專利名稱：腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑，適合外敷的藥劑配方及其用途，該藥劑配方對紅斑狼瘡和由于上皮細(xì)胞過度增殖導(dǎo)致的其他疾病具有治療作用，外敷包含腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物。
背景技術(shù)：
紅斑狼瘡是良性的人類皮膚疾病，一般特征為薄的皮屑覆蓋在加厚的斑塊上。導(dǎo)致此病的原因是由于不明原由增加的表皮細(xì)胞增生。對于通常的皮膚，細(xì)胞從基層運(yùn)動到上顆粒層大約需要5個星期的時間。對于紅斑狼瘡的皮膚，只需要6到9天的時間，原因是由于增生細(xì)胞數(shù)量的增長和分裂細(xì)胞比例的增長(G.Grove，Int.J.Dermatol.18111，1979)。美國大約2％的人口有紅斑狼瘡，占白種美國人的3％，占非裔美國人的1％，本土美國人幾乎沒有。
與炎癥有關(guān)的表皮增生是紅斑狼瘡皮膚特征。受損區(qū)域的皮膚活組織切片檢查，表現(xiàn)為核片段停滯的角化過度，角化增生的增加，慢性炎癥的滲透。(E.A.Bauer，M.Tabas and J.B.Goslen，in Textbook of Internal Medicine，W.N.Kelly(ed.)，1989，pp 1042-1045)。隨著不斷增加的細(xì)胞增值，在受損的組織里，DNA合成速度增加，如此成為評估抗紅斑狼瘡藥劑功效的有效方法。
沒有真正的紅斑狼瘡的動物模型，雖然珍貴的靈長類有紅斑狼瘡臨床和組織病理學(xué)的特征已經(jīng)被報導(dǎo)過(N.J.Lowe，Drug Dev.Res.13147-155，1988)。因此，抗紅斑狼瘡藥劑的研究是依靠實驗促使動物增生，或患有自然突變性狀(fsn)的老鼠(J.P.Sundberg et al.，J.Invest.Dermatol.92414，1989)。另一種有表皮增生的老鼠模型是患有必需脂肪酸缺乏癥(EFAD)的裸鼠。
用實驗的的方法誘發(fā)動物模型，也包括向免疫缺陷型無胸腺裸鼠移植患病的人類皮膚。
本發(fā)明使用包含成功減少快速細(xì)胞增值和減少炎癥進(jìn)行治療。這些治療包括外敷藥劑的局部敷用，全身性敷用或兩者皆有，同時結(jié)合放射性治療。局部治療包括類固醇藥膏的外敷，和煤焦油藥膏的外敷伴隨紫外線放射(UV B，290-320nm)。5-氟尿嘧啶的外敷已經(jīng)取得了一些成功，但是治療在已處理的區(qū)域及其不能被患者很好吸收的皮膚區(qū)域引起嚴(yán)重的紅斑、浮腫、泡形成和潰瘍(C.J.McDonald，Pharmac.Ther.141-24，1981)。TRIAZURE.TM(三醋酸基6-氮尿苷)已經(jīng)在患有紅斑狼瘡的患者皮膚上做過局部試驗，但是沒有效果(William Drell，personalcommunication，May，1993)抗增生藥物，包括甲氨蝶呤、6-氮尿苷和triazure，也已經(jīng)經(jīng)過全身性敷用。大量紅斑狼瘡的治療，是口服8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、光敏劑，伴隨紫外線A(320nm)放射或類維生素A的服用，例如銀屑靈，伴隨紫外線A放射(C.J.McDonald，Pharmac.Ther.141-24，1981；E.A.Bauer，M.Tabas，and J.B.Goslen，inTextbook of Internal Medicine，W.N.Kelly(ed.)，1989，pp 1042-1045)。
其他由于上皮細(xì)胞過度增殖引起的皮膚疾病，包括遺傳過敏性皮炎、扁平苔蘚、光化性角化病、基層細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌。目前還沒有對應(yīng)用腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物，治療紅斑狼瘡或者其他由于上皮細(xì)胞過度增值引起的皮膚疾病的相關(guān)報導(dǎo)。
美國專利申請(Ser.No.08/060,258，hereby incorporated by reference)透露抗皰疹核苷磷酸酯，例如阿昔洛韋，對被病毒感染的變異株性狀動物是有效的，由于突變影響活化酶、胸苷激酶，所以其中的阿昔洛韋不能轉(zhuǎn)變成阿昔洛韋磷酸鹽

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明提供了一種一種適合外敷的藥劑配方，其特征在于含有具有抵抗上皮細(xì)胞過度增殖的有效數(shù)量的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)，及其3-位氮類似物或其鹽類。
根據(jù)發(fā)明的藥劑配方，9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物中的有效成分濃度在0.001gm％到100gm％之間。在優(yōu)選藥劑中，9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的有效成分濃度在0.01gm％to10gm％之間。在特殊的優(yōu)選的藥劑中，9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的濃度在0.1gm％to5gm％之間。
根據(jù)發(fā)明的一方面，外敷的藥劑每天一到十次，每次用量0.001gm％到100gm％。也可以選擇，每天用一到十次，每次用量0.01gm％到10gm％。在優(yōu)選藥劑中，用于皮膚受損區(qū)域的藥膏每天用一到十次，每次用量0.1gm％到5gm％。
根據(jù)發(fā)明的另一個方面，提供包含有效成分的藥學(xué)9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的方法。在優(yōu)選藥劑中，9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物進(jìn)一步包含丙二醇、聚氧乙烯400和聚氧乙烯3350。在特殊的優(yōu)選藥劑中，9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物進(jìn)一步包含在外敷過程中增強(qiáng)皮膚滲透的成分。
具體實施方案本發(fā)明用具有免疫抑制效用的腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑DHCaA或DHCeA，作為外敷的主要成分來治療紅斑狼瘡及過敏性皮炎，這類抑制劑通過對腺苷同型半胱胺酸水解酶的抑制，有效的阻止TNF-α及其他cytokines的產(chǎn)生而達(dá)到了免疫抑制的功能。
9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物中的鹽很容易提煉，并且這樣的鹽在水溶性乳劑，也就是在乳劑、凝膠劑、或其他水分散劑中表現(xiàn)很高的溶解性。9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物中有代表性的有效鹽包括鈉、鉀、鋰、銨、或氫鹽。那些文獻(xiàn)里提到的眾所周知的任何生理學(xué)可接受的陽離子也可以應(yīng)用。此外，這種鹽在提供起促進(jìn)作用的黏膜或影響皮膚散布的丙二醇乳劑和液體中是可用的和有效的。
外敷應(yīng)用9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物根據(jù)發(fā)明的另一個方面，局部治療紅斑狼瘡的方法，是外敷應(yīng)用一種包含對患者皮膚上的紅斑狼瘡性損害有效的腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物。
基液是一些外敷藥膏的重要組成部分，因為它可以用來提高滲透能力，為了延長活躍周期，或達(dá)到應(yīng)用的要求。例如，應(yīng)用在身體起繭部分的配方，如手掌或腳底，其中包括增強(qiáng)滲透藥劑例如二甲亞砜，丙二醇或酮.TM.另一方面，選擇粉末成分對磨的部位應(yīng)用，例如跨部，內(nèi)肘或手指、腳趾之間。9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物也能被制成包括不同的有機(jī)聚合物或其他在文獻(xiàn)中為人們所知的化合物，為了讓有效的抗紅斑狼瘡衍生物緩慢持續(xù)的釋放。
大多數(shù)適當(dāng)?shù)木植繎?yīng)用的化合物，都能在為所有藥學(xué)藥劑師所知的藥典里找到Blaug，S.，Ch.87在雷明頓的藥物科學(xué)中(15th Ed.，1975，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.18042)。這些化合物包括，粉末狀、漿狀、乳劑、膠狀、蠟狀、油態(tài)、油脂、水不吸收基質(zhì)、水中油或油中水滴型乳態(tài)、有機(jī)乳劑(多種分子量的聚乙二醇)，半固體膠、和包含有機(jī)潤滑劑半固體混合物。
在本發(fā)明中的外敷應(yīng)用的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物里，有效成分的濃度可以從0.001gm％到100gm％；更適宜的濃度大約從0.01gm％到10gm％；最適宜的濃度從大約0.1gm％到大約5gm％。9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物可以進(jìn)一步包含，其他幫助提高皮膚滲透和有康復(fù)作用藥劑的有效濃度，像在上述參考藥物規(guī)范中所描述的，和那些文獻(xiàn)中所熟知的普通技能。
外敷的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的功效，包含本發(fā)明中作為有效成分的核苷類似物磷酸鹽能用常規(guī)的測試程序來評估，像那些文獻(xiàn)中為人所知的技能。包括模擬動物模型(也就是表皮的增生)和其他在實際化驗里進(jìn)行預(yù)測的應(yīng)用(N.J.Lowe，Drug Dev.Res.13147-155，1988)。
9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物能被重復(fù)地外敷于受影響皮膚的紅斑狼瘡性損害部分；如一天一次、兩次、或幾次，也可以延長幾天直到康復(fù)為止。毒性和刺激性影響的風(fēng)險減小到最小限度。
局部應(yīng)用麻藥評估化驗1.抑制表皮DNA合成化驗。因為增強(qiáng)DNA合成是紅斑狼瘡性皮膚表皮增生的典型特征，放射性DNA前體的合成物進(jìn)入用藥學(xué)藥劑處理過的皮膚組織，已經(jīng)被用來評估此藥物學(xué)藥劑對DNA合成的抑制程度。簡要地，一種在外敷藥膏里的抗紅斑狼瘡藥劑，被應(yīng)用在已經(jīng)用文獻(xiàn)中很知名的技術(shù)移植了紅斑狼瘡性人類皮膚和表皮的無胸腺鼠區(qū)域。同樣地，為了測量抗增生麻藥的效果，患必須脂肪酸缺乏癥的無毛鼠模型能被應(yīng)用在這個化驗分析里。在治療后大約六個小時，為了在0.1-5小時內(nèi)標(biāo)記脈沖，將已處理過的組織離體，放入組織培養(yǎng)介質(zhì)，包括.sup.3H-胸苷脫氧核醣或.sup.3H-溴脫氧尿苷。然后用標(biāo)準(zhǔn)的程序?qū)NA從組織上分離出來，.sup.3H-胸苷脫氧核醣或.sup.3H-溴脫氧尿苷的結(jié)合物進(jìn)入DNA，在分離的DNA里通過測定放射能(cpm/.mu.g of DNA)進(jìn)行測定?？辜t斑狼瘡藥劑對增生性抑制功效的測定，是通過比較從未治療的組織進(jìn)入DNA的放射能化合物，其中DNA是來自己用不同抗紅斑狼瘡藥劑化合物處理過的組織(增加有效成分的百分?jǐn)?shù))。
2.聚胺生物合成抑制化驗。這個化驗基于一些現(xiàn)存于表皮細(xì)胞鳥氨酸脫羧酶(ODC)。ODC是在聚胺的構(gòu)成中的限速酶，通常在增生中提高，包括和紅斑狼瘡相關(guān)的表皮增生。提高ODC放射性也可以通過角質(zhì)層去皮(Lesiewicz，et al.，inModels in Dermatology，vol.2，pp.112-116(H.I.Maibach & N.J.Lowe，eds.)，1985)或佛波醇酯的應(yīng)用(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate or TPA)來實現(xiàn)。
3.皮膚組織切片。移植過紅斑狼瘡性人類皮膚的患必須脂肪酸缺乏癥的無毛鼠、隱性突變基因小鼠、或無胸腺鼠被用抗紅斑狼瘡藥物處理過，在1-15天之內(nèi)為處理過的皮膚檢查紅斑狼瘡總指標(biāo)(皮膚切片、炎癥紅斑等等)，然后通過活組織切片檢查進(jìn)行分析，以便于在顯微鏡下的表皮細(xì)胞層的數(shù)量能用標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)程序來計算。表皮細(xì)胞層的數(shù)量與相似的正規(guī)檢查和未治療的紅斑狼瘡性皮膚相比較，來測定用抗紅斑狼瘡藥物的治療效果。同樣，組織里發(fā)炎相對程度，能通過測定在皮膚毛細(xì)血管里白細(xì)胞的數(shù)量(也就是，中性球和/或單核球)和相對于未處理紅斑狼瘡性皮膚和正常對照皮膚的毛細(xì)血管擴(kuò)張來測定。
同樣地，人類臨床試驗用皮膚活組織檢查和顯微鏡精密檢查來完成，采用雙方面的成對的檢查進(jìn)行對照，用少量抗紅斑狼瘡藥劑應(yīng)用于皮膚直徑大約3cm區(qū)域(例如，前臂或腿)。雙方面成對的對照比較，對避免從已處理區(qū)域進(jìn)入未處理對照區(qū)域穿透影響的風(fēng)險是特殊優(yōu)選的一種方式。
4.隱性突變基因鼠的應(yīng)用。天生的有隱性突變基因(fsn/fsn)的老鼠，在斷乳以后，隨著年齡增長其生長發(fā)育的白紅斑狼瘡皮膚日益變厚，這在特殊的紅斑狼瘡里類似增生性皮膚疾病。在發(fā)育42天時，老鼠表現(xiàn)為多層基礎(chǔ)膜和炎癥的表皮增生，像通過增加白細(xì)胞和皮膚毛細(xì)血管的測量一樣，符合人類紅斑狼瘡的所有特征。這些老鼠，能夠作為人類皮膚病模型，為測定局部應(yīng)用核苷磷酸鹽的治療功效服務(wù)。包含9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物，是被應(yīng)用在fsn/fsn小鼠背部或腹部皮膚1-5mm部分，從12小時到15天，皮膚被粗略觀察和顯微鏡觀察，直到測定表皮增生程度和上面用標(biāo)準(zhǔn)皮膚學(xué)和組織學(xué)方法提出的其他紅斑狼瘡性皮膚癥狀。相關(guān)的對照比較是對老鼠的沒有處理過的相似部分，對另一個沒有處理過的fsn/fsn鼠，對用不含核苷磷酸鹽的僅僅是藥物成分處理過的fsn/fsn鼠和用fsn類似地處理過的沒有突變的老鼠。
5.角化細(xì)胞標(biāo)志。蛋白質(zhì)表達(dá)的變化是與紅斑狼瘡性皮膚相關(guān)的增生變化一致的。對檢測皮膚里反常狀況有用的兩個分子是角蛋白和絲聚合蛋白。老鼠在基部上的表皮里的特異角蛋白的積聚、K6，是與增生相關(guān)聯(lián)的有代表性的分子變化。在患必須脂肪酸缺乏癥的無毛鼠或隱性突變基因(fsn/fsn)小鼠里，基于探測K6的方法的抗體對測定在基部上表皮里分子的存在和數(shù)量是有用的，因而能作為抗紅斑狼瘡的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物功效的指示劑來應(yīng)用。
絲聚合蛋白是在表皮里的一種蛋白，通常與在顆粒層和過渡細(xì)胞中的，而不是消失在上部角化細(xì)胞中的，角質(zhì)透明蛋白顆粒相關(guān)聯(lián)。然而，在fsn/fsn鼠里，絲聚合蛋白殘余呈現(xiàn)在處于過渡細(xì)胞仿制期的表面細(xì)胞層。因而在上部角化細(xì)胞中的絲聚合蛋白的存在，如被抗絲聚合蛋白抗體和(或)微觀檢查所探測到的，是紅斑狼瘡性細(xì)胞的特征，能用來評估應(yīng)用在fsn/fsn鼠皮膚上的抗紅斑狼瘡藥物制備的功效。
(1)DHCaA及其3-位氮類似物的合成2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-hydroxy-4-(2-propyloxy)-butanoic AcidLactone(5).L-erythruronolactone174(1.0g，4.7mmol)溶解在50mL包含起催化作用的一些吡啶P-甲苯磺酸鹽(10mol％，0.12g，0.47mmol)的干燥2-丙醇中，分餾1.5小時。然后將混合物濃縮至漿，溶解在50mL Et2O，用H2O(2x，50mL)和鹽水萃取，通過Na2SO4干燥，過濾，濾出液濃縮，混合漿溶解在少量的正己烷/Et2O(5∶1)混合液中，通過少量硅膠(5g)，用正己烷/Et2O(5∶1)洗提產(chǎn)生1.15g化合物5(97％產(chǎn)量)[α]D+45.18°(c1.55，MeOH)；IR(neat)1799cm-1；1HNMR(CDCl3)δ5.54(s，1H，H-4)，4.81(d，1H，H-2，J＝6Hz)，4.51(d，1H，H-3，J＝6Hz)，4.02(heptet，1H，(CH3)2CHO，J＝7Hz)，1.58(br s，10H，cyclohexyl)，1.24and 1.18(2s，6H，2CH3)；MS(D-El，CH2Cl2)，m/e256(M+)，213(Me2CH)，81(cyclohexyl).Anal.(C13H2005)C，H。
(-)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-cyclopentenone(1).在烘干的500-mL三頸瓶(用間隔和125-mL附加的漏斗形物制成的)中加入含二甲基甲基磷酸鹽(3.98g，31.4mmol)的200mL干燥THF，溶解在25mL THF中的內(nèi)酯5(8.07g，31.4mmol)注入附加的漏斗中。磷酸鹽溶液用丙酮/干冰浴冷卻至-78℃，然后從注射器逐滴加入n-bu-tyllithium(1.6M在正己烷中，19.6mL，31.4mmol)經(jīng)過8-10分鐘。當(dāng)加成反應(yīng)完成的時候，溶液在-78℃下攪拌2.5小時隨后移開干冰浴。當(dāng)溶液降至室溫的時候(～30分鐘)，將混合物注入包含100mL H2O的500mL Et2O中，搖動，于是有機(jī)層分離。用額外的100mL Et2O萃取水，有機(jī)層化合。Et2O層用鹽水清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，濃縮(＜50℃)至油(粗糙的，6g，90％)。油溶解在Et2O中，加入硅膠柱中(10g)，用Et2O洗提，提供4.85g(80％)無色液體(在冷凍裝置中凝固，用Et2O/正己烷再結(jié)晶)mp65℃；[α]D-74°(c3.0，MeOH)；IR(neat)1734cm-1；1H NMR(CDCl3)δ7.60(dd，1H，H-4，J＝7Hz)，6.19(d，1H，H-5，J＝7Hz)，5.26(dd，1H，H-3，J＝6Hz)，4.41(d，1H，H-2，J＝6Hz)，1.58(m，10H)；MS(D-El，CH2Cl2)，m/e 194(M+).Anal.(C11H1403)C，H。
2，35，6-O-Dicyclohexylidene-D-mannonolactone(7a).向含有嘧啶(53g，670mmol)的500mL CH2Cl2的溶液中加入一部分CrO3(33.5g，335mmol)，然后在室溫下攪拌1.5小時。2，35，6-di-O-cyclohexylidene-D-mannose(18)(19g，56mmol)溶解在50mL CH2Cl2中，迅速加入嘧啶/CrO3混合體中。1.5小時以后移除溶液，焦油用Et2O(2X，200mL)徹底粉碎?；系挠袡C(jī)層過濾通過添充Celite，濾出液濃縮。剩余物被250mL Et2O吸收，用稀釋的HCL(2x，200mL).H2O(3x，200mL)和鹽溶液萃取，通過Na2SO4干燥，過濾。濾出液濃縮至干燥，得到的固體溶解在少量Et2O中，使用硅膠柱(30g)，用Et2O/hexane(1∶1)洗提以得到所需的化合物7a(15.9g，84％產(chǎn)量)mp 108-109℃(lit.18mp108-110℃)。
2，3-O-Cyclohexylidene-D-mannonolactone(7b).內(nèi)酯7(4g，12mmol)溶解在100mL EtOH和100mL H2O中，加入2g Dowex 50W(H+)?；旌衔镌?0℃下攪拌16小時，隨后通過過濾移除樹脂，濃縮濾出液。獲得的油溶解在少量EtOAc/正己烷(1∶1)中，形成的固體(D-mannonolactone)通過過濾移除。濾出液被使用硅膠柱(10g)，剩余的原料(＜200mg)通過用75mL EtOAc/正己烷(1∶1)洗提進(jìn)行分離，所需的化合物通過EtOAc洗提提供2.6g所需化合物粘漿(85％產(chǎn)量)[α]D+42℃(c1.1，CHCL3).化合物(mp，NMR，IR)與2，3-O-cyclohexylidene-L-erythruronolactone完全相同，即先前Beer et al.17所報告的(lit.17[α]D-39.8℃(c1.65，CHCL3)對于對應(yīng)的對映體)(-)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-hydroxy-4-(2-propyloxy)butanoicAcid Lactone(9).化合物8(1.0g，4.7mmol)轉(zhuǎn)變成9依照得到化合物5的方法。9得到1.17g(98％)；[α]D-45.5℃(c5.57，MeOH).物質(zhì)的數(shù)據(jù)(bp，NMR，IR)與對應(yīng)的對映體5完全相同。
(+)-4，5-(Cyclohexylidenedioxy)-2-cyclopentenone(2).化合物2從9(0.5g，2.0mmol)通過化合物1中所描述的相同的方法得到。2得到0.30g(77％)；[α]D+74℃(c1.0，MeOH).物質(zhì)的數(shù)據(jù)(mp，NMR，IR)與對應(yīng)的對映體1完全相同。
(-)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-cyclopentenone-1-ol(10).環(huán)戊烯酮1(2.04g，10.5mmol)和CeCL3-7H2O(3.91g，10.5mmol)加入60mL MeOH中冷卻至0℃，加入NaBH4(0.48g，12.6mmol)(起沫)，混合物允許攪拌20分鐘。然后用1N HCL將PH值調(diào)節(jié)至7.0，加入200mL Et2O，有機(jī)層用少量鹽溶液清洗。Et2O層通過Na2SO4干燥，過濾，濃縮成黃色液體將液體溶解在少量CH2CL2中，加入硅膠柱中(5g)，通過洗提得到1.7g(83％)無色液體[α]D-23.59℃(c4.45，MeOH)；1H NMR(CDCl3)δ5.84(s，2H，H-4and H-5)，4.96(d，1H，H-1，J＝6Hz)，4.69(t，1H，H-3，J＝6Hz)，4.53(dd，1H，H-2，J＝6Hz)1.55(m，10H，cyclohexyl)；MS(D-El，CH2Cl2)，m/e196(M+)，8l(cyclohexyl).Anal.(C11H1603)C，H。
(-)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-1-[p-tolylsulfonyl)oxy]-cyclopent-4-ene(11).環(huán)戊烯醇10(0.22g，1.12mmol)和氯化p-甲苯磺酰(0.41g，2.14mmol)溶解在10mL CH2Cl2中，然后加入Et3N(0.46g，4.48mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時，隨后用H2O和鹽溶液萃取混合物。有機(jī)層通過Na2SO4干燥，過濾，濃縮至干燥。然后將固體溶解在少量CH2Cl2/正己烷(1∶1)，裝在2-mm色譜(Model7429T)感光板(硅膠)上，用CH2Cl2/正己烷(1∶1)洗提以得到0.31g(80％)粗糙產(chǎn)物mp110-111℃；[α]D-62.26℃(c2.65，CHCL3)；1H NMR(CDCl3)δ7.85(d，2H，aromatic J＝8Hz)，7.27(d，2H，aromatic J＝8Hz)，5.87(m，2H，H-4and H-5)，5.3(d，1H，H-1，J＝5Hz)，4.87(d，1H，H-3，J＝5Hz)；4.53(t，1H，H-2，J＝5Hz)，2.42(s，3H，CH3)，1.50(m，10H)；MS(D-El，CH2Cl2)，m/e350(M+)，155(tosylate)，81(cyclohexyl).Anal.(C18H2205S)C，H。
(-)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)cyclopent-4’-enyl]-adenine(12).甲苯磺酰11(1.45g，4.1mmol)溶解在3mL DMF中，加入到含腺嘌呤鈉的10mL DMF溶液中[通過將NaH(80％，0.35g，12.3mmol)加入到含腺嘌呤漿(1.66g，12.3mmol)的10mL DMF中制備腺嘌呤鈉]?；旌衔镌?0℃下攪拌1-2天，然后通過蒸餾移除DMF。腺嘌呤溶解在CH2Cl2(50mL)中，為溶解的物質(zhì)通過過濾分離出來。濾出液濃縮至干燥，將固體溶解在少量CH2Cl2/EtOH(9∶1)中，裝在4-mm色譜儀(Model 7429T)感光板上，收集到0.56g(45％)化合物12mp87℃；[α]D-23.59°(c4.45，MeOH)；1H NMR(CDCl3)δ8.36(s，1H，H-2)，7.68(d，1H，H-8)，6.58(brs，2H，NH2，exchanged D2O)，6.33(dd，1H，H-4’，J＝6Hz，J＝2Hz)，5.93(dd，1H，H-5’，J＝6Hz，J＝2Hz)，5.63(d，1H，H-1’，J＝1Hz)，5.49(d，1H，H-3’，J＝6Hz)，4.71(d，1H，H-2’，J＝6Hz)，1.60(m，10H)；MS(D-El，MeOH)，m/e313(M+)，135(base，adenine)，81(cyclohexyl).Anal.(C16H19N502·3/4H2O)C，H，N。
(-)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)cyclopent-4’-enyl]-3-deazaadenine(13).化合物13像12一樣的方式制備，通過從11(170mg，0.5mmol)開始，除了腺嘌呤被3-脫氮腺苷(25)(100mg，0.75mmol)取代得到100mg(67％)；mp156-158℃；[α]D-164°(c0.5，MeOH)；UVmax263nm，267nm(sh)；1HNMR(CDCl3+D2O)δ7.87(d，1H，H-6，J＝6Hz)，7.65(s，1H，H-2)，6.79(d，1H，H-7，J＝6Hz)，6.38(d，1H，H-4’，J＝5Hz)，6.10(d，1H，H-5’，J＝5Hz)，5.36(m，1H，H-1’and H-3’J＝6Hz，)4.58(d，H-2’，J＝6Hz)，1.62(m，10H)；MS(D-El，CH2Cl2)，m/e312(M+)，134(3-deazaadenine)，81(cyclohexyl).Anal.(C17H20N402·1/2H2O)C，H，N。
化合物12和13脫保護(hù)基的一般方法。將化合物12或13用20mL H2O混合，加入1mL 6N HCL，混合物在室溫下攪拌3-6小時直到TLC(CH2Cl2/EtOH 9∶1)顯示沒有原料剩余。溶液濃縮至干燥(與EtOH形成共沸混合物)，將固體溶解在1-2mL H2O中，應(yīng)用Dowex 1x8-50(H+)柱。產(chǎn)物用稀釋的氫氧化氨洗提，濃縮至干燥。化合物與乙醇共沸干燥。
(-)-9-(trans-2’，trans-3’-Dihydroxycyclopent-4’-enyl)-adenine(14)得到230mg(98％)；mp175-176℃；[α]D-170°(c1.0，H2O)；1HNMR(DMSO-d6+D2O)δ8.47(s，2H，H-2，H-8)，6.09(m，2H，H-4’andH-5’)，5.45(d，1H，H-1’，J＝6Hz)，4.55(d，1H，H-3’，J＝6Hz)，4.25(dd，1H，H-2’，J＝6Hz)；MS(QP-El-Probe)，m/e 233(M+1)，216(-HO)，135(base，adenine).Anal.(C10H11N502·H2O)C，H，N。
(-)-9-(trans-2’，trans-3’-Dihydroxycyclopent-4’-enyl)-3-deazaadenine(15)得到305mg(98％)；mp140℃；[α]D-210°(c1.1，MeOH)；UVmax263nm，267nm(sh).1H NMR(DMSO-d6+D2O)δ8.03(s，1H，H-2)，7.64(d，1H，H-6，J＝6Hz)，6.76(d，1H，H-7，J＝6Hz)，6.13(m，2H，H-4’and H-5’)，5.29(d，1H，H-1’，J＝5Hz)，4.49(d，1H，H-3’，J＝5Hz)，4.05(dd，1H，H-2’，J＝5Hz)；MS(D-El，MeOH)，m/e 232(M+)peak match Δ＝0.0007，215(-HO)，134(base，3-deazaadenine).Anal.(C11H12N402·EtOH)C，H，N。
(2)DHCeA及其3-位氮類似物的合成(2R，3R，4S)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-methylcyclopentanone(4c)。對-40℃在50ml乙醚中懸浮液碘化銅(I)(Aldrich Gold Label，3.43g，18mmol)逐滴加入甲基鋰(1.2M在乙醚中)，在45分鐘過程中，直到開始形成的黃色氧化汞已經(jīng)被溶解(25mL，30mmol)。然后將反應(yīng)混合物升溫至0℃，于是在10mL THF/乙醚(3∶2)中逐滴加入溶液3(650mg，3.6mmol)，5-10分鐘。然后反應(yīng)混合物允許升溫至環(huán)境溫度。一小時以后(包括升溫時間)，混合物再冷卻至0℃，加入25mL15％乙酸(起先緩慢地)。然后此混合物用50mL飽和的NH4Cl溶液清洗，2×75mL稀釋的NH4OH溶液，50mL H2O。有機(jī)相通過Na2SO4進(jìn)行干燥，過濾，在真空中濃縮，濾渣通過硅膠(15g，乙醚/正己烷，1∶1)以得到470mg(67％)4c白色晶體mp30-32℃；1H-NMR(300MHZ，CDCL3)δ1.03(d，J＝7Hz，3H)，1.20-1.80(m，10H)，1.96(d，J＝18Hz，1H)，2.55(d，J＝7Hz，1H)，2.82(dd，J＝18，8Hz，1H)，4.23(d，J＝5Hz，1H)，4.49(d，J＝5Hz 1H)；13C-NMR(75MHz，CDCL3)δ19.1，23.6，23.8，24.9，31.1，34.2，36.5，41.4，77.7，82.6，112.8，214.4；IR(neat)2920，2850，1750，1445，1400，1380，1365，1330，1275，1245，1230，1160，1140，1110，1085，1070，1035，960，940，925，905，845，825cm-1；MS(EI)m/e 211(M+1)，210(M+)，181，167，140，125，99，95，81，69，55，42；[α]D＝-20°(c＝0.705，CHCL3).Anal.(C12H1803)C，H。
(1S，2S，3R，4S)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-methylcyclopentanol(7c).對-78℃在60mL CH2CL2(貯存超過3°A分子篩)中的681mg(3.24mmol)4c溶液加入4.85mL的1M在CH2CL2(4.85mmol)中氫化二異丁基鋁超過2分鐘。3.5小時以后，加入MeOH(8mL)(開始逐滴加入)，反應(yīng)混合物升溫至環(huán)境溫度。然后加入水(15mL)，幾分鐘后，膠狀懸浮體被吸入過濾，用大量的CH2CL2和H2O清洗。CH2CL2層去除以后，用2×150mL額外的CH2CL2萃取水相?；系挠袡C(jī)相用200mL H2O清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮。濾渣通過硅膠(35g，Et2O/hexane，1∶1)以得到655mg(95％)的7c無色透明油1H-NMR(500MHz，CDCL3)δ0.93(dd，J＝3，8Hz，3H)，1.30-1.75(m，11H)，2.15(m，1H)，2.50(d，J＝9Hz，1H，OH)，4.10(m，1H)，4.25(d，J＝6Hz，1H)，4.50(dd，J＝6，6Hz，1H)；13C-NMR(125MHz，CDCL3)δ17.6，23.5，23.9，25.1，33.7，35.4，35.8，38.2，71.3，78.5，85.6，111.9；IR(neat)3480，2930，2860，1450，1405，1370，1285，1165，1145，1105，1035，960，950，925，910，850cm-1；MS(EI)m/e 212(M+)，183，169，97，81，69，55，41；[α]D＝-23°(c＝0.340，CHCL3).Anal.(C12H2003)C，H。
(1’R，2’S，3’R，4’S)9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-methylcyclopentan-1’-yl]adenine(8c)。對0℃在15mLCH2CL2中7c(498mg，2.35mmol)溶液和嘧啶(0.210mL，204mg，2.58mmol)加入三氟甲烷磺酸酐(0.395mL，663mg，2.35mmol)，逐滴加入超過8分鐘。40分鐘以后，用7mL的冷H2O將反應(yīng)淬火。混合物與附加的15mL of CH2CL2一起注入分液漏斗。然后用2×25mL冷H2O清洗有機(jī)相，通過Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮以得到880mg天然triflate。腺嘌呤懸浮液(954mg，7.05mmol)，NaH(60％dispersion in mineraloil，280mg，7.0mmol)，20mL DMF中的18-冠-6(308mg，1.17mmol)加熱至70℃持續(xù)4小時，然后冷卻至室溫。將此懸浮液在5mL DMF中加上triflate，反應(yīng)混合物被通宵攪拌?；旌衔镌贑H2CL2(75mL)和NaCL飽和溶液(2×25mL)中被吸入過濾和萃取。通過Na2SO4干燥以后，有機(jī)相被過濾和在真空中濃縮。然后殘渣通過硅膠(50g，CH2CL2/EtOH，9∶1)，顯影在預(yù)備的TLC板(20cm×20cm×200μm，EtOAc/正己烷，2∶1，單獨(dú)顯影)以得到135mg(17％)of 8cmp80-83℃；1H-NMR(300MHz，CDCL3)δ1.25(d，J＝6Hz，3H)，1.35-1.85(m，10H)，2.15-2.60(m，3H)，4.45(dd，J＝5，7Hz，1H)，4.70(m，1H)，5.10(dd，J＝5，7Hz，1H)，6.00(s，2H，NH2)，7.85(s，1H)，8.35(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCL3)δ18.0，23.4，24.0，25.0，34.6，37.4，38.8，38.9，62.1，83.3，85.4，114.5，120.5，139.9，150.0，152.7，155.6；IR(KBr)3320，3160，2925，2860，1640，1595，1570，1470，1415，1370，1330，1300，1250，1160，1090，1070，1055，940，925，910，850，795，725，645cm-1；MS(EI)m/e330(M+1)，300，286，231，216，162，136，108，79，67，55，41；[α]D＝-50°(c＝0.402，CHCL3).Anal.(C17H23N502)C，H，N。
(1’R，2’S，3’R，4’S)-9-(2’，3’-Dihydroxy-4’-methylcyclopentan-1’-yl)adenine(1c)。將128mg(0.39mmol)8c溶解在20mL 0.3 NHCL中。18小時以后，溶劑在減壓下除去，殘渣通過Dowex 50W(H+)，首先用水洗提，然后用稀釋的NH4OH以得到92mg(95％)1c白色固體mp172-174℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ1.10(d，J＝7Hz，3H)，1.60(m，1H)，1.95(m，1H)，2.25(m，1H)，3.60(dd，J＝5，6Hz，1H)，4.35(dd，J＝6，8Hz，1H)，4.65(m，1H)，8.15(s，1H)，8.25(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6+D2O)δ19.4，34.7，37.8，60.7，74.7，76.5，119.4，140.9，149.9，152.6，156.1；IR(KBr)3330，3180，2900，1660，1605，1570，1485，1450，1430，1335，1315，1260，1220，1135，1110，1080，830，795，720，660，630cm-1；MS(EI)m/e calcd for C11H15N502249.1226，found 249.1220；250(M+1)，249(M+)，190，178，162，136，135，108，55，41；[α]D＝-36°(c＝0.994，0.3NHCL).Anal.(C11H15N502)C，H，N。
(2R，3R，4R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-vinylcyclopentanone(4e)。對-5℃，25mL THF中碘化銅(I)(785mg，4.15mmol)懸浮液加入8.25mL的在THF(8.25mmol)中1M乙烯溴化鎂，經(jīng)過1.5-2.0分鐘。懸浮液被保存在-5℃，持續(xù)3分鐘包括加成時間，然后冷卻至-78℃。將10mL THF中enone3(500g，2.60mmol)逐滴加入到反應(yīng)混合物。1小時以后，干冰/丙酮浴被冰浴置換，反應(yīng)混合物被允許至0℃。15分鐘以后在此溫度，反應(yīng)用50mL 15％乙酸(脫氣)淬火。程序與4c一樣，以得到560mg(98％)的4e無色透明油1H-NMR(500MHz，CDCL3)δ1.30-1.70(m，10H)，2.30(d，J＝18Hz，1H)，2.85(dd，J＝18，9Hz，1H)，3.15(m，1H)，4.20(d，J＝5Hz，1H)，4.60(d，J＝5Hz，1H)，5.10(m，2H)，5.85(m，1H)；13C-NMR(125MHz，CDCL3)δ23.6，23.8，24.9，34.3，36.5，38.5，39.7，77.4，80.9，113.0，116.3，137.2，213.4；IR(neat)2930，2850，1755，1640，1445，1430，1400，1365，1335，1290，1270，1250，1230，1160，1105，1070，1035，995，960，925，845，830，775cm-1；MS(EI)m/e222(M+)，193，179，140，107，97，81，67，55，41；[α]D＝-192°(c＝0.391，CHCL3).Anal.(C13H1803)C，H。
(1S；2S，3R，4R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-vinylcyclopentanol(7e).y用633mg(2.85mmol)4e和用在7c上相同的實驗程序，和硅膠色譜法，以得到567mg(89％)7e的透明無色油1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.30-1.75(m，10H)，1.90(m，2H)，2.50(d，J＝7.5Hz，1H，0H)，2.75(m，1H)，4.05(m，1H)，4.50(m，2H)，5.10(m，2H)，5.75(m.1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ23.7，24.1，25.2，33.8，35.9，36.0，44.5，71.0，78.5，83.8，112.2，115.2，138.1；IR(neat)3500(br)，2930，2850，1640，1450，1370，1285，1165，1090，1035，995，950，930，915，850，835cm-1；MS(EI)m/e 224(M+)，195，181，109，91，81，67，55；[α]D＝-9°(c＝0.450，CHCL3).Anal.(C13H2003)C，H。
(1’R，2’S，3’R，4’R)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-vinylcyclopentan-1’-yl]adenosine(8e).應(yīng)用與8c的合成相同的實驗程序，用470mg(2.10mmol)7e合成8e.獲得化合物8e(200mg；28％)白色結(jié)晶體mp80-82°C；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.30-1.85(m，10H)，2.45(m，2H)，2.80(m，1H)，4.65(dd，J＝7，7Hz，1H)，4.80(m，1H)，5.20(m，3H)，5.95(m，1H)，6.25(br s，2H，NH2)，7.85(s，1H)，8.35(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ23.4，23.9，25.0，34.5，36.5，37.4，48.1，61.7，82.9，83.4，114.6，115.9，120.4，137.7，139.8，149.9，152.7，155.7；IR(KBr)3320，3160，2925，2855，1640，1595，1570，1470，1415，1370，1330，1300，1250，1160，1110，1090，1070，1055，920，850，800，725，650cm-1；MS(EI)m/e342(M+1)，341(M+)，312，298，243，228，190，162，136，135，108，91，77，65，55，41；[α]D＝-4°(c＝0.220，CHCL3).Anal.(C18H23N502)C，H，N。
(1’R，2’S，3’R，4’R)-9-[2’，3’-Dihydroxy-4’-vinylcyclopentan-1’-yl]adenine(1e).使用與獲得1c相同的程序，用204mg(0.60mmol)8e得到140mg(90％)1e白色粉末mp210℃ dec；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ1.92(m，1H)，2.58(m，1H)，3.84(dd，J＝6，6Hz，1H)，4.33(dd，J＝6，6Hz，1H)，4.69(m，1H)，5.10(m，2H)，6.00(m，1H)，8.15(s，1H)，8.23(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6+D2O)δ31.6，47.1，60.0，74.3，74.7，114.5，119.3，140.2，140.3，149.5，152.1，156.0；MS(EI)m/e calcd for C12H15N502 261.226，found261.1221；261(M+1)，244，232，202，190，162，149，136，108，78，63，41；[α]D＝+8°(c＝0.982，0.3NHCl)；HPLC method A，Rf＝13.18min；method B，Rf＝14.18min。
(1’R，2’S，3’R，4’S)9-[2’，3’-Dihydroxy-4’-ethylcyclopentan-1’-yl]adenine(1g).將60ml MeOH中的1e(100mg，0.38mmol)溶液加入10mg PtO2，懸浮液被放置在氫環(huán)境下(24psi)15小時.然后過濾懸浮液，濾出液在真空中濃縮以得到101mg(100％)1g米黃色固體mp191-192℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ0.92(t，J＝7Hz，3H)，1.40(m，1H)，1.50-1.85(m，3H)，2.25(m，1H)，3.70(dd，J＝5，5Hz，1H)，4.35(dd，J＝9，6Hz，1H)，4.65(dd，J＝9，18，1H)，8.10(s，1H)，8.20(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6+D2O)δ12.5，27.2，32.4，44.9，60.1，74.4，74.5，119.4，140.1，149.9，152.4，156.0；IR(KBr)3330，3180，2960，2920，1655，1605，1570，1485，1450，1420，1335，1315，1255，1215，1120，1105，1080，720，655cm-1；MS(EI)m/e calcd for C12H17N502263.1382，found263.1388；263(M+)，234，216，190，178，162，136，78，63，45.Anal.(C12H17N502.1/10H20)C，H，N。
(2R，3R，4R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-phenylcyclopentanone(4f).方法A.將充分?jǐn)嚢璧?5ml無水乙醚中的碘化銅(I)(2.95g，15.5mmol，AldrichGold Label)懸浮液冷卻至-35℃，逐滴加入苯基鋰(15.5ml，2.0M在環(huán)己胺/乙醚(2∶1)中，31.0mmol)經(jīng)過10分鐘。再過30分鐘以后，反應(yīng)被允許升溫至0℃，在其中加入10ml THF中的3(1.0g，5.15mmol)溶液經(jīng)過幾鐘。0℃情況下1小時以后，反應(yīng)用25ml 15％乙酸淬火。混合物用4c描述的方法處理。油狀濾渣通過硅膠(50g，正己烷/乙醚，2∶1)，得到972mg(69％)10淺黃油。
方法B.將-5℃ 5ml THF中的碘化銅(I)(74mg，0.39mmol)懸浮液加入苯基溴化鎂(260μl，0.78mmol，3M在乙醚中)經(jīng)過1.5分鐘。反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，逐滴加入2mL THF中的3(100mg，0.52mmol)溶液經(jīng)過5分鐘。在-78℃將混合物攪拌一小時，然后升溫至0℃。20分鐘以后，混合物用10mL 20％乙酸淬火，從75mL乙醚和50mL 6％氫氧化胺之間萃取出來。用2×50mL乙醚萃取水層，結(jié)合的有機(jī)相用25mL氯化銨飽和溶液清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮。油狀濾渣瞬間通過硅膠(35g，正己烷/乙醚，4∶1)，以得到111mg(79％)10淺黃油1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.35-1.75(m，10H)，2.55(d，J＝20Hz，1H)，3.10(dd，J＝9，19Hz，1H)，3.70(d，J＝8Hz，1H)，4.35(d，J＝5Hz，1H)，4.70(d，J＝5Hz，1H)，7.10-7.40(m，5H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ23.6，23.9，24.9，34.3，36.7，40.5，42.7，77.8，83.1，113.2，126.9，127.2，129.1，141.3，214.0；IR(neat)3060，3030，2930，2850，1755，1500，1450，1370，1290，1270，1235，1160，1110，1035，985，945，930，910，850，830，770，700cm-1；MS(EI)m/e272(M+)，243，229，157，145，140，131，115，104，97，91，77，69，55，41；[α]D＝-148°(c＝0.194，CHCl3).Anal.(C17H2003)C，H。
(1S，2S，3R，4R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-phenylcyclopentanol(7f).反應(yīng)用與7c的合成所描述的同樣方法，應(yīng)用900mg(3.31mmol)4f。未加工的產(chǎn)物通過硅膠柱(正己烷/乙醚，4∶1按照1∶1)凈化，提供7f(670mg；74％)無色透明油狀1H-NMR(500MHz，CDC13)δ1.35-1.85(m，10H)，2.05(m，1H)，2.23(m，1H)，2.67(d，J＝6Hz，1H，exchanges withD2O)，3.43(m，1H)，4.20(m，1H)，4.60(dd，J＝6，6Hz，1H)，4.70(dd，J＝3，6Hz，1H)，7.15-7.40(m，5H)；13C-NMR(125MHz，CDCl3)δ23.5，24.0，25.1，34.0，36.0，38.5，47.1，70.6，79.4，85.8，113.3，126.4，127.2，128.5，141.9；IR(neat)3500，3050，3020，2930，2850，1495，1445，1370，1285，1165，1100，1040，945，930，755，700cm-1；MS(EI)m/e274(M+)，245，231，159，141，131，117，104，99，91，81，77，69，55，41；[α]D＝+26°(c＝0.239，CHCl3).Anal.(C17H2203)C，H。
(1’R，2’S，3’R，4’R)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-phenylcyclopentan-1-yl]adenine(8f).反應(yīng)用和8c合成相同的方法，應(yīng)用516mg(1.88mmol)7f。分離出來化合物8f(396mg，54％)白色結(jié)晶固體mp235-237℃；1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ1.35-1.85(m，10H)，2.70(m，1H)，2.90(dd，J＝12，25Hz，1H)，3.35(m，1H)，4.85(m，2H)，5.20(dd，J＝5，7Hz，1H)，5.60(brs，2H)，7.27(m，2H)，7.37(m，3H)，7.87(s，1H)，8.36(s，1H)；13C-NMR(125MHz，CDCl3)δ23.4，24.0，25.0，34.6，37.5，37.7，49.5，62.0，83.0，85.2，114.8，120.4，126.9，127.1，128.7，140.0，141.0，150.0，152.8，155.7；IR(KBr)3290，3140，2920，1665，1635，1600，1565，1470，1425，1365，1330，1300，1240，1160，1115，1095，930，700cm-1；MS(EI)m/e392(M+1)，362，348，293，278，162，158，141，136，128，115，108，91，84，55；[α]D＝+16°(c＝0.376，CHCl3).Anal.(C22H25N502)C，H，N。
(1’R，2’S，3’R，4’R)-9-[2’，3’-Dihydroxy-4’-phenylcyclopentan-1-yl]adenine(1f).水解縮酮被完成，用1c合成所描述的一樣的方法用300mg(0.77mmol)8f生產(chǎn)200mg(84％)1f白色粉末mp194-195℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ2.25(dd，J＝12，24Hz，1H)，2.45(m，1H)，3.10(m，1H)，4.10(dd，J＝6，6Hz，1H)，4.47(dd，J＝6，6Hz，1H)，4.80(m，1H)，7.25-7.45(m，5H)，8.20(s，1H)，8.35(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6+D2O)δ34.1，49.6，61.0，74.8，76.2，119.5，126.8，127.9，128.9，141.0，143.4，149.9，152.7，156.1；IR(KBr)3400，3320，3140，3020，2925，1660，1605，1570，1480，1415，1335，1325，1250，1105，1050，760，700，645cm-1；MS(EI)m/e calcd forC16H17N5O2311.1382，found 311.1377；312(M+1)，178，162，136，135，115，108，91，77，44；[α]D＝+14°(c＝0.20，H2O).Anal.(C16H17N502)C，H，N。
(1’R，2’S，3’R)-9-[2’，3’-Dihydroxycyclopentan-1’-yl]adenine(1b).將100ml MeOH中的2b17(100mg，0.425mmol)溶液加入10mg PtO2，懸浮液被放在氫(25psi)環(huán)境下6小時。催化劑分離除去，化合物在真空中濃縮得到101mg(100％)2米黃色固體mp218℃ dec；1H-NMR(300MHz，DMSO-d 6+D2O)δ1.6-2.25(m，4H)，3.95(m，1H)，4.25(dd，1H)，4.45(m，1H)，8.40(s，1H)，8.55(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ25.7，28.8，59.5，70.5，76.2，119.5，140.5，149.7，152.0，156.0；MS(EI)m/e calcdfor C10H13N5O2235.1069，found 235.1071；235(M+)，162，136；[α]D＝-50°(c＝0.80，H2O).Anal.(C10H13N502)C，H，N。
2，3-O-cyclohexylidene-5-O-methylsulfonyl-D-ribonic Acid γ-Lactone(12).將-5℃時200ml CH2Cl2中2，3-O-cyclohexylidene-D-ribonicAcid γ-Lactone(35)T(15.77g，69.1mmol)和三乙胺(6.99g，69.1mmol)溶液逐滴加入含氯化甲烷磺酰(7.92g，69.1mmol)的50ml CH2Cl2。反應(yīng)緩慢至室溫，并攪拌4小時.然后混合物冷卻至0℃，緩慢加入50ml冷H2O。攪拌幾分鐘以后，層被分離，用2×100ml H2O清洗有機(jī)相，通過Na2SO4干燥。過濾和濃縮以后，獲得橙色油狀物在室溫3小時以內(nèi)凝固。此固體從CH2Cl2/正己烷再結(jié)晶以得到19.1g(90％)12米黃色固體。分析純樣被分離，通過從乙酸乙酯/正己烷再結(jié)晶少量的這種物質(zhì)mp110℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.35-1.71(m，10H)，3.06(s，3H)，4.47(m，2H)，4.78(d，J＝6Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.83(d，J＝6Hz，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ23.7，23.8，24.7，34.9，36.3，37.6，68.3，74.7，76.9，79.4，114.8，173.4；IR(KBr)2943，1778，1363，1178，1113，1068，1008，988，963，928，883，853，808，783，723cm-1；MS(EI)m/e306(M+)，277，263，79，55；[α]D＝-40°(c＝0.430，CHCl3).Anal.(C12H1807S)C，H。
2，3-O-cyclohexylidene-5-deoxy-5-iodo-D-ribonic Acid γ-Lactone(13).碘化鈉(607mg，4.05mmol)和12(497mg，1.62mmol)溶解在20ml甲乙酮，反應(yīng)器皿用干木塞塞住。此混合物在50℃下攪拌30分鐘，末尾加入20ml H2O。層被分離后，用2×20ml醚萃取水相。已結(jié)合的有機(jī)層用30ml H2O清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮以得到粘性黃油。此黃油通過硅膠(22g，正己烷/EtOAc；4∶1)以生產(chǎn)(90％)13無色透明油。此凈化油最終凝固成仍然是光譜純的淺棕色固體，并提供可接受的元素分析mp61-63 ℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.35-1.72(m，10H)，3.43(m，2H)，4.60(d，J＝6Hz，1H)，4.64(dd，J＝4，4Hz，1H)，4.95(d，J＝6Hz，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ5.8，23.7，23.8，24.7，34.9，36.1，74.9，80.0，81.0，114.8，173.2；IR(KBr)2945，2925，1790，1447，1418，1375，1350，1285，1252，1232，1215，1176，1158，1108，1050，1023cm-1；MS(EI)m/e338(M+)，309，295，98，69，55；[α]D＝-21°(c＝2.87，CHCl3).Anal.(C11H15IO4)C，H。
2，3-O-cyclohexylidene-5-deoxy-4，5-didehydro-D-ribonic Acid γ-Lactone(14).含13(810mg，2.40mmol)和二氮雜二環(huán)(DBU，400mg，2.64mmol)的15mL苯溶液用干木塞塞住，在室溫下允許通宵攪拌。然后反應(yīng)物被過濾，用干苯清洗白色沉淀，過濾物在真空中濃縮成透明黃色油狀。此油瞬間通過密封的硅膠(5g在燒結(jié)玻璃漏斗中，EtOAc/正己烷，1∶1)以通過1H-and 13C-NMR得到410mg(82％)14無色透明油狀，純度大約95％。由于這種化合物的不穩(wěn)定性，進(jìn)一步凈化是不可能的1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.34-1.71(m，10H)，4.83(d，J＝3Hz，1H)，4.87(d，J＝6Hz，1H)，5.03(d，J＝3Hz，1H)，5.09(d，J＝6Hz，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ23.7，23.8，24.7，35.3，36.2，74.9，75.0，95.1，115.5，152.9，171.5；IR(neat)2927，2852，1818，1684，1449，1369，1334，1280，1229，1160，1109，991，929，877，853cm-1；MS(EI)m/e210(M+)，181，167，153，97，81，69，55。
(2R，3R)-2，3-(cyclohexylidenedioxy)-4-methyl-4-cyclopentenone(6c).Method A.往-78℃下含二甲基甲基磷酸鹽(0.46mL，520mg，4.2mmol)的25mL THF溶液中逐滴加入n-丁基鋰(2.90mL，4.20mmol)。1小時以后，含14(442mg，2.10mmol)的10mL THF被緩慢逐滴加入?；旌衔锉恢饾u地升溫至-10℃，在此期間加入含有冰乙酸(0.12mL，126mg，2.10mmol)的5mL THF。然后逐漸將混合物升溫至室溫，附加攪拌1小時，用100mL pH7磷酸鹽緩沖液淬火。用5×50mL乙醚萃取，結(jié)合的萃取物用2×100mL H2O清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮。由此獲得的深色油通過硅膠(17g，正己烷/EtOAc，4∶1)，產(chǎn)生222mg(51％)6c白色固體。
Method B.二甲基銅被形成像在4c的合成中所描述的，利用含513mg碘化銅(I)(2.7mmol)的25mL無水乙醚和3.84mL甲基鋰(1.4M在乙醚中，5.4mmol)?；衔?(174mg，0.9mmol)被溶解在5mL THF，逐滴加入0℃二甲基銅溶液。3小時以后，反應(yīng)混合物被轉(zhuǎn)移至-78℃含氯化甲烷磺酰36(0.430mL，590mg，7.2mmol)的40mL乙醚溶液中。反應(yīng)混合物經(jīng)過0.5小時升溫至0℃，期間加入10mL 10％水乙酸。溶液用100mL乙醚沖淡，用2×150mL NH4CL飽和溶液含5％NH4OH，用100mL H2O清洗。然后用6×100mL CH2CL2萃取己結(jié)合的水相。CH2CL2層化合，在真空中濃縮，通過硅膠(17g，CH2CL2/EtOH，19∶1)以得到145mg β-酮亞砜5c四種非對映異構(gòu)體的混合物。這些不用進(jìn)一步凈化，但是134mg在40mL甲苯中用46mg CaCO3分餾經(jīng)過18小時。過濾和硅膠色譜法(26g，乙醚/環(huán)己胺，1∶1)以后，得到100mg(46％overall from 1)6c白色固體mp80℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.32-2.21(m，10H)，2.22(s，3H)，4.47(d，J＝5Hz，1H)，5.01(d，J＝5Hz，1H)，5.89(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ17.0，23.7，23.9，24.9，35.9，37.3，77.6，80.7，116.0，130.0，174.7，202.6；IR(KBr)2940，2920，2830，1697，1621，1375，1196，1162，1100，921，834cm-1；MS(EI)m/e208(M+)，179，165，111，82，55；[α]D＝-24°(c＝2.33，CHCl3).Anal.(C12H16O3)C，H。
(1S，2S，3R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-methyl-4-cyclopenten-1-ol(9c).將-78℃含有6c(5.00g，24.0mmol)的250mL CH2Cl2溶液中逐滴加入二異丁基氫化鋁(1.0M在CH2Cl2中，36.0mL 36.0mmol)。在此溫度6小時以后，反應(yīng)通過逐滴25mL MeOH淬火，然后升溫至室溫。在加入100mL H2O以后，劇烈攪拌15分鐘，混合物被吸入過濾和分離層。用3×50mL CH2Cl2析出水相，然后用150mL H2O清洗已結(jié)合的有機(jī)層，通過Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮。油狀殘渣通過硅膠柱(225g，正己烷/EtOAc，9∶1)以得到4.80g(95％)9c無色透明油
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.30-1.70(m，10H)，1.79(s，3H)，2.73(d，J＝9Hz，1H，exchanged with D2O)，4.49(m，1H)，4.70(dd，J＝6，6Hz 1H)，4.78(d，J＝6Hz，1H)，5.46(s，1H)；13C-NMR(78MHz，CDCl3)δ13.5，23.7，24.0，24.9，36.4，37.4，73.4，77.5，85.3，112.8，130.1，141.9；IR(neat)3538，2933，2855，1658，1445，1365，1280，1171，1105，1054，999，963，932，896cm-1；MS(EI)m/e210(M+)，181，167，95，56，42；[α]D＝+3°(c＝1.86，CHCl3).Anal.(C12H1803)C，H。
(1S，2R，3R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-methyl-4-cyclopenten-1-olMethanesulfonate(16).將-5℃下含7(356mg，1.69mmol)和三乙胺(188mg，1.86mmol)的10mL CH2Cl2迅速加入含氯化甲烷磺酰(213mg，1.86mmol)的CH2Cl2。1小時以后，加入15mL冰H2O，溶液被劇烈攪拌幾分鐘。分離層以后，有機(jī)相用15mL冰H2O清洗，通過Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮以得到487mg(100％)光譜純16透明油。由于這種甲磺酰的不穩(wěn)定性，所以不再嘗試得到分析純樣1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.30-1.70(m，10H)，1.88(s，3H)，3.15(s，3H)，4.79(d，J＝5Hz，1H)，4.87(dd，J＝5Hz，1H)，5.38(m，1H)；5.48(s，1H)13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，23.9，23.9，24.9，36.5，37.1，39.0，76.7，81. 5，85.2，113.8，124.2，146.6；IR(neat)2928，2858，1661，1354，1173，1445，1281，1124，1096，1054，1014，952，905，860，819，755cm-1；MS(EI)m/e288(M+)，259，245，193，95，55。
(1R，2S，3R)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-methyl-cyclopenten-4-enyl]adenine(10c).將含腺嘌呤(2.96g，21.9mmol)的50mL DMF懸浮液加入氫化鈉(80％散布在礦物油中，660mg，21.9mmol)和18-冠-6(5.79g，21.9mmol)?；旌衔镌?.5小時內(nèi)被加熱至80℃，然后允許冷卻回環(huán)境溫度，此時一部分加入含16(2.1g，7.3mmol)的10mL DMF。通宵攪拌以后，反應(yīng)混合物在真空中濃縮。將殘渣加入100mL H2O，水溶液用3M NaOH調(diào)節(jié)至pH11。用4×50mL CH2Cl2萃取，化合的析出物用50mL 0.5M NaOH清洗，通過K2CO3干燥，過濾，在真空中濃縮。合成的濾渣通過硅膠(100g，CH2Cl2/EtOH，9∶1)；通過預(yù)備的TLC(four 20×20cm×250mm plates，CH2Cl2/EtOH，13∶1)完成最后精煉，以得到830mg(35％)10c白色固體mp186℃；1H-NMR(30MHz，CDCl3)δ1.34-1.70(m，10H)，1.99(s，3H)，4.66(d，J＝6Hz，1H)，5.23(d，J＝6Hz，1H)，5.50-5.60(br，4H，2H after D2Oexchange)，7.66(s，1H)，8.39(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ14.5，23.9，24.3，25.3，36.1，37.6，64.9，84.2，86.4，113.4，120.4，122.5，138.8，149.2，150.0，153.4，154.0；IR(KBr)3310，3160，2935，1675，1600，1512，1475，1415，1369，1332，1303，1250，1207，1164，1052，1014，cm-1；MS(EI)m/e328(M+1)，327(M+)，284，230，229，200，136，135，95，55，41；[α]D＝-153(c＝14.53，CHCl3).Anal.(C17H21N502)C，H，N。
(1R，2S，3R)-9-(2’，3’-Dihydroxy-4’-methyl-4’-cyclopentenyl)adenine(2c).化合物10c(532mg，1.63mmol)被溶解在0.3N HCl中，將反應(yīng)混合物通宵攪拌?；旌衔镌谡婵罩袧饪s至1ml以下，加入20mL冰EtOH。立即形成白色結(jié)晶，混合物在20℃隔夜儲存。然后過濾結(jié)晶，繼續(xù)用EtOH環(huán)境溫度乙醚清洗，干燥以得到388mg(84％)2c-HClmp205℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ1.83(s，3H)，4.28(m，1H)，4.37(d，J＝6Hz，1H)，4.45-5.35(br s，2H，exchangedwith D2O)，5.43(m，1H)，5.60(s，1H)，8.51(s，1H)，8.55(s，1H)，9.00(br s，1H，exchanged with D2O)，9.60(br s，1H，exchanged with D2O)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ14.9，65.8，75.2，76.8，118.3，123.8，142.8，144.6，146.5，148.6，150.3；IR(Nujol)3500-3000，1713，1685，1105cm-1；MS(EI)m/e calcd forC11H13N5O2247.1069，found 247.1081；248(M+1)，136，135，108，94；[α]D＝-151°(c＝2.95，H2O)；HPLC method A，Rf＝10.73min；method B，Rf＝13.44min。
(1S，2S，3R，4R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-methyl-cyclopentanol(15).含9c(768mg，3.66mmol)的250mL甲醇溶液與80mg PtO2一起用氫(25psi)處理16小時。懸浮液被過濾，在真空中濃縮，剩余物通過硅膠(35g，乙醚/正己烷，1∶1)以得到728mg(94％)15無色透明油
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.05(d，J＝7Hz，3H)，1.25-1.70(m，12H)，1.85(m，1H)，2.50(d，J＝10Hz，1H，OH)，3.85(m，1H)，4.40(m，2H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ12.8，23.6，24.0，25.2，33.1，33.7，35.4，37.7，72.3，78.6，81.2，110.8；IR(neat)3450，2920，2850，1450，1400，1370，1285，1250，1230，1165，1140，1110，1090，1060，1030，1000，970，950，930，910，820，670，635cm-1；MS(EI)m/e212(M+)，169，97，79，69，55，42；[α]D＝+4°(c＝0.810，CHCl3 ).Anal.(C12H20O3)C，H。
(1’R，2’S，3’R，4’R)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-methylcyclopentan-1’-yl]adenine(8d).triflation和腺嘌呤置換反應(yīng)像上面所描述的8c的合成一樣，用675mg(3.18mmol)15以得到1.16g(定量的產(chǎn)量)粗糙的triflate和648mg(62％)8d白色固體mp148-150℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.15(d，J＝7Hz，3H)，1.30-1.80(m，10H)，1.95(m，1H)，2.20(m，1H)，2.50(m，1H)，4.75(dd，J＝5，5Hz，1H)，4.85(d，J＝7Hz，1H)，5.00(dd，J＝5Hz，1H)，6.35(s，2H.NH2)，7.70(s，1H)，8.35(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ13.2，23.6，24.0，25.1，33.6，36.1，36.9，37.2，61.7，82.2，85.2，111.4，119.8，138.9，149.9，152.9，155.7；IR(KBr)3300，3140，2925，1665，1645，1600，1570，1475，1450，1415，1370，1335，1300，1250，1165，1100，1075，1055，995，950cm-1；MS(CI)m/e330(M+1)，286，231，216，136，108，81，79，55；[α]D＝-20°(c＝0.680，CHCl3).Anal.(C17H23N502)C，H，N。
(1’R，2’S，3’R，4’R)9-(2’，3’-Dihydroxy-4’-methylcyclopentan-1’-yl)adenine(1d).將化合物8d(648mg，1.97mmol)溶解在75mL 0.3N HCl中，室溫下通宵攪拌，用1c中所描述的同樣的方法，以得到359mg(73％)1d白色粉末mp238-240℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6+D2O)δ0.95(d，J＝7Hz，3H)，1.75-2.10(m，2H)，2.45(m，1H)，3.75(dd，J＝4，4Hz，1H)，4.40(dd，J＝4，9Hz，1H)，4.70(m，1H)，8.10(s，1H)，8.15(s，1H)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6+D2O)δ15.3，33.8，35.4，60.6，74.9，78.2，119.7，141.6，149.9，152.8，156.2；IR(KBr)3360，3320，3110，2970，2930，2890，1660，1605，1565，1480，1415，1410，1330，1310，1245，1145，1115，990，880，795，690，645cm-1；[α]D＝-46°(c＝0.668，H2O)；MS(EI)m/e calcd for C11H15N502 249.1226，found 249.1215；249(M+)；HPLCmethod A，Rf＝12.25min；method B，Rf＝12.45min。
(2R，3R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-ethyl-4-cyclopentenone(6g).對-5℃下含碘化銅(I)(1.57g，8.20mmol)的50mL THF懸浮液加入含5.50mL 3M乙烯溴化鎂的乙醚(16.5mmol)經(jīng)過1.5-2.0分鐘。懸浮液在-5℃下保存3分鐘包括加成時間，然后冷卻至-78℃。將含3(1.00g，5.20mmol)的10mL THF逐滴加入到反應(yīng)混合物中。1小時以后，干冰/丙酮浴用冰浴取代，反應(yīng)混合物升溫至0℃。在此溫度15分鐘以后，反應(yīng)再冷卻至-78℃，通過管子轉(zhuǎn)移至-78℃含氯化甲烷磺酰(2.20mL，3.00g.3.10mmol)的400mL THF溶液中。反應(yīng)混合物升溫至0℃經(jīng)過30分鐘，此時，像6c中所描述的方法處理反應(yīng)以得到1.15g粗糙的亞砜非對映異構(gòu)體。然后，亞砜混合物在含甲苯(200mL)的CaCO3(1.00g，1.00mmol)中分餾17小時。在真空中濃縮，剩余物瞬間通過硅膠(CH2Cl2/EtOH；99∶1)，以得到495mg(43％全部來自3)純6g淺黃油1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ1.25(t，J＝7Hz，3H)，1.30-1.80(m，10H)，2.45(m，1H)，2.65(m，1H)，4.45(d，J＝6Hz，1H)，5.05(d，J＝6Hz，1H)，5.90(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ10.9，23.6，23.8，24.3，24.9，35.8，37.3，77.5，79.8，115.8，127.8，180.1，202.3；IR(neat)2930，2855，1720，1615，1450，1415，1370，1345，1335，1290，1255，1230，1195，1165，1145，1110，1075，1055，995，965，940，910，870，850，835cm-1；MS(EI)222(M+)，193，179，125，96，81，67，55，41；[α]D＝-32.5°(c＝0.962，CHCl3).Anal.(C13H1803)C，H。
(1S，2S，3R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-ethyl-4-cyclopenten-1-ol(9g).使用與7c相同的實驗過程，用815mg(3.67mmol)6g，通過硅膠色譜法，以得到634mg(77％)9g無色透明油1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.10(t，J＝7Hz，3H)，1.30-1.75(m，10H)，2.10(m，1H)，2.25(m，1H)，2.75(d，J＝10Hz，1H，exchanges with D2O)，4.50(m，1H)，4.70(dd，J＝5，5Hz，1H)，4.85(d，J＝5，1H)，5.45(s，1H)；13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ11.7，21.0，23.8，24.0，25.0，36.5，37.4，73.4，77.4，84.4，112.8，128.0，148.0；IR(neat)3540(br)，2930，2850，1645，1445，1430，1390，1360，1330，1275，1245，1225，1160，1110，1065，1040，980，945，930，900，870，845cm-1；MS(EI)224(M+)，195，181，126，109，95，81，69，55，41；[α]D＝+1°(c＝0.962，CHCl3).Anal.(C13H2003)C，H。
(1S，2R，3R)-2，3-(Cyclohexylidenedioxy)-4-ethyl-4-cyclopenten-1-olMethanesulfonate(17).用形成16的相同的實驗程序以得到定量的17無色透明油狀1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.15(t，J＝7Hz，3H)，1.30-1.70(m，10H)，2.15(m，1H)，2.30(m，1H)，3.15(s，3H)，4.85(m，2H)，5.40(m，1H)，5.50(d，J＝2Hz，1H)；13C-NMR(75MHz；CDCl3)δ11.4，21.4，23.9(two superimposedpeaks)，24.9，36.5，37.1，39.0，76.6，81.4，84.3，113.8，122.3，152.4；IR(neat)2960，2850，1645，1445，1430，1360，1280，1250，1225，1170，1120，1090，1050，1000，960，940，900，880，860，840，825cm-1；MS(EI)302(M+)，273，259，206，187，109，97，92，81，79，69，55，41。
(1’R，2’S，3’R)-9-[2’，3’-(Cyclohexylidenedioxy)-4’-ethyl-cyclopent-4-enyl]adenine(10g).化合物9g像6g一樣處理以得到10gmp207-208℃；1H-NMR(300MHz；CDCl3)δ1.20(t，J＝7Hz，3H)，1.30-1.80(m，10H)，2.35(m，2H)，4.65(d，J＝5，1H)，5.30(d，J＝5，1H)，5.50(s，1H)，5.55(s，1H)，6.15(br s，2H，NH2)，7.65(s，1H)，8.40(s，1H)；13C-NMR(75MHz；CDCl3)δ11.6，21.8，23.7，24.0，25.0，35.8，37.4，64.5，83.9，85.3，113.1，120.1，120.4，138.5，149.8，153.1，154.7，155.6；IR(KBr)3280，3130，2930，1680，1640，1605，1570，1465，1410，1360，1325，1300，1205，1160，1105，1040，730cm-1；MS(EI)341(M+)，298，243，134，109，55；[α]D＝-124°(c＝1.08，CHCl3)。
(1’R，2’S，3’R)-9-(2’，3’-Dihydroxy-4’-ethyl-4’-cyclopenyl)adenine(2g).像1c的合成中所描述的一樣水解縮酮10gmp212-214℃；1H-NMR(500MHz，DMSO-d6+D2O)δ1.05(t，J＝7Hz，3H)，2.15(m，2H)，4.25(dd，J＝5，5，1H)，4.40(d，J＝5，1H)，5.30(s，1H)，5.55(s，1H)，8.05(s，1H)，8.10(s，1H)；13C-NMR(125MHz，DMSO-d 6+D20)δ11.6，22.2，64.9，74.6，76.8，119.3，123.1，140.1，149.9，151.6，152.8，156.1；IR(KBr)3360，3320，3140(br)，2960，1650，，1605，1570，1480，1410，1325，1305，1245，1115，1050，860，800，690cm-1；MS(EI)m/e calcd for(M+1)of C12H15N502262.1304，found 262.1300；261(M+)，233，214，186，149，136，108.Anal.(C12H15N502)C，H，N。
實施例1具有抗增生作用的腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑在EFAD小鼠模型上的應(yīng)用抗增生核苷類似物的腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑由上述方法制備。9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物被個別的制成外敷聚乙烯藥膏，像上面所描述的，包括從0.001gm％到10gm％的丙二醇固體、聚乙二醇400和聚乙二醇3350中的有效成分，為了制造藥膏混合物。包含提高皮膚穿透能力的成分(例如，二甲基亞砜或AZONE.TM.)的類似配方也可以制成。
9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的藥膏被外敷在EFAD無毛鼠的背上，每份10.mu.1，6小時為一間隔，周期從6小時到5天。在每次完成一個間隔，殺死一只鼠，切離已處理組織，放入包含.sup.3H-胸苷脫氧核醣的組織培養(yǎng)基，進(jìn)行脈沖標(biāo)記，持續(xù)2小時，測量單、二和三磷酸酯在皮膚細(xì)胞增殖應(yīng)用的效果。然后用標(biāo)準(zhǔn)程序從組織上分離出DNA，.sup.3H-胸苷脫氧核糖進(jìn)入DNA的結(jié)合，通過在獨(dú)立的DNA個體中確定放射能(cpm/.mu.g of DNA)來測量。
有增生抑制作用的抗紅斑狼瘡9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的單、二和三磷酸酯的功效，通過比較放射能從未處理組織進(jìn)入DNA的結(jié)合情況來測定，用來自用不同的抗紅斑狼瘡藥劑配方處理過的組織的DNA。
每次皮膚活組織切片測試的有效成分的總數(shù)量，通過在藥膏配方藥劑中應(yīng)用有效成分gm％來確定，在鼠皮膚被化驗之前給予一定數(shù)量的應(yīng)用。對每一個試驗時間點，相應(yīng)的未處理時間點，用同一只鼠腹部的皮膚來化驗。.sup.3H-胸苷脫氧核醣從背部皮膚和腹部對照皮膚進(jìn)入DNA的結(jié)合的不同，被用來計算抑制細(xì)胞增殖的總百分比，作為被實施的每種磷酸酯的總數(shù)。
3H-結(jié)合的結(jié)果也被用來確定抑制百分?jǐn)?shù)(比較背部皮膚和腹部皮膚的結(jié)合)，作為每個單獨(dú)的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物試驗的時間。
.sup.3H-結(jié)合進(jìn)入相應(yīng)的DNA在用磷酸酯處理過的背部皮膚上的時間和被實施的有效成分的總數(shù)量，明顯的少于.sup.3H-結(jié)合進(jìn)入相應(yīng)的DNA在未處理的腹部皮膚上的。
實施例2具有抗增生作用的DHCaA及DHCeA，在移植過紅斑狼瘡性人類皮膚的老鼠上的應(yīng)用用皮膚活組織切片探測5-氟脫氧尿苷三磷酸鹽和5-氟尿苷三磷酸鹽的抗增生作用，當(dāng)對移植過人類紅斑狼瘡性皮膚的無胸腺老鼠實行外敷的時候。用文獻(xiàn)中所熟知的技術(shù)，將大約1-10mm直徑的人類紅斑狼瘡性皮膚移植到無胸腺鼠的背部。充分移植以后，用包括作為有效成分的DHCaA或DHCeA的抗紅斑狼瘡藥物，處理紅斑狼瘡性人類皮膚。這些化合物用例1中所描述的方法進(jìn)行合成。用包括有效成分的外敷聚乙烯藥膏的藥物制造，通過先前所述的方法用濃度0.1gm％到10gm％的有效成分。包含有效成分的藥膏以每份20.mu.1外敷在移植過皮膚的部分，在1-15天之間每6小時為一間隔。每處理24小時后，檢查被處理的皮膚，記錄紅斑狼瘡的全部指標(biāo)(皮膚切片和發(fā)炎的紅斑)。15天以后，皮膚從老鼠身上移除，用標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)技術(shù)，通過顯微鏡觀察活組織切片，以確定表皮細(xì)胞層的數(shù)量和皮膚里毛細(xì)血管膨脹的相對程度。
比較移植到無胸腺裸鼠身上被檢查的正常的和未處理的人類紅斑狼瘡性皮膚表皮細(xì)胞層的數(shù)量，以確定包含9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的治療效果。通過確定在適當(dāng)染色情況下，皮膚毛細(xì)血管中嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的數(shù)量，來測定組織炎癥相對程度的數(shù)量。記錄未處理紅斑狼瘡性皮膚和正常調(diào)節(jié)皮膚的毛細(xì)管膨脹的相對程度對比情況。
表皮細(xì)胞層的數(shù)量，炎癥的程度和毛細(xì)血管膨脹程度與治療的天數(shù)和有效成分的數(shù)量有關(guān)系，如9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物的濃度和用藥數(shù)量的確定。9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)和它們的3-位氮類似物，對相對于未處理紅斑狼瘡性皮膚的紅斑狼瘡癥狀都有明顯的治療作用。
權(quán)利要求
1.一種適合外敷的藥劑配方，其特征在于含有具有抵抗上皮細(xì)胞過度增殖的有效數(shù)量的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)，及其3-位氮類似物或其鹽類。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度為0.001gm％到100gm％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度大約從0.01gm％到10.0gm％。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度大約從0.1gm％到1.0gm％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任何一項權(quán)利要求所述的藥劑配方，其特征在于包含水溶性乳劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4任何一項權(quán)利要求所述的藥劑配方，其特征在于進(jìn)一步包含丙二醇、丙二醇400或丙二醇3350。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4任何一項權(quán)利要求所述藥劑配方，其特征在于進(jìn)一步包含皮膚的透增強(qiáng)因子。
8.一種適合外敷的藥劑配方，其特征在于，包含抵抗紅斑狼瘡的一定有效數(shù)量的9-[(1’R，2’S，3’R)-2’，3’-二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9-(反式-2’，反式-3’-二羥基環(huán)戊-4’-烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)，及其3-位氮類似物或其鹽類。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度大約從0.001gm％到50gm％。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度大約從0.01gm％到10.0gm％。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥劑配方，其特征在于DHCaA或DHCeA，及其3-位氮類似物或其鹽類的濃度大約從0.1gm％到1.0gm％。
12.根據(jù)權(quán)利要求8至11任何一項權(quán)利要求所述藥劑配方，其特征在于包含水溶性乳劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求8至11任何一項權(quán)利要求所述藥劑配方，其特征在于進(jìn)一步包含丙二醇、丙二醇400或丙二醇3350。
14.根據(jù)權(quán)利要求8至11任何一項權(quán)利要求所述藥劑配方，其特征在于進(jìn)一步包含皮膚的透增強(qiáng)因子。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑配方，其中對抵抗上皮細(xì)胞過度增殖包括遺傳過敏性皮炎、扁平苔蘚、光化性角化病、基層細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抑制細(xì)胞增殖的腺苷同型半胱胺酸水解酶抑制劑9－[(1’R，2’S，3’R)－2’，3’－二羥基環(huán)戊基]腺嘌呤(DHCaA)、9－(反式－2’，反式－3’－二羥基環(huán)戊－4’－烯基酯)腺嘌呤(DHCeA)，及其3－位氮類似物以及該抑制劑在治療紅斑狼瘡及其過敏性皮炎藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61K9/107GK1626088SQ20031011722
公開日2005年6月15日 申請日期2003年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月8日
發(fā)明者余凱茜, 劉希 申請人:北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司