專利名稱：枸杞多糖在制備治療胃潰瘍藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及枸杞多糖在制備治療胃潰瘍藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
枸杞是茄科植物寧夏枸杞Lyeium barbarum.L的干燥成熟果實，是我國傳統(tǒng)的滋補中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。具有滋補肝腎，益精明目的功效。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，枸杞中含有多糖、蛋白、脂肪、VA、VB1和氨基酸及鈣、鐵、鍺等微量元素和礦物質(zhì)。孟協(xié)中等報道，鑒定出寧夏枸杞果實中有10中游離氨基酸，如天門冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸等。Harsh M I報道枸杞中含有顛茄堿、天仙子胺等生物堿。王強等報道采用有機溶劑和水醇法提取枸杞多糖。儲演夢報道分得枸杞多糖I和II，經(jīng)組分鑒定得知他們都是由阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖和鼠李糖組成的雜多糖，并含有一定量的氨基酸。徐世忱等報道枸杞多糖還含有半乳糖醛酸和蛋白質(zhì)。近年來有不少研究報道枸杞多糖具有增強免疫力、抗癌、防衰老、增加造血功能、防止遺傳損傷等多種生物活性，但抗胃潰瘍作用未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于開發(fā)枸杞多糖的新用途，提供枸杞酸性多糖在制備治療胃潰瘍藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明公開的枸杞多糖是指從枸杞多糖中分離獲得的LBP-2和LBP-4。動物實驗表明，LBP-2對由無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍和消炎痛造成的小鼠胃潰瘍均有顯著的抑制作用，LBP-4對無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍有顯著的抑制作用。
本發(fā)明首先對枸杞多糖大分子量的兩種劑量組和枸杞多糖小分子量的兩種劑量組進行大鼠無水乙醇潰瘍模型抑制效果比較，發(fā)現(xiàn)大分子量枸杞多糖具有顯著的抗無水乙醇造成的胃潰瘍作用。然后本發(fā)明又對枸杞多糖大分子量部分用水、不同濃度NaCl溶液或NaOH溶液進行分離，獲得四種多糖組分即LBP-1、LBP-2、LBP-3、LBP-4。進一步的試驗證明LBP-2和LBP-4對由無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍具有顯著的抑制作用。多糖LBP-2對由消炎痛造成的小鼠胃潰瘍具有顯著的抑制作用。本發(fā)明實施例1對此進行了詳細的描述。
枸杞多糖LBP-2和LBP-4的分離方法已有公開報道，《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》1996；15(6)603-607中孫智達等報道了枸杞多糖的提取、分離及理化特性研究。其中枸杞多糖LBP-2和LBP-4的分離是取干燥枸杞果實，加提取溶媒提取，提液濃縮，加一定量沉淀劑，靜置過夜，取沉淀加水溶解再沉淀一次；沉淀加一定量水溶解，Sevag法去除游離蛋白；冷凍干燥，得枸杞粗多糖，得率5％左右。將枸杞總糖裝入透析袋內(nèi)透析，透析內(nèi)液干燥后得大分子多糖。將大分子量多糖上層析柱，以不同濃度的洗脫劑梯度洗脫，以自動收集器每管8ml收集，硫酸-蒽酮法隔管檢測，作洗脫曲線圖，合并高峰部分，濃縮干燥，取其中兩個多糖部分LBP-2、LBP-4，即得。
上述方法中所述提取溶媒為水或50％以下乙醇；所述沉淀劑為65-95％乙醇溶液或65-95％甲醇溶液；所述層析柱內(nèi)填充物可為活性炭、大孔樹脂、DEAE-纖維素、硅膠；所述洗脫劑為水、50-95％乙醇、0.01-1mol/l NaCL或0.01-1mol/l NaOH溶液。
作為治療胃潰瘍的藥物，本發(fā)明枸杞多糖LBP-2、LBP-4可制成各種形式的口服制劑包括片劑(含胃漂浮片)、膠囊劑、顆粒劑或口服液等。
所述的藥物制劑優(yōu)選由重量百分比為20-30％枸杞多糖提取物和80-70％藥用輔料或附加劑組成。
具體實施例方式實施例1、枸杞多糖抗胃潰瘍活性部位篩選(1)枸杞多糖抗胃潰瘍作用、結(jié)果先采用透析的方法，將枸杞多糖分為大分子量部分和小分子量部分，以對大鼠無水乙醇潰瘍模型的抑制效果為指標(biāo)進行篩選。選用體重160-200gSD大鼠，雌雄各半，隨機分為6組生理鹽水組(NS組)，陽性對照組(硫糖鋁組，250mg/kg)，大分子量多糖(大于8000分子量)劑量I組(500mg/kg)和劑量II組(250mg/kg)，小分子量糖(小于8000分子量)劑量I組(500mg/kg)和劑量II組(250mg/kg)。連續(xù)給藥七天，最后一次給藥前老鼠禁食24小時，禁食期間自由飲水，最后一次給藥1小時后，用無水乙醇灌胃，劑量為每1ml/200g。1小時后，將大鼠脫頸處死。剖腹，結(jié)扎幽賁門，從幽門處注入10ml4％的福爾馬林溶液。取胃，浸入福爾馬林液中固定30min后，沿胃大彎切開，可觀察到索狀及片狀的出血區(qū)域。
在固定光源下用數(shù)碼相機拍攝，圖象采用上海中醫(yī)藥大學(xué)藥理毒理中心提供的ipwin32圖象分析軟件計算其潰瘍面積指標(biāo)。
表1枸杞總多糖組分對無水乙醇胃潰瘍的抑制效果組別 劑量(mg/kg) N 潰瘍指標(biāo)抑制率(％)NS組 - 10 20.84±11.09陽性對照組250 10 6.64±8.66**68.10％大分子量多糖劑量I組 500 10 9.08±12.93*56.40％大分子量多糖劑量II組 250 10 11.68±5.70*43.90％小分子量多糖劑量I組 500 10 23.20±12.47小分子量多糖劑量II組 250 10 23.08±19.38與NS組相比，**P＜0.01；*P＜0.05從表中數(shù)據(jù)可以看出，大分子量枸杞多糖有顯著的對抗無水乙醇造成的胃潰瘍的作用。
(2)枸杞多糖大分子量部分抗?jié)冏饔煤Y選結(jié)果采用層析柱對枸杞多糖中大分子量部分分別用水、不同濃度的NaCL溶液或NaOH溶液進行分離，得到四種多糖組分LPB-1，LBP-2，LBP-3，LBP-4。以小鼠無水乙醇潰瘍模型的抑制效果為指標(biāo)，考察各組分抗?jié)冃ЧＨ±ッ鞣N小鼠，雄性，體重25-40g，隨機分為6組生理鹽水組(NS組)，陽性對照組(硫糖鋁組，100mg/kg)，LPB-1組(250mg/kg)，LBP-2組(250mg/kg)，LBP-3組(250mg/kg)，LBP-4組(250mg/kg)，造模方法基本同前，無水乙醇的劑量為0.1ml/20g。指標(biāo)評價采用記分法。1)每1mm長記1分；2)寬度超過1mm，則要在相應(yīng)的分值上乘寬度的分值；3)長度不超過1mm的記0.5分；4)最后分值由各潰瘍區(qū)域分值累加得到表2多糖組分對無水乙醇胃潰瘍的抑制效果組別 劑量(mg/kg)N 潰瘍指標(biāo) 抑制率(％)NS組 - 10 62.70±50.07陽性對照組 1008 22.31±17.36*64.4％LBP-1 25010 35.05±27.33 44.1％LBP-2 25010 14.00±10.22*77.7％LBP-3 25010 26.85±27.90 57.2％LBP-4 25010 12.50±11.82*80.1％與NS組比較，*P＜0.05從表中數(shù)據(jù)可以看出，四種多糖組分均對無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍有一定的抑制作用，但與生理鹽水組相比，只有LBP-2和LBP-4有顯著性差異。
以對消炎痛造成小鼠胃潰瘍的抑制效果為指標(biāo)，繼續(xù)考察對無水乙醇潰瘍模型有一定抑制效果的三種多糖LBP-2，LBP-3，LBP-4。陽性對照組為雷尼替丁，按前法給藥、禁食，最后一次給藥后30min，給小鼠腹腔注射消炎痛20mg/kg，6h后處死，取胃，固定，以記分法評價潰瘍指標(biāo)。
表3三種多糖組分對消炎痛胃潰瘍的抑制效果組別 劑量(mg/kg)N 潰瘍指標(biāo)抑制率(％)NS組 - 15 9.07±9.07雷尼替丁組10015 1.77±3.67*80.5％LBP2 25015 3.20±3.80*64.7％LBP3 25015 9.17±7.05LBP4 25015 4.77±4.14*47.4％與NS組比較，*P＜0.05從表中數(shù)據(jù)可以看出，LBP-2和LBP-4對消炎痛造成的小鼠胃潰瘍有一定抑制效果，但與生理鹽水組相比，只有LBP-2有顯著性差異。
實施例2、枸杞多糖提取物的制備取干燥枸杞果實，加水提取，共兩次；合并水提液，濃縮；加4倍量80％乙醇，靜置過夜，取沉淀加水溶解再醇沉一次；沉淀加一定量水溶解，Sevag法去除游離蛋白；冷凍干燥，得枸杞粗多糖，得率5％左右。將枸杞總糖裝入透析袋內(nèi)透析，透析內(nèi)液干燥后得大分子多糖。將大分子量多糖上活性炭柱，以0.01-1mol/l NaCL梯度洗脫，以自動收集器每管8ml收集，硫酸-蒽酮法隔管檢測，作洗脫曲線圖，合并高峰部分，濃縮干燥，取其中兩個多糖部分LBP-2、LBP-4，即得。
實施例3 枸杞多糖胃漂浮片的制備枸杞多糖LBP-2和LBP-4 10克，HPMC、十八烷醇、硬脂酸鎂，共40克。制備將主藥及輔料充分混合均勻，過100目篩，加粘合劑制成軟材，過16目篩制粒，40℃干燥，整粒。加硬脂酸鎂作潤滑劑，混合后壓片，共制100片，每片0.5克。
實施例4枸杞多糖膠囊的制備枸杞多糖LBP-2 10克，淀粉、糊精、碳酸鈣等共40克；制備將主藥及輔料充分混合均勻，裝膠囊，共制100粒每粒0.5克，即可。實施例5枸杞多糖顆粒劑的制備枸杞多糖LBP-4 10克，淀粉、糊精、糖粉等，共90克；制備將主藥及輔料充分混合均勻，用適當(dāng)濃度的乙醇適量制軟材，制粒，干燥，整粒，分裝，每包1克，共制100包，即可。
實施例6枸杞多糖口服液的制備枸杞多糖LBP-2和LBP-4 10克；另取蔗糖500克制成糖漿，加主藥、防腐劑等充分溶解，濾過，灌裝，每支5ml，共100支即可。
權(quán)利要求
1.枸杞多糖在制備治療胃潰瘍藥物中應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的枸杞多糖為LBP-2或LBP-4。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的LBP-2或LBP-4由下述步驟獲得取干燥枸杞果實，加提取溶媒提取，提取液濃縮，加一定量沉淀劑，靜置過夜，取沉淀加水溶解再沉淀一次；沉淀加一定量水溶解，Sevag法去除游離蛋白；冷凍干燥，得枸杞粗多糖；將枸杞總糖裝入透析袋內(nèi)透析，透析內(nèi)液干燥后得大分子多糖。將大分子量多糖上層析柱，以不同濃度的洗脫劑梯度洗脫，以自動收集器每管8ml收集，硫酸-蒽酮法隔管檢測，作洗脫曲線圖，合并高峰部分，濃縮干燥，取其中兩個多糖部分LBP-2、LBP-4，即得；其中提取溶媒為水或50％以下乙醇；沉淀劑為65-95％乙醇溶液或65-95％甲醇溶液；層析柱內(nèi)填充物可為活性炭、大孔樹脂、DEAE-纖維素或硅膠；所述洗脫劑為水、50-95％乙醇、0.01-1mol/lNaCL或0.01-1mol/l NaOH溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的藥物是由重量百分比為20-30％枸杞多糖提取物和80-70％藥用輔料或附加劑組成的口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及枸杞多糖在制備治療胃潰瘍藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述枸杞多糖是指從枸杞多糖中分離獲得的LBP－2和LBP－4。動物實驗表明，LBP－2對由無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍和消炎痛造成的小鼠胃潰瘍均有顯著的抑制作用，LBP－4對無水乙醇造成的小鼠胃潰瘍有顯著的抑制作用，可作為治療胃潰瘍的藥物。
文檔編號A61P1/00GK1546054SQ20031010942
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月15日
發(fā)明者馮怡, 徐德生, 張一芳, 馮 怡 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)