專利名稱：合成的內(nèi)酯制劑及其使用方法
技術領域：
本申請要求2002年11月5日提交美國臨時專利申請60/424,045的優(yōu)先權。
本發(fā)明屬于藥物活性內(nèi)酯、其藥物制劑及其使用方法，以及合成制備有效用作抗癌癥、抗感染和抗炎劑的化學功能性內(nèi)酯的方法的領域。
背景技術：
盡管已經(jīng)多種不同的化合物被開發(fā)用于有效治療感染、癌癥和其他失調(diào)，仍然存在著對開發(fā)新化合物的需求，使其能夠在更低劑量下有效、更具選擇性和更有效，具有更少的副作用或能治療使用已知的化合物治療產(chǎn)生抗性的疾病或失調(diào)。
化學治療劑被用于治療感染、癌癥、異常增殖紊亂(子宮內(nèi)膜異位、再狹窄、牛皮蘚)、和其他失調(diào)。絕大多數(shù)化學治療劑由于缺乏特異性爾具有副作用。例如，癌癥是致死的首要原因之一。治療癌癥的一種主要模式，化療，被用于特異性限制細胞生長和增殖。絕大多數(shù)化療制劑也影響正常組織(如骨髓、毛囊等)的腫瘤和快速增殖細胞，而產(chǎn)生數(shù)種副作用包括脫發(fā)、惡心、嘔吐和骨髓功能抑制。此外，這些制劑的有效性經(jīng)常由于抗性的產(chǎn)生而隨著時間減弱。
化療制劑的抗性在治療細菌疾病或真菌疾病時表現(xiàn)更為顯著。例如，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)在美國導致大量人口胃失調(diào)。缺乏對這些失調(diào)的有效治療會導致產(chǎn)生消化性潰瘍、胃炎、消化不良和胃癌。另外的常見細菌疾病是牙周疾病，主要的治病因素是細菌斑，其可以導致發(fā)展為牙周炎并最終牙齒脫落。
因此本發(fā)明的一個目的是提供一類新的可有效作為抗感染、抗增殖和抗炎劑的化合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供有效的抗腫瘤制劑，其具有特異的細胞毒性能使副作用最小化。
本發(fā)明的另一個目的是提供特異性并且不同于目前使用的多種其他藥物的抗感染制劑，為藥物抗性生物體提供替代的治療方法。
發(fā)明概述本發(fā)明開發(fā)了具有內(nèi)酯結(jié)構的通式Ia，Ib和Ic的天然和合成的化合物，和使用和制備所述化合物的方法，以及用于所述化合物給藥的組合物。該化合物可用作抗細菌、抗真菌和抗炎劑，并可用于治療增殖失調(diào)如黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌。該化合物還有效用于治療或預防炎性疾病如關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官移植排斥。此外，它們還可有效用于治療或預防細菌和真菌感染，包括治療消化性潰瘍、胃炎、消化不良和胃癌、齒齦炎以及牙周炎。
制備通式Ia，Ib和Ic的化合物的方法包括a)提供具有內(nèi)酯結(jié)構的前體，和b)將前體與一種或多種化學試劑反應產(chǎn)生該化合物。該化合物可通過與諸如醇、醇鹽、胺的親核試劑，或任何其他中性或帶負電荷的親核物質(zhì)反應而進一步衍生化。
發(fā)明詳述I.內(nèi)酯組合物內(nèi)酯本發(fā)明公開了內(nèi)酯和其各自在γ位帶有羥基的衍生物。內(nèi)酯和其衍生物能夠合成或從天然來源獲得。在一個實施方案中，內(nèi)酯和衍生物可利用色譜方法從植物中分離到，所述植物的分類學名稱為Securidaca virgata，屬于植物中的遠志科。這里使用的術語“內(nèi)酯”包括其中C＝O基團的氧原子能被硫原子或氮基取代的任何具有五元環(huán)內(nèi)酯結(jié)構的有機化合物。此處使用的術語“衍生物”指任何由內(nèi)酯與一種或多種化學試劑反應制成的化合物。該術語還指任何用有機或無機的親核試劑使內(nèi)酯用開環(huán)形成的產(chǎn)物，例如酸、酯、酰氨或其任何其他產(chǎn)物。
在一個實施方案中，內(nèi)酯具有下列的化學結(jié)構 式Ia其中R1-R6獨立地為氫原子、鹵原子、羥基或任何含有任意數(shù)目碳原子優(yōu)選1-8個碳原子的其它有機基團，并任選地在線性，分支或環(huán)狀結(jié)構中包括雜原子如氧原子、硫原子或氮基，代表性的R1-R6基團為H，烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基，取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺?；⑷〈幕酋；?、磺酸、磷?；?、取代的磷?；㈧Ⅴ；?、取代的膦?；?、多芳基、、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽或多肽基團；Z是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；和X是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子。
在另一個實施方案中，內(nèi)酯具有下列的化學結(jié)構 式Ib其中R1-R4獨立地為氫原子、鹵原子、羥基或任何含有任意數(shù)目碳原子，優(yōu)選為1-8個碳原子的其它有機基團，并任選在線性、分支或環(huán)狀結(jié)構中包括例如氧、硫或氮基的雜原子，代表性的R1-R4為H、烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺?；?、取代的磺?；⒒撬?、磷?；?、取代的磷?；㈧Ⅴ；⑷〈撵Ⅴ；⒍喾蓟?、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽或多肽基團；X是線性、分支或環(huán)狀結(jié)構式中例如氧原子、硫原子或氮基的雜原子；和Z是線性、分支或環(huán)狀結(jié)構式中例如氧原子、硫原子或氮基的雜原子。
在另外一個實施方案中，具有α亞甲基的內(nèi)酯具有下列的結(jié)構
式Ic其中R1-R4分別可以是氫原子、鹵原子、羥基或任何含有任意數(shù)目碳原子，優(yōu)選為1-8個碳原子的有機基團，并任選在線性、分支或環(huán)狀結(jié)構中包括例如氧、硫或氮基的雜原子，代表性的R1-R4為烷基、烯丙基、取代的烷基、鏈烯基、烯丙基、取代的烯丙基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺?；?、取代的磺?；?、磺酸、磷?；?、取代的磷?；㈧Ⅴ；?、取代的膦酰基、多芳基、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽或多肽基團；Z是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；和X是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子。
通式Ia，Ib和Ic的代表性的內(nèi)酯列于表1
表1.代表性的合成內(nèi)酪

通式Ia，Ib或Ic的化合物的藥物可接受的酸加成鹽可以通過常規(guī)的方法制備，即用大約一化學當量的藥物用酸的處理通式I的游離堿的溶液或懸液。常規(guī)的濃縮和重結(jié)晶技術被用來分離該鹽。
含有酸基的通式1的化合物的藥用堿加成鹽可以通過常規(guī)的方法從酸制備，例如，與大約一化學當量的堿反應。
B.賦形劑內(nèi)酯和功能性衍生物可使用常規(guī)的技術制備用于腸、非腸道的或局部給藥(參見，例如，受控藥品遞送百科全書Encyclopedia ofControlled Drug Delivery，Edith Mathiowitz，Ed.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，1999)?？梢曰诒绢I域技術人員公知的體外分析，如實施例中描述的分析，來確定有效劑量。
適合用于非腸道遞送的合適藥物載體包括無菌的鹽水、磷酸鹽緩沖液、無致熱源的無菌介質(zhì)和用于注射的標準微粒制劑，包括聚合的微球體、微膠囊、脂質(zhì)體和乳劑。這些可包括可降解的聚合物如聚乳酸和聚乙醇酸，及其共聚物，聚酸酐、聚原酸酯、聚羥基鏈烷酸酯。
合適的藥用載體包括滑石、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、可可油、水或非水載體、動物或植物來源的脂肪物質(zhì)、石蠟衍生物、乙二醇、各種濕潤劑、分散劑或乳化劑和防腐劑。
對注射而言，內(nèi)酯通常制備成于液體載體中的溶液或懸液的制劑。
對局部給藥而言，內(nèi)酯可以制劑成油膏、乳霜、洗液、凝膠、噴霧或控制的或持續(xù)釋放的制劑(例如透皮貼劑)。
對腸道給藥而言，內(nèi)酯可以制劑成片劑、膠囊、顆粒、栓劑、懸液或溶液、溶解或封裝在諸如乳糖的糖，諸如硬脂酸鎂的惰性化合物、石蠟衍生物、乙二醇或阿拉伯膠的賦形劑中。該制劑可以進一步包括染料、調(diào)味料、防腐劑、分散劑或乳化劑、或修飾制劑的釋放或穩(wěn)定性能的物質(zhì)。
這些活性化合物可與另一種藥物可接受下列抗微生物劑組合使用硝基咪唑抗生素，例如，替硝唑和甲硝唑；四環(huán)素，如四環(huán)素、強力霉素和二甲胺四環(huán)素；青霉素，如阿莫西林和美洛西林；頭孢菌素，如頭孢克洛、頭孢羥氨芐、吐根酚堿、頭孢呋辛、頭孢呋辛乙酰氧乙酯、頭孢氨卞、頭孢泊肟普昔酯、頭孢他啶和頭孢曲秦；碳青霉素烯類，如亞胺培南和米諾配能；氨基葡糖苷，如巴龍霉素；大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，如紅霉素、甲基紅霉素和阿齊霉素；林可胺類抗生素，如氯林可霉素；利福霉素，如利福平；和硝基呋喃妥英。
這些化合物于藥物降酸試劑的組合可以用于治療酸相關的失調(diào)，如酸泵抑制劑，例如，奧美拉唑和蘭索拉唑，或H2拮抗劑，例如雷尼替丁、西咪替丁和法莫替丁。
II.內(nèi)酯的合成通式Ia，Ib和Ic的合成包括a)形成具有內(nèi)酯結(jié)構的中間物或前體，和b)將中間物與一種或多種合適的化學試劑反應，生成通式Ia，Ib和Ic的內(nèi)酯。
在一個實施方案中，該方法包括a)提供具有下列結(jié)構的前體 式II
和b)將前體與一種或多種合適的化學試劑反應，以提供通式Ia，Ib和Ic的內(nèi)酯(反應流程

圖1)。
(反應流程圖1)
如反應流程圖1所示，乙炔能與乙醛在存在膦化物[CH3(CH2)3]3P的情況下進行反應，生成化合物A，其經(jīng)過環(huán)重組反應形成烯醇形式的化合物B。烯醇化合物B與其酮式的化合物C處于平衡?；衔顱或C在存在堿，如丁基鋰、碳酸鈉、氫氧化鈉或甲醇鈉或乙醇鈉的情況下形成化合物E(通式Ic)或F(通式Ia，Ib)。或者，烯醇化合物B可與NaBH4進行還原反應形成飽和的化合物D?；衔顳經(jīng)過與HCO2Et的濃縮反應而形成外環(huán)烯醇酯，化合物G，然后由甲?；┻€原形成化合物H?；衔颒能容易地使用例如鹵代烷基在堿存在的情況下衍生形成化合物I(通式Ia)，所述的堿例如為碳酸鈉、氫氧化鈉或甲醇鈉或乙醇鈉。
更官能化的內(nèi)酯能通過本領域容易獲得的合成方法而制備(參見，例如March，高級有機化學(Advanced OrganicChemistry，)第四版，1992，Wiley-Interscience Publication，New York)。
酸或例如胺的堿的形式的通式Ia-c的內(nèi)酯化合物的藥用鹽，可通過用約一化學當量的藥用堿或者酸處理通式Ia-c的化合物溶液或懸液以常規(guī)方式制備。常規(guī)的濃縮和重結(jié)晶技術被用于分離該鹽。
III.治療方法A.待治療的失調(diào)內(nèi)酯可有效用作抗感染、抗增殖和抗炎劑來預防或治療廣譜的失調(diào)。尤其是，內(nèi)酯可有效用于治療包括，例如癌癥、牙齦炎、牙周炎、幽門螺桿菌引起的疾病、細菌引起的疾病、真菌引起的疾病和炎性疾病等失調(diào)。
內(nèi)酯可被制備成殺真菌組合物、抗細菌組合物、抗癌組合物和抗炎組合物。殺真菌組合物包括殺真菌有效量的通式Ia，Ib或Ic的化合物或其鹽和惰性的藥物載體。殺真菌組合物對釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、白假絲酵母(Candida albicazzs)和其他假絲酵母如光滑假絲酵母(Candida glabrata)、克柔假絲酵母(krusei)、熱帶假絲酵母(tropicalis)、假熱帶假絲酵母(pseudotropicalis)和近平滑假絲酵母(parapsilosis)尤其有效，對煙曲霉(Aspergillus fumigatus)，黃曲霉(Aspergillus flavus)，黑曲霉(Aspergillus niger)，新生隱球菌(Cryptococcusneoformans)，犬小孢子菌(Microsporurzz canis)，深紅色毛癬菌(Trichophyton rubrun)，須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophyte)尤其有效，并尤其抵抗消化道、尿道、陰道和皮膚的念珠菌病、隱球菌病，例如神經(jīng)腦膜、肺部或皮膚隱球菌病、支氣管肺和肺的曲霉病和侵入性的免疫抑制系統(tǒng)的曲霉病。該組合物還可用于預防先天的和獲得性免疫抑制系統(tǒng)的真菌感染。
內(nèi)酯可被施用以治療或預防炎性疾病。代表性的炎性疾病包括關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官抑制排斥，諸如腎移植、肝移植、肺移植和心臟移植。
內(nèi)酯還可以被施用以治療增殖性失調(diào)，包括癌癥。顯示對細胞生長或增殖有抑制作用的癌癥的代表類型包括黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌。內(nèi)酯可有效治療的其他類型的異常增殖失調(diào)包括子宮內(nèi)膜異位和血管成形術后內(nèi)皮組織的異常過度增殖導致的再狹窄。
抗細菌組合物可被施用以治療或預防細菌性失調(diào)，包括，例如由幽門螺桿菌引起的疾病如胃潰瘍、胃炎、消化不良和胃癌。有效用于治療和預防幽門螺桿菌引起的疾病的抗細菌組合物可以與另一種藥物可接受的抗微生物劑或藥物可接受的降酸試劑組合使用。
內(nèi)酯抗細菌組合物可有效治療或預防口腔疾病，如牙周炎、牙菌斑和牙齦炎該組合物可有效抵抗與牙齦炎相關的特異性厭氧性革蘭氏陰性微生物。內(nèi)酯組合物可溶解在口腔介質(zhì)中以口腔制劑的形式局部施用到動物的口腔中?？谇恢苿┛梢岳缈谇幌匆汉脱栏嗟男问酱嬖凇?nèi)酯組合物還可制備成通過將內(nèi)酯組合物表皮涂敷到口腔而改善口腔衛(wèi)生的口腔組合物中。
B.劑量根據(jù)待治療的疾病或病癥、給藥方式和劑型來決定有效量。有效劑量可根據(jù)實施例中描述的那些體外分析決定的有效劑量來常規(guī)決定。
一類抗大腸桿菌(Eschericlzia coli)、肺炎克雷伯桿菌(Klebsielapneurrzoniae)、產(chǎn)氣假單孢菌(Pseudomona aeroginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)的α甲基內(nèi)酯，4，5-二氫-3-亞甲基-2[3H]呋喃酮(″Securolide″或″LMSV-6″)的高活性和低分子量是非常有益的。Securolide的優(yōu)點包括其能方便快捷促進藥理反應；其能跨越細胞膜屏障，此處高分子量是主要的障礙，和其抗多種藥物抗性微生物中的一種的假單孢菌的潛在活性。
抵抗真菌感染的方法包括施用殺真菌有效量的通式I的化合物或其酸加成鹽，以口腔、直腸、非腸道的途徑或通過局部途徑表皮涂敷到皮膚或粘膜上，但優(yōu)選給藥途徑是口腔。根據(jù)給藥的方法、治療狀況和特定的化合物，通常每天劑量為1-5mg/kg。
該化合物可以單獨給藥，但通常與根據(jù)指定的給藥途徑和標準的藥物實踐選擇的藥物載體混合給藥。例如，它們能口服給藥，或以含有諸如淀粉或乳糖等賦形劑的片劑形式給藥，或以膠囊形式單獨給藥或與賦形劑混合給藥，或以含有調(diào)味料或著色劑的酏劑或懸液的形式給藥。在動物的情況下，它們以大約5到5000ppm的濃度最好包含在動物飼料或飲料中，優(yōu)選大約25到500ppm。它們可以非腸道的方式注射，例如，肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下注射。對腸胃外給藥，它們最好以包含其他溶質(zhì)的無菌水溶液，例如足夠的鹽或葡萄糖，以使該溶液等滲的形式使用。在動物的情況下，化合物能以大約0.1到大約50mg/kg/天的劑量水平肌內(nèi)給藥或皮下給藥，優(yōu)選每天單次給藥或分四次給藥大約0.2到10mg/kg/天。
該化合物可通過口服或腸胃外的途徑對人給藥以治療幽門螺桿菌感染，并可以以大約0.1到大約50mg/kg的劑量水平，優(yōu)選大約0.5到50mg/kg/天單次給藥或分四次口服給藥。對肌內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥而言，劑量水平在大約0.1到大約100mg/kg/天，優(yōu)選約0.5到約50mg/kg/天。雖然肌內(nèi)給藥可以使單劑量或最多分4次劑量，而靜脈內(nèi)給藥可包括連續(xù)的滴注。根據(jù)治療受試者的重量和疾病狀況和特定選擇的給藥途徑，各種修改對本領域技術人員是顯而易見的。
第二種抗微生物劑和降酸劑可以與上述討論的本發(fā)明的該化合物以相同的方式給藥。因此，根據(jù)特定的藥劑，給藥可以是口服大約0.1到大約500mg/kg，例如每天給藥第二種抗微生物劑大約1到3g，及每天大約40到80mg降酸劑，或以大約0.1到大約200mg/kg/天注射。
C.給藥方式內(nèi)酯組合物可以任何合適的給藥方式施用到溫血動物。給藥模式可以是局部給藥或全身給藥。給藥方式可以根據(jù)待治療或預防的失調(diào)而不同。
該組合物可通過腸道、非腸道或局部給藥的方式施用于動物。代表性的給藥方式包括口服給藥，鼻腔給藥、肺部給藥、血管給藥、皮下注射、透皮給藥、粘膜給藥和通過口腔、直腸或陰道途徑給藥。本發(fā)明參考下述非限制性的實施例進一步闡明。
實施例1微生物敏感性分析培養(yǎng)基溶劑磷酸緩沖液0.1N，pH＝8.0
抗生素LMSV-6(Securolide) Securolide培養(yǎng)基涂層2mL/100mL培養(yǎng)基接種物4mL/皮氏培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的制備金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基(USP 23<81>)蛋白胨....................................................1.0g消化的胰酪蛋白(caseine)...................................4.0g酵母提取物................................................3.0g牛肉提取物................................................1.5g葡萄糖....................................................1.0g瓊脂......................................................15.0g加水至約1.0L滅菌后pH6.6±0.1產(chǎn)氣假單孢菌的培養(yǎng)基(USP 23<81>)胰消化的酪蛋白(caseine)...................................17.0g大豆木瓜蛋白酶消化物......................................3.0g氯化鈉....................................................5.0g磷酸氫二鉀................................................2.5g葡萄糖....................................................2.5g瓊脂......................................................20.0g加水至1.0L滅菌后pH7.2～0.1大腸桿菌和克雷伯肺炎桿菌(K.neumoniae)的培養(yǎng)基(根據(jù)USP 23<81>)蛋白胨....................................................5.0g酵母提取物................................................1.5g牛肉提取物................................................1.5g氯化鈉....................................................3.5g葡萄糖....................................................1.0g磷酸氫二鉀................................................3.68g磷酸二氫鉀................................................1.32g加水至1.0L滅菌后pH7.0士0.05抗細菌活性分析(最低抑制濃度，MIC)(MIC)檢測No.1方法將pH＝8的Mueler Hinton培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)板中緩沖液pH＝8，用于頭孢三嗪模式稀釋2％的TWEENTM 20用作樣品稀釋使用的微生物藤黃八疊球菌(Sarcina lutea)樣品(S)LMSV-6(5純μL施用到敏感平皿上)模式(P)頭孢三嗪(帶有10μg的平皿)P(mm) S(mm)12401544X＝127×100＝295.35％(考慮到10μg頭孢三嗪)164343127抑制樣品區(qū)比模式區(qū)大三倍。
(MIC)檢測No 2方法將pH＝8的Mueler Hinton培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)板中緩沖液pH＝8，用作頭孢三嗪模式稀釋
2％TWEEN 20用作樣品稀釋使用的微生物藤黃八疊球菌樣品(S)16.0微升/100mL及施用10μL到敏感平皿上)模式(P)頭孢三嗪(帶有10μg的平皿)P(mm) S(mm)18 2016 23151949 62X＝62×100＝126.53％(考慮到10μg頭孢三嗪)49(MIC)檢測No.3方法將pH＝8的Mueler Hinton培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)板中緩沖液pH＝8，用作頭孢三嗪模式稀釋2％TWEEN 20用作LMSV-6(Securolide)稀釋使用的微生物藤黃八疊球菌樣品(S)(10微升/10mL及施用20μL到敏感平皿上)模式(P)頭孢三嗪(帶有10μg的平皿)P(mm) S(mm)18 316 315 44910X＝10×100＝20.4％(考慮到10μg頭孢三嗪)4949 10X＝10×100＝20.4％(考慮到10μg頭孢三嗪)49
沒有出現(xiàn)明顯的抑制區(qū)，因此最低抑制濃度(MIC)非常接近于0.2μL的LMSV-6。
施用到平皿的體積抑制區(qū)5μL................................................42.0mm1.6M................................................20.0mmMIC為0.2μL的LMSV-6.................................3.3mm結(jié)果和討論大鼠在手術中感染，然后使感染發(fā)展并成功應用Securolide治療。這些內(nèi)酯抗大腸桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、產(chǎn)氣假單孢菌、金黃色葡萄球菌的高活性和其低分子量是有利的。這些檢測清楚表明Securolide具有對難以消滅的微生物之一的假單孢菌的高活性。
實施例2抗真菌活性的確定材料和方法使用重量18到22g的雌性小鼠，以每鼠106CFU(CFU菌落形成單位)的速度將一定量的白假絲酵母44858施用尾靜脈。小鼠被分成每批五只，共五批，并以下述的方式進行處理感染后1小時第一組小鼠以25mg/kg口服給藥所述產(chǎn)品，第二組小鼠以25mg/kg的劑量腹膜內(nèi)給藥所述產(chǎn)品，第三組小鼠以25mg/kg口服給藥酮康唑，第四組小鼠以25mg/kg的劑量腹膜內(nèi)給藥酮康唑，第五組小鼠不接受任何抗真菌治療。
在22天后計數(shù)死亡的小鼠數(shù)。
結(jié)果和討論所述產(chǎn)物的活性在上述兩種給藥方式下是非常優(yōu)異的。在帶有皮膚真菌，例如毛癬菌的“表皮模式”和在亞致死量的模式中，同樣的治療也是有效的。
最低抑制濃度(MIC)白假絲酵母細胞如J.Antimicrobial Chemotherapy，38，579-587的方法制備，并用0.1M的磷酸鹽溶液洗3次，然后立即用以確定最低抑制濃度(MIC)。通過根據(jù)Comite National實驗室臨床標準的標準方法對微孔板進行修飾而確定MIC。
RPMI-1640和L-谷氨酸用pH7的0.15M的MOPS(3-[N-嗎啉代]丙烷磺酸)溶液緩沖。白假絲酵母細胞(1.5×103細胞/mL)被加入到含RPMI-1640和抗真菌劑稀釋液的96孔板的孔中。在35℃溫育48小時后讀取結(jié)果，并且確定抑制白假絲酵母細胞生長的MIC或最低抑制濃度。
最低殺真菌濃度在48小時后讀取MIC，振動平板并從孔中吸取10μL的等分樣品置于含有葡萄糖的矩形盤中。板在35℃溫育48小時，并且確定不出現(xiàn)菌落形成單位的最低殺真菌濃度和抗真菌劑濃度。
實施例3.細胞毒性或抗腫瘤分析藥物抗增殖和細胞毒性效應可通過使用四唑鹽，MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-聯(lián)苯四唑溴)來定量。在這個比色測定分析中，黃色的四唑鹽MTT，被活細胞中的線粒體酶，琥珀酸脫氫酶分解成紫色的甲月替。甲月替由于其不能透過細胞膜而在活細胞中堆積。產(chǎn)生的甲月替的量與藥物處理后活細胞的量成比例。該分析被用于檢測我們的化合物對多種癌細胞系的細胞毒和抗腫瘤效應。
以前的方法采用利用多種癌細胞系，如HEP-2(喉癌)、HELA(子宮頸癌)的公知組織培養(yǎng)技術。甲月替濃度以濃度梯度Securolide通過多孔掃描分光光度計(ELISA掃描儀)測量。隨后的數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理允許建立作為抗腫瘤活性的定量參數(shù)的半抑制濃度(IC50)。
方法和材料材料-培養(yǎng)基(DMEN+all)-EDTA(Quelant試劑捕獲細胞膜中存在的Ca++/Mg++離子，促進細胞膜從板上脫離)-胰蛋白酶-EDTA-DMEM+ALL和10％的TERNERO RECENTAL血清.
-二甲基亞砜(DMSO，惰性溶劑)-MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-聯(lián)苯四唑溴-多孔掃描分光光度計(ELISA掃描儀)抗腫瘤分析根據(jù)Skehan等J.Nat.Cancer Inst.821107(1990)的方法來確定對抑制細胞生長的評估。細胞在96孔板上每孔涂布400到1200個細胞，并在添加藥物使細胞脫離板之前于37℃溫育15-18小時。檢測的化合物溶于100％DMSO并進一步用含10mM HEPES的RPMI-1640稀釋。各細胞系用10個濃度(5個對數(shù)級范圍)的化合物處理。在溫育72小時后，向各孔加入100mL的冰冷的50％TCA，并在4℃溫育1小時。然后用自來水洗板5次以除去TCA，低分子量代謝物和血清蛋白。向各孔加入硫羅丹明(sulforhodamine)B(SRB)(0.4％，50mL)。在室溫溫育5分鐘后，板用0.1％乙酸洗滌5次并空氣干燥。結(jié)合的染料用10mM Tris堿(pH10.5)在轉(zhuǎn)動搖床震動5分鐘溶解。在570nm測量光密度。
數(shù)據(jù)利用Sigmoid-Emax濃度效應模型進行分析(參見Holford，N.H.G.Scheiner，LB.，“理解劑量效應關系藥物動力學-藥效模型”，(Understanding the dose-effect relationshipClinical applications ofpharmacokinetic-pharmacodynamic models)，Clin.Pharimiacokin 6429-453(1981)具有非線性回歸，通過預測反應的平方倒數(shù)進行加權。分析軟件由Roswell Park研究所使用微軟公司的FORTRAN語言開發(fā)，使用了Nash采用的(參見Nash.J.C.，“計算機壓縮nμMericsal方法線性代數(shù)和功能最小化”″Compact nμMericsal method for computersLinear algebra and function minimization，″John Wiley & Sons，New York，1979)用于非線性回歸的Marquardt算法(參見Marquardt，D.W.，“非線性參數(shù)最小平方預計的算法”″An algorithm for least squaresestimation of nonlinear parameters″，J.Soc.Ind.)。計算產(chǎn)生50％生長抑制(IC50)的藥物濃度。
實施例4.LMSV-6抗子宮頸癌和前列腺癌細胞的體外細胞毒性4種腫瘤細胞系，包括人前列腺癌PC-4(雄激素不敏感)和LnCaP(雄激素不敏感)和人子宮頸癌CaSKi(人乳頭瘤病毒(HPV)16型陽性和C-33(HPV-陰性)，在5％CO2條件下，37℃培養(yǎng)于RPMI-10％牛血清，谷氨酸和抗生素中。
在4小時后記錄LMSV-6對C-33(LD50＝538μM)的細胞毒性(在1-1000μg/mL或10.2-10，200μM檢測)，但不對其他進行檢測(LD50＞1，982μM)。72小時后LMSV-6濃度為1×10-2到102μM的條件下對所有細胞類型具有抗增殖活性。對每種細胞系的致死劑量如下細胞 LD50(μM)C-33 7.10LNCaP 26.5PC-4 59.2CaSKi 64.3一般來說，甲氨蝶呤、阿霉素和紫杉醇(LC50＝0.1μM)在濃度低于0.001到0.5μM的情況下抑制所有類型癌的增殖活性。唯一的例外是甲氨蝶呤，其對CaSKi沒有活性。
他莫昔芬被發(fā)現(xiàn)對所有四種細胞類型均具有細胞毒性(測得的LC50＝34.5-79.7μM，與預計的50μM比較)。代表1000μg LMSV-6和1000μM他莫昔芬的抑制增殖百分數(shù)的曲線形狀相似并且平行，他莫昔芬的強度為LMSV-6的1.53倍(LD50分別為345μM和528μM)。
實施例5.抗幽門螺桿菌的活性抗微生物化合物的瓊脂稀釋將6mg待評估的化合物溶解于0.6mL的100％二甲基亞砜(DMSO)中，然后用無菌的布魯氏培養(yǎng)基補充到6mL并記錄溶解度。DMSO的終濃度為總體積的10％。用無菌的布魯氏培養(yǎng)基進行系列2倍稀釋(3mL Securolide+3mL布魯氏培養(yǎng)基)。系列內(nèi)的各培養(yǎng)基稀釋液中取2mL的等分置于單獨的無菌培養(yǎng)皿中，加入18mL融化并冷卻(大約50℃)的補充有7％馬血的布魯氏瓊脂。這產(chǎn)生最終在瓊脂中1∶10稀釋的Securolide，和終濃度1％的DMSO。例如，瓊脂中藥物的高難度為100μg/mL。瓊脂板在接種前一天制備，并在冰箱儲藏過夜。
接種制劑幽門螺桿菌在胰胨豆胨-5％羊血瓊脂板上培養(yǎng)，每48小時進行傳代。鼬鼠螺桿菌(Helicobacter mustelae)在同樣的瓊脂上培養(yǎng)，根據(jù)上次傳代的生長情況每48-60小時進行傳代。板在37℃下在帶有水激活(10mL)的CampyPak Plus(BBL微生物系統(tǒng))帶有鈀催化劑的包膜的GasPak罐中培養(yǎng)。
螺桿菌培養(yǎng)物在深的培養(yǎng)皿中用補充有10％胎牛血清的10mL布魯氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)。板在37℃下在帶有水激活(10mL)的CampyPak Plus帶有鈀催化劑的包膜的GasPak罐中在搖床上以50rpm振蕩培養(yǎng)。
過夜培養(yǎng)物(大約108CFU/mL)在帶有螺旋蓋的試管內(nèi)稀釋到10倍布魯氏培養(yǎng)基(無FCS)中用作標準接種物。Steer復制儀的孔用0.8mL稀釋的生物體填充，并將大約0.002mL體積的2×104個細胞置于瓊脂表面上。接種的板置于加有水激活(10mL)的Campy Pak Plus(BBL微生物系統(tǒng))帶有鈀催化劑的包膜的GasPak罐中并在37℃培養(yǎng)48小時。
結(jié)果和討論在培養(yǎng)結(jié)束后，所有檢測板與無Securolide的生長對照板比較。MIC是與對照板比較抑制生長的濃度。在較高濃度肉眼可見的薄生長膜被忽略，不作為真實的MIC。對照生物也接種在各板上，并稀釋1000倍用作接種物。對照生物包括空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)，大腸桿菌[ATCC 35218，Lote 202602，Exp 05/2000(19-258)]的篩選培養(yǎng)物，產(chǎn)氣假單孢菌[ATCC 27853，Lote 202992，Exp 08/2000(19-060)]，陰溝腸桿菌(E.Cloacae)、斯氏普羅威登斯菌(Provideticia stuartii)和拉氏普羅威登斯菌(P.rettgeri)。板和/或接種物傳代不應在微好氧微生物環(huán)境外超過2小時。所有包括螺桿菌培養(yǎng)的操作在層流凈化罩下進行以降低霉菌污染培養(yǎng)物的機會。
Lee等的小鼠模型，Gastroenterology，991315-23(1990)，被用于預測抗幽門螺桿菌的化合物在人體體內(nèi)的活性。貓螺桿菌(Helicobacterfelis)在含10％胎牛血清的布魯氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)。冰凍的培養(yǎng)物被迅速融解，檢查培養(yǎng)物的運動性，并將0.5cc融化的冰凍培養(yǎng)物接種到含有9.5cc布魯氏/血清混合物的深組織培養(yǎng)平皿中。平皿置于Capy Pak罐[BBL]中以確保微好氧環(huán)境。將該罐置于旋轉(zhuǎn)搖床以60rpm，37℃在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。18小時后，應當出現(xiàn)可見的混濁。在(相)顯微鏡下檢查培養(yǎng)物的純度和運動性，然后收集到燒瓶中。Swiss-Webster雌性小鼠(18-20g)在感染前禁食18小時。一周內(nèi)小鼠隔一天接受共三次感染。在最后一次施用生物體后2周開始定量給藥。連續(xù)14天每天進行一次治療。在治療結(jié)束后大約3周處死小鼠。對每個小鼠，切下其胃并沿胃大彎打開。在胃竇區(qū)取一柱狀樣品(3mm組織切片)。該柱狀樣品表面被洗滌后，切碎并滴到含100微升尿素酶試劑的試管中。尿素酶試劑(pH6.3-6.5)含有尿素和酚紅。如果存在螺桿菌，尿素酶將分解尿素引起pH改變。紫色(堿性)表明螺桿菌陽性，紅/黃色(無變化)表明螺桿菌陰性。在18小時后記錄任何顏色變化。每個治療組大約20只小鼠，記錄每組中陽性的百分比。
臨床上有數(shù)種在治療之前用作初步診斷感染的方法用來確定人體是否存在幽門螺桿菌，以及確定從病人體內(nèi)消除該生物體的治療是否成功。
尿素呼吸測試包括攝入放射標記的尿素。螺桿菌產(chǎn)生能降解尿素的尿素酶，哺乳動物胃細胞不含有該酶。因此呼出標記的二氧化碳(根據(jù)使用的同位素進行質(zhì)譜分析或放射性分析)表明存在幽門螺桿菌。
也可以用血清學來評定幽門螺桿菌的感染。使用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測血清中幽門螺桿菌的抗體，如IgG和IgA?？梢允褂枚喾N不同的幽門螺桿菌蛋白作為抗原。
病人的內(nèi)窺鏡檢查提供可以在微好氧環(huán)境中培養(yǎng)的組織樣品以診斷幽門螺桿菌感染。或者，任選地，該樣品可以利用多種染料如吉姆薩或蘇木精-曙紅中的一種進行組織學檢查。也可以使用尿素檢測，其也利用了幽門螺桿菌能產(chǎn)生尿素酶的優(yōu)點。該檢測根據(jù)尿素水解產(chǎn)生的氨導致可觀察的pH變化。
實施例6.抗牙齦炎活性的分析口腔組合物抗牙齦炎的評估使用含Securolide的口腔洗液對30只畢格狗(beagle dog)進行為期10周的研究，清楚顯示其抵抗牙齦炎的優(yōu)越效力。使用的方法包括完全去除硬的和軟的牙沉積物，其后用軟飲食喂飼狗6周以使牙齦炎發(fā)展。然后用待測溶液處理牙系每天兩次每周五天，對口腔每側(cè)作用大約15秒。檢查動物并根據(jù)0到3的標準對牙齦炎的炎癥程度評分0＝無炎癥，1＝牙齦邊緣輕微度局部的水腫和泛紅，手指輕壓沒有引起出血，2＝牙齦邊緣中度水腫和泛紅，手指輕壓有出血，3＝牙齦邊緣和附著齦嚴重水腫和潰瘍，無手指輕壓情況下也出血。分別采用安慰劑洗液和0.5％甲硝唑洗液作為陰性和陽性對照。
結(jié)果和討論與安慰劑相比，Securolide洗液顯著降低牙齦炎的發(fā)展。產(chǎn)物可有效控制牙齦炎和治療牙周病。此外，還提供改善口腔衛(wèi)生的簡單的方法，即每天對口腔常規(guī)施用該產(chǎn)品1到3次。
實施例7.對LSV-6的體外突變研究(艾姆斯氏試驗)該研究根據(jù)USC 79/831的標準進行，其建立了有毒物質(zhì)分析方法的指導方案。
艾姆斯氏試驗檢測藥物誘導的突變鼠傷寒沙門菌株的回復突變，這些菌株帶有rfa突變使其細胞膜對化學試劑是可透過性的。每個檢測株系帶有組氨酸操縱子中的已知突變(缺失、替換或增加堿基對)。這些突變的存在使這些細胞不能在組氨酸缺乏的培養(yǎng)基中生長。藥物導致的回復突變能逆轉(zhuǎn)所有這些突變的效應，使該株系恢復到其之前組氨酸陽性的狀態(tài)，因此，提高鼠傷寒沙門菌在組氨酸缺乏的培養(yǎng)基上的生長。
一種藥物如果使組氨酸缺乏的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目增加超過兩倍，則認為是致突變的。LMSV-6(1或10μg/mL)被加入到細菌株TA98中沒有使組氨酸缺乏的培養(yǎng)基上正常菌落數(shù)目增加，而LMSV-6(＜1000μg/mL)加入到細菌株TA100中也沒有使菌落數(shù)目增加，因此符合致突變的標準。這些初步結(jié)果表明LMSV-6沒有使鼠傷寒沙門菌TA98或TA100產(chǎn)生回復突變，并且不能預期在人基因組中導致突變。
實施例8.LMSV-6對健康志愿者的副作用的研究方法19位健康的志愿者參加該研究。參加者的年齡在21到40歲之間，平均年齡為30.5±7.2歲。體重在150到190磅之間，中值為163.2±14.3磅，身高在1.8到2.1米之間，平均為1.9±0.1米。受試者根據(jù)國家和國際標準和已確立的人類研究規(guī)范隨機選擇的。
使用數(shù)種臨床評估、實驗室檢測、心電圖和胸部X光片確立參加者的健康狀況。通過化學酶法研究檢驗肝臟和腎臟系統(tǒng)的功能。同樣，對每個參加者進行血液化學檢驗、血液病理學檢驗和尿分析。對女性，通過實驗室檢驗和婦產(chǎn)科學評估確定沒有懷孕和/或不在哺乳期。
隨機選擇將參加者分成3組(n＝6)第一組(安慰劑)接受2.0mL生理鹽水(CINa+，0.9％)，第二組，接受肌內(nèi)注射60mg LMSV-6，以及第三組(n＝7)接受肌內(nèi)注射100mg LMSV-6。
參加者接受數(shù)項用于建立該分析的客觀參數(shù)的基值的檢測，包括實驗室檢驗血象、血化學、尿分析和糞便分析心血管功能動脈張力(TA)、心律(RC)、心搏頻率(FC)和橈動脈搏動(PR)肺功能肺呼吸(VP)和呼吸頻率(FR)腎功能尿液體積和尿頻率(FU)感覺系統(tǒng)聽覺、視覺、嗅覺、味覺和感覺反射皮膚和/或被膜靈敏度、皮膚質(zhì)地、溫度和肌骨伸縮性植物神經(jīng)系統(tǒng)功能唾液腺和汗腺活性、胃腸死亡率和內(nèi)臟反射超敏反應局部敏感性和系統(tǒng)敏感性。
評估以下列時間間隔進行時間0.0、5.0、15.0、20.0、30.0和45.0分鐘；1.0小時、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、36.0和48.0小時。
結(jié)果驗證參加者健康狀況的實驗室檢驗和特別檢查表明這些值保持在基本水平及沒有觀察到與接受安慰劑組有任何不一致。
實驗室檢驗尿功能和微生物模式的結(jié)果發(fā)現(xiàn)其值在使用的方法的參考值范圍內(nèi)。類似地，糞便分析的結(jié)果也顯示沒有病理變化。
測量各組參加者在實驗前和實驗當中相對心血管參數(shù)包括動脈張力(TA)、心博頻率(FC)、橈動脈搏動(PR)和心臟節(jié)律(RC)的單個值和平均標準偏差，以確定對LMSV-6的副作用和耐受極限。對健康的志愿者而言，他們接受60和100mg的LMSV-6和2mL的0.9％氯化鈉作為安慰劑，結(jié)果顯示與基本值和安慰劑對照組的值相比，TA、FC、PR和RC的水平隨著治療沒有改變。類似地，基礎條件下和研究后的心電圖沒有變化。
也對健康志愿者測量了評價LMSV的作用的關于呼吸功能的每組單個值和標準平均偏差。結(jié)果顯示與基本值和安慰劑對照組相比，以實驗的劑量治療后沒有改變參加者的呼吸機能和動力學。呼吸頻率(FR)在整個檢測中保持在每分鐘18到20次呼吸的范圍內(nèi)。
根據(jù)在基本條件下和在安慰劑對照組中的觀察，所評價的有關呼吸動力學、吸氣、呼氣、氣管呼吸、支氣管呼吸和胸-肺擴張以及上層和下層氣流的參數(shù)沒有受到改變。
參考腎功能參數(shù)對LMSV-6作用的評估顯示，尿頻率值在對照組的個體和接受治療組的個體在12小時內(nèi)直接觀察到保持在沒有顯著差異的3.1±0.7倍到3.3±1.5倍的范圍內(nèi)。相似地，平均尿液體積在相同的時間段內(nèi)在安慰劑對照組和接受60和100mg LMSV-6的組中分別為434.2±213.2，489.2±94.3和394.3±103.9mL。這表明該治療沒有影響基本的腎功能。
LMSV-6對精神狀態(tài)和感覺精確度影響的數(shù)據(jù)聽覺、視覺、嗅覺和味覺辨別力顯示治療沒有引起上述任何功能或分析參數(shù)的改變。類似地，淺表反射和骨腱反射沒有任何改變。
LMSV-6對皮膚敏感性和溫度影響的評估數(shù)據(jù)顯示該治療沒有引起參加者的皮膚敏感性或溫度的任何改變。類似地，沒有證據(jù)顯示對照組和治療組任何參與者的肌骨伸縮性有任何改變。
本研究中該治療在所有的參加者皮膚質(zhì)地和濕潤程度上沒有產(chǎn)生任何改變，也沒有因為治療的作用對口腔和鼻腔粘膜產(chǎn)生性質(zhì)的改變。
評估局部和全身的過敏作用(反應性)的相關數(shù)據(jù)表明在任何參加者中沒有顯示任何過敏反應。
LMSV-6對植物神經(jīng)水平(腺體和內(nèi)臟)影響的評估數(shù)據(jù)顯示在研究劑量的范圍內(nèi)(60和100mg)在胃腸內(nèi)臟水平、生殖的-泌尿的水平、喉-眼腺體、或強心作用方面沒有顯示植物神經(jīng)的任何改變；就是說，在外分泌和內(nèi)分泌腺體水平?jīng)]有改變。
本研究的結(jié)果確認了LMSV-6具有足夠的耐受極限，所有參加者對檢測的最大劑量(100mg)是耐受的。類似地，在所有參與本研究的參加者中沒有表現(xiàn)副作用的證據(jù)、標志或癥狀。
權利要求
1.制備通式Ia、Ib或Ic的化合物的方法，包括提供具有內(nèi)酯結(jié)構的前體，以及將前體與一種或多種化學試劑反應以提供具有通式Ia、Ib和Ic之一的產(chǎn)品。
2.權利要求1的化合物，其中的前體具有通式II的結(jié)構 式II其中R1和R2獨立地為氫原子或選自下列的基團烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺?；?、取代的磺?；⒒撬?、磷?；?、取代的磷酰基、膦?；?、取代的膦?；?、多芳基、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽和多肽基團。
3.由下列結(jié)構之一定義的分離的或合成的化合物 式Ia 式Ia 式Ic其中R1-R6獨立地為氫原子或選自下列的基團烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺酰基、取代的磺酰基、磺酸、磷?；?、取代的磷酰基、膦?；?、取代的膦酰基、多芳基、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽和多肽基團；Z是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；以及X是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子。
4.權利要求3的化合物，選自表1中定義的化合物1-50。
5.藥物組合物，含有內(nèi)酯化合物或其藥用鹽或其水合物以及生理可接受的載體，其中內(nèi)酯化合物具有下列結(jié)構之一 式Ia 式Ia 式Ic其中R1-R6獨立地為氫原子或選自下列的基團烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺酰基、取代的磺酰基、磺酸、磷?；⑷〈牧柞；?、膦?；?、取代的膦?；?、多芳基、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽和多肽基團；Z是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；以及X是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子。
6.權利要求5的藥物組合物，其中內(nèi)酯化合物選自表1中定義的化合物1-50。
7.權利要求5的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗細菌劑、抗真菌劑、抗腫瘤劑、抗炎劑、抗牙齦炎劑或抗牙周炎劑。
8.權利要求6的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗細菌劑、抗真菌劑、抗腫瘤劑、抗炎劑、或抗牙周炎劑。
9.權利要求7的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗炎劑用于治療或預防選自如下的炎性疾病關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官移植排斥。
10.權利要求8的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗炎劑用于治療或預防選自如下的炎性疾病關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官移植排斥。
11.權利要求7的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗腫瘤劑用于治療或預防癌癥。
12.權利要求8的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗腫瘤劑用于治療或預防癌癥。
13.權利要求7的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗腫瘤劑用于治療或預防選自下列的癌癥黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌。
14.權利要求8的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效用作抗腫瘤劑用于治療或預防選自下列的癌癥黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌。
15.權利要求7的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物為有效抗幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)的抗細菌劑，用于治療或預防胃潰瘍、胃炎、消化不良或胃癌。
16.權利要求8的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物為有效抗幽門螺桿菌的抗細菌劑，用于治療或預防胃潰瘍、胃炎、消化不良或胃癌。
17.權利要求7的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效抗牙齦炎和/或牙周炎，其中的組合物是進一步包括另一種有效抗革蘭氏陰性厭氧微生物Bacteriodes assaccharolyticus、Bacteriodes gingivalis及其混合物的抗牙齦炎劑的口腔組合物。
18.權利要求8的藥物組合物，其中的內(nèi)酯化合物可有效抗牙齦炎和/或牙周炎，其中的組合物是進一步包括另一種有效抗革蘭氏陰性厭氧微生物Bacteriodes assaccharolyticus、Bacteriodes gingivalis及其混合物的抗牙齦炎劑的口腔組合物。
19.權利要求9的藥物組合物，其中的器官移植排斥是對選自下列器官移植的排斥腎移植、肝移植、肺移植和心臟移植。
20.權利要求10的藥物組合物，其中的器官移植排斥是對選自下列器官移植的排斥腎移植、肝移植、肺移植和心臟移植。
21.權利要求7的藥物組合物，其中的化合物可有效抗消化器官、泌尿器官、生殖器官或皮膚的念珠菌病、隱球菌病、支氣管肺或肺的曲霉病、或免疫抑制系統(tǒng)的侵入性曲霉病。
22.權利要求8的藥物組合物，其中的化合物可有效抗消化器官、泌尿器官、生殖器官或皮膚的念珠菌病、隱球菌病、支氣管肺或肺的曲霉病、或免疫抑制系統(tǒng)的侵入性曲霉病。
23.治療或預防紊亂的方法，包括給動物施用含有有效量的化合物或其藥用鹽或其水合物的組合物，其中的化合物具有下列結(jié)構中的一種 式Ia 式Ia 式Ic其中R1-R6獨立地為氫原子或選自下列的基團烷基、取代的烷基、烯丙基、取代的烯丙基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、鹵素、羥基、烷氧基、取代的烷氧基、alloxy、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、異氰基、取代的異氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、磺酰基、取代的磺?；?、磺酸、磷?；⑷〈牧柞；?、膦?；⑷〈撵Ⅴ；⒍喾蓟?、取代的多芳基、C1-C20環(huán)、取代的C1-C20環(huán)、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、氨基酸、肽和多肽基團；Z是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；以及X是以線性、分支或環(huán)狀形式組成的基團中選自氧原子、硫原子或氮基的雜原子；其中所述的失調(diào)選自癌癥、牙齦炎、牙周炎、細菌疾病、真菌疾病和炎性疾病。
24.權利要求23的方法，其中的化合物選自表1中定義的化合物1-50。
25.權利要求23的方法，其中的癌癥選自黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌。
26.權利要求23的方法，其中由幽門螺桿菌引起的細菌性疾病選自胃潰瘍、胃炎、消化不良和胃癌。
27.權利要求23的方法，其中的炎性疾病選自關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官移植排斥。
28.權利要求23的方法，其中的器官移植排斥是對選自下列器官移植的排斥腎移植、肝移植、肺移植和心臟移植。
29.權利要求23的方法，其中的失調(diào)是牙齦炎或牙周炎，并且其中的組合物是每天施用到口腔的局部制劑。
30.權利要求23的方法，其中的病癥是牙齦炎或牙周炎，并且其中的組合物是每天施用到口腔的局部制劑。
31.權利要求23的方法，其中的真菌疾病選自消化器官、泌尿器官、生殖器官和皮膚的念珠菌病、隱球菌病、支氣管肺和肺的曲霉病、以及免疫抑制系統(tǒng)的侵入性曲霉病。
全文摘要
本發(fā)明公開了天然的和合成的具有內(nèi)酯結(jié)構的化合物，及其使用和制備方法。該化合物可用作抗細菌、抗真菌和抗炎藥劑，并科用于治療諸如黑色素瘤、白血病、乳癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食道癌、肝癌和淋巴癌的增殖紊亂。該化合物還可有效用于治療或預防炎性疾病如關節(jié)硬化癥、肺纖維化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰腺炎、結(jié)節(jié)病、腎小球炎和器官移植排斥。它們還可有效用于治療或預防細菌和真菌感染，包括治療消化性潰瘍、胃炎、消化不良和胃癌、牙齦炎和牙周炎。
文檔編號A61K31/365GK1720242SQ200380105227
公開日2006年1月11日 申請日期2003年11月5日 優(yōu)先權日2002年11月5日
發(fā)明者戴維·特雷羅 申請人:馬格納化學國際實驗室公司