專利名稱：用于治療癌癥的包含雌四醇衍生物的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過向所述哺乳動(dòng)物給藥有效量的特殊雌激素成分以治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中雌激素抑制型腫瘤(estrogen-suppressed tumor)的方法。該方法尤其適用于治療或預(yù)防結(jié)腸直腸癌和前列腺癌。
背景技術(shù)：
結(jié)腸直腸癌為一種惡性腫瘤疾病。在西方結(jié)腸直腸癌發(fā)生率很高。這類腫瘤經(jīng)常通過淋巴管和血管轉(zhuǎn)移。許多患有結(jié)腸直腸癌的患者最終都死于這種疾病。迄今，已研發(fā)出全身性治療和化療用于治療結(jié)腸直腸癌。然而，沒有任何治療方法能顯示出足夠的抗癌活性，以任意可靠度延長(zhǎng)結(jié)腸直腸癌轉(zhuǎn)移性疾病患者的生存。因此，仍需要開發(fā)一種可成功治療或預(yù)防結(jié)腸直腸癌的方法。
Al-Azzawi等在一篇文章(“Estrogen and colon cancercurrent issues”，Climacteric 2002；53-14)中綜述了在使用激素替代療法的絕經(jīng)后婦女中結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率的當(dāng)前流行病學(xué)數(shù)據(jù)。激素替代療法(HRT)包括給藥雌激素以預(yù)防或治療由雌激素的缺乏(雌激素缺乏)引起的癥狀。作者的結(jié)論是，使用雌激素可產(chǎn)生全面的保護(hù)，同時(shí)結(jié)腸腺瘤和癌的發(fā)病率下降約30％。據(jù)稱，使用雌激素可減少與結(jié)腸癌相關(guān)的死亡率。
US 6,291,456(Signal Pharmaceuticals Inc.)涉及通過雌激素受體來調(diào)節(jié)基因表達(dá)的化合物以及用于治療大量雌激素相關(guān)疾病包括結(jié)腸癌的方法。該美國(guó)專利的化合物包括雌激素拮抗劑和激動(dòng)劑兩者。該專利中觀察到那些雌激素拮抗劑化合物在如乳房和卵巢組織中可用作抗雌激素藥物并因此可用于預(yù)防和治療乳腺癌和卵巢癌。那些雌激素激動(dòng)劑化合物則推薦用于其它的治療和預(yù)防應(yīng)用中。
如上述專利公開所示，現(xiàn)有技術(shù)中曾有提示向絕經(jīng)后雌性給藥雌激素可有助于減少患結(jié)腸癌的危險(xiǎn)。然而，該觀察資料并不能自動(dòng)證明通過給藥雌激素來治療或預(yù)防雌激素抑制型癌癥如結(jié)腸癌是可取的這一結(jié)論。事實(shí)上，眾所周知的是通過誘導(dǎo)這些組織中雌激素受體介導(dǎo)的細(xì)胞分裂(增殖)頻率的提高，雌激素可增加“雌激素刺激型癌癥”(estrogen-stimulated cancer)如雌性子宮內(nèi)膜癌(Cushing等.，1998.ObstetGynecol.91，35-39；Tavani等.，1999.Drugs Aging，14，347-357)以及雌性與雄性均有的乳腺癌(Tavani等.，1999.Drugs Aging，14，347-357；Pike等.，2000.Steroids，65，659-664，Heinig等，2002，European Journal ofObstetrics & Gynecology，102，67-73)的危險(xiǎn)性。由于其本身能增加基因發(fā)生錯(cuò)誤，尤其是如腫瘤抑制基因失活的基因錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)，細(xì)胞分裂在人類癌癥發(fā)生的復(fù)雜過程中必不可少。
由于前述雌激素刺激型癌癥在工業(yè)國(guó)家的發(fā)病率很高，在治療或預(yù)防如結(jié)腸癌中給藥雌激素伴有非常重大的缺陷。因此需要能應(yīng)用于治療雌激素抑制型腫瘤而不增加患雌激素刺激型腫瘤的危險(xiǎn)的雌激素。
在美國(guó)，前列腺癌引起的死亡居于男性癌癥死亡率的第二位。在過去的六十年，激素治療已成為晚期前列腺癌的重要治療方法。一種該方法為使用己烯雌酚(DES)以抑制內(nèi)源性雄激素的生成。已知DES為一種具有雌激素活性的物質(zhì)。然而，顯著的心血管毒性有礙DES的使用。在前列腺治療中，減少血栓栓塞事件的策略如降低劑量或使用華法林鈉沒有獲得成功(Malkwicz等，“The role of diethylstilbestrol in the treatmentof prostate cancer，”Urology 2001 Aug；58(2 Suppl 1)108-13)。此外，DES的應(yīng)用被認(rèn)為可提高患乳腺癌的危險(xiǎn)。
因此，需要一種可用于治療或預(yù)防雌激素抑制型腫瘤如結(jié)腸直腸腫瘤或前列腺腫瘤、且不會(huì)帶來發(fā)展出雌激素刺激型癌癥的危險(xiǎn)或顯示嚴(yán)重的心血管毒性的雌激素物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)下列通式所代表的雌激素物質(zhì)能滿足前述需要 其中式R1、R2、R3、R4獨(dú)立地為氫原子、羥基或含有1-5個(gè)碳原子的烷氧基。
該組雌激素物質(zhì)已知的代表為1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇，又稱作雌四醇(estetrol)、雌甾四醇(oestetrol)和15α-羥基雌三醇。雌四醇是人類妊娠期間由胎兒肝臟產(chǎn)生的一種雌激素。足月妊娠母體血漿中非結(jié)合雌四醇水平峰值為1.2ng/ml，且胎兒血漿中的水平為母體血漿中水平的12倍(Tulchinsky等，1975.J.Clin.Endocrinol.Metab.，40，560-567)。
US 5,340,585和US 5,340,584記載了治療良性婦科失調(diào)如經(jīng)前綜合癥的組合物和方法，其包括聯(lián)合給藥GnRH組分和雌激素組分。US5,340,585進(jìn)一步提及應(yīng)用這種方法減少患乳腺癌和卵巢癌的危險(xiǎn)。后一種癌癥通常被認(rèn)為是雌激素敏感性癌癥，即其形成和生長(zhǎng)能被除本發(fā)明雌激素成分之外的雌激素尤其是選自17β-雌二醇、乙炔雌二醇及其前體和代謝物的雌激素所激發(fā)的癌癥。
出人意料的是，與技術(shù)人員預(yù)計(jì)雌激素物質(zhì)會(huì)增進(jìn)這類腫瘤的形成和生長(zhǎng)不同，本發(fā)明的雌激素物質(zhì)并不增加患雌激素刺激型腫瘤的危險(xiǎn)。由于本發(fā)明的雌激素物質(zhì)看來不具有雌激素拮抗性質(zhì)，這一發(fā)現(xiàn)確實(shí)出乎意料。
據(jù)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的雌激素物質(zhì)對(duì)ERα受體具有相對(duì)高的親和力，或相反地對(duì)ERβ受體具有相對(duì)低的親和力。這種受體特異性被認(rèn)為在一定程度上與所下述觀測(cè)結(jié)果相關(guān)，即該物質(zhì)與通常使用的雌激素不同，不會(huì)刺激雌激素刺激型組織增殖。然而，盡管在這個(gè)領(lǐng)域正在進(jìn)行大量的科學(xué)努力，但對(duì)支配造成這種現(xiàn)象的ER信號(hào)通路的機(jī)制到目前為止仍了解很少。
已知多數(shù)雌激素與兩種ER都結(jié)合，這些ER在組織特異性輔激活物和/或輔阻遏物存在下結(jié)合到基因調(diào)節(jié)區(qū)的雌激素效應(yīng)元件，或結(jié)合到其他轉(zhuǎn)錄因子。鑒于ER信號(hào)的復(fù)雜性以及ERα和ERβ及其輔因子的組織特異性表達(dá)，現(xiàn)已意識(shí)到ER配體可以組織特異性的方式起雌激素激動(dòng)劑或者甚至起雌激素拮抗劑的作用。
如今還已知雌激素通過基因表達(dá)調(diào)節(jié)細(xì)胞藥理學(xué)，且該雌激素作用由雌激素受體介導(dǎo)。雌激素受體對(duì)基因調(diào)節(jié)的作用可由ER與雌激素效應(yīng)元件的直接結(jié)合、ER與其它轉(zhuǎn)錄因子如NF-？B、C/EBPβ的結(jié)合以及由包括離子通道受體的非基因效應(yīng)來調(diào)節(jié)。過去數(shù)年的研究進(jìn)展顯示，ER能與同樣可以組織特異性和配體特異性的方式調(diào)節(jié)ER轉(zhuǎn)錄活性的輔激活物(如SRC-1、CBP和SRA)及輔阻遏物(如SMRT和N-CoR)締合。此外，目前有證據(jù)顯示大多數(shù)雌激素調(diào)節(jié)的基因不具有典型的雌激素效應(yīng)元件。在該情況下，ER與對(duì)調(diào)節(jié)這些基因關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子相互作用。已知由ER調(diào)節(jié)其活性的轉(zhuǎn)錄因子包括如AP-1、NF-？B、C/EBP以及Sp-1。
鑒于ER信號(hào)的復(fù)雜性與表達(dá)ER以及其輔因子的各種類型的組織，通常認(rèn)為ER配體不能再簡(jiǎn)單地劃分為單純的拮抗劑或激動(dòng)劑。這種觀點(diǎn)得到Paech等(Science 277，1508-1510，1997)的發(fā)現(xiàn)的支持，據(jù)他報(bào)道，17β-雌二醇在ERα存在下活化AP-1位點(diǎn)，但是在ERβ存在下抑制該同一位點(diǎn)。相反，ER配體雷洛昔芬(Eli Lilly & Co.)和他莫昔芬以及ICI-182，780(Zeneca Pharmaceuticals)通過ERβ激發(fā)AP-1位點(diǎn)，但在ERα存在下抑制該位點(diǎn)。
正如主要由RT-PCR或原位雜交所分析，已知ERα和ERβ既存在重疊又有不同的組織分布。通常組織既表達(dá)ERα也表達(dá)ERβ，但受體局限于不同種類的細(xì)胞中。
總之，盡管本發(fā)明雌激素成分發(fā)揮其有益作用的機(jī)制仍然未知，但顯然所述雌激素成分與雌激素物質(zhì)如17β-雌二醇和乙炔雌二醇不同，相對(duì)于ERβ受體其對(duì)ERα受體顯示出相對(duì)高的親和力。從以上所述還可明白，這種特異性可能是造成本發(fā)明雌激素成分對(duì)雌性和雄性具有治療或預(yù)防雌激素抑制型腫瘤效力而不具有增加患雌激素刺激型腫瘤危險(xiǎn)的缺點(diǎn)的原因。
具體實(shí)施例方式
因此，本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中雌激素抑制型腫瘤的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的雌激素成分，其中該雌激素成分選自以下組中下列通式所代表的物質(zhì) 其中式R1、R2、R3、R4獨(dú)立地為氫原子、羥基或含有1-5個(gè)碳原子的烷氧基；當(dāng)應(yīng)用于本發(fā)明方法時(shí)可釋放出前述通式物質(zhì)的前體；以及一種或多種前述物質(zhì)和/或前體的混合物。
此處所用的術(shù)語“腫瘤”是指其中細(xì)胞增殖失控且為進(jìn)行性的組織的新的發(fā)育。術(shù)語腫瘤既涵蓋良性也涵蓋惡性腫瘤。
術(shù)語“雌激素抑制型腫瘤”是指一種可通過給藥雌激素抑制其形成和生長(zhǎng)的腫瘤，且不局限于其形成和生長(zhǎng)受雌激素直接影響的腫瘤。例如，雌激素抑制型腫瘤也涵蓋其形成和生長(zhǎng)受雄激素刺激的腫瘤以及可通過以抑制內(nèi)源性雄激素生成有效的量給藥雌激素而抑制其形成和生長(zhǎng)的腫瘤。這種被認(rèn)為是雌激素抑制型腫瘤的雄激素刺激型腫瘤的實(shí)例包括前列腺腫瘤和前列腺增生。
術(shù)語“雌激素刺激型腫瘤”是指一種其形成和生長(zhǎng)受除本發(fā)明所述的雌激素化合物之外的(內(nèi)源性或外源性)雌激素尤其是選自17β-雌二醇、結(jié)合馬雌激素、乙炔雌二醇及其前體和代謝物的雌激素刺激的腫瘤。
術(shù)語“癌”指經(jīng)過惡化使之對(duì)宿主機(jī)體產(chǎn)生病變的細(xì)胞。
本發(fā)明的雌激素物質(zhì)與藥物制劑中通常應(yīng)用的生物源及合成雌激素的不同之處在于，在甾體骨架的五元環(huán)上含3個(gè)而不是0-2個(gè)羥基取代基。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，至少R1、R2、R3及R4之一為羥基，這意味著該雌激素物質(zhì)至少含有4個(gè)羥基。優(yōu)選地，在本發(fā)明組合物中用作活性成分的雌激素成分為所謂的生物源雌激素即人體內(nèi)天然存在的雌激素、生物源雌激素的前體、或其混合物。因?yàn)樯镌创萍に靥烊淮嬖谟谔汉痛菩泽w內(nèi)，預(yù)期不會(huì)出現(xiàn)副作用，尤其是當(dāng)外源性給藥該雌激素產(chǎn)生的血清水平不明顯高于天然存在濃度時(shí)，更不會(huì)出現(xiàn)副作用。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該雌激素物質(zhì)含有4個(gè)羥基。在另一優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，R1、R2、R3、R4中的不多于3個(gè)為氫原子。同樣的，前述結(jié)構(gòu)式中，R1優(yōu)選地代表氫原子。所述結(jié)構(gòu)式中，R1、R2、R3及R4中優(yōu)選至少2個(gè)，更優(yōu)選為至少3個(gè)代表氫原子。
由于帶有羥基取代基的碳原子為手性活性，該結(jié)構(gòu)式的雌激素物質(zhì)涵蓋各種對(duì)映體。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明雌激素物質(zhì)為15α-羥基取代。在另一優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該物質(zhì)為16α-羥基取代。在另一優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該物質(zhì)為17β-羥基取代。該雌激素物質(zhì)最優(yōu)選為15α，16α，17β-三羥基取代。本發(fā)明雌激素成分甾體骨架上的其他手性碳原子優(yōu)選為與17β-雌二醇和其它生物源雌激素中的相應(yīng)碳原子具有相同的構(gòu)型。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，R3代表羥基或烷氧基。在另一優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，R1、R2和R4代表氫原子，這時(shí)該物質(zhì)為1，3，5(10)-雌三烯-3，15，16，17-四醇。后一物質(zhì)優(yōu)選的異構(gòu)體是1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇(雌四醇)。
本發(fā)明還涵蓋在本方法中構(gòu)成活性成分的雌激素物質(zhì)的前體的應(yīng)用。這些前體在應(yīng)用于本發(fā)明方法時(shí)可釋放出前述雌激素物質(zhì)，如作為代謝轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物。這些前體優(yōu)選地選自本發(fā)明雌激素物質(zhì)的如下衍生物，其中至少一個(gè)羥基的氫原子被1-25個(gè)碳原子的烴羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；凰臍溥秽?；四氫吡喃基；或每個(gè)殘基包含1-20個(gè)糖苷單元的直鏈或支鏈糖苷殘基取代。適合根據(jù)本發(fā)明使用的前體的典型實(shí)例為通過使該雌激素物質(zhì)的羥基與含有其中M+代表氫或(堿)金屬陽離子的一個(gè)或多個(gè)羧基(M+-OOC)的物質(zhì)反應(yīng)得到的酯。因此，在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該前體為雌激素物質(zhì)的衍生物，其中所述結(jié)構(gòu)式中至少一個(gè)羥基的氫原子被-CO-R取代，其中R為含有1-25個(gè)碳原子的烴基。優(yōu)選地，R為氫或包含1-20個(gè)碳原子的烷基、烯基或芳基。
本發(fā)明的方法可適用于治療哺乳動(dòng)物如家畜、寵物、以及特別是人。盡管用于雌性時(shí)最有效，但該方法既可用于治療雌性和也可用于治療雄性。該方法可有利地應(yīng)用于絕經(jīng)前、圍絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后的雌性。
當(dāng)持續(xù)給藥一段時(shí)間時(shí)本方法特別有效。通常，該方法包括在至少五天的時(shí)間內(nèi)不間斷給藥該雌激素成分。該不間斷給藥優(yōu)選為至少持續(xù)三十天、更優(yōu)選為至少九十天。
本發(fā)明方法可適用于該雌激素成分的腸道或非胃腸道給藥。此處所用的術(shù)語“非胃腸道給藥”涵蓋透皮、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、陰道內(nèi)、肺部、口腔、皮下、肌肉內(nèi)和子宮內(nèi)給藥。術(shù)語“腸道給藥”包括口服以及直腸給藥。
優(yōu)選地，該給藥方式選自口服、透皮、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、陰道內(nèi)、肺部、直腸、口腔、皮下、肌肉內(nèi)或子宮內(nèi)給藥。更優(yōu)選地，該給藥方式選自口服、透皮、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、肺部和陰道給藥。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明方法采用口服、透皮、鼻內(nèi)或皮下給藥。更優(yōu)選地，本發(fā)明方法采用口服或透皮給藥。
口服、靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸、口腔以及肺部給藥理想地適于每天給藥(至少)一次。透皮和陰道內(nèi)給藥有利地以每天一次到每月一次的頻率施用。子宮內(nèi)給藥有利地以每周一次到每月一次的頻率施用。皮下和肌肉內(nèi)給藥也可適用于以儲(chǔ)庫型注射劑的形式以1周至6個(gè)月的間隔給藥，優(yōu)選為以4周至3個(gè)月的間隔給藥。
出于便利，本發(fā)明方法優(yōu)選采用1天、1周或1個(gè)月的給藥間隔。特別優(yōu)選采用每日一次口服、皮下、靜脈內(nèi)或鼻內(nèi)給藥，每周一次透皮給藥或每月一次陰道內(nèi)或皮下給藥的療法。
不管給藥方式如何，該雌激素成分優(yōu)選地以可有效達(dá)到至少1ng/升、更優(yōu)選為至少10ng/升、最優(yōu)選為至少100ng/升的血清濃度的有效量給藥。通常，該雌激素成分引起的血清濃度不超過100μg/升、優(yōu)選為不超過50μg/升、更優(yōu)選為不超過25μg/升。
根據(jù)本發(fā)明方法，該雌激素成分通常以每天每公斤體重少于1mg優(yōu)選每天每公斤體重少于0.4mg的劑量給藥。為使給藥該雌激素成分產(chǎn)生顯著的效果，建議以每天每公斤體重至少1μg的劑量給藥。優(yōu)選地，該給藥劑量為每天每公斤體重至少5μg。
該活性成分的口服給藥優(yōu)選為以每天每公斤體重少于400μg的劑量給藥，優(yōu)選為每天每公斤體重少于200μg。為使給藥該活性成分產(chǎn)生顯著的效果，建議以每天每公斤體重至少2μg的量口服給藥。優(yōu)選地，該口服給藥量為每天每公斤體重至少5μg。本發(fā)明方法中，特別是應(yīng)用于人類時(shí)，通常以每天至少0.05mg、優(yōu)選地為每天至少0.1mg的平均劑量給藥雌激素成分。最大劑量通常保持在每天40mg以下，優(yōu)選為每天20mg以下。
本發(fā)明的治療方法包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物給藥有效量的雌激素成分。達(dá)到有效所需的量在個(gè)體與個(gè)體之間存在差異，并由如個(gè)體的性別、體重、給藥途徑和所用特定雌激素成分的效力等因素決定。
在本發(fā)明方法中，特別是應(yīng)用于人類時(shí)，通常以每天0.01至20mg、優(yōu)選為每天0.05至10mg的平均劑量口服給藥雌激素成分。類似地，非胃腸道劑量?jī)?yōu)選為每天至少0.05mg、優(yōu)選為至少0.1mg。非胃腸道劑量的平均最大值通常保持在每天40mg以下，優(yōu)選為每天20mg以下。
在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該方法采用該活性雌激素成分口服給藥。此處所用的術(shù)語口服給藥也涵蓋經(jīng)口管飼給藥。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，盡管其效力很低，但雌四醇和相關(guān)的雌激素物質(zhì)可有利地以口服給藥。雖然本發(fā)明的發(fā)明人不希望束縛于理論，但仍認(rèn)為口服給藥雌四醇類物質(zhì)的效果是由這些物質(zhì)的特殊藥物動(dòng)力學(xué)(ADME)和藥效學(xué)性質(zhì)共同導(dǎo)致的。
本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，雌四醇類物質(zhì)的口服生物利用度出人意料地高，且其體內(nèi)半衰期遠(yuǎn)長(zhǎng)于通常使用的生物源雌激素。因此，盡管雌四醇和雌四醇類物質(zhì)的雌激素效力相對(duì)較低，但由于達(dá)到所需效果的口服劑量與已用于如17β-雌二醇的劑量相似，因此它們可有效地以口服方式給藥。
口服給藥雌四醇及雌四醇類物質(zhì)的另一個(gè)重要優(yōu)點(diǎn)在于這些物質(zhì)由于其在所謂的“首過效應(yīng)”中基本不被代謝而被認(rèn)為肝臟作用很小。口服藥物的首過效應(yīng)是指藥物從最初攝取轉(zhuǎn)運(yùn)到血液循環(huán)過程中藥物被肝臟降解的過程。從腸腔重吸收后，口服施用的活性成分經(jīng)過肝臟進(jìn)入機(jī)體。該事實(shí)對(duì)雌激素藥物特別重要，因?yàn)楦闻K是雌激素的靶器官，口服攝取雌激素在肝臟引起強(qiáng)烈的雌激素作用。當(dāng)口服施用時(shí)，通常使用的生物源雌激素的治療等效劑量可引起明顯的肝參數(shù)反應(yīng)，如SHBG、CBG和血管緊張素原的增加。在應(yīng)用馬雌激素(所謂的結(jié)合型雌激素)時(shí)也可觀察到雌激素的這些肝臟作用。
本發(fā)明的方法可適用于各種雌激素抑制型腫瘤包括結(jié)腸直腸腫瘤和前列腺腫瘤的(預(yù)防性)治療。在治療或預(yù)防前列腺癌時(shí)，本發(fā)明雌激素成分適于以能有效抑制雄激素內(nèi)源性生成的量給藥。本發(fā)明的方法可最有利地應(yīng)用于預(yù)防或治療結(jié)腸直腸腫瘤，更優(yōu)選地用于預(yù)防或治療結(jié)腸腫瘤。
在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該方法用于治療患有或曾患有良性或惡性腫瘤特別是結(jié)腸直腸腫瘤的哺乳動(dòng)物。在發(fā)展出腫瘤(包括腺瘤)的哺乳動(dòng)物中，即使這些腫瘤已經(jīng)手術(shù)切除或用別的方法除去，但患雌激素刺激型癌癥的危險(xiǎn)仍被認(rèn)為尤其高。因此，由于使用常見的雌激素治療將帶來嚴(yán)重的危害，本發(fā)明方法在治療這些哺乳動(dòng)物中的優(yōu)點(diǎn)尤為顯著。本發(fā)明方法可最有利地應(yīng)用于治療性治療患有雌激素抑制型腫瘤的哺乳動(dòng)物。
在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括聯(lián)合給藥有效量的孕激素以抑制內(nèi)源性雌激素的生成。聯(lián)合給藥孕激素可提供另外的優(yōu)勢(shì)，即已知孕激素能抑制雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜的增生作用。盡管與常見的雌激素不同，本發(fā)明的雌激素成分對(duì)子宮內(nèi)膜沒有顯著的增生作用，但聯(lián)合給藥孕激素以排除任何潛在的危險(xiǎn)仍是可取的。
可根據(jù)本發(fā)明使用的孕激素的實(shí)例包括孕酮、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔諾酮、地屈孕酮、屈螺酮、3-β-羥基去氧孕烯、3-酮-去氧孕烯(＝依托孕烯)、17-去乙?；Z孕酯、19-去甲孕酮、乙酰氧基孕烯諾龍、烯丙基雌醇、阿那孕酮、氯地孕酮、環(huán)丙孕酮、地美孕酮、去氧孕烯、地諾孕素、二氫孕酮(dihydrogesterone)、地美炔酮、炔孕酮、雙醋炔諾醇、醋酸氟孕酮、gastrinon、孕二烯酮、孕三烯酮、羥甲基孕酮、羥基孕酮、利奈孕酮(＝lynoestrenol)、美屈孕酮、甲羥孕酮、甲地孕酮、美侖孕酮、諾美孕酮、炔諾酮(＝norethisterone)、異炔諾酮、炔諾孕酮(包括d-炔諾孕酮和dl-炔諾孕酮)、諾孕烯酮、normethisterone、孕酮、奎孕醇、(17α)-17-羥基-11-亞甲基-19-去甲孕-4，15-二烯-20-炔-3-酮、替勃龍、曲美孕酮、阿孕奈德、nestorone、普美孕酮、17-羥基孕酮酯、19-去甲-17-羥基孕酮、17α-乙炔基睪酮、17α-乙炔基-19-去甲睪酮、d-17β-乙酰氧基-13β-乙基-17α-乙炔基-甾-4-烯-3-酮肟，以及應(yīng)用于本發(fā)明方法時(shí)能夠在體內(nèi)釋放出這些孕激素的這些化合物的前體。優(yōu)選地，應(yīng)用于本發(fā)明方法的孕激素選自孕酮、去氧孕烯、依托孕烯、孕二烯酮、地諾孕素、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔諾酮、屈螺酮、曲美孕酮、地屈孕酮、這些孕激素的前體以及它們的混合物。
原則上，如US 5,340,585和US 5,340,584中所記載的GnRH組合物也可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。然而，本發(fā)明的方法優(yōu)選不使用這些GnRH組合物。
本發(fā)明另一方面涉及藥物組合物，其包含a.至少0.05mg的如在此之前所定義的雌激素成分；b.至少0.01mg的選自5α-還原酶抑制劑、抗雄激素、細(xì)胞色素P45017α抑制劑、α1腎上腺素受體阻斷劑以及微管抑制劑的抗腫瘤成分；以及c.藥物學(xué)可接受的賦形劑。
聯(lián)合使用本發(fā)明的雌激素成分及前述抗腫瘤成分治療和預(yù)防雌激素抑制型腫瘤比單獨(dú)使用該雌激素成分或該抗腫瘤成分更為有效。當(dāng)該抗腫瘤成分能如通過抑制雄激素的生物合成(5α-還原酶抑制劑和細(xì)胞色素P45017α抑制劑)或通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合雄激素受體(抗雄激素)抑制體內(nèi)雄激素活性時(shí)，這種聯(lián)合治療特別有效。
據(jù)Jarman等的綜述文章(“Inhibitors of enzymes of androgenbiosynthesiscytochrome P45017αand 5α-steroid reductase”，Nat Prod Rep.1998 Oct；15(5)495-512)闡述，5α-還原酶抑制劑和細(xì)胞色素P45017α抑制劑可用作對(duì)抗前列腺癌和良性前列腺增生的潛在武器。作者們觀察到大約80％的前列腺癌患者患有雄激素依賴性疾病并對(duì)激素切除具有反應(yīng)。由于細(xì)胞色素P45017α抑制劑能阻止為睪酮及5α-二氫睪酮前體的雄激素脫氫表雄酮的生物合成，且5α-還原酶抑制劑能阻止被認(rèn)為是特別有害的雄激素5α-二氫睪酮的生物合成，因此這些酶抑制劑可有利地應(yīng)用于治療前列腺癌。
適合根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的5α-還原酶抑制劑的實(shí)例包括非那雄胺、度他雄胺(GI-198745)、依立雄胺、妥羅雄脲、固醇脂提取物(lipidosterolextract)。阿比特龍為可有利地根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的細(xì)胞色素P45017α抑制劑的實(shí)例?？捎糜诒景l(fā)明方法中的抗雄激素選自醋酸環(huán)丙孕酮、醋酸奧沙特隆、醋酸氯地孕酮、氟他胺、尼魯米特和比卡魯胺。
前列腺癌的治療失敗通常歸因于晚期非雄激素依賴性發(fā)展和對(duì)化療藥物的耐藥性。近來，據(jù)報(bào)道α1腎上腺素受體阻斷劑如特拉唑嗪能抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。Xu等(“The alphal-adrenoceptor antagonist terazosininduces prostate cancer cell death a p53 and Rb independent pathway”，OncolRep，2003 Sep-Oct；10(5)1555-60)報(bào)道特拉唑嗪不僅能抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)而且能抑制為化療主要靶標(biāo)的成集落能力?？筛鶕?jù)本發(fā)明應(yīng)用的α1腎上腺素受體拮抗劑的實(shí)例包括特拉唑嗪、ABT-980、ABT-627、多沙唑嗪、哌唑嗪、阿夫唑嗪、吲哚拉明和坦洛新。
微管抑制劑已被建議用作前列腺癌治療的化療藥物。Picus和Schultz(“Docetaxel(Taxotere)as monotherapy in the treatment of hormone-refractory prostate cancerpreliminary results”，Semin Oncol.1999 Oct；26(5 Suppl 17)14-8)報(bào)道了多西他賽作為單一藥物治療激素頑固性前列腺癌的具有基本持久的活性。微管抑制劑的適當(dāng)?shù)膶?shí)例包括泰索帝和紫杉醇。
本發(fā)明的一個(gè)特定的具體實(shí)施方案涉及包含上述藥物組合物的藥物傳遞系統(tǒng)，所述藥物傳遞系統(tǒng)選自口服劑量單位、可注射液體、栓劑、凝膠和乳膏。
另一個(gè)特定的具體實(shí)施方案涉及一種藥盒，該藥盒包含一個(gè)或多個(gè)含有至少0.05mg此前所定義的雌激素成分和藥物學(xué)可接受的賦形劑的劑量單位；一個(gè)或多個(gè)含有至少0.01mg選自5α-還原酶抑制劑、抗雄激素、細(xì)胞色素P45017α抑制劑、α1腎上腺素受體阻斷劑和微管抑制劑的抗腫瘤成分和藥物可接受的賦形劑的劑量單位。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，前述劑量單位為口服劑量單位。
通過下面的實(shí)施例，本發(fā)明更進(jìn)一步得以闡明。
實(shí)施例實(shí)施例1通過試驗(yàn)來測(cè)定雌四醇對(duì)切除卵巢的雌性大鼠中1，2-二甲基肼(DMH)誘導(dǎo)的結(jié)腸癌的作用。
DMH誘導(dǎo)的癌發(fā)展被選作“雌激素抑制型腫瘤”的模型，因?yàn)樗c人類結(jié)腸癌的情況非常接近1)腫瘤常位(orthotopically)生長(zhǎng)并可以相同的組織學(xué)試驗(yàn)劃分為腺癌，2)轉(zhuǎn)移性生成的途徑相同(腫瘤相對(duì)緩慢的生長(zhǎng)以及從腺瘤到癌的發(fā)展)，以及3)正如之前所報(bào)道(Greene等，1987，J.Surgical Research，43，476-487；Madara等，1983，Am.J.Pathology，110，230-235；Smirnoff等，1999，Oncology Research，11，255-264)，17β-雌二醇能在該模型中提供保護(hù)。
誘導(dǎo)結(jié)腸癌的前一周，通過摘除卵巢手術(shù)閹割五十只性成熟的重量介于150到200克的雌性Sprague-Dawley大鼠(Harlan，The Netherlands)。實(shí)驗(yàn)期間，將大鼠置于明/暗循環(huán)周期為12小時(shí)的分開的塑料籠中，自由攝取食物(Purina chow)和水。
將動(dòng)物隨機(jī)分成五組，每組包含10只大鼠，實(shí)驗(yàn)期間，從卵巢切除術(shù)后三天開始并至尸檢結(jié)束，這些大鼠按如下方法接受安慰劑或雌四醇治療●第1組動(dòng)物接受含3.0ml/kg/天的載體(20％質(zhì)量/體積的羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液)的安慰劑口服治療；●第2組動(dòng)物口服接受單一日劑量為0.1mg/kg的雌四醇；●第3組動(dòng)物口服接受單一日劑量為0.3mg/kg的雌四醇；●第4組動(dòng)物口服接受單一日劑量為1.0mg/kg的雌四醇；●第5組動(dòng)物口服接受單一日劑量為3.0mg/kg的雌四醇。
從卵巢切除術(shù)后一周開始，所有組的動(dòng)物以一周的間隔連續(xù)5周皮下給藥DMH注射劑(每100g體重14.7mg DMH二鹽酸鹽)，該注射劑使用新鮮配制的DMH二鹽酸鹽在Hank’s平衡鹽溶液中的溶液。
第一次給藥DMH的十五周后處死大鼠。尸檢時(shí)，割開所有動(dòng)物并打開結(jié)腸，在進(jìn)一步顯微分析前仔細(xì)檢查任何大體可見的腫瘤。確定惡性的標(biāo)準(zhǔn)是基于對(duì)腫瘤組織學(xué)特征的檢查以及腫瘤侵入粘膜下層的觀測(cè)證據(jù)。效能分析只包含惡性腫瘤。
在只使用載體治療的大鼠中，恒量給藥DMH導(dǎo)致產(chǎn)生惡性結(jié)腸腫瘤。在提前以遞增的劑量范圍給藥雌四醇的動(dòng)物組中，惡性腫瘤的數(shù)量隨每日口服雌四醇劑量從0.1到3.0mg/kg/天的增加而減小。
實(shí)施例2采用確定的競(jìng)爭(zhēng)性甾體結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定雌四醇(E4)相對(duì)于17α-乙炔基雌二醇(EE)及17β-雌二醇(E2)而言與人類α和β型雌激素受體(ER)的相對(duì)結(jié)合親和力。
所采用的方法是根據(jù)科技文獻(xiàn)改編，并由Osboum等詳細(xì)記載(1993，Biochemistry，32，6229-6236)。自轉(zhuǎn)染的Sf9-細(xì)胞純化重組人類ERα和ERβ蛋白。體外試驗(yàn)包括應(yīng)用ERα或ERβ蛋白以及將0.5nM固定濃度的[3H]E2用作標(biāo)記配體。將重組人類ERα和ERβ蛋白溶于結(jié)合緩沖液(10mM Tris-HCl，PH7.5，10％甘油，1mM DTT，1mg/ml BSA)中，之后將雙份等分試樣與最終濃度為0.5nM的[3H]E2以及載體對(duì)照(0.4％DMSO)或者等量的包含濃度遞增的未標(biāo)記甾體配體作為競(jìng)爭(zhēng)劑的載體一同溫育。于25℃溫育2小時(shí)后，移除未結(jié)合的配體并測(cè)定結(jié)合至ERα或ERβ蛋白的[3H]E2的量。用在每種競(jìng)爭(zhēng)劑濃度下結(jié)合至ERα或ERβ蛋白的[3H]E2量的平均值繪制抑制曲線。隨后通過非線性最小二乘法回歸分析確定IC50值。利用Cheng和Prusoff方程(Cheng等，1973，Biochem.Pharmacol.，22，3099-3108)，通過所測(cè)得的待測(cè)化合物的IC50值、試驗(yàn)中所應(yīng)用的放射配體的濃度以及經(jīng)確定對(duì)ERα和ERβ分別為0.2nM和0.13nM的放射配體的Kd歷史值計(jì)算出抑制常數(shù)(Ki)。E4在三個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)中的生物化學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表示為特異性結(jié)合的抑制百分?jǐn)?shù)(表1)。為了比較E4、EE和E2對(duì)人類ERα和ERβ蛋白的結(jié)合親和力，在表2中列出試驗(yàn)觀察的Ki值。與EE和E2相比，E4對(duì)ERα蛋白的結(jié)合表現(xiàn)出具有很強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)(400％)的獨(dú)特的結(jié)合特征(表2)。相比而言，EE和E2甾體配體對(duì)ERβ蛋白的Ki值更顯著(表2)。
表1使用E4作為未標(biāo)記甾體配體、0.5nM[3H]作為標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)劑的特異性結(jié)合ERα和ERβ蛋白的抑制百分?jǐn)?shù)。所示為三個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。

nd未檢出表2試驗(yàn)測(cè)定的雌四醇(E4)、17α-乙炔雌二醇(EE)和17β-雌二醇(E2)對(duì)人類ERα和ERβ蛋白的抑制常數(shù)Ki。同樣顯示為與ERα蛋白結(jié)合的相對(duì)優(yōu)勢(shì)。

實(shí)施例3為進(jìn)一步評(píng)價(jià)本發(fā)明的雌激素物質(zhì)的抗腫瘤效能，在用7，12-二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)的大鼠腫瘤模型中對(duì)雌四醇進(jìn)行測(cè)試。由Huggins等于1961年(Nature，19，204-207)最初建立的這個(gè)模型已經(jīng)被廣泛使用，并且是被普遍接受的對(duì)人類抗腫瘤藥物具預(yù)測(cè)價(jià)值的模型。大鼠中DMBA誘導(dǎo)的腫瘤的生長(zhǎng)代表“雌激素刺激型癌癥”的一個(gè)實(shí)例，且依賴于內(nèi)源性生成的雌二醇或外源性給藥的雌激素和促乳素(Sylvester等，1982，Cancer Research，42，4943-4947)。據(jù)發(fā)現(xiàn)，在DMBA模型中卵巢切除術(shù)(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)、雄激素(Dauvois等，1989，Breast Cancer Treatment，14，299-306)、他莫昔芬(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)、孕激素(Kelly等，1979，Eur.J.Cancer，15，1243-1251；Russo等，1987，Lab.Invest.57，112-137)以及GnRH類似物(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)均為有效的抗腫瘤治療。
84只雌性Sprague-Dawley大鼠(Harlan，The Netherlands)置于明/暗循環(huán)周期為12小時(shí)的環(huán)境中成群飼養(yǎng)，自由攝入Soya Free Diet(SDSEngland)及水。動(dòng)物每周稱重。在誘導(dǎo)乳腺癌前一周，通過摘除卵巢手術(shù)閹割12只動(dòng)物(43天齡)。在50天齡時(shí)，向所有動(dòng)物給藥單一口服劑量的16mg DMBA以誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。隨后將動(dòng)物分成七組(n＝12)，接受如下安慰劑或治療●第1組動(dòng)物接受含3.0ml/kg/天的載體(20％質(zhì)量/體積的羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液)的安慰劑口服治療；●第2組手術(shù)閹割的動(dòng)物接受含3.0ml/kg/天的載體的安慰劑治療；●第3組動(dòng)物接受口服給藥的單一每日劑量為3mg/kg的抗雌激素他莫昔芬；●第4組動(dòng)物口服接受單一每日劑量為0.025mg/kg的乙炔雌二醇(EE)；●第5組動(dòng)物口服接受單一每日劑量為0.125mg/kg的乙炔雌二醇(EE)；●第6組動(dòng)物口服接受單一每日劑量為0.5mg/kg的雌四醇(E4)；●第7組動(dòng)物口服接受單一每日劑量為2.5mg/kg的雌四醇(E4)。
EE和E4的劑量基于先前的研究數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)顯示0.025mg/kg/天的EE和0.5mg/kg/天的E4在預(yù)防骨質(zhì)重吸收、預(yù)防熱潮紅和陰道角質(zhì)化的激動(dòng)模型中等效。類似地，0.125mg/kg/天的EE和2.5mg/kg/天的E4的劑量在預(yù)防骨質(zhì)重吸收、預(yù)防熱潮紅和陰道角質(zhì)化中的體內(nèi)雌激素效能等效。
在為期8周的治療期間，每周測(cè)定可覺察的腫瘤的出現(xiàn)及腫瘤的數(shù)量。在第8周，尸檢時(shí)進(jìn)行最后的測(cè)量。尸檢時(shí)腫瘤的數(shù)量如

圖1所示。正如卵巢被切除的動(dòng)物中(第2組)未出現(xiàn)腫瘤所清楚地顯示，DMBA誘導(dǎo)的乳腺腫瘤的發(fā)生為雌激素依賴性的。正如所料，他莫昔芬在該模型中通過抑制乳腺腫瘤的發(fā)生也顯示出抗腫瘤特性。出人意料的是，與0.125mg/kg/天劑量的EE所顯示的效果相比，在2.5mg/kg/天的等效激動(dòng)劑量下的E4能顯著抑制乳腺腫瘤發(fā)生。此外，該特定的E4劑量在預(yù)防DMBA誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生方面和他莫昔芬一樣有效。
圖1每個(gè)治療組的腫瘤數(shù)量(n＝12)第1組 以3.0ml/kg/天的載體口服治療；第2組 以3.0ml/kg/天的載體接受安慰劑治療的手術(shù)閹割的動(dòng)物；第3組 口服他莫昔芬3mg/kg/天；第4組 口服乙炔雌二醇(EE)0.025mg/kg/天；第5組 口服EE 0.125mg/kg/天；第6組 口服雌四醇(E4)0.5mg/kg/天；第7組 口服E4 2.5mg/kg/天。
權(quán)利要求
1.一種選自以下組中的雌激素成分在制備用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物雌激素抑制型腫瘤的方法中的藥物組合物中的應(yīng)用，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的該雌激素成分下式代表的物質(zhì)、應(yīng)用于本發(fā)明的方法時(shí)可以釋放出所述通式物質(zhì)的前體、以及一種或多種前述物質(zhì)和/或前體的混合物， 其中式R1、R2、R3、R4獨(dú)立地為氫原子、羥基或含有1-5個(gè)碳原子的烷氧基的物質(zhì)。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中R1、R2、R3及R4中不超過3個(gè)為氫原子。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中R3代表羥基或烷氧基。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中R1、R2、R3和R4中至少3個(gè)代表氫原子。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中能夠釋放該雌激素物質(zhì)的前體是所述雌激素物質(zhì)的衍生物，其中至少一個(gè)羥基的氫原子被1-25個(gè)碳原子的烴羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；?；四氫呋喃基；四氫吡喃基；或每個(gè)殘基包含1-20個(gè)糖苷單元的直鏈或支鏈糖苷殘基取代。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述方法通常包括在為期至少五天、優(yōu)選為至少三十天的期間內(nèi)不間斷地給藥該雌激素成分。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述方法包括口服、透皮、靜脈內(nèi)或皮下給藥該雌激素成分。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中所述方法包括口服給藥。
9.如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述雌激素成分是以每天每公斤體重至少1μg、優(yōu)選以每天每公斤體重至少5μg的劑量給藥。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述雌激素抑制型腫瘤選自結(jié)腸直腸腫瘤或前列腺腫瘤。
11.如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述哺乳動(dòng)物患有或曾患有良性或惡性腫瘤，特別是結(jié)腸直腸腫瘤。
12.如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述哺乳動(dòng)物為雌性，尤其是人類女性。
13.如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述方法包括聯(lián)合給藥孕激素。
14.一種藥物組合物，其包含a)至少0.05mg的如權(quán)利要求1所定義的雌激素成分；b)至少0.01mg的選自5α-還原酶抑制劑、抗雄激素、細(xì)胞色素P45017α抑制劑、α1腎上腺素受體阻斷劑和微管抑制劑的抗腫瘤成分；以及c)藥物學(xué)可接受的賦形劑。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述抗腫瘤成分選自5α-還原酶抑制劑、抗雄激素和細(xì)胞色素P45017α抑制劑。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述抗腫瘤成分選自非那雄胺、度他雄胺(GI-198745)、依立雄胺、妥羅雄脲、固醇脂提取物、醋酸環(huán)丙孕酮、醋酸奧沙特隆、醋酸氯地孕酮、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺以及阿比特龍。
17.一種藥物傳遞系統(tǒng)，其含有如權(quán)利要求14至16中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，所述藥物傳遞系統(tǒng)選自口服劑量單位、可注射液體、栓劑、凝膠和乳膏。
18.一種藥盒，其包含一個(gè)或多個(gè)含有至少0.05mg如權(quán)利要求1所定義的雌激素成分以及藥物學(xué)可接受的賦形劑的劑量單位；以及一個(gè)或多個(gè)含有至少0.01mg選自5α-還原酶抑制劑、抗雄激素、細(xì)胞色素P45017α抑制劑、α1腎上腺素受體阻斷劑和微管抑制劑的抗腫瘤成分以及藥物學(xué)可接受的賦形劑的劑量單位。
19.如權(quán)利要求18所述的藥盒，其中所述劑量單位為口服劑量單位。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中雌激素抑制型腫瘤的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的雌激素成分，其中該雌激素成分選自以下組中下列通式I所代表的物質(zhì)，其中R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1732007SQ200380107435
公開日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2003年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月23日
發(fā)明者赫爾曼·揚(yáng)·蒂扎曼·科林格本寧克, 埃弗特·約翰內(nèi)斯·本恩舍滕 申請(qǐng)人:潘塔希生物科學(xué)股份有限公司