專利名稱：降低血壓的藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及降低血壓的藥物。
背景技術：
吳茱萸是一種傳統(tǒng)的中藥，始載于《神農本草經》，在臨床應用已有數百年的歷史。近年來，國內外學者對其化學成分和藥理作用進行了深入研究。其中重要生物堿成分為吳茱萸堿(evodiamine，Evo)和吳茱萸次堿(rutaecarpine，Rut)。Evo和Rut可增強豚鼠離體心房收縮力，提高其收縮頻率。該作用可被競爭性辣椒素受體(VR1)拮抗劑Capsazepine和非競爭性VR1拮抗劑釕紅以及選擇性降鈣素基因相關肽(CGRP)受體拮抗劑CGRP8-37所取消，并且這兩種生物堿與辣椒素之間可產生快速交叉耐受，提示Evo和Rut對豚鼠離體心房的興奮作用與激活VR1促進CGRP釋放有關[1]。
Rut可產生劑量(或濃度)依賴性的降壓和舒張血管效應，其機制主要涉及內皮細胞Ca2+-NO-cGMP途徑，也與減少VSMC Ca2+內流有關[7-9]。其證據有①一氧化氮合酶(NOS)抑制劑Nω-nitro-argine(L-NNA)可明顯抑制Rut的降壓作用[9]；②在苯腎上腺素預收縮(強直性收縮)的大鼠胸主動脈和腸系膜上動脈環(huán)，去除內皮或加入NOS抑制劑如L-NAME、L-NNA、L-NG-nitro-argine和對苯二酚(hydroquinone)以及腺苷酸環(huán)化酶抑制劑亞甲藍，可取消或減弱Rut Ca2+依賴性的舒血管反應，而細胞內Ca2+動員拮抗劑TMB-8對其作用無明顯影響[8，9]；③Rut可促進培養(yǎng)內皮細胞Ca2+依賴性的NO釋放，增加胸主動脈環(huán)cGMP的產生，去除內皮后其促cGMP產生作用顯著減弱[9]；④預先加入Rut，在細胞外有Ca2時，可明顯抑制苯腎上腺素所致胸主動脈環(huán)位相收縮，無Ca2+時則無明顯影響，TMB-8可抑制Rut的血管舒張反應[8]；⑤在細胞外有Ca2+或無Ca2+的情況下，預先加入Rut均可濃度依賴性抑制去甲腎上腺素所致胸主動脈環(huán)位相收縮，去除內皮時可顯著減弱其舒張反應[7]；⑥在細胞外有Ca2+時，Rut可增加內皮細胞內Ca2+濃度([Ca2+]i)，而無Ca2+時Rut對內皮細胞[Ca2+]i無影響；在有Ca2+時，Rut可抑制KCl所致培養(yǎng)VSMC[Ca2+]i增加；無Ca2+時也可降低去甲腎上腺素所致VSMC[Ca2+]i增加[7]；⑦全細胞膜片鉗實驗發(fā)現，Rut可開放內皮細胞非電壓依賴性Ca2+通道，在VSMC可開放L-電壓依賴性Ca2+通道[9]。
申請人發(fā)現，靜脈注射Rut產生降壓效應，同時可升高血漿CGRP濃度，實驗前4天皮下注射辣椒素(50mg/kg)耗竭感覺神經遞質(包括CGRP)，可取消其降壓和促CGRP釋放作用；預先應用Capsazepine和CGRP8-37可明顯減弱Rut對胸主動脈和腸系膜上動脈環(huán)的舒張作用，并且Rut與辣椒素之間可產生快速交叉耐受，提示Rut的降壓和舒血管作用可能與激活VR1受體促進CGRP釋放有關[10]。
另一方面，高血壓的防治一直是心血管領域中的重要研究課題。降鈣素基因相關肽(CGRP)是感覺神經的主要遞質，為目前已知最強的舒血管物質，其為多肽不能口服，且半衰期短(10分鐘左右)，應用受限，故人們一直在尋找促進內源性CGRP合成與釋放的藥物。
但是，現有技術對Rut降壓作用的研究僅顯示，Rut能促進CGRP的釋放，并且其作用維持時間短暫(僅約2min)。因此依據現有技術，普通技術人員不知道Rut是否可以作為降血壓的藥物。
現有技術中有許多合成Rut的方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明克服了現有技術認識上的不足，發(fā)現Rut的另一個重要性質，因而可以將Rut作為降血壓的藥物。
本發(fā)明提供的降血壓藥物，含有吳茱萸次堿或和藥學上可用的輔劑。
本發(fā)明人經研究首次發(fā)現長期給予吳茱萸次堿產生劑量依賴性降壓，給藥后6～8天可達到穩(wěn)定降壓，同時升高血中及背根神經節(jié)中CGRP含量。使用辣椒素使感覺神經脫敏后，其降壓作用與促CGRP合成和釋放作用明顯被抑制。因此吳茱萸次堿的降壓作用是通過激活辣椒素敏感的感覺神經上辣椒素受體，促進CGRP的合成和釋放。
高血壓需長期用藥，Rut口服有效；Rut不僅可以促進CGRP釋放，而且可以促進其合成，故能發(fā)揮長期穩(wěn)定降壓作用。這樣使Rut作為藥物有效成份降血壓成為現實。


圖1單次靜脈給予吳茱萸次堿(RUT)對高血壓大鼠平均動脈壓的影響；其中Veh溶媒；Cap辣椒素；CAPZCapsazepine(選擇性辣椒素受體阻斷劑)。數據表示為均數±標準誤，n＝9-12。**P＜0.01vs+Veh(RUT)；++P＜0.01vs+RUT(300μg/kg)。
圖2單次靜脈給予吳茱萸次堿(RUT)對高血壓大鼠血漿CGRP濃度的影響；其中Hypertension高血壓；Veh溶媒；Cap辣椒素；CAPZCapsazepine(選擇性辣椒素受體阻斷劑)。數據表示為均數±標準誤，n＝9-12。**P＜0.01vs Hypertension；++P＜0.01vs+RUT(300μg/kg)。
圖3長期給予吳茱萸次堿(RUT)對高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響；動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，連續(xù)灌胃給藥12天，每天給藥2次，圖中血壓為每次給藥前所測值。其中動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，連續(xù)灌胃給藥12天，每天給藥2次，圖中血壓為每次給藥前所測值。Control正常對照組；Hypertension高血壓組；RUT(L)低劑量吳茱萸次堿組(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高劑量吳茱萸次堿組(3mg/kg/次)；Cap辣椒素。數據表示為均數±標準誤，n＝9-12。
圖4長期給予吳茱萸次堿(RUT)對高血壓大鼠血漿CGRP濃度的影響；動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，連續(xù)灌胃給藥12天，每天給藥2次，圖中CGRP濃度為處死動物前所測值。其中Control正常對照組；Hypertension高血壓組；RUT(L)低劑量吳茱萸次堿組(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高劑量吳茱萸次堿組(3mg/kg/次)Cap辣椒素。數據表示為均數±標準誤，n＝8-11。**P＜0.01vs Control；++P＜0.01vs Hypertension；；##P＜0.01vs+RUT(H)。
圖5長期給予吳茱萸次堿(RUT)對高血壓大鼠背根神經節(jié)CGRP含量的影響；動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，連續(xù)灌胃給藥12天，每天給藥2次，圖中CGRP含量為處死動物前所測值。其中Control正常對照組；Hypertension高血壓組；RUT(L)低劑量吳茱萸次堿組(1.5mg/kg/次)；RUT(H)高劑量吳茱萸次堿組(3mg/kg/次)；Cap辣椒素。數據表示為均數±標準誤，n＝8-9。**P＜0.01vs Control；++P＜0.01vsHypertension；；##P＜0.01vs+RUT(H)。
具體實施方案第一部分 單次給予吳茱萸次堿的降壓作用及其機制研究SD大鼠200-250g，左腎下極注射10％苯酚50μl(溶于生理鹽水)誘導腎性高血壓。動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，單次靜脈注射不同劑量吳茱萸次堿，給藥后記錄平均動脈壓的變化，待降壓達到最大程度時采血測血漿CGRP。
實驗分設(1)高血壓組；(2)不同劑量吳茱萸次堿組(30，100，300μg/kg，iv)；(3)Capsazepine(1.5mg/kg，iv)+吳茱萸次堿(300μg/kg)組；(4)辣椒素(50mg/kg，sc)+吳茱萸次堿(300μg/kg)組；(5)吳茱萸次堿溶媒(20％二甲亞砜+80％乙醇)組；(6)辣椒素溶媒(10％乙醇+10％吐溫-80+80％生理鹽水)+吳茱萸次堿(300μg/kg)組。Capsazepine為選擇性辣椒素受體阻斷劑，辣椒素耗竭CGRP。
結果顯示高血壓大鼠各組間基礎血壓差異無顯著性。單次靜脈給予吳茱萸次堿能產生劑量依賴性的降壓效應，同時可劑量依賴性地升高血漿CGRP濃度。辣椒素耗竭感覺神經遞質CGRP及選擇性辣椒素受體阻斷劑capsazepine均能明顯抑制吳茱萸次堿的降壓作用及CGRP的釋放(圖1、2)。
第二部分 長期給予吳茱萸次堿的降壓作用及其機制研究上述高血壓模型，動物血壓升高達穩(wěn)定后(約15天)，然后隨機分組(1)正常對照組；(2)高血壓組；(3)兩個劑量的吳茱萸次堿(3，6mg/kg/d，以0.5％羧甲基纖維素鈉配成混懸液，分兩次灌胃)組；(4)辣椒素(50mg/kg，sc)+吳茱萸次堿(6mg/kg)。吳茱萸次堿處理前一天給予辣椒素使感覺神經脫敏，然后灌胃給藥12天，每天給藥前測尾動脈收縮壓。處死前，測平均動脈壓、血漿CGRP濃度和背根節(jié)CGRP含量。
結果顯示長期給予吳茱萸次堿產生劑量依賴性降壓，給藥后6～8天可達到穩(wěn)定降壓，同時升高血中及背根神經節(jié)中CGRP含量。使用辣椒素使感覺神經脫敏后，其降壓作用與促CGRP合成和釋放作用明顯被抑制(圖3，4，5)。
參考文獻1 Kobayashi Y，Hoshikuma K，Nakano Y et al. The positive inotropic and chronotropic effects ofevodiamine and rutaecarpine，indoloquinazoline alkaloids isolated from the fruits of Evodiarutaecarpa，on the guinea-pig isolated right atriapossible involvement of vanilloid receptors.PlantaMed，2001；67(3)244-8。
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權利要求
1.吳茱萸次堿在制備降血壓藥物中的用途。
2.降血壓的藥物，含有吳茱萸次堿或和藥學上可用的輔劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及降低血壓的藥物。本發(fā)明克服了現有技術認識上的不足，發(fā)現Rut的另一個重要性質，因而可以將Rut作為降血壓的藥物。本發(fā)明提供的降血壓藥物，含有吳茱萸次堿或和藥學上可用的輔劑。Rut口服有效；Rut不僅可以促進CGRP釋放，而且可以促進其合成，故能發(fā)揮長期穩(wěn)定降壓作用。這樣使Rut作為藥物有效成分降血壓成為現實。
文檔編號A61P9/00GK1568998SQ200310110450
公開日2005年1月26日 申請日期2003年10月24日 優(yōu)先權日2003年10月24日
發(fā)明者李元建, 胡長平, 胡高云, 鄧盤月, 譚桂山 申請人:李元建, 胡長平, 胡高云, 鄧盤月, 譚桂山