專利名稱：一種黃芪甲苷原料藥的制備方法及其原料藥和制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種黃芪甲苷原料藥的制備方法及其原料藥和制劑，屬于中藥現代化領域。
背景技術：
黃芪(Astragalus membranaceus或Astragalus mongholicus)為常用中藥，始載于《神農本草經》，具有補氣升陽、利水消腫、脫毒生肌等功效?，F代植物化學成分研究表明黃芪含有氨基酸、多糖、黃酮、生物堿、皂苷類等多種化學成分。大量藥理學研究報道黃芪皂苷類成分為黃芪中主要有效成分，而其中代表性成分為黃芪甲苷(astragalosideIV)，具有增強免疫功能、抗炎、抗氧化、抗衰老、強心、改善血液流變學等多種藥理活性，是黃芪中有望開發(fā)為新藥的有效成分。
黃芪甲苷雖然是黃芪中指標性成分，但因其在藥材中的實際含量很低(0.01～0.5‰)，用常規(guī)的植物化學成分提取分離方法很難制備而得，從而阻礙了其作為藥用原料的開發(fā)、利用。已有的有關制備黃芪甲苷的專利報道(CN 1283462A、JP 57165400、JP 62012791、JP 62012792)均為用多次硅膠柱層析，以氯仿-甲醇等溶劑系統(tǒng)洗脫分離的方法，如CN 1283462A中采用水提醇沉法制得黃芪精制液，據我們反復試驗表明，該方法第二步醇沉中(乙醇濃度達80％)可損失原提取量70％的黃芪甲苷，而后一步硅膠柱層析因需梯度洗脫和反復的柱層析純化，不僅延長了制備周期而且在分離純化過程中的樣品損失而造成低收率，再者制備過程中使用氯仿、甲醇等毒害性有機溶媒，將提升對生產設施、操作人員防護等要求而導致生產成本的提高，因此不適合作為藥用原料的工業(yè)化生產方法。
技術內容本發(fā)明的目的是提供一種簡便、制備周期短、成本低廉、可用于大規(guī)模生產的以含黃芪甲苷的藥材(如膜莢黃芪、蒙古黃芪、綿毛黃芪、多序巖黃芪等)為原料制備黃芪甲苷的工藝。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種黃芪甲苷原料藥及其制劑。
為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，該方法依次包括下列步驟
1)提取以含黃芪甲苷的藥材為原料，用水、低級醇或含水低級醇提取，濾過，得到黃芪提取液，其中低級醇的碳數為C1～C5，如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、異丁醇等，濃度為X，0％＜X≤100％，最好為30％≤X≤80％；提取方法為煎煮法、或加熱回流法、或浸出法、和滲漉法中的一種，最好為加熱回流提取法或滲漉法；2)濃縮將所得提取液進行濃縮，得到60℃下相對密度為1.05～1.40的濃縮液；3)堿處理調整濃縮液相對密度為60℃下1.05～1.20，加堿調溶液pH值為8～14或大于14，最好為pH值大于10，常溫放置12～48小時；或于40～100℃加熱處理0.5～24小時，最好為1～10小時；堿為氫氧化鉀、或氫氧化鈉、或碳酸氫鈉等堿性試劑；4)分離黃芪甲苷將所得堿處理溶液，將其用酸調節(jié)pH值至5～9，再用有機溶劑萃取，分取有機溶液層；所述萃取用有機溶劑為碳數為C4～C6的低級醇系、或丁酮、或體積比為5∶1～3∶2的醋酸乙酯-乙醇或體積比為5∶1～3∶2醋酸乙酯-甲醇混合有機溶劑；5)純化黃芪甲苷將所得有機溶劑層濃縮至干，加適量水轉溶，調節(jié)溶液pH值為3～9，最好為4.5～7用有機溶劑萃取，揮去有機溶劑，水層即有白色沉淀析出，所述萃取用有機溶劑為石油醚、或醋酸乙酯或石油醚-醋酸乙酯(體積比為1∶1～1∶5)、或石油醚-丙酮(體積比為5∶1～1∶1)、或醋酸乙酯-丙酮(體積比為10∶1～5∶1)的混合溶液；6)精制離心或過濾所得白色沉淀，用水或碳數為C1～C3的含水低級醇進行洗滌，含水低級醇濃度為X，40％＜X≤100％，濾過，沉淀干燥，干品用碳數為C1～C3的含水低級醇、或碳數為C1～C3的低級醇、或丙酮或體積比為2∶1～1∶3的醋酸乙酯與碳數為C1～C2的低級醇的混合溶液重結晶，即得黃芪甲苷原料藥。
一種黃芪甲苷原料藥，該原料藥是采用以上方法制備得到的。
一種黃芪甲苷制劑，是本發(fā)明得到的黃芪甲苷原料藥為主要成分，加入藥劑學可接受的輔料，制成藥劑學可接受的劑型。輔料包括淀粉、微晶纖維素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、亞硫酸鈉等。藥劑學可接受的劑型為口服劑和注射劑如片劑、膠囊、注射液等。
本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明工藝路線簡便、無須使用硅膠柱層析和毒害性有機溶劑，制備周期短，所得黃芪甲苷質量穩(wěn)定、價格低廉、可供大規(guī)模工業(yè)化生產。因此，本發(fā)明將促進黃芪甲苷作為醫(yī)藥工業(yè)原料藥的開發(fā)、利用。
下面結合較佳實施例對本發(fā)明作進一步說明，可以幫助本領域的技術人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明，凡依照本發(fā)明的內容所做的任何本領域的等同替換均屬于本發(fā)明的保護范圍之內。
具體實施例方式
實施例1.黃芪甲苷原料藥的制備1、膜莢黃芪(Astragalus membranaceus Bge)1kg，加80％乙醇(3、2、2倍量)加熱回流提取3次，每次1hr，提取液濾過，合并；2、濾液濃縮至相對密度1.15(60℃)；3、濃縮液加50％NaOH水溶液調pH值為13，50℃水浴加熱4小時，放冷；4、上述堿處理溶液用10％HCl調節(jié)pH值至9，用等量正丁醇萃取4次，合并正丁醇層，濃縮至干；5、正丁醇萃取物加100ml水轉溶，調節(jié)pH值為5.5，用石油醚萃取2次，棄去石油醚層，水液放置，即析出白色粉末狀沉淀；6、含沉淀溶液離心，傾出上清夜，沉淀用50％乙醇水溶液洗滌2次，濾過，干燥，再用甲醇重結晶，濾過，濾得沉淀于105℃干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例2.黃芪甲苷原料藥的制備1、綿毛黃芪(Astragalus siversianus，Pall)2kg，用10倍量60％乙醇滲漉，滲漉液濾過；2、濾液濃縮至相對密度1.28(60℃)；3、提取物加水稀釋至相對密度1.10，加KOH調節(jié)溶液pH值約10，70℃水浴加熱10小時，放冷；4、上述堿處理溶液用10％HCl調節(jié)pH值至8.0，用等量正戊醇萃取4次，合并正戊醇層，濃縮至干；5、正戊醇萃取物加60ml水轉溶，調節(jié)pH值為7.0，用石油醚-醋酸乙酯(1∶3)萃取2次，棄去有機層，水液放置，即析出沉淀；6、含沉淀溶液濾過，濾得沉淀用水洗滌2次，濾過，干燥，再用60％甲醇重結晶，濾過，結晶于105℃干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例3黃芪甲苷原料藥的制備
1、蒙古黃芪(Astragalus monggholicus)1kg，每次加10倍量水煎煮提取3次，分別提取2、1.5、1小時，煎煮液濾過，合并；2、濾液濃縮至相對密度為1.32，(60℃)；3、濃縮液加水稀釋至溶液相對密度1.05(30℃)，加適量NaOH調節(jié)溶液pH值至14，80℃水浴加熱2小時，放冷；4、上述堿處理溶液再用10％HCl調節(jié)pH值至6.5，用等量醋酸乙酯-乙醇(3∶1)混合溶劑萃取3次，合并有機層，濃縮至干；5、萃取物加100ml水轉溶，用等量石油醚-丙酮(5∶1)混合有機溶媒萃取2次，棄去有機溶媒層，放置，即析出沉淀；6、含沉淀溶液濾過，用40％乙醇溶液洗滌2次，濾過，干燥，再用丙酮重結晶，濾過，濾得沉淀于105℃干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例4.黃芪甲苷原料藥的制備1、蒙古黃芪(Astragalus monggholicus)1kg，加60％乙醇溶液(3、2、2倍)加熱回流提取3次，分別提取2、1、1小時，煎煮液濾過，合并；2、濾液濃縮至相對密度為1.20，(60℃)；3、濃縮液加適量水調整溶液60℃下相對密度為1.14，加50％KOH水溶液調溶液pH值為13，60℃水浴加熱3小時，放冷；4、上述堿處理溶液再用10％HCl調節(jié)pH值至7.5，用等量丁酮萃取3次，合并丁酮層，濃縮至干；5、萃取物加100ml水轉溶，10％HCl調節(jié)pH值至6，用等量醋酸乙酯萃取2次，棄去有機溶媒層，水層放置，即析出沉淀；6、含沉淀溶液濾過，用60％甲醇溶液洗滌2次，濾過，干燥，再用醋酸乙酯-乙醇(2∶3)混合溶劑重結晶，濾過，濾得沉淀于105℃干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例5.黃芪甲苷原料藥的制備1、膜夾黃芪(Astragalus membranaceus Bge)2kg，用10倍量水滲漉，滲漉液過濾；2、濾液濃縮至相對密度1.16(60℃)；
3、50％NaOH水溶液調節(jié)pH值約11，60℃水浴加熱5小時，放冷；4、上述堿處理溶液用20％HCl調節(jié)pH值至8，用等量醋酸乙酯-乙醇(3∶2)混合有機溶媒萃取4次，合并有機溶媒層，濃縮至干；5、萃取物加60ml水轉溶，10％HCl調節(jié)pH值至5.5，用醋酸乙酯-丙酮(6∶1)萃取2次，棄去有機層，水液放置，即析出沉淀；6、含沉淀溶液濾過，用水洗滌2次沉淀，濾過，沉淀再用醋酸乙酯-甲醇(1∶1)重結晶，濾過，結晶于70℃減壓干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例6.黃芪甲苷原料藥的制備1、綿毛黃芪(Astragalus siversianus，Pall)1.5kg，加60％乙醇(3、2、2倍量)加熱回流提取3次，分別提取2、1、1小時，提取液濾過，合并；2、提取液濃縮至相對密度為1.10(60℃)；3、濃縮液加入NaHCO3調節(jié)pH值約14，90℃水浴加熱4小時，放至室溫；4、上述堿處理溶液用20％HCl調節(jié)pH值至8，用等量醋酸乙酯-甲醇(5∶2)混合有機溶媒萃取3次，合并有機溶媒層，濃縮至干；5、萃取物加120ml水轉溶，10％HCl調節(jié)pH值至4.5，用石油醚-丙酮(3∶1)萃取3次，棄去有機層，水液放置，即析出沉淀；6、含沉淀溶液濾過，用60％甲醇洗滌2次沉淀，濾過，沉淀再用乙醇重結晶，濾過，結晶于70℃減壓干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例7.黃芪甲苷原料藥的制備1、膜莢黃芪(Astragalus membranaceus Bge)3kg，加60％乙醇10倍量水滲漉，滲漉液過濾，合并；2、濾液濃縮至相對密度1.15(60℃)；3、濃縮液加30％NaOH水溶液調pH值為10，50℃水浴加熱8小時，放冷；4、上述堿處理溶液用15％HCl調節(jié)pH值至7.5，用等量正丁醇萃取4次，合并正丁醇層，濃縮至干；5、正丁醇萃取物加200ml水轉溶，調節(jié)pH值為5.0，用石油醚-醋酸乙酯(1∶5)萃取2次，棄去有機溶劑層，水液放置，即析出白色粉末狀沉淀；6、含沉淀溶液離心，傾出上清夜，沉淀用70％甲醇水溶液洗滌2次，濾過，干燥，再用丙酮重結晶，濾過，濾得沉淀于80℃干燥，粉碎，得黃芪甲苷原料藥。
實施例8.黃芪甲苷片劑黃芪甲苷100g，加400g(乳糖-微晶纖維5∶1)、硬脂酸鎂1％，用70％乙醇制粒、壓片即得10000片黃芪甲苷片劑。規(guī)格50mg/片，每片含黃芪甲苷不少于9.5mg。
實施例9.黃芪甲苷注射劑黃芪甲苷5g，加2000ml(乙醇-甘油2∶1(v/v))、3000ml注射用水溶解，濾過，制得5000支注射劑。規(guī)格1ml/支，每支含黃芪甲苷不少于0.95mg。
實施例10.黃芪甲苷膠囊劑黃芪甲苷100g，加糊精100g、乳糖300g用60％乙醇制粒、干燥、裝膠囊，制得10000粒膠囊劑。規(guī)格50mg/支，每支含黃芪甲苷不少于9.5g。
實施例11.黃芪甲苷對心力衰竭模型大鼠心臟功能的改善作用1、實驗動物及藥品Wistar大鼠，雌雄均有，體重200～300g，隨機分為4組對照組、AS2組、AS4組、AS8組。戊巴比妥鈉(進口分裝，上?；瘜W試劑采購供應站)。黃芪甲苷(Astragaloside IV，AS，天津藥物研究院植化新藥組提供)。
2、手術及結果記錄用烏拉坦腹腔注射麻醉(1.2g/kg)，將動物固定于手術臺上，行氣管插管術，然后分離右頸總動脈和左側頸外靜脈，通過右頸總動脈行左心室內插管，測定左室內壓力的收縮壓(LVSP)和舒張壓(LVDP)、最大上升速率和下降速率(dP/dtmax和-dP/dtmax)、左室舒末壓(LVEDP)行左側頸外靜脈插管，以建立給藥途徑。分離左側股動脈并插管記錄血壓的收縮壓(SAP)和舒張壓(DAP)。把針狀電極分別插入左右前肢的皮下，記錄II導聯心電圖。將以上各指標并聯輸入多道生理記錄儀(日本光電RM-6300)和MP-100數據采集系統(tǒng)(美國BIOPAC)進行數據采集、記錄，并以AcqKnowledge v.3.5.7軟件進行分析處理。
3、心衰模型的制備及黃芪甲苷作用的觀察記錄正常指標后，從左側頸外靜脈用恒速注射泵恒速注射戊巴比妥鈉溶液(1.5％)，給藥速度0.2ml/min，給藥時間5min左右，直至LVSP和dP/dtmax分別降低到正常水平20～40％左右，表明心功能已嚴重衰竭。待其平穩(wěn)2～5min后，對照組給生理鹽水(NS)，AS2組給0.2％AS，AS4組給0.4％AS，AS8組給0.8％AS，藥物均經左側頸外靜脈用恒速注射泵以0.2ml/min的速度注入，給藥時間均為5min，所以AS2、AS4、AS83組AS溶液的溶積均為1ml，劑量分別為2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg，停藥后觀察30min。各組動物手術后正常值、心衰后以及給藥后不同時間的各指標變化匯于下表黃芪甲苷對實驗性心衰的影響


x±s；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001vsHF；UnitLVSP、LVDP、LVEDP、SAP、DAPkPa；+dP/dtmax、-dP/dtmaxkPa*s-1；HRbeats/min；ASAstragaloside IV結論AS在4、8mg/kg劑量下可顯著改善已衰竭的心臟心功能，使動脈血壓上升，說明了其作為藥用原料使用的有效性。
權利要求
1.一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于該方法依次包括下列步驟1)提取以含黃芪甲苷的藥材為原料，用水、低級醇或含水低級醇提取，濾過，得到黃芪提取液，其中低級醇的碳數為C1～C5，濃度為X，0％＜X≤100％；2)濃縮將所得提取液進行濃縮，得到60℃下相對密度為1.05～1.40的濃縮液；3)堿處理調整濃縮液相對密度為60℃下1.05～1.20，加堿調溶液pH值為8～14或大于14，常溫放置12～48小時或于40～100℃加熱處理0.5～24小時；4)分離黃芪甲苷將所得堿處理溶液，將其用酸調節(jié)pH值至5～9，再用有機溶劑萃取，分取有機溶液層；所述萃取用有機溶劑為碳數為C4～C6的低級醇系、或丁酮或體積比為5∶1～3∶2的醋酸乙酯-乙醇或體積比為5∶1～3∶2的醋酸乙酯-甲醇混合有機溶劑；5)純化黃芪甲苷將所得有機溶劑層濃縮至干，加適量水轉溶，調節(jié)溶液pH值為3～9，用有機溶劑萃取，揮去有機溶劑，水層即有白色沉淀析出，所述萃取用有機溶劑為石油醚、或醋酸乙酯或石油醚-醋酸乙酯、或石油醚-丙酮、或醋酸乙酯-丙酮的混合溶劑；6)精制離心或過濾所得白色沉淀，用水或碳數為C1～C3的含水低級醇進行洗滌，含水低級醇濃度為X，40％＜X≤100％，濾過，沉淀干燥，干品用碳數為C1～C3的含水低級醇、或碳數為C1～C3的低級醇、或丙酮或體積比為2∶1～1∶3的醋酸乙酯與C1～C2的低級醇的混合溶液重結晶，即得黃芪甲苷原料藥。
2.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述步驟1)中低級醇濃度為X，30％≤X≤80％。
3.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述提取方法為煎煮法、或加熱回流法、或浸出法和滲漉法中的一種。
4.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的堿處理用堿為氫氧化鉀、或氫氧化鈉、或碳酸氫鈉等堿性試劑。
5.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述步驟3)中加熱處理時間為1～10小時。
6.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述步驟5)中調節(jié)溶液pH值為4.5～7。
7.根據權利要求1所述的一種黃芪甲苷原料藥的制備方法，其特征在于所述步驟5)中石油醚-醋酸乙酯體積比為1∶1～1∶5，石油醚-丙酮體積比為5∶1～1∶1，醋酸乙酯-丙酮體積比為10∶1～5∶1。
8.一種黃芪甲苷原料藥，其特征在于該原料藥是采用權利要求1～7中任何一項所述的方法制備得到的。
9.一種黃芪甲苷制劑，其特征在于該制劑中的主要成分為權利要求8所述的黃芪甲苷原料藥，并加入制劑學可接受的輔料，制成藥劑學可接受的劑型；所述藥劑學可接受的劑型為口服制劑或注射劑。
10.根據權利要求9所述的一種黃芪甲苷制劑，其特征在于所述藥劑學可接受的輔料包括淀粉、微晶纖維素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、亞硫酸鈉中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃芪甲苷原料藥的制備方法及其原料藥和制劑，屬于中藥現代化領域。該方法如下1)提取以含黃芪甲苷的藥材為原料，提取，濾過，得提取液；2)濃縮提取液濃縮為60℃下相對密度1.05～1.40的濃縮液；3)堿處理調溶液pH值為8～14或大于14；4)分離黃芪甲苷調堿處理液的pH值至5～9，用有機溶劑萃取，分取有機溶液層；5)純化將有機溶劑層濃縮至干，轉溶，調pH值為3～9，用有機溶劑萃取，揮去有機溶劑，白色沉淀析出；6)精制離心或過濾所得白色沉淀，洗滌，濾過，沉淀干燥，重結晶，得黃芪甲苷原料藥。本發(fā)明的優(yōu)點工藝路線簡便，制備周期短，所得黃芪甲苷質量穩(wěn)定、價格低廉、可供大規(guī)模工業(yè)化生產。
文檔編號A61P9/04GK1669566SQ20041000796
公開日2005年9月21日 申請日期2004年3月19日 優(yōu)先權日2004年3月19日
發(fā)明者韓英梅, 趙娜夏, 劉鵬, 夏廣萍, 付曉麗, 韓鋒 申請人:天津藥物研究院