mL，4當(dāng)量，12.1mmol)，溶液溫?zé)嶂潦覝?。將混合物重新冷卻至-70℃，攪拌下向其中逐滴加入(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1當(dāng)量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌1小時(shí)，再溫?zé)嶂?55℃并在該溫度下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用Et2O(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脫得到為無色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.53g(47％)。(50％de 3S，4R50％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.44(t，3H，J＝7.03Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.52&0.77(2×d，6H，J＝6.48Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.79-1.13(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.72(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.11(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.77(m，1H，-NHCH(CH2CHX)CH(CH(CH3)2)OH)，2.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.55(d，1H，J＝5.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.15-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇 在氬氣下、于-78℃向攪拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2當(dāng)量，6.66mmol)的Et2O(100mL)懸浮液中逐滴加入異丙基鋰(0.7M戊烷溶液，17.29mL，4當(dāng)量，12.1mmol)，然后溶液溫?zé)嶂潦覝?。將混合物重新冷卻至-70℃，攪拌下向其中逐滴加入(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1當(dāng)量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌1小時(shí)，然后溫?zé)嶂?55℃，并在該溫度下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用Et2O(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗脫，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脫得到為無色油狀物的標(biāo)題化合物；產(chǎn)率0.36g(32％)，(50％de 3R，4S50％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.44(t，3H，J＝6.79Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.52&0.76(2×d，6H，J＝6.63Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.80-1.15(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.70(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.10(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.76(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.55(d，1H，J＝5.84Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.17-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇 在氬氣下、于-78℃向攪拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2當(dāng)量，6.66mmol)的Et2O(100mL)溶液中逐滴加入叔丁基鋰(1.5M戊烷溶液，8.0mL，4當(dāng)量，12.0mmol)，溶液溫?zé)嶂潦覝?。將混合物重新冷卻至-55℃，攪拌下向其中逐滴加入(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1當(dāng)量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液，然后在該溫度下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用Et2O(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.57g(49％)。(55％de 3S，4R45％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.36&0.86(2×t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，0.57&0.71(2×s，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.38-1.52(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.27(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.95(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.22&4.77(2×d，1H，J＝4.42 5.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.14-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇 在氬氣下、于-78℃向攪拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2當(dāng)量，6.66mmol)的Et2O(100mL)溶液中逐滴加入叔丁基鋰(1.5M戊烷溶液，8.0mL，4當(dāng)量，12.0mmol)，溶液溫?zé)嶂潦覝?。將混合物重新冷卻至-55℃，攪拌下向其中逐滴加入(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1當(dāng)量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液，然后在該溫度下繼續(xù)攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，將其在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)混合物用Et2O(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶Et2O(100∶0 → 90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.47g(40％)。(53％de 3R，4S47％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.37&0.87(2×t，3H，J＝7.46Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，0.58&0.71(2×s，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.38-1.52(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.00(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.28(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.95(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.24&4.79(2×d，1H，J＝5.21&6.16Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.15-7.53(m，15H，3×Ph)。
(3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2酮
在氬氣下、于-45℃向攪拌的DMSO(2.19mL，2.8當(dāng)量，30.86mmol)的DCM(30mL)溶液中逐滴加入乙二酰氯(2M的DCM溶液，7.69mL，1.4當(dāng)量，15.38mmol)。反應(yīng)混合物在-45℃下攪拌1小時(shí)，之后攪拌下逐滴加入(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(3.81g，1當(dāng)量，11.04mmol)的DCM(20mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌4小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向反應(yīng)混合物中加入N-乙基哌啶(7.54mL，5當(dāng)量，54.88mmol)，然后將溶液在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍７磻?yīng)混合物用更多的DCM(50mL)稀釋，再用水(200mL)洗滌。水相用DCM(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于Et2O(100mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)。殘余物溶解于己烷(50mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率3.78g(100％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.73(t，3H，J＝7.35Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，1.47-1.60(m，5H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.12(d，1H，J＝8.38Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.32(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，7.16-7.49(m，15H，3×Ph)。
(3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮 在氬氣下、于-45℃向攪拌的DMSO(1.95mL，2.8當(dāng)量，27.48mmol)的DCM(30mL)溶液中逐滴加入乙二酰氯(2M的DCM溶液，6.85mL，1.4當(dāng)量，13.70mmol)。反應(yīng)混合物在-45℃下攪拌1小時(shí)，之后攪拌下逐滴加入(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(3.39g，1當(dāng)量，9.83mmol)的DCM(20mL)溶液。反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌4小時(shí)，此時(shí)TLC(己烷∶乙醚；80∶20)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。向反應(yīng)混合物中加入N-乙基哌啶(6.71mL，5當(dāng)量，48.84mmol)，將溶液在16小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍７磻?yīng)混合物用更多的DCM(50mL)稀釋，用水(200mL)洗滌。水相用DCM(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。將殘余物溶解于Et2O(100mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)。殘余物溶解于己烷(50mL)中，過濾除去固體沉淀，濾液真空蒸發(fā)得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率3.15g(93％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.73(t，3H，J＝7.50Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，1.45-1.62(m，5H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.12(d，1H，J＝8.53Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.31(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，7.13-7.45(m，15H，3×Ph)。
(3R)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮(0.87g，1當(dāng)量，2.54mmol)的Et2O(100mL)溶液中逐滴加入甲基碘化鎂(3M乙醚溶液，2.54mL，3當(dāng)量，7.62mmol)。將該溶液置于45℃的預(yù)熱油浴中，并在該溫度下回流16小時(shí)。混合物重新冷卻至0℃，加入H2O(100mL)，溶液用硅藻土(celite)過濾，將該硅藻土用更多的Et2O(50mL)洗滌。分離出合并的有機(jī)相，水相用Et2O(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.21g(23％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.26(t，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.00&1.25(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，0.72-1.43(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.84(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.90(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.32(s，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.17-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3S)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮(0.59g，1當(dāng)量，1.72mmol)的Et2O(100mL)溶液中逐滴加入甲基碘化鎂(3M的Et2O溶液，1.72mL，3當(dāng)量，5.16mmol)。將該溶液置于45℃的預(yù)熱油浴中，并在該溫度下回流16小時(shí)。將混合物重新冷卻至0℃，加入H2O(100mL)，溶液用硅藻土過濾。將該硅藻土用更多的Et2O(50mL)洗滌。分離出合并的有機(jī)相，水相用Et2O(2×50mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，用己烷∶Et2O(100∶0→90∶10)洗脫得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.10g(16％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.27(t，J＝7.10Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99&1.25(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，0.75-1.42(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.88(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.92(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.32(s，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.18-7.46(m，15H，3×Ph)。
(2S，3R)-3-氨基-戊-2-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(1.32g，1當(dāng)量，3.83mmol)的DCM(50mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(10mL)，然后溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(300mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，然后所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.30g(99％)。(80％de 2S，3R20％de2R，3R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.915&0.924(2×t，3H，J＝7.50&7.58Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.06&1.13(2×d，J＝6.48&6.32Hz)，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.41-1.59(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.77&2.93(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.62-3.72&3.80-3.90(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.75(bs，2H，NH2)。
(2R，3S)-3-氨基-戊-2-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(1.64g，1當(dāng)量，4.75mmol)的DCM(50mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(10mL)，然后溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(300mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，然后所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.30g(98％)。(80％de 2R，3S20％de2S，3S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.913&0.923(2×t，3H，J＝7.50&7.50Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.11&1.18(2×d，J＝6.48&6.48Hz)，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.41-1.65(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.76+2.93(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.61-3.69&3.80-3.90(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.73(bs，2H，NH2)。
(3RS，4R)-4-氨基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4R)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(1.13g，1當(dāng)量，3.14mmol)的DCM(15mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(7mL)，然后溶液在該溫度下攪拌4小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，加入EtOH(20mL)，再真空除去，重復(fù)上述步驟兩次。使用己烷(40mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(5mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.37g(100％)。(57％de 3S，4R43％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.79&0.92(t&m，6H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.30-1.67(m，4H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.70(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.84&2.96(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.41&3.56(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.71(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4S)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(1.19g，1當(dāng)量，3.31mmol)的DCM(15mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(7mL)，然后溶液在該溫度下攪拌4小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，加入EtOH(20mL)，再真空除去，重復(fù)上述步驟兩次。使用己烷(40mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(5mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥得到標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.39g(99％)。(65％de 3R，4S35％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.79&0.92(t&m，6H，J＝7.50Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.22-1.68(m，4H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.71(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.83&2.95(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.39&3.54(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.77(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)。
(3RS，4R)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4R)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.53g，1當(dāng)量，1.41mmol)的DCM(20mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(90mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(10mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(20mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.18g(100％)。(50％de 3S，4R50％de3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.85-0.99(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.42-1.79(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.95(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.18(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.37(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.58(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4S)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.36g，1當(dāng)量，0.97mmol)的DCM(20mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(90mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(10mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(20mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.13g(100％)。(50％de 3R，4S50％de3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.85-1.01(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.44-1.76(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.94(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.17(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.40(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.54(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4R)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4R)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.57g，1當(dāng)量，1.47mmol)的DCM(10mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(20mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(3mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(20mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.21g(100％)。(55％de 3S，4R45％de3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.84-0.99(m，3H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.25-1.29(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.20-1.72(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.14(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.39(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.65(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.43，7.77&8.54(3×bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3RS，4S)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.47g，1當(dāng)量，1.21mmol)的DCM(10mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(20mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(3mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(20mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.18g(99％)。(53％de 3R，4S47％de3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.86-0.99(m，3H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.25-1.30(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.20-1.67(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.14(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.38(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.64(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.41，7.73&8.44(3×bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3R)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3R)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(0.21g，1當(dāng)量，0.60mmol)的DCM(5mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(2.5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(300mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物；產(chǎn)率0.07g(100％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.97(t，3H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.06&1.19(2×s，6H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.28-1.71(m，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.72(m，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，5.21(s，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.63(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)。
(3S)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇 在氬氣下、于室溫向攪拌的(3S)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(0.38g，1當(dāng)量，1.06mmol)的DCM(5mL)溶液中逐滴加入CF3COOH(2.5mL)，溶液在該溫度下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，使用己烷(300mL)在攪拌下使殘余物從Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黃色油狀物。從該油狀物中輕輕傾出溶劑，所得到的油狀物用己烷(30mL)洗滌并真空干燥，得到為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.12g(99％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ0.97(t，3H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.07&1.19(2×s，6H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.28-1.61(m，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.72(m，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，5.21(s，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.63(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)。
6-氯-2-氟-9H-嘌呤該化合物通過對(duì)現(xiàn)有文獻(xiàn)所記載的方法進(jìn)行變型而制備得到(Gray，N.S.；Kwon，S.；Schultz，P.G.Tetrahedron Lett.1997，38(7)，1161-1164)。
將氯-9H-嘌呤-2-基胺(75.0g，0.44mol)懸浮于HBF4水溶液(1.5L的48％w/w的水溶液)中?；旌衔锢鋮s至-15℃，然后劇烈攪拌。隨后在75分鐘內(nèi)慢慢加入NaNO2(2.5L的0.3M水溶液)，同時(shí)攪拌并小心控制溫度(＜10℃)。加料完成之后，將所得到的淺黃色溶液在室溫下繼續(xù)攪拌30分鐘。然后重新冷卻至-15℃，用NaOH(50％w/v水溶液)小心中和至pH＝6.2。將此溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至半干。將所得到的餅狀物用刮刀分開并在高真空下干燥過夜。所得到的黃色粉末干法裝填在快速色譜柱(24×15cm的SiO2床)上，其用CH2Cl2/MeOH，9∶1洗脫。收集適當(dāng)餾分，合并，然后蒸發(fā)。真空干燥之后，得到為無色粉末的標(biāo)題化合物(34.8g，48％)。TLC∶Rf＝0.25(CH2Cl2/MeOH，9∶1)，起始原料Rf＝0.16。m/z 173(MH+，100)，175(MH+2，33)。
(2-氟-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺 在氬氣下，向冷卻至0℃的攪拌的6-氯-2-氟嘌呤(0.4g，1當(dāng)量，2.31mmol)的正丁醇(25mL)溶液中先后加入DIEA(1.13mL，2.80當(dāng)量，6.49mmol)和C-吡啶-2-基-甲基胺(0.48mL，2.0當(dāng)量，4.66mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3小時(shí)，然后在30分鐘內(nèi)恢復(fù)至室溫。在該溫度下攪拌1小時(shí)，此時(shí)TLC(CHCl3∶MeOH；90∶10)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。真空蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物在檸檬酸溶液(200mL，10％水溶液)和EtOAc(200mL)之間分配，分離出水相并用更多的EtOAc(2×100mL)萃取，棄掉含有微量6-氯-2-氟嘌呤的大體積有機(jī)相。使用NaOH溶液(50％w/v，水溶液)將水相的pH調(diào)節(jié)至7.0，用EtOAc(4×100mL)萃取，所得到的大體積有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(95∶5→85∶15)洗脫，得到為淺黃色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.40g(71％)。Mp217-220℃。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ4.58(d，2H，J＝5.68Hz，-HNCH2-Pyr)，7.29，7.71，8.49(3×m，4H，Pyr)，8.10(s，1H，-N＝CH-NH-)，8.69(bs，1H，-HNCH2-Pyr)，13.07(bs，1H，-N＝CH-NH-)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)245([M+H]+，55)，176(30)，154(100)，136(85)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值245.0951，測(cè)量值245.0942。微量分析(期望值測(cè)量值)C11H9N6F.0.4H2OC；52.5552.91，H；3.933.49，N；33.4233.26。
2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺 在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(0.4g，1當(dāng)量，1.64mmol)的DMA(5mL)溶液中先后加入K2CO3(粉末狀，無水，1.1g，4.85當(dāng)量，7.96mmol)和2-溴丙烷(1.5mL，9.75當(dāng)量，15.98mmol)。反應(yīng)混合物在40℃下攪拌48小時(shí)，此時(shí)TLC(CHCl3∶MeOH；90∶10)顯示反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行完全。真空蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物在水(200mL)和EtOAc(100mL)之間分配，分離出水相，并用更多的EtOAc(2×50mL)萃取。所得到的大體積有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)，殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→95∶5)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率0.27g(58％)。mp 150-152℃。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)δ1.49(2×s，6H，CH(CH3)2)，4.63(m，1H，-CH(CH3)2)，4.71(d，2H，J＝5.76Hz，-HNCH2-Pyr)，7.26，7.71，8.49(3×m，4H，Pyr)，8.26(s，1H，-N＝CH-N-)，8.78(bs，1H，-HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)287([M+H]+，100)，245(10)，154(22)，136(17)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值287.1420，測(cè)量值287.1412。微量分析(期望值測(cè)量值)C14H15N6FC；58.7358.38，H；5.285.13，N；29.3529.36。
(2S3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.2mL，10.96當(dāng)量，1.14mmol)和(2S，3R)-3-氨基-戊-2-醇(60mg，5.5當(dāng)量，0.58mmol)。將反應(yīng)混合物置于160℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率36.1mg(93％)。(80％de 3R，2S20％de 3R，2R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.91&1.06(2×t，3H，J＝7.11&7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.16&1.29(2×d，3H，J＝6.48&3.48Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.71-2.01(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.98(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.58-4.69(m，1H，-CH(CH3)2)，4.83-5.00(m，2H，-HNCH2-Pyr)，6.75-6.91(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.19-7.25(m，1H，Pyr-H)，7.37(d，1H，J＝8.05Hz，Pyr-H)，7.57(s，1H，-N＝CH-N)，7.64-7.71(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.58Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)370([M+H]+，100)，324(40)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值370.2355，測(cè)量值370.2347。
(2R3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁基/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.2mL，10.96當(dāng)量，1.14mmol)和(2R，3S)-3-氨基-戊-2-醇(60mg，5.5當(dāng)量，0.58mmol)。將反應(yīng)混合物置于160℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率22mg(57％)。(80％de 3S，2R20％de 3S，2S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.90&1.05(2×t，3H，J＝7.11&7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.17&1.25(2×d，3H，J＝6.31&6.16Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.75-2.03(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.93-4.05(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.58-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.83-5.01(m，2H，-HNCH2-Pyr)，6.74-6.91(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.19-7.25(m，1H，Pyr-H)，7.37(d，1H，J＝7.90Hz，Pyr-H)，7.57(s，1H，-N＝CH-N-)，7.64-7.71(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.90Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)370([M+H]+，100)，324(43)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值370.2355，測(cè)量值370.2347。
(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(20mg，1當(dāng)量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(3.75mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.18mL，15當(dāng)量，1.03mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-己-3-醇(110mg，13當(dāng)量，0.94mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率11mg(41％)。(57％de 4R，3S43％de 4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.85-1.06(m，6H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，&-CH(CH3)2)，1.42-1.65(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.45(d，1H，J＝6.31Hz，OH)，3.57-3.70(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.91-4.03(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.57-4.76(m，1H，-CH(CH3)2)，4.86-4.98(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.18-5.29(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，6.73-6.89(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.15-7.25(m，1H，Pyr-H)，7.38(d，1H，J＝7.90Hz，Pyr-H)，7.56(s，1H，-N＝CH-N-)，7.63-7.70(m，1H，Pyr-H)，8.60(d，1H，J＝4.42Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)384([M+H]+，100)，324(35)，307(37)，297(25)，289(20)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值384.2512，測(cè)量值384.2523。
(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(20mg，1當(dāng)量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(3.75mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.18mL，15當(dāng)量，1.03mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-己-3-醇(110mg，13當(dāng)量，0.94mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率10mg(37％)。(57％de 4S，3R43％de 4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.85-1.06(m，6H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，&-CH(CH3)2)，1.43-1.64(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.45(d，1H，J＝6.16Hz，OH)，3.56-3.70(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.91-4.02(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.58-4.71(m，1H，-CH(CH3)2)，4.86-4.98(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.21-5.32(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，6.76-6.94(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.16-7.26(m，1H，Pyr-H)，7.38(d，1H，J＝7.74Hz，Pyr-H)，7.58(s，1H，-N＝CH-N-)，7.64-7.70(m，1H，Pyr-H)，8.60(d，1H，J＝4.45Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)384([M+H]+，100)，324(35)，307(37)，297(25)，289(20)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值384.25 12，測(cè)量值384.2523。
(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5當(dāng)量，0.57mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇(42mg，3.0當(dāng)量，0.32mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率7.8mg(19％)。50％de 4R，3S50％de4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.91-1.04(m，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.66-1.94(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.22-3.34(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.79-3.93(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.57-4.71(m，1H，-CH(CH3)2)，4.85-4.97(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.13-5.24(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，6.65-6.79(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.13-7.24(m，1H，Pyr-H)，7.32-7.42(m，1H，Pyr-H)，7.56(s，1H，-N＝CH-N-)，7.58-7.73(m，1H，Pyr-H)，8.60(d，1H，J＝4.42Hz，Pyr-H)。FABMSm/z(相對(duì)強(qiáng)度)398([M+H]+，100)，324(50)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值398.2668，測(cè)量值398.2654。
(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.20mL，11當(dāng)量，1.14mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇(28mg，2.0當(dāng)量，0.21mmol)。將反應(yīng)混合物置于160℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物；產(chǎn)率5.7mg(14％)。(50％de 4S，3R50％de4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ0.90-1.06(m，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.64-1.93(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.24-3.37(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.80-3.95(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.57-4.71(m，1H，-CH(CH3)2)，4.84-4.96(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.13-5.24(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，6.65-6.80(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.12-7.23(m，1H，Pyr-H)，7.30-7.40(m，1H，Pyr-H)，7.56(s，1H，-N＝CH-N-)，7.59-7.74(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.42Hz，Pyr-H)。FABMSm/z(相對(duì)強(qiáng)度)398([M+H]+，100)，324(55)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值398.2668，測(cè)量值398.2654。
(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5當(dāng)量，0.57mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇(52mg，3.41當(dāng)量，0.36mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率6.3mg(15％)。(55％de 4R，3S45％de 4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ1.00-1.03(m，12H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.56&.58(2×d，6H，J＝6.63&6.63Hz，-CH(CH3)2)，1.69-1.89(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.56(d，1H，J＝1.89Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.72-3.84(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.58-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.88-4.98(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.22-5.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，6.70-6.80(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.18-7.24(m，1H，Pyr-H)，7.38(d，1H，J＝7.90，Pyr-H)，7.57(s，1H，-N＝CH-N-)，7.63-7.70(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.90Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)412([M+H]+，100)，324(70)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值412.2825，測(cè)量值412.2835。
(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5當(dāng)量，0.57mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇(43mg，2.81當(dāng)量，0.29mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率5.9mg(14％)。(53％de 4S，3R47％de 4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ1.00-1.04(m，12H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.56&1.58(2×d，6H，J＝6.63&6.63Hz，-CH(CH3)2)，1.67-1.90(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.56(d，1H，J＝1.89Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.70-3.83(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.58-4.69(m，1H，-CH(CH3)2)，4.88-4.98(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.23-5.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，6.71-6.80(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.17-7.24(m，1H，Pyr-H)，7.38(d，1H，J＝7.90，Pyr-H)，7.57(s，1H，-N＝CH-N-)，7.63-7.70(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.90Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)412([M+H]+，100)，324(75)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值412.2825，測(cè)量值412.2835。
(3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(20mg，1當(dāng)量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(1.25mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.25mL，20.5當(dāng)量，1.44mmol)和(3R)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(22mg，2.7當(dāng)量，0.19mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率3.7mg(14％)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ1.01(t，3H，J＝7.35Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.22&1.30(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.69-1.88(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，3.68-3.82(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.59-4.72(m，1H，-CH(CH3)2)，4.86-5.03(m，2H，-HNCH2-Pyr)，6.88-7.09(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.20-7.25(m，1H，Pyr-H)，7.40(d，1H，J＝7.74，Pyr-H)，7.59(s，1H，-N＝CH-N-)，7.65-7.72(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.42Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)384([M+H]+，100)，324(80)，307(30)，193(50)，176(90)，165(35)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值384.2512，測(cè)量值384.2494。
(3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-2-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(1.25mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.25mL，14.4當(dāng)量，1.44mmol)和(3S)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(40mg，3.2當(dāng)量，34mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率4.8mg(12％)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ1.01(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.22&1.30(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.70-1.88(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，3.69-3.84(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.59-4.73(m，1H，-CH(CH3)2)，4.87-5.08(m，2H，-HNCH2-Pyr)，6.87-7.16(m，1H，-HNCH2-Pyr)，7.20-7.26(m，1H，Pyr-H)，7.40(d，1H，J＝8.05，Pyr-H)，7.59(s，1H，-N＝CH-N-)，7.65-7.73(m，1H，Pyr-H)，8.61(d，1H，J＝4.53Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)384([M+H]+，100)，370(30)，324(80)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值384.2512，測(cè)量值384.2494。
(3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
在氬氣下、于室溫向攪拌的(2-氟-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1當(dāng)量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(1.25mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.25mL，14.4當(dāng)量，1.44mmol)和(3S)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(40mg，3.2當(dāng)量，34mmol)。將反應(yīng)混合物置于140℃的預(yù)熱油浴中，然后在該溫度下攪拌72小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物在EtOAc(50mL)和鹽水/水(1∶1，100mL)之間分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。殘余物通過硅膠梯度柱色譜法純化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)率6.5mg(16％)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)δ1.00(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.22&1.31(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.70-1.90(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，3.66-3.81(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.56-4.73(m，1H，-CH(CH3)2)，4.78-5.01(m，2H，-HNCH2-Pyr)，7.20-7.45(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.48-7.69(m，1H，Pyr-H)，7.77(d，1H，J＝7.74Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相對(duì)強(qiáng)度)384([M+H]+，100)，366(30)，324(85)，286(40)，242(65)，192(63)，176(70)。精確質(zhì)量(M+H)實(shí)際值384.25 12，測(cè)量值384.2494。
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修飾和變型對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，只要其沒有偏離本發(fā)明范圍和主旨。盡管結(jié)合具體優(yōu)選的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不僅僅限于這些具體的實(shí)施方案。實(shí)際上，為了完成本發(fā)明而對(duì)所述方案進(jìn)行于相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的各種變型也是被包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)的。
表1

表2

a人類腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)549，HT29，Saos-2
表3

權(quán)利要求
1.式1的化合物或其可藥用鹽 其中R1和R2中的一個(gè)是甲基、乙基或異丙基，并且另一個(gè)是H；R3和R4各自獨(dú)立地是H、支鏈或直鏈C1-C6烷基、或芳基，并且其中R3和R4中的至少一個(gè)不是H；R5是支鏈或直鏈C1-C5烷基或C1-C6環(huán)烷基，其中的每個(gè)可以任選被一個(gè)或多個(gè)OH基團(tuán)取代；R6、R7、R8和R9各自獨(dú)立地是H、鹵素、NO2、OH、OMe、CN、NH2、COOH、CONH2或者SO2NH2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2中的一個(gè)是乙基或異丙基，另一個(gè)是H。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R5是異丙基或環(huán)戊基。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，其中R6、R7、R8和R9都是H。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2中的一個(gè)是乙基，另一個(gè)是H。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或者苯基。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基、正丙基、正丁基、仲丁基或者叔丁基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R3和R4各自獨(dú)立地是H、甲基、乙基、異丙基或者叔丁基。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，其選自(2S3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；(2R3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；(3RS，4R)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；(3RS，4S)-4-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；(3R)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；以及(3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的化合物，它是(2R3S)-3-{9-異丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇。
11.一種藥物組合物，它含有與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體、或者它們的混合物相混合的根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述增殖性疾病是癌癥或白血病。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中該增殖性疾病選自腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或者慢性梗阻性肺病。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療病毒性疾病的藥物中的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中該病毒性疾病是人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1-型單純皰疹病毒(HSV-1)、1-型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)、以及水痘帶狀皰疹病毒(VZV)。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療CNS疾病的藥物中的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的用途，其中該CNS疾病是阿耳茨海默氏病或雙相性精神障礙。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療脫發(fā)癥的藥物中的用途。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
21.根據(jù)權(quán)利要求12-20中任意一項(xiàng)的用途，其中該化合物按照足以抑制至少一種PLK酶的用量施用。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的用途，其中該P(yáng)LK酶是PLK1。
23.根據(jù)權(quán)利要求12-20中任意一項(xiàng)的用途，其中該化合物按照足以抑制至少一種CDK酶的用量施用。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中該CDK酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
25.根據(jù)權(quán)利要求12-20中任意一項(xiàng)的用途，其中該化合物按照足以抑制aurora激酶的用量施用。
26.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中該糖尿病是II型糖尿病。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27中任意一項(xiàng)的用途，其中該化合物按照足以抑制GSK的用量施用。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的用途，其中該化合物按照足以抑制GSK3β的用量施用。
30.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物作為抗有絲分裂劑的用途。
31.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在治療神經(jīng)變性疾病中的用途。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的用途，其是用于治療神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。
33.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在抑制蛋白激酶中的用途。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的用途，其中所述蛋白激酶是依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的用途，其中所述依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
36.一種治療增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中所述增殖性疾病是癌癥或白血病。
38.根據(jù)權(quán)利要求36或權(quán)利要求37的方法，其中所述化合物按照足以抑制至少一種CDK酶的用量施用。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中該CDK酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
40.根據(jù)權(quán)利要求36-39中任意一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是口服給藥的。
41.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)的化合物在用于識(shí)別可以抑制一種或多種依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶、GSK和PLK酶的其它候選化合物的測(cè)定方法中的用途。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的用途，其中所述測(cè)定方法是競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定方法。
43.制備權(quán)利要求1所定義的式I化合物的方法，所述方法包括將式V化合物與式VI化合物反應(yīng) 其中R1-9如權(quán)利要求1的定義，X是Cl或F。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的方法，其中所述式V化合物按照下述步驟制備 (i)將式II化合物與式III化合物反應(yīng)，形成式IV化合物；(ii)將所述式IV化合物用烷基鹵化物R5-X’烷基化，形成式V化合物。
45.根據(jù)權(quán)利要求43的方法，其中所述式VI化合物按照下述步驟制備 (i)將式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保護(hù)基團(tuán)；(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；(iii)除去所述式X化合物上的保護(hù)基團(tuán)PG；或者(i)將式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保護(hù)基團(tuán)；(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；(iii)氧化所述式X化合物，形成式XII化合物；(iv)烷基化所述式XII化合物，形成式XIII化合物；(v)除去所述式XIII化合物上的保護(hù)基團(tuán)PG。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(1)的化合物或其可藥用鹽，其中R
文檔編號(hào)A61P9/00GK1675213SQ03819429
公開日2005年9月28日 申請(qǐng)日期2003年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月15日
發(fā)明者彼得·費(fèi)希爾, 邁克爾·賈曼, 愛德華·麥克唐納, 伯納德·納特利, 弗洛倫斯·雷諾德, 斯圖爾特·威爾遜, 保羅·沃克曼 申請(qǐng)人:西克拉塞爾有限公司