專利名稱：非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域是酶抑制，特別是逆轉(zhuǎn)錄酶的體外和體內(nèi)抑制。
背景技術(shù)：
本領(lǐng)域已知許多用于HIV的療法，其中藥用活性化合物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑對許多HIV感染者提供了顯著療效。例如，拉米夫定(3TC)或齊多夫定(AZT)是耐受比較好的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物。然而，許多病毒株目前已出現(xiàn)針對這些化合物的明顯抗性。為了至少在某種程度上克服抗性，可以給予新型核苷類抑制劑(單用或與其它核苷類抑制劑聯(lián)用)，示例性的替代藥物包括司他夫定(d4T)、去羥肌苷(ddI)、可比韋(拉米夫定和齊多夫定聯(lián)用)和三協(xié)維(3TC、AZT和阿巴卡韋聯(lián)用)。
遺憾的是，針對一種核苷類抑制劑的抗性發(fā)展也可伴隨著針對另一種核苷類抑制劑的抗性(至少在某種程度上)，常常迫使改用不同類型的藥用活性分子。在這些情況下，患者可接受通常與其它抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑聯(lián)用的蛋白酶抑制劑(例如沙奎那韋、茚地那韋、奈非那韋等)。然而，這類聯(lián)用的相對復(fù)雜的給藥方案對許多患者來說常常是組織上和經(jīng)濟(jì)上的挑戰(zhàn)，而且通常達(dá)不到所需要的順應(yīng)性。
在一些較好耐受的聯(lián)合療法中，核苷類抑制劑可與非核苷類抑制劑聯(lián)用。非核苷類抑制劑(例如奈韋拉平、地拉韋啶、依法韋侖)是結(jié)構(gòu)相關(guān)的不同類型化合物，被認(rèn)為與逆轉(zhuǎn)錄酶的非核苷口袋結(jié)合，因此當(dāng)使用核苷類抑制劑時(shí)顯著增加了抗病毒功效。盡管使用非核苷類抑制劑看來提供了一類有希望的新型抗病毒藥，但仍然有一些缺點(diǎn)。例如，目前已知的非核苷類抑制劑的價(jià)格相當(dāng)昂貴，而且在病毒逆轉(zhuǎn)錄酶中的一個(gè)突變即可導(dǎo)致針對一大類非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的交叉抗性。此外，僅有數(shù)目有限的非核苷類抑制劑可用于治療HIV感染者。
因此，盡管本領(lǐng)域已知各種用于抑制逆轉(zhuǎn)錄酶、尤其是來自HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶的組合物和方法，但是它們所有或大多數(shù)都具有一個(gè)或多個(gè)缺點(diǎn)。此外，HIV病毒突變率相當(dāng)高，常常導(dǎo)致針對目前治療藥物的抗性。因此，仍然需要提供用于抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的新型組合物和方法。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的方法和組合物，其中不同羰酰胺化合物作為逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制性化合物起作用。
在本發(fā)明主題的一個(gè)方面，抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的方法包括如下步驟其中使所述逆轉(zhuǎn)錄酶與具有HET-L-C(Y)NR1R2結(jié)構(gòu)的化合物接觸，其中HET包含5元雜環(huán)或6元雜環(huán)，L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與H共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合，Y為氧、硫或NH，R1選自氫、鹵素和甲基，或者R1通過1-5個(gè)原子的鏈與R2形成環(huán)；且R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。
在特別優(yōu)選的方法中，HET為取代三唑或取代咪唑，甚至更優(yōu)選所述取代三唑或取代咪唑被第一取代基(例如甲基)和第二取代基(例如甲苯甲酰基)取代，其中第一和第二取代基中的至少一個(gè)包括芳基。此外，通常優(yōu)選L為-X1-CR3R4-，其中X1選自S、O、S(O)、S(O)2、NH、NR3和CR3R4；并且其中R3和R4獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級環(huán)烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和SH。在再一些優(yōu)選的方面中，L選自-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-、NHCH2、N(Me)CH2和-CH2-CH2-，和/或Y為O。在所述方法的再一些優(yōu)選的化合物中，R1為氫，且R2為取代的芳基或雜芳基，更優(yōu)選R2包含其中取代基為鹵素或甲基的鄰位取代苯基。
尤其設(shè)計(jì)的方法包括其中逆轉(zhuǎn)錄酶是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的方法，最優(yōu)選其中HIV逆轉(zhuǎn)錄酶對非核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑具有抗性的方法。所設(shè)計(jì)的方法可在體內(nèi)和/或體外進(jìn)行，并且還可包括其中化合物轉(zhuǎn)變成前體藥物的步驟，和/或其中使逆轉(zhuǎn)錄酶與第二種抑制劑(例如非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑)接觸的步驟。
因此，設(shè)計(jì)治療HIV感染者的方法可包括如下步驟其中將包含有效降低病毒復(fù)制的劑量的如下結(jié)構(gòu)I的化合物的藥用組合物給予患者，其中結(jié)構(gòu)I為HET-L-C(Y)NR1R2，并且其中HET包含雜環(huán)，L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與HET共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合，Y為氧、硫或NH，R1選自氫、鹵素和甲基，或者R1通過1-5個(gè)原子的鏈與R2形成環(huán)；且R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。對于特別優(yōu)選的取代基，應(yīng)用與如上所述相同的考慮。
因此，設(shè)計(jì)藥用組合物將包括結(jié)構(gòu)HET-L-C(Y)NR1R2(其取代基如上所述)的化合物，其中所述化合物當(dāng)給予患者時(shí)是以在患者細(xì)胞內(nèi)抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的有效濃度存在。
在本發(fā)明主題的又一些設(shè)計(jì)方面中，化合物具有HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5)的通用結(jié)構(gòu)，其中HET包含一個(gè)含氮取代雜環(huán)，W為O、S(O)、S(O)2、NH、NR1或CH2，R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級環(huán)烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH，Y為O、S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH，R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基，或者R4通過1-5個(gè)原子的鏈與R5形成環(huán)，且R5選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。
在本發(fā)明主題的又一方面，化合物具有HET-S-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5)的通用結(jié)構(gòu)，其中HET包含一個(gè)含氮取代雜環(huán)，R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級環(huán)烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH，前提條件是R1和R2不同時(shí)為氫，Y為O、S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH，R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基，或者R4通過1-5個(gè)原子的鏈與R5形成環(huán)，且R5選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。
在本發(fā)明主題的再一些方面，化合物具有HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5)的通用結(jié)構(gòu)，其中HET包含三唑除外的含氮取代雜環(huán)，W為O、S、S(O)、S(O)2、NH、N(Me)或CH2，R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH，Y為O、S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH，R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基，或者R4通過1-5個(gè)原子的鏈與R5形成環(huán)，且R5選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。
根據(jù)以下本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案詳述連同附圖
，將會使本發(fā)明的各種目的、特征、方面和優(yōu)勢更加顯而易見，本文中同樣的數(shù)字代表同樣的組分。
發(fā)明詳述本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)錄酶、特別是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶可以被多種包括羰酰胺部分的化合物所抑制。因此，設(shè)計(jì)在體外和體內(nèi)抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的方法和組合物。更尤其設(shè)計(jì)包括治療HIV感染者的方法在內(nèi)的方法，特別是設(shè)計(jì)包括所選羰酰胺化合物及其藥用組合物在內(nèi)的組合物。
本文所用的術(shù)語“鹵素”是指通常與其它原子(例如碳)共價(jià)結(jié)合的氟、溴、氯或碘。本文還使用的術(shù)語“羥基”是指-OH基團(tuán)。本文還使用的術(shù)語“羰基原子”是指三個(gè)原子與其共價(jià)結(jié)合的碳原子，其中這三個(gè)原子中的一個(gè)通過雙鍵結(jié)合所述碳原子(所述雙鍵可以是部分離域的)。因此，特別設(shè)計(jì)的羰基原子包括甲酰胺基、甲脒基和硫代甲酰胺基中的碳原子。
本文所用的術(shù)語“烷基”是指其中所有碳-碳鍵都是單鍵的環(huán)烴、支鏈烴或直鏈烴，而術(shù)語“低級烷基”是指1-10個(gè)碳原子的環(huán)烴、支鏈烴或直鏈烴(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基(或2-甲基丙基)、環(huán)丙基甲基、異戊基、正戊基、己基等)。本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指含有3-15個(gè)碳的單環(huán)或多環(huán)烷基。對于多環(huán)基團(tuán)，它們可以是多重稠環(huán)，其中一個(gè)較遠(yuǎn)的環(huán)(distal ring)可以是芳環(huán)(例如茚滿基、四氫化萘等)。
同樣，本文所用的術(shù)語“烯基”是指其中至少一個(gè)碳-碳鍵是雙鍵的烷基。因此，術(shù)語“低級烯基”是指所有具有1-10個(gè)碳原子的烯基。本文所用的術(shù)語“環(huán)烯基”是指含有3-15個(gè)碳原子和至少一個(gè)雙鍵的單環(huán)或多環(huán)基團(tuán)。同樣，本文所用的術(shù)語“炔基”是指其中至少一個(gè)碳-碳鍵為三鍵的烷基或烯基。因此，術(shù)語“低級炔基”是指所有具有1-10個(gè)碳原子的炔基。
本文所用的的術(shù)語“烷氧基”也指-OR基團(tuán)，其中R為低級烷基、取代的低級烷基、?；⒎蓟?、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、雜芳基烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基。同樣，術(shù)語“芳氧基”是指-OAr基團(tuán)，其中Ar為芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基。
此外，術(shù)語“芳基”和“Ar”在本文中可互換使用，并且是指具有至少一個(gè)芳環(huán)的芳族碳環(huán)基團(tuán)(例如苯基或二苯基)或其中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)的多重稠環(huán)的芳族碳環(huán)基團(tuán)(例如1，2，3，4-四氫萘基、萘基、蒽基或菲基)。同樣，本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”是指具有一個(gè)單環(huán)的飽和、部分不飽和或完全不飽和碳環(huán)基團(tuán)、或芳族碳環(huán)基團(tuán)(例如嗎啉基、吡啶基或呋喃基)或者是在環(huán)中包含至少一個(gè)雜環(huán)子的多重稠環(huán)(例如苯并吡啶基、喹喔啉基、喹啉基或吲嗪基)。本文所用的術(shù)語“雜原子”是指碳原子除外的原子(例如S、O或N)，所述原子可任選被諸如以下基團(tuán)取代氫、鹵素、低級烷基、烷氧基、低級烷硫基、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷硫基、巰基、磺酰胺基等。因此，術(shù)語“雜芳基”是指其中至少一個(gè)雜環(huán)為芳環(huán)的雜環(huán)。
此外，本文所用的術(shù)語“取代的”是指共價(jià)結(jié)合基團(tuán)或原子(或原子的自由電子對或雙鍵電子對)的氫原子被包括以下基團(tuán)的共價(jià)結(jié)合的非氫取代基取代羥基、巰基、烷硫基、鹵素、烷氧基、氨基、酰氨基、硝基、羧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、酰基、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基、烷基、烯基、炔基(alknyl)和氰基。
本文所用的術(shù)語“前體藥物”是指所設(shè)計(jì)化合物的修飾物，其中修飾的化合物表現(xiàn)出較低的藥理學(xué)活性(與未修飾的化合物相比)，并且其中修飾的化合物在靶細(xì)胞(例如T細(xì)胞)或靶器官(例如淋巴結(jié))內(nèi)重新轉(zhuǎn)變成未修飾形式。例如，當(dāng)活性藥物對安全的系統(tǒng)給藥來說毒性太大，或者當(dāng)所設(shè)計(jì)化合物通過消化道吸收太差，或者當(dāng)機(jī)體在所設(shè)計(jì)化合物到達(dá)其靶部位之前就將其分解時(shí)，將所設(shè)計(jì)化合物轉(zhuǎn)變成前體藥物是有用的。
本文還使用的術(shù)語“抑制逆轉(zhuǎn)錄酶”是指降低由逆轉(zhuǎn)錄酶從模板RNA或DNA形成DNA，其中可以通過各種方式直接或間接達(dá)到所述降低。例如，直接抑制包括自殺、競爭性抑制和非競爭性抑制、變構(gòu)抑制，或者抑制劑結(jié)合在非核苷類口袋中。間接抑制的實(shí)例包括消耗用于DNA合成的核苷、誘導(dǎo)或促使構(gòu)象變化等。
本文還使用的術(shù)語“降低病毒繁殖”是指降低樣品中的病毒滴度，其中所述降低可以包括各種方式，包括病毒復(fù)制的部分或總體抑制，或病毒蛋白加工或裝配的部分或總體抑制，病毒進(jìn)入或離開感染細(xì)胞的部分或總體抑制和/或通過針對病毒的免疫應(yīng)答從系統(tǒng)中清除病毒。
所設(shè)計(jì)的化合物總的來講，本發(fā)明人設(shè)計(jì)下式(I)的所有化合物都適用于本文中HET-L-C(Y)NR1R2(I)其中HET包含取代或未取代的雜環(huán)，所述雜環(huán)可以是也可以不是芳族；L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基碳原子共價(jià)結(jié)合；Y為O、S或NR3；R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的烷基、烯基或炔基(最好是低級烷基)；且R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)(所述雜環(huán)可包括一個(gè)或多個(gè)雙鍵，并且還可是芳族)。
對于所述雜環(huán)而言，優(yōu)選至少一個(gè)、更典型的是至少兩個(gè)雜原子是氮，而且這兩個(gè)雜原子在雜環(huán)中通過共價(jià)鍵彼此相連。因此，特別適合的雜環(huán)包括三唑(最優(yōu)選1，2，4-三唑)或咪唑環(huán)系。然而，在替代方面，合適的雜環(huán)還可包括具有至少一個(gè)雜原子(例如O、N或S)的5元環(huán)和6元環(huán)，其中所述環(huán)還可與至少一個(gè)其它環(huán)偶聯(lián)或稠合(所述環(huán)可以包含或不包含雜原子)。
特別優(yōu)選的雜環(huán)還包括至少一個(gè)、甚至更優(yōu)選至少兩個(gè)取代基，其中合適的取代基獨(dú)立地包括取代和/或未取代的芳基、取代和/或未取代的烷基、取代和/或未取代的烯基、取代和/或未取代的炔基，其中這兩個(gè)取代基中的每個(gè)還可包括一個(gè)或多個(gè)雜原子。然而，在甚至更優(yōu)選的方面，設(shè)計(jì)的雜環(huán)將包括低級烷基(最優(yōu)選甲基、鹵原子或三氟甲基)作為一個(gè)取代基，而取代或未取代的苯基(例如鹵代的或甲苯甲酰基)或者取代或未取代的喹啉作為另一個(gè)取代基。
因此，特別優(yōu)選的雜環(huán)將具有下式(II)結(jié)構(gòu) 其中R1和R2獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷芳基(所有這些基團(tuán)均可被取代)、OH、SH、NO2、NR1R2(其中R1和R2如上定義)、CF3、N3和/或O-烷基，且X為N或CR1(其中R1如上定義)。
在另一些所設(shè)計(jì)的方面，人們應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，合適連接基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)可以是完全不同的。例如，當(dāng)需要連接基團(tuán)具有相當(dāng)剛性的性質(zhì)(例如至少一個(gè)、更典型兩個(gè)旋轉(zhuǎn)自由度是受限制的)時(shí)，合適的連接基團(tuán)可包括雙鍵和/或三鍵，或者包括處于平面構(gòu)型中的一個(gè)或多個(gè)原子(例如芳族結(jié)構(gòu)、共軛結(jié)構(gòu)或羰基結(jié)構(gòu))。在另一方面，當(dāng)需要連接基團(tuán)至少在某種程度上具有撓性時(shí)，合適的連接基團(tuán)可包括烷基或氧原子或硫原子。因此，合適的連接基團(tuán)也可包括各種雜原子，特別優(yōu)選的雜原子是氧和硫(以不同的氧化態(tài))。
因此，設(shè)計(jì)的連接基團(tuán)特別包括其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈(通過共價(jià)鍵)的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)(最好與HET的碳原子)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與所設(shè)計(jì)化合物的羰基碳原子共價(jià)結(jié)合。因此，特別優(yōu)選的連接基團(tuán)將具有下式(III)的結(jié)構(gòu)-X-CR3R4- (III)
其中X1為雜原子，最優(yōu)選S、S(O)、S(O)2、O或NR5，其中R5最好是氫或者取代或未取代的烷基(最優(yōu)選低級烷基)?；蛘?，X1還可包括碳原子，因此可具有-(CR5R6)n-結(jié)構(gòu)，其中n介于1-5之間，并且其中R3、R4、R5和R6獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和/或SH。因此，合適的連接基團(tuán)將包括具有下列結(jié)構(gòu)的連接基團(tuán)-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-、-NHCH2、-N(CH3)CH2和-CH2-CH2-。
此外，人們應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，式(I)化合物的羰基碳原子可與各種原子/基團(tuán)Y共價(jià)結(jié)合，特別適合的基團(tuán)Y包括其中Y為O(以形成甲酰胺)、S(以形成硫代甲酰胺)和NR(以形成甲脒)的基團(tuán)，其中R可以為氫或者為取代或未取代的低級烷基。合適替代的R包括所有將(與N形成，或)提供氫鍵供體或受體基團(tuán)的基團(tuán)。因此，式(I)的Y可以是O、S或NR，其中R如上定義，尤其包括氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH。
同樣，對于式(I)化合物而言，與其羰基碳共價(jià)結(jié)合的氮原子的取代基R1和R2的性質(zhì)可以有相當(dāng)大的不同，本文設(shè)計(jì)所有已知的仲胺取代基。因此，式(I)的R1和R2可獨(dú)立地為氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的芳基，所有這些基團(tuán)還可包括一個(gè)或多個(gè)雜原子。然而，通常優(yōu)選R1和R2中的一個(gè)比較小(例如氫、甲基、三氟甲基等)，且R1和R2中的另一個(gè)包含芳基。尤其優(yōu)選的芳基可以是取代的，最優(yōu)選在鄰位取代，而且還包括對位的取代基(例如用鹵素或甲基作為取代基的鄰位取代苯基)。因此，特別設(shè)計(jì)的R1將包括氫和低級烷基(所述烷基可被進(jìn)一步取代[例如三氟甲基])，而特別設(shè)計(jì)的R2包括芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜芳基和雜環(huán)。
在一個(gè)特別優(yōu)選的方面，所述雜環(huán)通過不是-S-或-O-的基團(tuán)共價(jià)結(jié)合連接基團(tuán)，而且所述連接基團(tuán)具有比較短和相對柔性的結(jié)構(gòu)-W-C(R1)(R2)-。因此，所設(shè)計(jì)化合物將具有下式(IV)的結(jié)構(gòu)HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5) (IV)其中HET如上式(I)中定義，其中C(Y)-N(R4R5)如上式(I)中C(Y)-N(R1R2)的定義。對于W而言，通常設(shè)計(jì)不是-S-和-O-的所有基團(tuán)和/或原子都適合，特別優(yōu)選的基團(tuán)包括S(O)、S(O)2、NH、NR1和CH2。特別優(yōu)選的R1和R2和比較小的基團(tuán)，尤其優(yōu)選R1和R2獨(dú)立地為低級烷基、低級烯基、低級炔基(所有這些基團(tuán)可進(jìn)一步被取代)、氫、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH。
或者，當(dāng)需要所述雜環(huán)通過-S-、-O-或其它基團(tuán)共價(jià)結(jié)合連接基團(tuán)時(shí)，以及當(dāng)所述連接基團(tuán)比較短且相對柔性時(shí)，所設(shè)計(jì)化合物可具有下式(V)的結(jié)構(gòu)HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5)(V)其中HET、R1、R2、R4和R5如上式(IV)中的定義，其中W和Y如上式(I)中的定義，除了Y不為O之外。
在再一個(gè)設(shè)計(jì)方面，特別優(yōu)選的化合物包括其中雜環(huán)基為二取代的1，2，4-三唑或二取代的咪唑的化合物，合適的化合物可具有下式(VI)結(jié)構(gòu)HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5)(VI)其中HET包含二取代的1，2，4-三唑或二取代的咪唑，其中HET的至少一個(gè)取代基為取代芳基，其中所述取代芳基共價(jià)結(jié)合HET的氮；其中W為O、S、S(O)、S(O)2、NH、NR1和CH2，其中Y如上式(I)中的定義，其中R1、R2、R4和R5獨(dú)立地如上式(IV)中的定義。因此，特別優(yōu)選的化合物將具有式A或式B的結(jié)構(gòu)
其中R1為低級烷基(任選取代的)、鹵素或CF3，R2為任選取代的環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的喹啉或任選取代的異喹啉，且R3、R4和R5獨(dú)立地為氫、鹵素、任選取代的烷基、S-烷基、CF3、雜環(huán)、NR′R″、S(O)2R′、P(O)R′R″、OP(O)R′R″或C(O)R′，其中R′和R″獨(dú)立地為NH2、NH烷基、NH?；烷基?；(烷基)2、O-烷基、?；⒎蓟?、烷基、雜環(huán)，或者R′和R″形成環(huán)。R3和R4可以相同或不同，或者甚至可以通過2-4個(gè)碳原子的鏈連接在一起。同樣，R5可以與R3相同，但更優(yōu)選與R3不同。例如，R4或R5可獨(dú)立具有以下結(jié)構(gòu) 因此，式A和B化合物的鄰位取代苯基還可包括至少一個(gè)間位和對位取代基(例如，如以上R3中的定義)。
在式A或式B的特別優(yōu)選的化合物中，R2選自一取代苯基、二取代苯基、三取代苯基、一取代萘基、二取代萘基、三取代萘基、一取代喹啉、二取代喹啉、三取代喹啉、一取代異喹啉、二取代異喹啉和三取代異喹啉。最優(yōu)選所述取代芳基的取代基為任選取代的低級烷基、CF3、低級烷氧基、鹵素或NR′R″，其中R′和R″獨(dú)立地為H或低級烷基。
此外，人們還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，在所設(shè)計(jì)化合物中甲酰胺基團(tuán)-C(Y)-NR1R2可以被噁唑部分取代。所述取代的優(yōu)點(diǎn)是增加一種或多種藥代動(dòng)力學(xué)/藥物動(dòng)力學(xué)特性，至少對于與逆轉(zhuǎn)錄酶相互作用的原子/基團(tuán)來說，這被認(rèn)為能保留全部立體化學(xué)構(gòu)型。生物等排性取代方法描述于George A.Patani和Edmond J.LaVoie，BioisosterismA rationalapproach in drug design(生物等排性一種合理的藥物設(shè)計(jì)途徑)，Chem.Rev.1996，96，3147-3176，或者描述于Preben H.Olsen，The use ofbioisosteric groups in lead optimization(生物等排基團(tuán)在最優(yōu)化中的應(yīng)用)，Current Opinion in Drug Discovery & Development 2001，4，471-478，這兩篇文獻(xiàn)均通過引用結(jié)合到本文中。
各種噁唑的合成和修飾描述于Toshikazu Ibata和Yasushi Isogami，F(xiàn)ormation and reaction of oxazoles.Synthesis of N-substituted 2-(aminomethyl)oxazoles(噁唑的生成和反應(yīng)。N-取代的2-(氨基甲基)噁唑的合成)，Bull.Chem.Soc.Jpn 1989，62，618-620，或者描述于Toshikazu Ibata和Ryohei Sato，The acid catalyzed decomposition ofdiazo compounds.I.Synthesis of oxazoles in the BF3catalyzed reaction ofdiazo carbonyl compounds with nitriles(重氮化合物的酸催化分解。I.重氮羰基化合物與腈的BF3催化反應(yīng)中噁唑的合成)，Bull.Chem.Soc.Jpn 1979，52，3597-3600，這些文獻(xiàn)和本領(lǐng)域已知的其它文獻(xiàn)都可用于提供一些對制備其中甲酰胺基團(tuán)已被噁唑部分取代的所設(shè)計(jì)化合物的指導(dǎo)。
所設(shè)計(jì)化合物的合成人們將會特別認(rèn)識到，一些所設(shè)計(jì)化合物有各種市售來源，所有這些市售化合物設(shè)計(jì)都適合用于本文。然而，許多所設(shè)計(jì)化合物卻不是市售的，但可以基本上按照美國專利第5,939,462號中描述的方案來合成這些化合物中的某些化合物，所述專利文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。
然而，人們將會認(rèn)識到，也考慮過許多用于制備所設(shè)計(jì)化合物的替代合成路線，并且提供以下示例性路線用于指導(dǎo)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員。例如，在一個(gè)合成路線中，使合適取代的胺(例如伯胺或仲胺)與含有活性羰基的化合物(最好是羰基鹵)反應(yīng)，其中含有羰基的化合物還包含離去基團(tuán)(最優(yōu)選溴離子)。形成羰酰胺后，反應(yīng)產(chǎn)物與第二試劑的親核基團(tuán)(例如OH、SH或NR1R2，其中R1和R2如以上式(I)所述，獨(dú)立地為氫、烷基等)反應(yīng)，因而取代離去基團(tuán)，形成所需要的化合物，如以下流程1所示。
流程1流程1中的R1和R2可以是任何合適的取代基，通常設(shè)計(jì)合適的R1和R2獨(dú)立包括氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的芳基，所有這些基團(tuán)還可包括一個(gè)或多個(gè)雜原子。然而，通常優(yōu)選R1和R2中的一個(gè)比較小(例如氫、甲基、三氟甲基等)，且R1和R2中的另一個(gè)包含芳基。尤其優(yōu)選的芳基可以是取代的，最優(yōu)選在鄰位取代，而且還包括對位的取代基(例如用鹵素或甲基作為取代基的鄰位取代苯基)。因此，特別設(shè)計(jì)的R1將包括氫和低級烷基(所述烷基可被進(jìn)一步取代)，且R2可選自芳基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)。
同樣，設(shè)計(jì)離去基團(tuán)L1和L2的選擇在某種程度上將取決于具體選擇的胺和/或HET-XH，設(shè)計(jì)所有合適的離去基團(tuán)。然而，特別優(yōu)選L1和L2是鹵離子，最優(yōu)選溴離子?；蛘撸琇1也可以是OH或O-?；τ赗3和R4的考慮，與上式(III)中對于R3和R4所述的考慮相同。Y可以是O、S或NR，其中R如上定義。HET-XH中的X通常是雜原子或CH2，最優(yōu)選S、S(O)、S(O)2或O。HET可以是任何雜環(huán)，特別合適的雜環(huán)包括以上描述的雜環(huán)。合適的溶劑包括醚、醇和烴類(任選鹵代的)，對合適溶劑的選擇至少將部分取決于具體試劑的化學(xué)性質(zhì)。而對于以上反應(yīng)中所用的催化劑和/或堿，與Connell等(美國專利第5,939,462號)采用的試劑的考慮相同。
或者，可按照流程2總結(jié)的通用流程來合成，其中從兩種分開制備的前體制備所設(shè)計(jì)化合物?？梢园凑找韵隆皩?shí)施例”部分給出的方案的類似方案，制備包含取代雜環(huán)的第一前體。同樣，可以按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的類似方案，制備包含取代芳基的第二前體。將這樣制備的前體稠合，通常是在含有碳酸鉀的DMF中進(jìn)行。
流程2當(dāng)所述取代雜環(huán)被雜芳基或芳基取代(其中相應(yīng)的氨基硫脲不是市售的)時(shí)，以及當(dāng)所述芳基包含鄰位取代的氯苯基時(shí)，可以按照“實(shí)施例”部分給出的方案的類似方案，采用以下流程3所示的合成方法。
流程3在又一個(gè)示例性合成路線中，當(dāng)所述取代的雜環(huán)被取代芳基取代(其中相應(yīng)的氨基形式不是市售的)時(shí)，可以按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的類似方法，采用以下流程4所示的合成方法。
流程4
或者，當(dāng)所述取代雜環(huán)被取代雜環(huán)芳基取代(其中相應(yīng)的氨基不是市售的)時(shí)，可以基本上按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的方法，采用以下流程5所示的合成方法。
流程5人們也將會認(rèn)識到，連接基團(tuán)部分的甲酰胺可以從非市售的取代苯胺制備，可以基本上按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的方法，采用以下流程6所示的示例性合成方法。
流程6在制備本發(fā)明主題的化合物的其它所設(shè)計(jì)的示例性路線中，合適的用HET基團(tuán)也可以被鹵素取代。流程7中顯示了帶有所述鹵素-取代的HET部分的化合物的一個(gè)示例性合成方法，所述方法基本上按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的方法。
流程7當(dāng)所述雜環(huán)為咪唑時(shí)，可以基本上按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的方法，采用以下流程8所示的合成方法。
流程8或者，當(dāng)所述三唑被CF3取代時(shí)，可以基本上按照以下“實(shí)施例”部分給出的方案的類似方法，采用以下流程9所示的合成方法。
流程9當(dāng)需要所設(shè)計(jì)化合物包括噁唑基團(tuán)代替甲酰胺基時(shí)，可以按照流程10示意的方法進(jìn)行合成，其中在相當(dāng)于式(I)的R2基團(tuán)上可以形成所述噁唑部分，然后其中相當(dāng)于R2基團(tuán)的噁唑部分可以與所述取代的三唑雜環(huán)基共價(jià)偶聯(lián)。
流程10在另外的設(shè)計(jì)方面，尤其是當(dāng)所設(shè)計(jì)化合物包括酸性基團(tuán)或堿性基團(tuán)時(shí)，人們將會認(rèn)識到，可以形成相應(yīng)的鹽(最好是藥理學(xué)上可接受的鹽)。例如，當(dāng)所設(shè)計(jì)化合物包括堿性基團(tuán)時(shí)，可制備酸加成鹽?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)方法，在合適的溶劑中，從所述化合物和過量的酸制備堿性化合物的酸加成鹽，所述酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸。同樣，如果所設(shè)計(jì)化合物包括酸性基團(tuán)，可以制備堿加成鹽(例如通過用過量堿試劑處理酸性化合物，所述堿試劑例如含有合適陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或醇鹽。合適的陽離子包括Na+、K+、Ca2+或NH4+)。
包含所設(shè)計(jì)化合物的藥用組合物當(dāng)以藥用組合物的形式給予所設(shè)計(jì)化合物時(shí)，設(shè)計(jì)可以將合適的化合物與藥學(xué)上可接受的載體一起配制成混合物。例如，所設(shè)計(jì)化合物可以作為藥學(xué)上可接受的鹽(參見上文)口服給予，或者溶于生理鹽水(例如調(diào)節(jié)pH約為7.2-7.5)靜脈內(nèi)給予。磷酸鹽、碳酸鹽或檸檬酸鹽等常規(guī)緩沖液都可用于此目的。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以在說明書所述范圍內(nèi)修改配方，以提供各種用于具體給藥途徑的配方。具體地講，可以將所設(shè)計(jì)化合物改性，使之在水或其它溶媒中溶解性更好，所述改性例如可以通過小的修改(鹽制劑、酯化等)容易地完成，這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也全都知道，為了讓本發(fā)明化合物的藥代動(dòng)力學(xué)能在患者體內(nèi)達(dá)到最大有益效應(yīng)而修改具體化合物的給藥途徑和給藥方案。
在某些藥物劑型中，可以按照不同目的，制備所設(shè)計(jì)化合物的前體藥物形式，所述目的包括降低毒性、增加器官特異性或靶細(xì)胞特異性等。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員全都知道如何容易地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)變成前體藥物形式，以便將活性化合物給予宿主生物或患者的靶部位(參見上文)。在將本發(fā)明化合物給予宿主生物或患者的靶部位時(shí)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還將利用可以利用的前體藥物形式的有利的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以使所述化合物的預(yù)期效應(yīng)最大化。
另外，所設(shè)計(jì)化合物可以單用或與其它藥物聯(lián)用以治療HIV，特別設(shè)計(jì)的額外化合物包括核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如拉米夫定、齊多夫定、司他夫定、阿巴卡韋、替諾福韋或去羥肌苷)、非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如奈韋拉平、地拉韋啶、依法韋侖)、蛋白酶抑制劑(例如沙奎那韋、茚地那韋、奈非那韋)、融合抑制劑(例如Enfuvirtide)、CCR5拮抗劑、免疫治療劑(例如利巴韋林、IL-2)、主動(dòng)、被動(dòng)和/或治療性疫苗。本發(fā)明的聯(lián)合療法包括給予至少一種本發(fā)明化合物或其功能性衍生物以及至少一種其它藥用活性成分。所述活性成分和藥用活性劑可以分別給予或一起給予，當(dāng)分別給予時(shí)，可以同時(shí)給予或依次分別給予。可以選擇活性成分和藥用活性劑的用量和相應(yīng)給藥時(shí)間，以達(dá)到所需的聯(lián)合療效。
因此，本發(fā)明人設(shè)計(jì)藥用組合物可包含結(jié)構(gòu)HET-L-C(Y)NR1R2的化合物，其中HET最好包含一個(gè)取代的雜環(huán)，L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合，Y為O、S或NR3，R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和低級烷基，R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)，其中所述化合物當(dāng)給予患者時(shí)以在患者細(xì)胞內(nèi)有效抑制逆轉(zhuǎn)錄酶和/或HIV復(fù)制的濃度存在。
對于藥用組合物中所設(shè)計(jì)化合物的合適濃度，人們應(yīng)該知道，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易調(diào)節(jié)所述化合物的用量，以便能夠抑制逆轉(zhuǎn)錄酶和/或HIV復(fù)制。例如，可以采用如下所述的血培養(yǎng)和基于螢光素酶的測定系統(tǒng)，體外監(jiān)測細(xì)胞(通常是感染了HIV病毒的T細(xì)胞)中對HIV復(fù)制的抑制?；蛘撸梢圆捎肦T-PCR，體內(nèi)監(jiān)測對逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制，以測定血液或淋巴結(jié)(含有HIV感染細(xì)胞)中病毒DNA的拷貝數(shù)和/或病毒RNA的拷貝數(shù)。然而，通常設(shè)計(jì)合適的濃度將達(dá)到1nM(在某些情況下甚至在0.01nM和1nM之間)和100μM之間的血清濃度。
在特別優(yōu)選的化合物中，HET為取代三唑或取代咪唑，甚至更優(yōu)選所述取代三唑或取代咪唑被第一取代基(例如甲基、CF3或鹵素)和第二取代基(例如甲苯甲?；?、萘基或喹啉)取代，其中第一和第二取代基中的至少一個(gè)包括取代苯基。此外，通常優(yōu)選連接基團(tuán)L具有-X1-CR3R4-的結(jié)構(gòu)，其中X1選自CH2、S、O、S(O)、S(O)2、NH、NR3和CR3R4，并且其中R3和R4獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和SH。因此，特別優(yōu)選的連接基團(tuán)包括以下連接基團(tuán)其中L為-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-、-NHCH2、-N(Me)CH2或-CH2-CH2-。此外，所述氮原子特別合適的取代基R1和R2分別包括氫和取代的芳基，特別優(yōu)選R2為鄰位取代苯基(其中鄰位取代基為鹵素、CF3或甲基)。
因此，特別優(yōu)選的藥用組合物將包括以下結(jié)構(gòu)A或B的所設(shè)計(jì)化合物其中R1為任選取代的低級烷基、CF3、鹵素或氫，其中R2為環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)，且R3為低級烷基或鹵素。
在本發(fā)明主題的又一方面，人們將會認(rèn)識到，可以將所設(shè)計(jì)化合物用作治療哺乳動(dòng)物(通常是人類)的病毒性感染(尤其是逆轉(zhuǎn)錄病毒感染)的藥品。因此，設(shè)計(jì)合適的藥品將包括所設(shè)計(jì)化合物，以及根據(jù)降低逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒繁殖的方案將所述化合物給予逆轉(zhuǎn)錄病毒感染者的說明書。例如，可以按口服或胃腸外給藥的方式提供所述化合物(參見下文)，而給予所述化合物的合適說明書通常將包括包裝說明書或處方信息?；蛘撸O(shè)計(jì)的說明書也可包括適于特定治療方案的具體治療時(shí)間表(例如當(dāng)在聯(lián)合療法中所設(shè)計(jì)化合物是聯(lián)合給予時(shí))或者是銷售小冊子或其它廣告類刊物。本文設(shè)計(jì)的方案包括所有已知給藥形式，以降低患者體內(nèi)病毒滴度，或者甚至完全消除患者體內(nèi)的病毒。
所設(shè)計(jì)的使用方法本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)(其實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)參見以下“實(shí)施例”部分)，所設(shè)計(jì)化合物表現(xiàn)出對逆轉(zhuǎn)錄酶、尤其是HIV病毒逆轉(zhuǎn)錄酶的顯著的體外和/或體內(nèi)抑制效應(yīng)。
因此，本發(fā)明人設(shè)計(jì)用于抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的方法，其中使逆轉(zhuǎn)錄酶與下式(I)化合物接觸HET-L-C(Y)NR1R2(I)其中HET最好包含取代的雜環(huán)；L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基碳原子共價(jià)結(jié)合；Y為O、S或NR3；R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級烷基；且R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。
在設(shè)計(jì)方法的特別優(yōu)選的方面，所述雜環(huán)包含含氮雜環(huán)，最優(yōu)選取代三唑或取代咪唑。盡管設(shè)計(jì)的雜環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)取代基可以有相當(dāng)大的不同，但是通常優(yōu)選取代三唑或取代咪唑?qū)ǖ谝缓偷诙〈?，其中第一取代基比較小(例如甲基、三氟甲基、硝基、氨基、鹵素、羥基或硫代)，并且其中第二取代基包括芳環(huán)系(最優(yōu)選取代萘基、取代苯基或取代喹啉)。對于芳環(huán)系，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)芳環(huán)系包含苯基時(shí)，如果所述苯基具有鄰位取代基則可達(dá)到特別強(qiáng)烈的抑制。在具有萘基或喹啉基的化合物中也觀察到同樣現(xiàn)象。
此外，雖然設(shè)計(jì)將所述雜環(huán)與羰基碳相連的連接基團(tuán)的性質(zhì)、特別是結(jié)構(gòu)可以有相當(dāng)大的不同，但是通常設(shè)計(jì)所述連接基團(tuán)可讓其具有立體撓性，或者可以以相對于羰基的相對固定位置將所述雜環(huán)定向。例如，當(dāng)連接基團(tuán)具有相對的撓性時(shí)，設(shè)計(jì)形成將雜環(huán)與羰基碳連接的連接鏈的原子之間所有共價(jià)鍵都是單鍵。當(dāng)然，人們應(yīng)知道，所述原子的鍵角將至少在某種程度上取決于所述原子的化學(xué)性質(zhì)。因此，設(shè)計(jì)為相對直角(例如當(dāng)原子為O或S時(shí))以及非直角(例如當(dāng)原子為C或P時(shí))。
在另一方面，當(dāng)連接基團(tuán)相對剛性時(shí)，合適的連接基團(tuán)可以包括通過雙鍵或三鍵彼此共價(jià)偶聯(lián)的兩個(gè)或多個(gè)原子(在將雜環(huán)與羰基碳相連的原子連接鏈之內(nèi))。因此，所述連接基團(tuán)可包括不飽和直鏈或支鏈烴鏈，或芳環(huán)?；蛘?，設(shè)計(jì)的連接基團(tuán)還可包括環(huán)烷基。此外，合適的連接基團(tuán)還可包括各種官能團(tuán)，以提供特定理化特性，所述官能團(tuán)包括氫鍵供體或受體基團(tuán)、極性或非極性基團(tuán)、離子基團(tuán)或親脂基團(tuán)。因此，合適的連接基團(tuán)可包括2-20(甚至更多)個(gè)原子，所述連接基團(tuán)可包括或不包括雜原子。
因此，特別優(yōu)選的連接基團(tuán)可具有-X1-CR3R4-的結(jié)構(gòu)，其中X1選自S、O、S(O)、S(O)2、NH、NR3和CR3R4，其中R3和R4獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和SH。甚至更優(yōu)選的連接基團(tuán)將包括選自以下基團(tuán)的連接基團(tuán)-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-、-NH-CH2-、-N(Me)CH2-和-CH2-CH2-。
在優(yōu)選方法的又一些方面，所述羰基碳可以共價(jià)結(jié)合氧、硫或NH或NR基團(tuán)，其中R可選自氫、鹵素和低級烷基。因此，所設(shè)計(jì)化合物可包括甲酰胺基、(取代的)甲脒基或硫代甲酰胺基。
在優(yōu)選方法的再一些方面，R1和R2可以有相當(dāng)大的不同，而且認(rèn)為在以上“所設(shè)計(jì)化合物”部分設(shè)計(jì)的所有R1和R2基團(tuán)都適用于本文。然而，通常優(yōu)選R1為氫，且R2為取代芳基(最優(yōu)選R2包含鄰位取代苯基，其中所述鄰位取代基為鹵素、SCH3、CF3或甲基)。
人們還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的設(shè)計(jì)方法不需要限制在具體的逆轉(zhuǎn)錄酶上，人們將會認(rèn)識到，所有已知的逆轉(zhuǎn)錄酶都被認(rèn)為適用于本文。然而，特別優(yōu)選的逆轉(zhuǎn)錄酶是病毒逆轉(zhuǎn)錄酶，在尤其優(yōu)選的方面，所述病毒逆轉(zhuǎn)錄酶來自HIV。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，所述逆轉(zhuǎn)錄酶可被抑制，甚至當(dāng)所述逆轉(zhuǎn)錄酶至少部分對非核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑有抗性時(shí)。本文使用的術(shù)語“至少部分對非核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑有抗性”是指‘至少部分抗性’逆轉(zhuǎn)錄酶被先前已知的非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑抑制，其抑制程度小于無抗性逆轉(zhuǎn)錄酶(參見“實(shí)施例”部分)。
對于逆轉(zhuǎn)錄酶的接觸步驟，設(shè)計(jì)所有接觸方式都是合適的并且包括各種體外接觸和體內(nèi)接觸。例如，當(dāng)使逆轉(zhuǎn)錄酶與所設(shè)計(jì)化合物接觸是在體外時(shí)，人們應(yīng)該知道，逆轉(zhuǎn)錄酶可以溶于溶劑中或在固相上支持(并且任選在RNA或DNA模板、輔因子和核苷酸等的存在下)。設(shè)計(jì)的溶劑包括預(yù)先確定的溶劑(例如逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液)以及其中精確的化學(xué)組成極其復(fù)雜的溶劑(例如細(xì)胞溶解物)。合適的固相包括凝膠、聚合物珠、微量板的板壁等。此外，特別設(shè)計(jì)的體外接觸也包括其中逆轉(zhuǎn)錄酶包含在細(xì)胞(被HIV病毒感染、或者被轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生重組逆轉(zhuǎn)錄酶的細(xì)胞)中的接觸，并且其中所述細(xì)胞處于包含所設(shè)計(jì)化合物的環(huán)境中。
因此，體外接觸包括其中逆轉(zhuǎn)錄酶與所設(shè)計(jì)化合物處于同一環(huán)境中的所有接觸方式。因此，可以將所設(shè)計(jì)化合物加入到緩沖液、培養(yǎng)基或其它溶劑中，在所述緩沖液、培養(yǎng)基或其它溶劑中所設(shè)計(jì)化合物接觸所述逆轉(zhuǎn)錄酶，所設(shè)計(jì)化合物的加入包括以溶解態(tài)或固態(tài)形式的加入。對于其中將所設(shè)計(jì)化合物加入到環(huán)境中的特定形式(例如溶于特定溶劑的溶液)來說，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易確定合適形式。同樣，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地確定合適的濃度，而無需進(jìn)行過度實(shí)驗(yàn)(例如應(yīng)用IC50數(shù)據(jù)作為指導(dǎo))。
同樣，設(shè)計(jì)的體內(nèi)接觸包括將所設(shè)計(jì)化合物以合適制劑形式加入到含有逆轉(zhuǎn)錄酶的環(huán)境中的所有方式，尤其設(shè)計(jì)的環(huán)境包括感染逆轉(zhuǎn)錄病毒、最優(yōu)選HIV病毒的哺乳動(dòng)物。因此，特別優(yōu)選的體內(nèi)接觸包括將包含所設(shè)計(jì)化合物的藥用組合物給予感染HIV病毒的患者。因此，合適的給藥可以通過口服和/或胃腸外(系統(tǒng)性)給藥，以及離體給予全血或其組分，再回輸至少部分所述全血或其組分。在以上“包含所設(shè)計(jì)化合物的藥用組合物”部分描述了示例性的藥用組合物。
因此，本發(fā)明人設(shè)計(jì)用于治療HIV感染者的方法，其中以降低病毒繁殖的有效劑量將包含式(I)化合物的藥用組合物給予所述患者，其中式(I)為HET-L-C(Y)NR1R2，其中HET最好包含取代的雜環(huán)，L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合，Y為氧、硫、NH或NR(R如上所述)，R1選自氫、鹵素和甲基，且R2選自取代或未取代的芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基以及取代或未取代的雜環(huán)。對于特別優(yōu)選的結(jié)構(gòu)，與上述“所設(shè)計(jì)化合物”中所采用的考慮相同。
因此，用于治療HIV感染者的特別優(yōu)選的化合物包括以下化合物其中HET為取代三唑或取代咪唑，和/或L選自-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-、-NH-CH2-、-N(Me)CH2-和-CH2-CH2-，并且其中Y為氧。在用于治療方法的其它優(yōu)選化合物中，R1為氫，且R2為取代芳基。因此，用于治療HIV感染的特別優(yōu)選的化合物包括結(jié)構(gòu)A或結(jié)構(gòu)B的化合物其中R1為低級烷基、鹵素或CF3，R2為環(huán)烷基、取代芳基或未取代芳基、取代喹啉或未取代喹啉，且R3為低級烷基、S-烷基、CF3或鹵素。對于劑量來說，設(shè)計(jì)劑量將主要取決于所用的具體化合物(例如具體溶解度、功效、生物利用度和/或代謝特性)，人們將會認(rèn)識到，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易地確定合適的劑量或劑量范圍。同樣，可以用本領(lǐng)域熟知的各種方法監(jiān)測病毒繁殖的降低。例如，可采用定量PT-PCR測定病毒繁殖，以確定特定生物樣品(例如全血)中的病毒拷貝數(shù)。
當(dāng)然，人們將會認(rèn)識到，如有必要，可將所設(shè)計(jì)化合物轉(zhuǎn)變成前體藥物形式，以增加對感染細(xì)胞的特異性、降低對非感染細(xì)胞的副作用、提高生物利用度等；合適的給藥制劑、途徑和方案都是本領(lǐng)域眾所周知的(也參見上文)。在下文可找到將所設(shè)計(jì)化合物轉(zhuǎn)變成相應(yīng)前體藥物形式的示例性合適方案Francisca Lopez，Rui Moreira和Jim Iley，Acyloxymethyl as a drug protecting group.Part 6N-acyloxymethyl-and N-[(aminocarbonyloxy)methyl]sulfonamides asprodrugs of agents containing a secondary sulfonamide group(酰氧甲基作為藥物保護(hù)基。第6部分N-酰氧甲基-和N-[(氨基羰氧基)甲基]磺酰胺作為含仲氨磺?；幬锏那绑w藥物)，Bioorg.Med.Chem.2000，8，707-716，或者Jorn Drustrup Larsen和Hans Bundgaard，Prodrug formsfor the sulfonamide group.I.Evaluation of N-acyl derivatives，N-sulfonylamidines，N-sulfonylfilimines and sulfonylureas as possibleProdrug derivatives(磺酰胺基團(tuán)的前體藥物形式。I.評價(jià)N-?；苌铩-磺酰脒、N-sulfonylfilimines和磺酰脲作為可能的前體藥物衍生物，International Journal of Pharmaceutics，1987，37，87-95，或者Joseph H.Chan，Benzophenones as inhibitors of reverse transcriptase(二苯甲酮作為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑)，WO 02/070470，所有所述全都文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。
實(shí)施例以下實(shí)驗(yàn)僅供說明本發(fā)明主題的示例性方面用，不應(yīng)該理解為對本發(fā)明主題的限制。
N-(2-溴-4-甲基苯基)-2-(5-甲基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基)-乙酰胺 5-甲基-4-苯基-4H-1，2，4-三唑-3-硫醇在敞口燒瓶中，將4-苯基-3-氨基硫脲(10g，59.8mmol)的二甲基乙酰胺縮二甲醇(30ml，205mmol)懸浮液在蒸汽浴上加熱1.5小時(shí)。除去溶劑，殘余物用快速色譜法進(jìn)行純化(2％甲醇/二氯甲烷)，得到5-甲基-4-苯基-4H-1，2，4-三唑-3-硫醇和3-甲基-5-甲硫基-4-苯基-4H-1，2，4-三唑的混合物。
N-(2-溴-4-甲基苯基)-2-氯乙酰胺將2-溴-4-甲基苯基(500mg，2.69mmol)加入到氯乙酰氯(0.14ml，2.69mmol)和二異丙基甲胺(0.47ml，2.69mmol)的二氯甲烷(16ml)混合物中。攪拌4小時(shí)后，所得混合物用乙酸乙酯稀釋，用1N鹽酸、水、飽和氯化鈉水溶液洗滌，并經(jīng)MgSO4干燥。真空除去溶劑，得到所需要的化合物。
N-(2-溴-4-甲基苯基)-2-(5-甲基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基)乙酰胺將5-甲基-4-苯基-4H-1，2，4-三唑-3-硫醇(200mg，1.05mmol)、碳酸鉀(153.6mg，1.1mmol)和N-(2-溴-4-甲基苯基)-2-氯乙酰胺(273.5mg，1.05mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)的混合物攪拌過夜。所得混合物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水、飽和氯化鈉水溶液洗滌，并經(jīng)MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘余物用快速色譜進(jìn)行純化，得到所需要的化合物。
N-(2-溴-苯基)-2-[5-甲基-4-(4-甲基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 4-甲基-硝基萘在0℃，將硝酸(9.6ml)慢慢加入到純的1-甲基-萘(3g，21mmol)中。然后加入水(20ml)，水層用苯(40ml)萃取。有機(jī)層用氫氧化鈉洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到2.82g產(chǎn)物(收率72％，黃色固體)。
4-甲基-氨基萘向4-甲基-硝基萘(1g，5.3mmol)的乙醇(80ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(0.9g)并在氫氣(5psi)下將混合物攪拌4小時(shí)。然后濾出催化劑，真空除去溶劑，得到粗制的標(biāo)題化合物(772mg，92％，黃色油狀物)，無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲向乙亞氨基乙酯鹽酸鹽(1g，8.1mmol)的二甲基甲酰胺(16ml)溶液中加入氨基硫脲(738mg，8.1mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將水加入到反應(yīng)物中直到形成沉淀(產(chǎn)物)為止(1.16g，89％)。
5-甲基-4-(4-甲基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(488mg，3.02mmol)、二甲基甲酰胺(4ml)和4-甲基-氨基萘(475mg，3.02mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)物沉淀為止(435mg，56％)。
N-(2-溴-苯基)-2-[5-甲基-4-(4-甲基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向5-甲基-4-(4-甲基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-溴-苯基)-2-氯-乙酰胺(從2-溴苯胺制備而來)(49mg，0.19mmol)和碳酸鉀(30mg，0.22mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到65mg標(biāo)題化合物(收率87％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(4-乙基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 4-乙基-硝基萘在0℃，將硝酸(9.6ml)慢慢加入到純的1-乙基-萘(3g，19.2mmol)中。然后加入水(20ml)，水層用苯(40ml)萃取。有機(jī)層用氫氧化鈉洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到3.2標(biāo)題化合物(收率84％，黃色固體)。
4-乙基-氨基萘向4-乙基-硝基萘(1g，4.9mmol)的乙醇(80ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(0.9g)，在氫氣(5psi)下，將混合物攪拌4小時(shí)。然后濾出催化劑，真空除去溶劑，得到黃色油狀物，用柱色譜法進(jìn)行純化(95％己烷/5％乙酸乙酯)，得到標(biāo)題化合物(800mg，收率94％，黃色固體)。
5-甲基-4-(4-乙基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將3(1.94g，12.0mmol)、二甲基甲酰胺(10ml)和7(1.35g，12.0mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(25ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到所需產(chǎn)物沉淀為止(1.48g，46％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(4-乙基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向5-甲基-4-(4-乙基-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-氯-乙酰胺(從2-氯-吡啶-3-基胺制備而來)(39mg，0.19mmol)和碳酸鉀(28mg，0.22mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的化合物(86mg，收率93％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[5-甲基-4-(4-甲基-5，6，7，8-四氧-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 4-甲基-5，6，7，8-四氫-萘-1-基胺向4-甲基-硝基萘(1.1g，5.9mmol)的乙醇(80ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(0.9g)，并在氫氣(5psi)下將混合物攪拌3天。然后濾出催化劑，真空除去溶劑，得到粗制的所需化合物(750mg，收率79％，黃色油狀物)，無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
5-甲基-4-(4-甲基-5，6，7，8-四氫-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(500mg，3.1mmol)、二甲基甲酰胺(4ml)和4-甲基-氨基萘(500mg，3.1mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)物沉淀為止(349.4mg，43.5％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[5-甲基-4-(4-甲基-5，6，7，8-四氫-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向5-甲基-4-(4-甲基-5，6，7，8-四氫-萘-1-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-氯-乙酰胺(從2-氯-吡啶-3-基胺制備而來)(39mg，0.19mmol)和碳酸鉀(28mg，0.22mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的化合物(35mg，收率40％)。
N-(2-溴-苯基)-2-[4-(2，4-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 2，4-二甲基-1-硝基-萘在0℃，將硝酸(9.6ml)慢慢加入到純的2，4-二甲基-萘(3g，19.2mmol)中。然后加入水(20ml)，水層用苯(40ml)萃取。有機(jī)層用氫氧化鈉洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到3.459g產(chǎn)物13(收率89％，黃色固體)。
2，4-二甲基-萘-1-基胺向2，4-二甲基-1-硝基-萘(1g，4.9mmol)的乙醇(80ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(0.9g)，在氫氣(大氣壓)下，將混合物攪拌18小時(shí)。然后濾出催化劑，真空除去溶劑，得到粗制的所需化合物，用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到純的所需胺(822mg，收率97％)。
4-(2，4-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(500mg，3.1mmol)、二甲基甲酰胺(4ml)和2，4-二甲基-萘-1-基胺(534mg，3.1mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)物沉淀為止(284mg，34％)。
N-(2-溴-苯基)-2-[4-(2，4-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向4-(2，4-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-溴-苯基)-2-氯-乙酰胺(從2-溴苯胺制備而來)(47mg，0.19mmol)和碳酸鉀(28mg，0.21mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的化合物(49mg，收率58％)。
N-(2-氯-4-氨磺?；?苯基)-2-[4-(4，7-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 4，7-二甲基-1-硝基-萘在0℃，將硝酸(5ml)慢慢加入到純的1，6-二甲基-萘(1g，6.4mmol)中。然后加入水(20ml)，水層用苯(40ml)萃取。有機(jī)層用氫氧化鈉洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到1.0g所需要的產(chǎn)物(收率78％，黃色固體)。
4，7-二甲基-萘-1-基胺向4，7-二甲基-1-硝基-萘(1g，4.9mmol)的乙醇(80ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(0.9g)，在氫氣(大氣壓)下，將混合物攪拌18小時(shí)。然后濾出催化劑，真空除去溶劑。粗制混合物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到純的所需胺(434mg收率52％)。
4-(4，7-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(400mg，2.48mmol)、二甲基甲酰胺(6ml)和4，7-二甲基-萘-1-基胺(425mg，2.48mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到所需產(chǎn)物沉淀為止(370mg，收率55％)。
N-(2-氯-4-氨磺?；?苯基)-2-[4-(4，7-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向4-(4，7-二甲基-萘-1-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-氯-4-氨磺?；?苯基)-2-氯-乙酰胺(44mg，0.19mmol)和碳酸鉀(28mg，0.20mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的產(chǎn)物(34.3mg，收率39％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(2，5-二甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 2，5-二甲基-8-硝基-喹啉在室溫下，向2-硝基-5-甲基苯胺(3g，19.8mmol)的鹽酸(12ml)懸浮液中滴加乙醛，將混合物在該溫度下攪拌15分鐘，然后在68℃再攪拌1小時(shí)。讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫，傾入冰水中，用氫氧化銨中和，形成黃色沉淀(3.64g，收率89％)。
2，5-二甲基-喹啉-8-基胺向2，5-二甲基-8-硝基-喹啉(2g，9.9mmol)的乙醇(160ml)溶液中加入阮內(nèi)鎳(1.8g)，在氫氣(大氣壓)下，將混合物攪拌18小時(shí)。然后濾出催化劑，真空除去溶劑。粗制混合物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％己烷/10％乙酸乙酯)，得到純的所需胺(1.5g，收率88％)。
4-(2，5-二甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(1.7g，10.7mmol)、二甲基甲酰胺(12ml)和2，5-二甲基-喹啉-8-基胺(1.8g，10.7mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)物沉淀為止(465mg，收率17％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(2，5-二甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向4-(2，5-二甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.18mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-氯-乙酰胺(從2-氯-吡啶-3-基胺制備而來)(37mg，0.18mmol)和碳酸鉀(28mg，0.22mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的產(chǎn)物(40.1mg，收率52％)。
N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-2-[5-甲基-4-(2，5，7-三甲基-喹啉-8-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 2，5，7-三甲基-喹啉在0℃，向3，5-二甲基苯胺(5g，41.2mmol)的鹽酸(20ml)懸浮液中滴加乙醛，將混合物在該溫度下攪拌15分鐘，然后在70℃再攪拌18小時(shí)。然后讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫，傾入冰水中，用氫氧化銨中和并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥并真空濃縮。殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(己烷/乙酸乙酯)(6∶1)，得到所需要的喹啉(3.95g，收率56％)。
2，5，7-三甲基-8-硝基-喹啉在0℃，將硫酸(21.8ml)加入到純的2，5，7-三甲基-喹啉(4g，23.4mmol)中。然后分批加入硝酸鉀(2.6g，25.7mmol)并將反應(yīng)物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入冰上，用氫氧化銨中和并用二氯甲烷萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(己烷/乙酸乙酯)(3∶1)，得到所需要的喹啉(3.63g，收率72％)。
2，5，7-三甲基-喹啉-8-基胺將2，5，7-三甲基-8-硝基-喹啉(3.63g，16.8mmol)和連二亞硫酸鈉(14g，80.6mmol)在50％含水乙醇(400ml)中回流4小時(shí)。混合物用1M NaOH堿化，然后用乙醚萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮，得到所需要的化合物(1.65g，收率54％)。
5-甲基-4-(2，5，7-三甲基-喹啉-8-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(1.4g，8.8mmol)、二甲基甲酰胺(10ml)和2，5，7-三甲基-喹啉-8-基胺(1.64g，8.8mmol)溶液在回流下加熱3小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)，將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)物沉淀為止(879mg，收率35％)。
N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-2-[5-甲基-4-(2，5，7-三甲基-喹啉-8-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向5-甲基-4-(2，5，7-三甲基-喹啉-8-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-2-氯-乙酰胺(47mg，0.19mmol)和碳酸鉀(28mg，0.21mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的化合物(65mg，收率73％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(5-二甲最基-2-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺 5-氯-2-甲基-8-硝基-喹啉在0℃，將鹽酸(12ml)加入到裝有2-硝基-5-氯苯胺(3g，17.4mmol)的燒瓶中，然后在0℃滴加乙醛(3ml，52.2mmol)并在此溫度下將所得混合物攪拌15分鐘，然后在75℃攪拌3小時(shí)。然后讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫，傾入冰水中，用氫氧化銨中和，然后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥并真空濃縮，得到1.69 g硝基喹啉(收率44％)，無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
二甲基-(2-甲基-8-硝基-喹啉-5-基)-胺在室溫下，向5-氯-2-甲基-8-硝基-喹啉(680mg，3.1mmol)的二甲基甲酰胺(3ml)溶液中，加入二甲胺(2M，MeOH(16ml，31mmol)并在40℃將反應(yīng)物攪拌4天。然后將所得反應(yīng)混合物濃縮并用柱色譜法進(jìn)行純化(己烷/乙酸乙酯)(3∶1)，得到557mg所需胺(收率78％)。
2-甲基-5-二甲氨基-8-氨基喹啉將二甲基-(2-甲基-8-硝基-喹啉-5-基)-胺(556mg，2.4mmol)和連二亞硫酸鈉(2.09g，12mmol)在50％含水乙醇(60ml)中回流加熱1小時(shí)。所得混合物用1M NaOH堿化，然后再用乙醚萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮，得到所需要的化合物(450mg，收率94％)。
4-(5-二甲氨基-2-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(361mg，2.2mmol)、二甲基甲酰胺(4ml)和2-甲基-5-二甲氨基-8-氨基喹啉(449mg，2.2mmol)溶液回流加熱3小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)并將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到產(chǎn)生沉淀為止(170mg，收率25％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[4-(5-二甲氨基-2-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-乙酰胺向4-(5-二甲氨基-2-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.17mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-氯-乙酰胺(從2-氯-吡啶-3-基胺制備而來)(35mg，0.17mmol)和碳酸鉀(25mg，0.18mmol)并將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的產(chǎn)物(63mg，收率79％)。
2-[4-(4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-乙酰胺 4-氯-2-甲氧基-5-甲基-8-硝基-喹啉將2，4-二氯-5-甲基喹啉(1g，3.9mmol)在甲醇鈉(0.5M，MeOH)(8ml，3.9mmol)中回流加熱1小時(shí)。然后將所得反應(yīng)物冷卻，傾入冷水中并過濾，得到875mg所需喹啉(收率89％)。
4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基胺將4-氯-2-甲氧基-5-甲基-8-硝基-喹啉(875mg，3.5mmol)和連二亞硫酸鈉(3g，17.3mmol)在50％含水乙醇(120ml)中回流加熱1小時(shí)。所得混合物用1M NaOH堿化，然后用乙醚萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮，得到所需要的化合物(410mg，收率53％)。
4-(4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇將乙亞氨基乙酯縮氨基硫脲(283mg，1.75mmol)、二甲基甲酰胺(4ml)和4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基胺(2.83mg，1.75mmol)溶液回流加熱3小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)后，加入1N氫氧化鈉溶液(10ml)并將混合物在40℃攪拌20分鐘。然后反應(yīng)混合物用乙醚萃取以除去副產(chǎn)物。所得水層用10％鹽酸溶液處理直到所需產(chǎn)物沉淀為止(170mg，收率25％)。
2-[4-(4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基]-N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-乙酰胺向4-(4-氯-2-甲氧基-5-甲基-喹啉-8-基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(50mg，0.16mmol)的二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，加入N-(2-甲基-4-氨磺?；?苯基)-2-氯-乙酰胺(33mg，0.16mmol)和碳酸鉀(25mg，0.18mmol)并將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。加入水，水層用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。所得殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化(90％二氯甲烷/10％甲醇)，得到所需要的產(chǎn)物(42mg，收率49％)。
三唑衍生物5-甲氧基甲基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇 100ml圓底燒瓶中裝有4-苯基氨基硫脲(500mg，2.99mmol)的20ml無水乙醇。向所得非均一反應(yīng)混合物中加入甲氧基乙酸乙酯(214μl，2.99mmol)，接著加入0.5M甲醇鈉的甲醇(11.96ml，5.98mmol)溶液。反應(yīng)物在氬氣氛下回流36小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，然后加入1ml乙酸。所得固體用快速柱色譜法進(jìn)行純化(5％甲醇/二氯甲烷混合物)。得到灰色固體(64％，361mg)。
N-(2-氯-苯基)-2-(5-甲氧基甲基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基硫基)-乙酰胺 10ml圓底燒瓶中裝有5-甲氧基甲基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇(44.1mg，0.2mmol)、2-氯-N-(2-氯-苯基)-乙酰胺(49.4mg，0.2mmol)和碳酸鉀(30.4mg，0.22mmol)的2ml無水DMF。所得非均一溶液在室溫下攪拌16小時(shí)。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到油狀殘余物。該殘余物用制備型TLC純化(使用5％MeOH/二氯甲烷)，得到白色固體(62mg，79％)。
(1-甲硫基-2-硝基-乙烯基)-對甲苯基-胺 50ml圓底燒瓶中裝有對甲苯胺(1.65g，10mmol)和1，1-雙(甲硫基)-2-硝基乙烯(1.07g，10mmol)的25m1無水EtOH。將反應(yīng)物回流5小時(shí)。然后冷卻至室溫，得到固體。該固體用20ml EtOH(1.64g，73％)洗滌。該固體無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
(1-肼基-2-硝基-乙烯基)-對甲苯基-胺 100ml圓底燒瓶中裝有(1-甲硫基-2-硝基-乙烯基)-對甲苯基-胺(5.62g，25.08mmol)的60ml EtOH。在室溫下，用注射器向所得反應(yīng)混合物中加入無水肼(1.88ml，60.2mmol)。將反應(yīng)物回流5小時(shí)。然后冷卻至室溫，固體從溶液中沉淀。該固體用濾紙過濾，然后用30mlEtOH洗滌，得到黃色固體(4.30g，74％)。
3-甲基-5-硝基甲基-4-對甲苯基-4H-[1，2，4]三唑 100ml圓底燒瓶中裝有(1-肼基-2-硝基-乙烯基)-對甲苯基-胺(4.3g，18.5mmol)的60ml EtOH。向所得反應(yīng)混合物中加入原乙酸三乙酯(6.76ml，37.0mmol)。將反應(yīng)混合物回流4小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑后，所得殘余物用快速柱色譜法進(jìn)行純化(用正己烷和乙酸乙酯(1∶1)的混合物)。得到極稠的純凈油狀化合物(3.7g，86％)。
C-(5-甲基-4-對甲苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-甲胺 100ml Parr反應(yīng)器中裝有3-甲基-5-硝基-4-對甲苯基-4H-[1，2，4]三唑(350mg，1.43mmol)、10％Pd-C(200 mg)的40ml MeOH。反應(yīng)物在30psi壓加下振蕩20小時(shí)。反應(yīng)物經(jīng)硅藻土過濾，然后減壓濃縮濾液，得到淺黃色油狀物(280mg，97％)。殘余物無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
1-(3-溴-苯基)-3-(5-甲基-4-對甲苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基甲基)-脲 25ml圓底燒瓶中裝有C-(5-甲基-4-對甲苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-甲胺(56mg，0.28mmol)的無水二氯甲烷(5ml)溶液。向所得溶液中加入異氰酸3-溴苯酯(52μl，0.42mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌15小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到褐色殘余物。該殘余物用制備型TLC純化(用5％MeOH/二氯甲烷)，得到30mg白色固體(27％)。
咪唑衍生物1-(4-二甲氨基-萘-1-基)-3-丙-2-炔基-硫脲 100ml圓底燒瓶中裝有異硫氰酸對甲苯酯(1.00g，6.70mmol)的20ml苯溶液。用注射器向所得溶液中加入炔丙胺(0.51ml，7.37mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到淺褐色固體。該固體(1.29g，95％)用100ml正己烷洗滌，然后該固體無需純化就可用于下一步驟。
1-(4-二甲氨基-萘-1-基)-5-甲基-1H-咪唑-2-硫醇 50ml圓底燒瓶中裝有1-(4-二甲氨基-萘-1-基)-3-丙-2-炔基-硫脲(160mg，0.56mmol)的10ml MeOH溶液。在氬氣氛下，用注射器向所得混合物中加入25％MeOH/MeONa(1ml)。反應(yīng)物在室溫下攪拌5小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入乙酸(1ml)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到白色固體。該固體用快速柱色譜法進(jìn)行純化(用己烷和乙酸乙酯(1∶2)的混合物)，得到50mg純的白色固體(31％)。
N-(2-氯-吡啶-3-基)-2-[1-(4-二甲氨基-萘-1-基)-5-甲基-1H-咪唑-2-基硫基]-乙酰胺 10ml圓底燒瓶中裝有1-(4-二甲氨基-萘-1-基)-5-甲基-1H-咪唑-2-硫醇(100mg，0.35mmol)、碳酸鉀(53.21mg，0.39mmol)的3ml DMF。向所得混合物中加入2-氯-N-(2-氯-吡啶-3基)-乙酰胺(72.05mg，0.35mmol)，然后將反應(yīng)物攪拌16小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到油狀殘余物。該殘余物用快速柱色譜法進(jìn)行純化(用正己烷和乙酸乙酯(1∶1)的混合物)，得到136mg純產(chǎn)物(86％)。-氨基甲酸叔丁酯 250ml圓底燒瓶中裝有Boc-Ala-OH(1.89g，10mmol)的50ml二氯甲烷溶液。向所得混合物中一次性加入EDC(2.1g，11mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌10分鐘。向所得混合物中加入DIPEA(3.83ml，22mmol)和N，O-二甲基-羥胺鹽酸鹽(1.07g，11mol)的20ml二氯甲烷的混合物。所得反應(yīng)物攪拌14小時(shí)。有機(jī)層用50ml HCl水溶液洗滌，然后用50ml飽和NaHCO3水溶液洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到黃紅色油狀物(5.3g，53％)，無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
(1-甲基-2-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯 100ml圓底燒瓶中裝有(1-甲基-2-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.23g，5.29mmol)的30ml二氯甲烷溶液。用注射器向反應(yīng)混合物中加入3.0M溴化甲基鎂(5.30ml，15.9mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌30分鐘。用100ml 25％氯化銨水溶液猝滅反應(yīng)物，用100ml乙酸乙酯稀釋有機(jī)層。合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到黃褐色油狀物(561mg，57％)。該粗制產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化就可用于下一步驟。
4，5-二甲基-1-對甲苯基-1H-咪唑-2-硫醇 50ml圓底燒瓶中裝有(1-甲基-2-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(370mg，2.0mmol)的10ml 25％三氯乙酸的二氯甲烷溶液。所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到深褐色殘余物。然后將該殘余物重溶于20ml二氯甲烷中。向所得混合物中加入異硫氰酸對甲苯酯和DIEA(2.8ml，8mmol)的10ml二氯甲烷。所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。有機(jī)層用50ml飽和氯化銨水溶液洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，得到淺黃色殘余物。該殘余物用快速硅膠色譜法進(jìn)行純化(用正己烷和乙酸乙酯(1∶1)的混合物)，得到40mg白色固體(10％)。
N-(2-溴-苯基)-2-(4，5-二甲基-1-對甲苯基-1H-咪唑-2-基硫基)-乙酰胺 10ml圓底燒瓶中裝有4，5-二甲基-1-對甲苯基-1H-咪唑-2-硫醇(40mg，0.18mmol)、N-(2-溴-苯基)-2-氯-乙酰胺(45.3mg，0.18mmol)和碳酸鉀(25mg，0.18mmol)的3mlDMF溶液。所得反應(yīng)物在室溫下攪拌14小時(shí)。減壓除去溶劑，得到黃色油狀殘余物。該殘余物用硅膠色譜法進(jìn)行純化(用乙酸乙酯和正己烷(1∶1)的混合物)，得到18mg白色固體(23％)。
用于測定HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制的試驗(yàn)系統(tǒng)用高通量基于細(xì)胞的測定，使用HIV-1表達(dá)的螢火蟲螢光素酶作為報(bào)道基因并且用皰疹性口腔炎病毒包膜糖蛋白(VSV-G)包被成假型病毒，篩選用于抑制人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)活性的所設(shè)計(jì)化合物。實(shí)驗(yàn)方法基本上按照以下文獻(xiàn)中描述的方法Connor等，Journalof Virology(1996)，705306-5311(Characterization of the functionalproperties of env genes from long-term survivors of humanimmunodeficiency virus type 1 infection(感染人免疫缺陷病毒1型的長期存活者的env基因的功能特性的表征))，以及Popik等，Journal ofVirology(2002)，764709-4722(Human immunodeficiency virus type 1uses lipid raft-colocalized CD4 and chemokine receptors for productiveentry into CH4+T cells(人免疫缺陷病毒1型使用脂質(zhì)raft-共定位CD4和趨化因子受體用于繁殖性進(jìn)入CH4+T細(xì)胞))。人們應(yīng)當(dāng)特別認(rèn)識到，該病毒在RT基因中含有2個(gè)引入的突變(K103N和Y181C，由PCR誘變產(chǎn)生)，這賦予病毒對目前非核苷類HIV-1藥物的高抗性。通過編碼VSV-G的質(zhì)粒DNA與載體pHL4-3Env(-)Luc(+)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，產(chǎn)生病毒原種。轉(zhuǎn)染后64小時(shí)，離心收集含病毒培養(yǎng)基并于-80℃冷凍貯存。
在384孔微量滴定板中，在篩選化合物存在下，用VSV-G假型病毒感染HeLa細(xì)胞。開始感染后48小時(shí)，向細(xì)胞中加入裂解緩沖液和螢光素酶檢測試劑(Promega)，使用LJL發(fā)光計(jì)，通過檢測所產(chǎn)生的光來確定螢光素酶活性。因?yàn)樗霾《净蚪M中攜帶螢光素酶基因，其表達(dá)水平直接反映了在化合物存在下的病毒復(fù)制水平。
為了評價(jià)所述化合物對野生型HIV-1的活性，通過在HIV-1啟動(dòng)子(長末端重復(fù)序列，即LTR)控制下表達(dá)螢光素酶的穩(wěn)定細(xì)胞系的分離，來修飾高水平表達(dá)CD4和CCR5的HeLa-JC53細(xì)胞系(參見例如Platt等，Journal of Virology(1998)，722855-2864Effect of CCR5and CD4 cell surface concentrations on infection by macrophagetropicisolates of human immunodeficiency virus type 1(CCR5和CD4細(xì)胞表面濃度對人免疫缺陷病毒1型巨噬細(xì)胞分離物感染的影響))。該細(xì)胞系的HIV-1感染刺激了螢光素酶從HIV-1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，螢光素酶基因表達(dá)水平與病毒復(fù)制水平成比例(Harrington等，Journal ofVirology Methods(2000)，88111-115Direct detection of infection ofHIV-1 in blood using a centrifugation-indicator cell assay(用離心-指示細(xì)胞測定法直接測定血液中HIV-1的感染)；和Roos等，Virology(2000)，273307-315LuSIV cellsa reporter cell line for the detection andquantitation of a single cycle of HIV和SIV replication(LuSIV細(xì)胞用于檢測并定量測定HIV和SIV復(fù)制單循環(huán)的報(bào)道細(xì)胞系))。病毒感染方法、化合物檢測方法和螢光素酶活性測定方法與用于VSV-G假型HIV-1的方法相同。
在HIV-1病毒測定中，發(fā)現(xiàn)兩種方法用于評價(jià)陽性化合物的細(xì)胞毒性。第一種方法采用另一種修飾的HeLa-JC53細(xì)胞系，所述細(xì)胞系組成型高水平表達(dá)螢光素酶，而無需病毒感染。這些細(xì)胞中螢光素酶表達(dá)水平可作為化合物存在下細(xì)胞復(fù)制的指示劑。化合物檢測方法和螢光素酶活性測定方法與用于病毒感染試驗(yàn)中的方法相同。另一種毒性測定使用HeLe-JC53細(xì)胞和測定細(xì)胞線粒體功能的市售MTS檢測試劑盒(Promega)。
結(jié)果下表1列出了示例性化合物對HIV的抑制活性值。抑制活性表示為以微摩爾計(jì)的EC50，IC50表示為對野生型HIV RT的微摩爾。A表示抑制活性濃度小于10微摩爾，B表示抑制活性濃度介于10微摩爾-100微摩爾之間，C表示抑制活性濃度大于100微摩爾。
表1對于化合物ID 1-52所列出的具體化合物，下表2列出了基于表2所示架構(gòu)的化合物各自的取代基。ID 3、10、22和25化合物的結(jié)構(gòu)見下表2。
用于表2的架構(gòu)




表2
下表3列出了示例性化合物對HIV的抑制活性值。抑制活性表示為以微摩爾計(jì)的EC50，IC50表示為對野生型HIV RT的微摩爾。A表示抑制活性濃度小于10微摩爾，B表示抑制活性濃度介于10微摩爾-100微摩爾之間，C表示抑制活性濃度大于100微摩爾。
表3對于化合物ID 1-21所列出的具體化合物，下表4列出了基于表4所示架構(gòu)的化合物各自的取代基。ID 19、20和21化合物的結(jié)構(gòu)見下表4。
用于表4的架構(gòu)

表4 因此，已經(jīng)公開了非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的具體實(shí)施方案和應(yīng)用。然而，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該顯而易見的是，在不偏離此中的本發(fā)明概念的情況下，可能有在已經(jīng)描述的實(shí)施方案和應(yīng)用以外的更多的修改方案和應(yīng)用。因此，本發(fā)明的主題除所附權(quán)利要求書的精神外不受限制。此外，在解釋本說明書和權(quán)利要求書時(shí)，所有術(shù)語都應(yīng)該以與本說明書正文一致的可能的最廣義的方式解釋。具體地說，術(shù)語“包含(comprises)”和“包含(comprising)”應(yīng)該解釋為是以非竭盡方式指元素、組分或步驟，表明所提及的元素、組分或步驟可以與未表述性地提及的其它元素、組分或步驟一起存在或利用或組合。
權(quán)利要求
1.一種抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的方法，所述方法包括使逆轉(zhuǎn)錄酶與下式(I)的化合物接觸HET-L-C(Y)NR1R2(I)其中HET包含雜環(huán)；L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合；Y為O、S或NR3；R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和低級烷基；且R2選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，并且其中R2任選被取代。
2.權(quán)利要求1的方法，其中HET為取代三唑或取代咪唑。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述取代三唑或取代咪唑被第一取代基和第二取代基取代，并且其中第一取代基和第二取代基中的至少一個(gè)包括芳基。
4.權(quán)利要求3的方法，其中第一取代基為甲基、CF3或鹵素，并且其中第二取代基為甲苯甲?；?、鹵代苯基或取代喹啉。
5.權(quán)利要求1的方法，其中L為-X1-CR3R4-，其中X1選自S、O、S(O)、S(O)2和CR3R4；且R3和R4獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和SH。
6.權(quán)利要求1的方法，其中L選自-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-和-CH2-CH2-。
7.權(quán)利要求1的方法，其中Y為O。
8.權(quán)利要求1的方法，其中R1為氫，且R2為取代芳基或取代雜芳基。
9.權(quán)利要求8的方法，其中R2包含鄰位取代苯基。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述鄰位取代基是鹵素或甲基。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述逆轉(zhuǎn)錄酶是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述HIV逆轉(zhuǎn)錄酶對非核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑至少具有部分抗性。
13.權(quán)利要求1的方法，其中逆轉(zhuǎn)錄酶的接觸步驟包括體內(nèi)接觸。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物在接觸步驟之前轉(zhuǎn)變成前體藥物。
15.權(quán)利要求1的方法，所述方法還包括使所述逆轉(zhuǎn)錄酶與第二抑制劑接觸。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述第二抑制劑選自非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
17.一種治療HIV感染者的方法，所述方法包括給予所述患者包含有效降低病毒繁殖的劑量的下式(I)化合物的藥用組合物HET-L-C(Y)NR1R2(I)其中HET包含雜環(huán)；L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合；Y為O、S或NR3；R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和低級烷基；且R2選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，并且其中R2任選被取代。
18.權(quán)利要求17的方法，其中HET為取代三唑或取代咪唑。
19.權(quán)利要求18的方法，其中L選自-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-和-CH2-CH2-。
20.權(quán)利要求18的方法，其中Y為O。
21.權(quán)利要求18的方法，其中R1為氫、CF3或鹵素，并且其中R2為取代芳基或取代雜芳基。
22.權(quán)利要求17的方法，其中所述化合物具有以下式(A)或式(B)的結(jié)構(gòu) 其中R1為任選取代的低級烷基、鹵素或CF3，R2為任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的喹啉或任選取代的異喹啉；且R3、R4和R5獨(dú)立地為氫、鹵素、任選取代的烷基、S-烷基、CF3、雜環(huán)、NR′R″、S(O)2R′或C(O)R′，其中R′和R″獨(dú)立地為NH2、NH烷基、NH?；?、N烷基?；(烷基)2、O-烷基、?；?、芳基、烷基、雜環(huán)，或者R′和R″形成環(huán)。
23.權(quán)利要求17的方法，所述方法還包括聯(lián)合給予第二種抗病毒藥物。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述第二種藥物選自非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、整合酶抑制劑、病毒結(jié)合抑制劑和融合抑制劑。
25.一種藥品，所述藥品包括化合物和給藥說明書所述化合物的結(jié)構(gòu)為HET-L-C(Y)NR1R2，其中HET包含雜環(huán)，L為其中至少兩個(gè)原子形成連接鏈的連接基團(tuán)，其中這兩個(gè)原子中的一個(gè)與所述雜環(huán)共價(jià)結(jié)合，而這兩個(gè)原子中的另一個(gè)與羰基原子共價(jià)結(jié)合，Y為O、S或NR3，R1和R3獨(dú)立選自氫、鹵素和低級烷基，R2選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，其中R2任選被取代；且所述給藥說明書指示根據(jù)降低逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒繁殖的方案，將所述化合物給予逆轉(zhuǎn)錄病毒感染者。
26.權(quán)利要求25的藥品，其中HET為取代三唑或取代咪唑。
27.權(quán)利要求26的藥品，其中所述取代三唑或取代咪唑被第一取代基和第二取代基取代，并且其中第一取代基和第二取代基中的至少一個(gè)包括芳基。
28.權(quán)利要求27的藥品，其中第一取代基為甲基、鹵素或CF3，并且其中第二取代基為甲苯甲酰基、鹵代苯基或取代喹啉。
29.權(quán)利要求25的藥品，其中L為-X1-CR3R4-，其中X1選自CH2、S、O、S(O)、S(O)2和CR3R4；且R3和R4獨(dú)立地為氫、鹵素、低級烷基、低級烯基、低級炔基、NH2、OH和SH。
30.權(quán)利要求25的藥品，其中L選自-S-CH2-、-S(O)-CH2-、-S(O)2-CH2-、-O-CH2-或-CH2-CH2-。
31.權(quán)利要求25的藥品，其中R1為氫，且R2為取代芳基或取代雜芳基。
32.權(quán)利要求31的藥品，其中R2包含鄰位取代苯基。
33.權(quán)利要求32的藥品，其中所述鄰位取代基為鹵素或甲基。
34.權(quán)利要求25的藥品，其中所述化合物具有以下式(A)或式(B)的結(jié)構(gòu) 其中R1為任選取代的低級烷基、鹵素或CF3，R2為任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的喹啉或任選取代的異喹啉；且R3、R4和R5獨(dú)立地為氫、鹵素、任選取代的烷基、S-烷基、CF3、雜環(huán)、NR′R″、S(O)2R′或C(O)R′，并且其中R′和R″獨(dú)立地為NH2、NH烷基、NH?；?、N烷基酰基、N(烷基)2、O-烷基、酰基、芳基、烷基、雜環(huán)，或者R′和R″形成環(huán)。
35.一種具有下式(IV)結(jié)構(gòu)的化合物HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5) (IV)其中HET包含雜環(huán)；W為S(O)、S(O)2或CH2；R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH；Y為O、S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH；R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基；且R5選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，并且其中R5任選被取代。
36.權(quán)利要求35的化合物，其中HET包含取代三唑或取代咪唑。
37.權(quán)利要求36的化合物，其中R1、R2和R4為氫，并且其中R5包含鄰位取代苯基。
38.權(quán)利要求37的化合物，其中Y為O，并且其中HET被至少一個(gè)任選取代的芳基和選自鹵素、CF3和CH3的取代基取代。
39.一種具有下式(V)結(jié)構(gòu)的化合物HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5) (V)其中HET包含雜環(huán)；W為O、S、S(O)、S(O)2或CH2；R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH；Y為S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH；R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基；且R5選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，其中R5任選被取代。
40.權(quán)利要求39的化合物，其中HET包含取代三唑或取代咪唑。
41.權(quán)利要求40的化合物，其中R1、R2和R4為氫，并且其中R5包含鄰位取代苯基。
42.權(quán)利要求41的化合物，其中Y為NR3。
43.一種具有下式(VI)結(jié)構(gòu)的化合物HET-W-C(R1)(R2)-C(Y)-N(R4R5) (VI)其中HET包含二取代的1，2，4-三唑或二取代的咪唑，其中HET的至少一個(gè)取代基為取代芳基，并且其中所述取代芳基與HET的氮共價(jià)結(jié)合；W為O、S、S(O)、S(O)2、NH、NR1或CH2；R1和R2獨(dú)立地為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基、鹵素、OH、SH、NH2、N3、O-烷基或CH2OH；Y為O、S或NR3，其中R3為氫、低級烷基、低級烯基、低級炔基或羥基、O-烷基或CH2OH；R4為氫、低級烷基、低級烯基或低級炔基；且R5選自芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)，并且其中R5任選被取代。
44.權(quán)利要求43的化合物，其中R1、R2和R4為氫，并且其中R5包含鄰位取代苯基。
45.權(quán)利要求44的化合物，其中Y為O。
46.具有以下式(A)或式(B)結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求43的化合物 其中R1為任選取代的低級烷基、鹵素或CF3，R2為任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的喹啉或任選取代的異喹啉；且R3、R4和R5獨(dú)立地為氫、鹵素、任選取代的烷基、S-烷基、CF3、雜環(huán)、NR′R″、S(O)2R′或C(O)R′，其中R′和R″獨(dú)立地為NH2、NH烷基、NH?；?、N烷基?；?、N(烷基)2、O-烷基、酰基、芳基、烷基、雜環(huán)，或者R′和R″形成環(huán)。
47.權(quán)利要求46的化合物，其中R2選自一取代苯基、二取代苯基、三取代苯基、一取代萘基、二取代萘基、三取代萘基、一取代喹啉、二取代喹啉、三取代喹啉、一取代異喹啉、二取代異喹啉和三取代異喹啉。
48.權(quán)利要求46的化合物，其中所述取代芳基的至少一個(gè)取代基為任選取代的低級烷基、CF3、低級烷氧基、鹵素或NR′R″，其中R′和R″為H或低級烷基。
全文摘要
各種羰酰胺化合物在體外和體內(nèi)可用作非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，特別是非核苷類HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。因此，所設(shè)計(jì)化合物可用于治療HIV感染者。此外，所設(shè)計(jì)的方面還包括含有治療有效量的所設(shè)計(jì)化合物的藥用組合物。
文檔編號A61K31/4196GK1697650SQ03824337
公開日2005年11月16日 申請日期2003年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月23日
發(fā)明者J·-L·吉拉德特, Z·張, R·哈馬塔克, M·D·L·R·赫爾南德斯, E·古尼克, Z·洪, H·W·金, Y·-H·柯, S·尼拉, S·肖, N·姚 申請人:威朗研發(fā)公司