專利名稱：一種治療血管栓塞的中藥膠囊制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療血管栓塞的藥物組合物，特別是能夠清除腦血栓、冠脈血栓的中藥膠囊制劑。
背景技術(shù)：
目前采用中藥治療血管栓塞的文獻(xiàn)報道很多，涉及多種組方、劑型和不同的療效。其中單獨研究黃芪、地龍或在組方中涉及黃芪和地龍的研究也有報道，但在制備過程中，大多采用煎煮水提的方法，工藝落后。特別是地龍在炮制和煎煮時，其組織中蛋白質(zhì)及酶類的活性物質(zhì)已被破壞，導(dǎo)致藥物的療效不佳。
現(xiàn)代研究證明，地龍中具有溶栓作用的有效成分是纖溶酶和地龍素，黃芪的有效成分是黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮。在一些文獻(xiàn)中也有采用地龍?zhí)崛∥锘螯S芪提取物的，但其地龍?zhí)崛∥镏欣w溶酶和地龍素含量很低，而不具有溶栓作用的雜質(zhì)含量較高，有效成分含量低將直接影響藥物的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是采用生物工程技術(shù)，精純化提取鮮地龍體內(nèi)纖溶酶和地龍素，使其既可直接溶解纖維蛋白，又可激活纖溶酶原為纖溶酶而使纖維蛋白溶解，還可降低血液黏度，有利于防止血栓形成；利用超臨界萃取技術(shù)制備黃芪提取物，將地龍與黃芪的提取物科學(xué)配伍，制成抗栓、溶栓，改善微循環(huán)系統(tǒng)，增加血流量的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑。
本發(fā)明利用層析和冷凍干燥技術(shù)對鮮地龍進(jìn)行處理，制備含有纖溶酶和地龍素的地龍?zhí)崛∥?；利用超臨界萃取技術(shù)，從中藥黃芪中提取含有黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的黃芪提取物。具體制備方法如下1、將鮮地龍清洗干凈，用組織勻漿機(jī)將其制成勻漿后進(jìn)行二次離心處理，第一次離心處理后對上清液進(jìn)行酸變性處理，加入醋酸鈉溶液，使上清液中醋酸鈉的濃度達(dá)到30-60mol/L，然后進(jìn)行第二次離心處理，收集上清液。
將收集的上清液過中壓層析柱，收集兩個主峰，將得到的層析流出液透析除鹽，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到含量為85％-90％的纖溶酶和地龍素的干粉。
2、采用超臨界萃取黃芪提取物，將黃芪洗凈、干燥、粉碎成20目的粗粉，投入萃取釜中，分別對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加熱，當(dāng)溫度分別達(dá)到48-52℃、52-58℃、50-55℃和37-43℃時，通入CO2對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加壓，當(dāng)壓力分別達(dá)到25-30MPa、8-14MPa、6-9MPa和5-8MPa時，開始循環(huán)萃取，并保持恒溫恒壓，收集萃取液，進(jìn)行冷凍干燥，得到含量為90％-95％的黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的干粉。
3.將含有纖溶酶和地龍素的地龍?zhí)崛∥锔煞叟c含有黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的黃芪提取物干粉以及淀粉以質(zhì)量比2∶1∶50的比例混合均勻，制成治療血管栓塞的中藥膠囊制劑。
按照本發(fā)明的制備方法，由太原邁迪生物科技有限公司生產(chǎn)了治療血管栓塞的中藥膠囊制劑——克栓膠囊，并進(jìn)行了毒性試驗和主要藥效學(xué)試驗。
本發(fā)明對動物進(jìn)行了長期毒性試驗，觀察連續(xù)重復(fù)給藥對大鼠所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。
試驗結(jié)論以成人臨床用藥量的40倍、60倍、90倍三個劑量連續(xù)灌胃給予大鼠9周，停藥后繼續(xù)觀察兩周。給藥期間及恢復(fù)期克栓膠囊低、中、高三個劑量組，均無一例大鼠死亡，一般狀況、血液學(xué)、血液生化學(xué)等指標(biāo)、主要臟器肉眼觀察、臟器指數(shù)、光鏡下病理組織學(xué)檢查均未見異常。表明克栓膠囊對大鼠無明顯毒性作用(具體試驗資料見附件1)。
本發(fā)明對動物進(jìn)行了急性毒性試驗，觀察當(dāng)日給藥對小鼠所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，連續(xù)觀察7天，詳細(xì)記錄小鼠反應(yīng)情況?？怂z囊因其藥的濃度和體積的限制無法測出LD50。因此，對該藥進(jìn)行最大給藥量試驗，即動物能耐受的最大濃度、最大體積即50％、0.5ml/10g，一日內(nèi)給予小鼠兩次灌胃，觀察其毒性反應(yīng)。給藥量為50g/kg、折合生藥量360g/kg，即相當(dāng)于臨床成人用藥量的625倍，給小鼠灌胃，未見毒性反應(yīng)，表明無急性毒性作用(具體試驗資料見附件2)。
本發(fā)明進(jìn)行了與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗，包括藥物對實驗性腦缺血的保護(hù)作用；藥物對動物腦血管及其功能的影響；藥物對大鼠血小板、凝血時間的影響；藥物的抗血栓作用。結(jié)論如下1.克栓膠囊對實驗性急性腦缺血有保護(hù)作用中、高劑量顯著降低實驗性腦缺血大鼠腦含水量及腦指數(shù)、毛細(xì)血管通透性；減少錐體細(xì)胞重度病變細(xì)胞(死亡細(xì)胞)數(shù)，減輕實驗性腦缺血大鼠腦組織病理損傷。
2.克栓膠囊對家兔、犬腦供血有改善作用各劑量組給藥后家兔腦血流量顯著增加；高劑量有增加犬腦血流量的趨勢，給藥后20分鐘腦血流量作用顯著。
3.中、高劑量克栓膠囊對抗動物血栓形成高劑量顯著降低大鼠在體血栓濕重和干重；中、高劑量給藥后家兔體外血栓長度、濕重和干重較給藥前降低。
4.克栓膠囊對大鼠、家兔血流變有一定的改善作用高劑量組顯著延長大鼠凝血時間；中、高劑量降低家兔纖維蛋白原、給藥后紅細(xì)胞壓積較給藥前降低，血漿壓積增加。
實驗表明克栓膠囊對動物急性缺血性腦損傷具有保護(hù)作用，改善腦供血和血流變；隨給藥次數(shù)和給藥劑量增加，有一定對抗血栓作用(見藥效學(xué)試驗報告3)。
本發(fā)明從2000年至2002年治療血栓病患者100例，并與溶栓膠囊對照組100例做對照，治療組服用的膠囊制劑——克栓膠囊，是按照本發(fā)明的配方，由太原邁迪生物科技有限公司提供。每日3次，每次4粒(每粒含0.41g)，口服。對照組服用的溶栓膠囊為山西中遠(yuǎn)威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，每日3次，每次2粒(每粒0.25g)。兩組均以單盲法給藥，以服藥1個月為1療程，治療兩個療程后做對比觀察。觀察結(jié)果治療組臨床控制率和總有效率分別達(dá)到60％和85％，而對照組則分別為50％和70％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，P＜0.05，兩組有顯著性差異。臨床初步試驗表明，克栓膠囊有較好的治療血栓的效果，顯愈率及總有效率均高于對照組，統(tǒng)計學(xué)有顯著差異。證實克栓膠囊對血栓造成的組織損傷有保護(hù)作用，有對抗血栓作用和增加組織血流量的作用。
本發(fā)明抗栓、溶栓機(jī)理主要是通過改善微循環(huán)系統(tǒng)，減少血管阻力，降低血液粘度，增加血流量，降低新生小血栓的形成率，延緩體內(nèi)血栓形成。制劑具有強(qiáng)效溶栓作用，同時還可改善血栓組織的局部壞死狀況。此外，本發(fā)明還有顯著的降血脂、降血壓、降血糖作用。對腦血栓、冠脈血栓、靜脈曲張及血栓形成，高血粘度綜合癥的總有效率為82.3％，其中顯效率為79.6％。對短暫性腦缺血、心肌梗塞、心絞痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、高血脂癥、高血壓等也有顯著療效。
本發(fā)明組方，以黃芪為君藥，其性味甘、溫，入脾、肺經(jīng)，補(bǔ)元氣、壯筋骨、固護(hù)營衛(wèi)，以助康復(fù)增強(qiáng)自身祛邪之力；以地龍為臣藥，其性味咸寒，入胃、腎、肝經(jīng)，重用地龍，取其清熱止痙，善入血分搜風(fēng)、祛瘀、活絡(luò)、開清竅之功效。地龍、黃芪配伍使用呈現(xiàn)的基本協(xié)同效應(yīng)，說明了益氣通絡(luò)配伍的合理性。黃芪配地龍，正是互為助力，扶正祛邪，相得益彰。特別是本發(fā)明在合理配方的基礎(chǔ)上，又采用了先進(jìn)的提取工藝，將地龍和黃芪中的溶解血栓的有效成分高效的提取出來。去除與溶解血栓無關(guān)的物質(zhì)，可以避免這些物質(zhì)對成藥溶栓作用的影響和它們可能產(chǎn)生的副作用。有效成分的提純，有利于藥效的提高，并且可以方便的對給藥劑量進(jìn)行科學(xué)的控制，更有利于臨床應(yīng)用。
具體實施例方式
本發(fā)明治療血管栓塞的中藥膠囊制劑由地龍?zhí)崛∥锖忘S芪提取物制備而成。
由地龍中提取纖溶酶和地龍素的制備工藝將鮮地龍清洗干凈，用組織勻漿機(jī)將其制成勻漿后進(jìn)行離心處理。地龍勻漿后進(jìn)行第一次離心處理的轉(zhuǎn)速為7000-9000轉(zhuǎn)/分，處理時間為30分鐘；收集上清液進(jìn)行酸變性處理，加入醋酸鈉溶液，使上清液中醋酸鈉的濃度達(dá)到30-60mol/L，放置4-8小時后進(jìn)行第二次離心處理，轉(zhuǎn)速為10000-15000轉(zhuǎn)/分，處理時間為15分鐘，離心后收集上清液。
將收集的上清液過中壓層析柱，先用0.1mol/L的氯化鈉溶液平衡層析柱，將上清液上樣后，用0.1mol/L的氯化鈉溶液以20ml/min的流速沖洗層析柱并用紫外檢測器檢測，收集兩個主峰，層析結(jié)束后，將得到的層析流出液透析除鹽，采用截留分子量為20000的透析膜，采用蒸餾水作透析液。然后在-50℃進(jìn)行冷凍干燥，得到含有85％-90％的纖溶酶和地龍素的干粉，干粉得率為1％-2％。
由黃芪中提取黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的制備工藝采用超臨界萃取制備黃芪提取物，將黃芪洗凈、干燥、粉碎成20目的粗粉，然后投入萃取釜中，分別對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加熱，當(dāng)溫度分別達(dá)到52℃、56℃、54℃和38℃時，通過高壓泵加入CO2對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加壓，當(dāng)壓力分別達(dá)到28MPa、14MPa、9MPa和7MPa時，開始循環(huán)萃取，并保持恒溫恒壓，萃取過程中循環(huán)流速為110～120kg/h，分別收集萃取液，將萃取液混合后在-50℃進(jìn)行冷凍真空干燥，得到含有90％-95％黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙、黃芪黃酮的干粉，干粉得率為4％-5％。
治療血管栓塞的中藥膠囊制劑——克栓膠囊的制備工藝將含有纖溶酶和地龍素的地龍?zhí)崛∥锔煞叟c含有黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的黃芪提取物干粉以及淀粉以質(zhì)量比2∶1∶50混合，兩種提取物與淀粉混勻后制粒，測定堆密度為0.603g/cm3，裝入膠囊規(guī)格為0.41g/粒。
由太原邁迪生物科技有限公司生產(chǎn)的臨床試驗用克栓膠囊，經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院方劑研究所進(jìn)行了藥品的初步穩(wěn)定性試驗，結(jié)果均符合國家有關(guān)規(guī)定，說明該藥質(zhì)量是穩(wěn)定的(克栓膠囊初步穩(wěn)定性試驗見附件4)。
權(quán)利要求
1.一種治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，其特征在于中藥膠囊制劑由地龍?zhí)崛∥锖忘S芪提取物配制而成，具體制備方法如下A、將鮮地龍清洗干凈，用組織勻漿機(jī)將其制成勻漿后進(jìn)行二次離心處理，第一次離心處理后對上清液進(jìn)行酸變性處理，加入醋酸鈉溶液，使上清液中醋酸鈉的濃度達(dá)到30-60mol/L，然后進(jìn)行第二次離心處理，收集上清液；將收集的上清液過中壓層析柱，收集兩個主峰，將得到的層析流出液透析除鹽，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到含量為85％-90％的纖溶酶和地龍素的干粉；B、采用超臨界萃取黃芪提取物，將黃芪洗凈、干燥、粉碎成20目的粗粉，然后投入萃取釜中，分別對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加熱，當(dāng)溫度分別達(dá)到48-52℃、52-58℃、50-55℃和37-43℃時，通入CO2對萃取釜、解析釜I、解析釜II和精餾柱進(jìn)行加壓，當(dāng)壓力分別達(dá)到25-30MPa、8-14MPa、6-9MPa和5-8MPa時，開始循環(huán)萃取，并保持恒溫恒壓，收集萃取液，進(jìn)行冷凍干燥，得到含量為90％-95％的黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的干粉；C、將含有纖溶酶和地龍素的地龍?zhí)崛∥锔煞叟c含有黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的黃芪提取物干粉以及淀粉以質(zhì)量比2∶1∶50的比例混合均勻，制成治療血管栓塞的中藥膠囊制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，其特征在于上述層析流出液透析除鹽，采用截留分子量為20000的透析膜，采用蒸餾水作透析液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，其特征在于地龍勻漿后進(jìn)行第一次離心處理的轉(zhuǎn)速為7000-9000轉(zhuǎn)/分，處理時間為30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，其特征在于地龍勻漿后進(jìn)行第二次離心處理的轉(zhuǎn)速為10000-15000轉(zhuǎn)/分，處理時間為15分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，其特征在于黃芪萃取過程中循環(huán)流速為110～120kg/h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療血管栓塞的中藥膠囊制劑，利用層析和冷凍干燥技術(shù)對鮮地龍進(jìn)行處理，制備含有纖溶酶和地龍素的地龍?zhí)崛∥铮焕贸R界萃取技術(shù)，從中藥黃芪中提取含有黃芪多糖、黃芪甲甙、黃芪總皂甙和黃芪黃酮的黃芪提取物；將地龍?zhí)崛∥锔煞酆忘S芪提取物干粉與淀粉以質(zhì)量比2∶1∶50的比例混合均勻，制成治療血管栓塞的中藥膠囊制劑。本發(fā)明采用生物工程技術(shù)，精純化提取鮮地龍體內(nèi)纖溶酶和地龍素，使其既可直接溶解纖維蛋白，又可激活纖溶酶原為纖溶酶而使纖維蛋白溶解，還可降低血液黏度，有利于防止血栓形成；利用超臨界萃取技術(shù)制備黃芪提取物，將地龍與黃芪的提取物科學(xué)配伍，制成抗栓、溶栓、改善微循環(huán)系統(tǒng)、增加血流量的治療血管栓塞的中藥膠囊制劑。
文檔編號A61P7/02GK1539464SQ20031010379
公開日2004年10月27日 申請日期2003年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月30日
發(fā)明者解軍, 徐鈞, 聶繼盛, 于保鋒, 胥顯民, 陳顯久, 黃登宇, 董華慧, 譚杏麗, 解 軍 申請人:解軍, 解 軍