專利名稱：蘆薈內(nèi)脂在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物蘆薈內(nèi)脂5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮的用途，尤其是在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
蘆薈內(nèi)脂Synonym5-hydroxy-6-octen-4-olide，Aloelactone 5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮為一已知化合物，1969年，Evans Jr，RH，Ellested GA andKunstann MP在《Tetrahedron Lett.》雜志上首次報導(dǎo)從一株未鑒定的黑孢霉菌培養(yǎng)液分離得到5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮化合物。在國際通用的hdsch軟件化合物庫中檢索，顯示如下名稱5-羥基-6辛烯基-4-脂(5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮)，化合物注冊編號23790-99-0，分子式C8H12O3，分子量156.08。但公開文獻中并未報道蘆薈內(nèi)脂的用途。1996年，Zeeck，A.及Burkhardt，K.等人，在抗生物活性雜志《J.Antibiot.》上，報導(dǎo)了上述化合物對部分病原細菌有抗性作用，1998年，F(xiàn)ukushima，T.等人，植物化學(xué)《Phytochemistry》上，報導(dǎo)了在含有上述化合物與其他2種內(nèi)脂化合物的培養(yǎng)液對溫室植物病害有預(yù)防作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供蘆薈內(nèi)脂的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
本發(fā)明涉及蘆薈內(nèi)脂作為制備治療抗皮膚真菌的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及蘆薈內(nèi)脂作為制備治療抗腫瘤的藥中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用蘆薈內(nèi)脂的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
一、經(jīng)動物(小鼠)灌胃及注射急性毒性試驗，證明本化合物使用安全。
二、抗皮膚真菌活性供試樣品單體化合物蘆薈內(nèi)脂，提取分離自云南元江蘆薈植物元江黑孢菌的發(fā)酵產(chǎn)物。
樣品數(shù)量5mg。
試劑二甲基亞砜Dimethy Sulfoxide (CH3)2SO4國產(chǎn)(CP)培養(yǎng)基固體沙孢弱培養(yǎng)基；PDA液體培養(yǎng)基方法1用無菌水洗下星型石膏樣毛癬皮膚真菌孢子，制成孢子懸液，取0.5ml孢子懸液于固體沙孢弱培養(yǎng)基平皿上涂皿，將無菌鋼管—即牛津杯置于平板培養(yǎng)基上，加入濃度為1mg/ml二甲亞砜溶解的蘆薈內(nèi)脂單體化合物0.2ml，置于28℃±2℃培養(yǎng)72h，抑菌圈直徑達到45mm。說明蘆薈內(nèi)脂單體化合物對星型石膏樣毛癬皮膚真菌(Trichophyton gypseum astenides)具有很強的抑制生長活性。
方法2在5ml含有5％濃度的毛癬皮膚真菌孢子液體(PDA)培養(yǎng)基中，加入蘆薈內(nèi)脂單體化合物，置于28℃±2℃靜止培養(yǎng)72h后，觀查化合物對皮膚真菌星型石膏樣毛癬菌(Trichophyton gypseum astenides)的抑制生長情況。結(jié)果顯示，加入劑量150-200ug/ml時，蘆薈內(nèi)脂單體化合物對星型石膏樣毛癬菌生長抑制率達到80-90％范圍內(nèi)。
三、抗腫瘤活性就蘆薈內(nèi)脂單體化合物，采用細胞學(xué)培養(yǎng)方法，觀察該單體化合物對供試腫瘤細胞生長的抑制作用。
1、材料1.1供試樣品單體化合物蘆薈內(nèi)脂。
1.2樣品數(shù)量5mg。
1.3試劑二甲基亞砜Dimethy Sulfoxide (CH3)2SO4國產(chǎn)(CP)EDTA乙二胺四乙酸ethylene diamietetraacetic acid(國產(chǎn))三蒸餾水，蒸餾水重蒸2次。
新生牛血清Newborn Calf Serum，NCS，美國HyClone-PIERECE公司提供。
胰蛋白酶(1∶250)豬胰蛋白酶干粉，美國HyClone-PIERECE公司提供。
0.25％的胰蛋白酶溶液含有0.5g/L豬胰蛋白酶(1∶250)溶于三蒸餾水，同時加入0.5mM的EDTA試液1ml，-20℃保存。
1.4細胞培養(yǎng)基(美國HyClone-PIERECE公司提供)DMEM低糖Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium。
Low Glucose；RPMI-1640，含有L-谷氨酰胺2.05mM；不含碳酸氫鈉；含酚紅。
2、細胞系MolT-4白血病淋巴細胞 懸浮培養(yǎng)K-562 骨髓白血病淋巴細胞 懸浮培養(yǎng)CA人肝癌細胞貼壁培養(yǎng) 貼壁培養(yǎng)HAS-84人肺癌細胞貼壁培養(yǎng) 貼壁培養(yǎng)HSC 人胃癌細胞貼壁培養(yǎng) 貼壁培養(yǎng)上述細胞系由中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會，中科院昆明動物研究所細胞庫提供。
3、方法3.1樣品處理取供試樣品5mg，加入2.5ml二甲基亞砜溶解，制成含量2000ug/ml供試液。根據(jù)國際抗腫瘤活性檢測標準原則，供試樣品最終稀釋劑量為10ug/ml。
3.2細胞培養(yǎng)在無菌操作條件下，MolT-4、K-562懸浮腫瘤細胞及CA人肝癌貼壁細胞37℃培養(yǎng)48hr，每24小時計算細胞生長數(shù)量。
4、觀察分別記錄24hr-48hr期間細胞生長情況，同時檢測細胞數(shù)量。
5、結(jié)果按照中華人民共和國醫(yī)藥管理局“新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則”中化合物IC50≤10ug/ml判為有效的規(guī)定評價標準。蘆薈植物內(nèi)生真菌單體化合物蘆薈內(nèi)酯對MolT4白血病淋巴細胞、K562骨髓白血病淋巴細胞以及CA人肝腫瘤細胞生長抑制作用的實驗表明，以10ug/ml劑量，蘆薈內(nèi)酯化合物對上述3種腫瘤細胞生長具有較強的抑制作用。其中，對CA人肝臟腫瘤細胞生長的抑制率為65.67％；MolT4白血病淋巴細胞生長的抑制率是62.50％；而K562骨髓白血病淋巴細胞生長的抑制率60.25％。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本發(fā)明對已知化合物蘆薈內(nèi)脂發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
2、本發(fā)明的蘆薈內(nèi)脂安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。
3、本發(fā)明的蘆薈內(nèi)脂可從多種渠道獲得，如1979年，Asaaka，M.等人在日本化學(xué)公報《Bull.Chem.Soc.Jpn.》上，報導(dǎo)了采用化學(xué)人工方法合成了5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮化合物；也可由微生物途徑獲得。
4、本發(fā)明的蘆薈內(nèi)脂配制成的藥物可為多種劑型，如口服膠囊劑、片劑型、皮膚用劑、軟膏劑型等。
具體實施例方式
實施例1蘆薈內(nèi)脂的提取取元江黑孢菌(Nigrospora yuanjiangensis sp.nov.Chenet Yin)作為發(fā)酵獲取蘆薈內(nèi)脂化合物的出發(fā)菌株，以馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)為發(fā)酵基質(zhì)。采用液態(tài)發(fā)酵技術(shù)，收集發(fā)酵液置容器內(nèi)。按發(fā)酵液與乙酸乙酯溶劑1∶4比例(v/v)萃取發(fā)酵液，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮得到蘆薈內(nèi)脂粗提物。取蘆薈內(nèi)脂粗提物適量，采用國產(chǎn)硅膠(Silica)進行第1次柱層析分離，以溶劑氯仿-甲醇(95∶5)洗脫得到分離物F1、F2、F3。取濃縮分離物F2進行第2次硅膠柱層析分離，以溶劑氯仿-丙酮(8∶2)洗脫得到含有蘆薈內(nèi)脂的混合物H1、H2。再取濃縮混合物H2進行第3次硅膠柱層析分離，以溶劑石油醚-乙酸乙酯(6∶4)洗脫后，濃縮揮棄溶劑即得蘆薈內(nèi)脂[(5-(1-羥基-2-丁烯基)-二氫呋喃-2-酮)]。
片劑的制備片劑成分為蘆薈內(nèi)脂、二甲基亞砜(DMSO)、可溶性淀粉、硬脂酸鎂和羥丙基甲基纖維素(HPMCP)。首先按規(guī)格、劑量要求用二甲基亞砜(DMSO)對蘆薈內(nèi)脂進行溶解，其余原料粉碎過篩，稱量待用。將定量溶解的蘆薈內(nèi)脂和可溶性淀粉倒入混合機充分混合均勻，加入80％藥用乙醇作為濕潤劑，繼續(xù)混合至16-18目篩的顆粒機進行制粒形成片芯，然后將片芯置60℃下干燥。干燥后的片芯加入硬脂酸鎂及羥丙基甲基纖維素(HPMCP)6-9％的乙醇溶液，混合均勻后，采用壓片機進行壓片即成。
實施例2由已知方法提取蘆薈內(nèi)脂。
膠囊的制備按劑量要求，先取蘆薈內(nèi)脂一定量，溶解于適量的二甲基亞砜(DMSO)溶劑中；同時對環(huán)狀糊精(或淀粉)原料進行粉碎過篩，稱量備用。將溶解于二甲基亞砜的蘆薈內(nèi)脂、3-5％甘油乙醇溶液及環(huán)狀糊精(或淀粉)投入混合機內(nèi)混合均勻，60℃下干燥，取出后過80目孔篩。以2號或3號規(guī)格硬膠囊，采用自動膠襄充填機，將一定量的蘆薈內(nèi)脂及輔料制成均勻的粉末充填于空心膠囊中制成。
實施例3由已知方法提取蘆薈內(nèi)脂。
皮膚用劑的制備蘆薈內(nèi)脂皮膚用劑涂敷皮膚表面，在局部發(fā)生作用以防治皮膚真菌疾患。稱取蘆薈內(nèi)脂單體化合物10克，并溶解于二甲基亞砜(DMSO)50ml甲醇溶液中，室溫下緩慢攪拌使其充分溶解，得到溶解液A。稱取羥乙基纖維素(HEC)25克，另取一容器中加入無菌水250ml，在低速攪拌下加入羥乙基纖維素，攪拌至所有物料完全濕透，得到羥乙基纖維素溶解液B。再取一容器中加入水200ml，加熱至80-90℃，在不斷攪拌下慢慢加入甲基纖維素(MC)10克，所形成的淤漿，經(jīng)降溫冷卻后，得到溶解液C。將溶液A、B、C溶液A、B、C混合于容器內(nèi)，攪拌均勻后，又取丙二醇1.0克，尿素0.5克加入混合A、B、C溶解液中，溶解即為抗皮膚真菌蘆薈內(nèi)脂皮膚用劑。
此方法制備的蘆薈內(nèi)脂皮膚用劑，可引起皮膚屏障變化或改變毛囊和皮脂腺途徑，減低皮膚對滲透的阻力，起到防治皮膚真菌疾病的較好作用。
實施例4蘆薈內(nèi)脂的提取同實施例1。
軟膏劑的制備取實施例3中的蘆薈內(nèi)脂皮膚用劑100ml，按重量/體積百分比計算，加入凡士林0.8-1.0％；植物油0.2-0.4％；氮酮1.0-1.5％；聚乙二醇0.3-0.5％；羊毛脂2-5％，水浴加熱溶化后，混合攪拌均勻即為蘆薈內(nèi)脂軟膏劑。此外，以0.1-0.2mg/劑量的蘆薈內(nèi)脂加入1％氟脲嘧啶丙二醇溶液和5％的氟脲嘧啶軟膏同樣具有很好的抗皮膚真菌的效果。
權(quán)利要求
1.蘆薈內(nèi)脂在制備治療抗皮膚真菌的藥中的應(yīng)用。
2.蘆薈內(nèi)脂在制備治療抗腫瘤的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種化合物蘆薈內(nèi)脂5－(1－羥基－2－丁烯基)－二氫呋喃－2－酮的用途，尤其是在制藥領(lǐng)域中的用途。本發(fā)明涉及蘆薈內(nèi)脂作為制備治療抗皮膚真菌的藥中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及蘆薈內(nèi)脂作為制備治療抗腫瘤的藥中的應(yīng)用。蘆薈內(nèi)酯對MolT
文檔編號A61P17/00GK1623541SQ20031011932
公開日2005年6月8日 申請日期2003年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月4日
發(fā)明者陳有為, 李治瀅, 尹建雯, 周斌, 楊麗源, 李紹蘭 申請人:云南省微生物研究所