專利名稱：乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療帕金森病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地涉及乙酰膽堿酯酶抑制劑在治療帕金森病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
帕金森病(parkinson’s disease，PD)是以中腦黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元為主受到損傷的老年性退行性神經(jīng)疾病，呈進(jìn)行性發(fā)展。臨床早期以錐體外系運(yùn)動(dòng)受損為主運(yùn)動(dòng)遲緩、靜止性震顫、肌強(qiáng)直及姿勢反射障礙為臨床特征，隨著疾病進(jìn)展，可出現(xiàn)認(rèn)知障礙，包括癡呆、抑郁和焦慮等癥狀，其中對于帕金森病伴隨有癡呆的病人能夠占到30-60％不等，甚至有調(diào)查顯示可達(dá)到93％的病人有癡呆表現(xiàn)；多巴胺替代治療有效；臨床發(fā)病年齡一般在60歲左右，早到40歲就可出現(xiàn)癥狀，在55歲以上有1％的罹患該病，66歲以上可達(dá)2％以上。
PD病因尚不清楚，發(fā)病機(jī)理復(fù)雜；病理特征為選擇性黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性丟失、殘余多巴胺能神經(jīng)元出現(xiàn)嗜酸性包涵體(lewy小體)，導(dǎo)致黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)多巴胺遞質(zhì)減少的生化改變。對于多巴胺能神經(jīng)元選擇性丟失的認(rèn)識，以氧化應(yīng)激反應(yīng)、線粒體功能缺陷和細(xì)胞凋亡機(jī)制為基礎(chǔ)的解釋得到了大家的認(rèn)可，在此認(rèn)識基礎(chǔ)上的藥物治療包括1)多巴胺替代治療，如左旋多巴；2)多巴胺受體激動(dòng)劑，如溴隱亭、麥角乙脲等；3)抗膽堿能制劑，如本海索；4)多巴胺釋放促進(jìn)劑，如金剛烷胺；4)單胺氧化酶抑制劑，如丙炔苯丙胺等；5)兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，如硝替卡明；6)其它，如谷氨酸拮抗劑、抗組胺藥、心得胺等；此外，阿樸嗎啡、卡麥角林、羅皮尼羅、普拉克索也有報(bào)道用于PD治療。由于現(xiàn)有藥物主要以改善癥狀為目的，難以達(dá)到阻止或減少用藥過程中多巴胺能神經(jīng)元繼續(xù)丟失，不能有效改變病程進(jìn)展，甚至有加速多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞丟失的毒副作用，如左旋多巴。
作為中樞老年退行性疾病，PD和阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)在病理和臨床癥狀上具有許多類似的重疊，如PD患者可以有癡呆癥狀及出現(xiàn)淀粉樣斑塊和纖維絲纏結(jié)的AD病理特征(Aarsland et al.，Aech.Neruol，1996，53538-542)。同樣，在AD患者中也可出現(xiàn)PD樣的運(yùn)動(dòng)障礙及l(fā)ewy小體病理現(xiàn)象(Hulette et al.，Neurology，1995，451991-1995)。
乙酰膽堿酯酶抑制劑作為AD患者的首選藥已經(jīng)在臨床中得到了認(rèn)可和使用，如Huperzine A(石杉堿甲)、Tacrine(他克林)等。由于歷來認(rèn)為PD發(fā)病的機(jī)理之一是神經(jīng)中樞多巴胺和乙酰膽堿之間的濃度平衡失調(diào)造成的，所以臨床上只應(yīng)用抗膽堿能藥物而不是應(yīng)用乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制劑來治療PD患者，這種治療方案效果不十分明顯，而且對于有癡呆癥狀及老年患者還不能使用。
綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)可有效治療帕金森病的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種有效治療帕金森病的藥物。
在本發(fā)明的第一方面，提供了乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療帕金森病藥物中的用途。
在另一優(yōu)選例中，所述藥物含有0.005-99重量百分比的乙酰膽堿酯酶抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體，更佳地，所述藥物含有0.01-90重量百分比的乙酰膽堿酯酶抑制劑。
在另一優(yōu)選例中，所述的乙酰膽堿酯酶抑制劑選自下組(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮；3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮；(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯；1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯；9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶；11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇；(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮；O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯；四異丙基焦磷酰胺；Fasciculin-I、或Fasciculin-II；以及藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一優(yōu)選例中，所述的抑制劑選自下組
1，5-二[4-烯丙基二甲基銨苯基戊-3-酮]，十烴季銨，N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺，加拉碘銨，3，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶，(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮，3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮，伊立替康，(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯，N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺，安貝氯銨，1-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯，1-萘基甲基氨基甲酸酯，2-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯，2，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯，鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯，間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯，苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯，9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶，7-甲氧基他克林，11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇，(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮，7-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮，12-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉，12-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉，N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲，12-(2′-羧基-5′-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮，O，O-二異丙基氟代磷酸酯，N-(磷酸甲基)甘氨酸，O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯，O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯，O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯，苯甲基磺酰氟，甲基磺酰氟，四異丙基焦磷酰胺，F(xiàn)asciculin-I，F(xiàn)asciculin-II或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一優(yōu)選例中，所述的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物為片劑、顆粒劑、針劑、粉劑或膠囊。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物用于治療同時(shí)患有老年癡呆病和帕金森病的病人。
在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明特別提供了(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮的用途，它被用于制備治療帕金森病藥物。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種治療帕金森病的方法，給予需要治療的病人安全有效量的乙酰膽堿酯酶抑制劑。


圖1乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
11，5-二(4-烯丙基二甲基銨苯基)戊-3-酮1，5-bis(4-allyldimethylammoniumphenyl]-pentan-3-one，BW284c51，C25H38N2O2十烴季銨(decamethonium，C16H38N2)3N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺N，N，N-trimethyl-O-hydroxyaniline，Edrophone，C9H14NO4加拉碘銨(gallamine，C30H60N3O3)53，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶3，8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium Propidium，C27H34N46(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮(±)-2-[(1-benzylpiperidin-4-yl)methyl]-5，6-dimethoxy-indan-1-one，donepezil，C24H29NO373-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮
3-[1-(Phenylmethyl)-4-Piperidinyl]-1-(2，3，4，5-Tetrahydro-1H-1-Benzazepin-8-yl)-1-Propanone，TAK-147，C25H32N2O8伊立替康(Irinotecan，CPT11，C33H39N4O6)9(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯(S)-N-ethyl-N-methyl-3-[(1-dimethyl-amino)ethyl]phenylcarbamate，rivastigmine，C14H22N2O2101，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol methylcarbamate，Physostigmine，C15H21N3O2111，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol-N-phenylcarbamate，Phenserine，C20H23N3O2121，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-yl-N-4’-i sopropylphenylcarbamate，Cymserine，C23H29N3O213(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，N1-norcymserine，C22H27N3O214(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1-phenethyl-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，N1-phenethylnorcymserine，C30H35N3O215(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-8-Benzyl-1，3a-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，C29H33N3O216(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，3a-Dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，C22H27N3O217(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，8-Dibenzyl-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，C35H37N3O218(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4’-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-4’-Isopropylphenylcarbamate，C21H25N3O2191，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol-N-2’-Methylphenylcarbamate，Tolserine，C21H25N3O220(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2’-methylphenylcarbamate，N1-nortolserine，C20H23N3O221(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1-phenethyl-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2’-methylphenylcarbamate，N1-phenethylnortolserine，C28H30N3O222(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-8-Benzyl-1，3a-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2’-Methylphenylcarbamate，C27H29N3O223(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，3a-Dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-2’-Methylphenylcarbamate，C20H23N3O224(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，8-Dibenzyl-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2’-Methylphenylcarbamate，C33H33N3O2
25(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2’-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-2’-Methylphenylcarbamate，C19H21N3O226±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯±-5-[2-(tert-butylamino)-1-hydroxyethyl]-m-phenylene bis-dimethylcarbamate，bambuterol，C18H29N3O527N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺N，N，N-trimethyl-3-[(dimethyl-amino)formyloxy]aniline，neostogmine，C12H19N2O228安貝氯銨(Ambenonium，C29H46Cl2N4O2)291-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯1-methyl-3-hydroxy-pyridinium dimethylcarbamate，Pyridostigmine，C9H13N2O2301-萘基甲基氨基甲酸酯1-naphthyl methylcarbamate，sevin，carbaryl，C12H11NO2312-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯2-isopropoxyphenyl-N-methylcarbamate，Propoxur，C11H15NO3322，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯2，3-dihydro-2，2-dimethylbenzofuranol-7-ol methylcarbamate，C12H15NO333鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯O-cumenyl methylcarbamate，isoprocarb，C11H15NO234間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯meta-tolyl-N-methylcarbamate，C9H10NO235苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯benzimidazole-2-yl-amino formic acid methyl ester，C9H9N3O2369-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶9-amino-1，2，3，4-tetrahydroacridine，Tacrine，C13H14N2377-甲氧基他克林(7-Methoxytacrine，C14H16N2O)3811-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇11-methyl-3-methoxy-4a，5，9，10，11，12-hexahydro-6H-benzofuran[3a，2-ef][2]benzoaza-6-ol，Galanthamine，C17H21NO339(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮或石杉堿甲
5R，9R，11E-5-amino-11-ethylidene-5，6，9，10-tetrahydro-7-methyl-5，9-methylenecycloocta-(b)pyridine-2(1H)-one，Huperzine A，C15H18N2O407-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮7-methyl-5，6，9，10，11，12，13，14-octahydro-5，11-tetrahydropyridine-5，9-methylenecycloocta-(b)pyridine-2(1H)-one，Huperzine B，C17H18N2O4112-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉12-Amino-3-chloro-9-ethyl-6，7，10，11-tetrahydro-7，11-methanocycloocta[b]quinoline，Huperzine X，C18H19ClN2)4212-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉12-Amino-3-chloro-9-methyl-6，7，10，11-tetrahydro-7，11-methanocycloocta[b]quinoline Huperzine Y，C17H17ClN2)43N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲N-[2-hydroxy-3-methoxy-5-chloro-benzilidene]-huperzine A，ZT-1，C23H23ClN2O34412-(2’-羧基-5’-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮12-(2’-carboxy-5’-methoxyphenyl)-2，12-dihydroxy-dodeca-4-one，Sporotricolone，C20H31O645O，O-二異丙基氟代磷酸酯O，O-diisopropyl fluorophosphate，DFP，Isoflurophate，C6H14FO3P46N-(磷酸甲基)甘氨酸N-(Phosphonomethyl)glycine，glyphosate，C3H8NPO547O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯O，O-dimethyl-(2，2，2-trichloro-1-hydroxyethyl)phosphate，Metrifonate，Trichlorfon，Totalene，Higalfon，Pronto，C4H8Cl3O4P48O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯O，O-dimethyl-O-(2，2-dichlorovinyl)phosphate，DDVP，C4H7Cl2O4P49O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯O，O-dimethyl-O-paranitrobenzylthiophosphate，Parathion-methyl，Dalf，F(xiàn)olidol-M，C8H10NO5PS50O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯O，O-dimethyl-S-(N-methylformamylmethyl)dithiophosphate，C5H12NO3PS251O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，
O，O-dimethyl-S-(N-methylformamylmethyl)thiophosphate，Omethoate，F(xiàn)olemate，C5H12NO4PS52O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯O，O-dimethyl-S-[2-(1，4-diethyl succinate)]dithiophosphate53苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF，C7H7FO2S)54甲基磺酰氟(methanesulfonyl fluoride，MSF，CH3FO2S)55四異丙基焦磷酰胺tetraisopropylpyrophosphoramide，Iso-OMPA，C12H28N4O3P2S圖2多巴胺(200uM)誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞SH-SY5Y凋亡，凋亡細(xì)胞核表達(dá)乙酰膽堿酯酶。左圖示乙酰膽堿酯酶染色(400倍)，右圖為Hoechst 33258染色顯示細(xì)胞凋亡(400倍)。
圖36-羥基多巴胺(20ug/ml)誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞SH-SY5Y凋亡，左圖示凋亡細(xì)胞核表達(dá)乙酰膽堿酯酶(200倍)，右圖為Hoechst 33258染色顯示細(xì)胞凋亡(200倍)。
圖4MPP誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞SK-N-SH細(xì)胞凋亡，左圖示凋亡細(xì)胞核表達(dá)乙酰膽堿酯酶(200倍)，右圖為MPP誘導(dǎo)后顯微鏡觀察(200倍)。
圖5多巴胺(0.5mM)誘導(dǎo)表達(dá)有大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的CHO細(xì)胞凋亡，左圖示凋亡細(xì)胞核表達(dá)乙酰膽堿酯酶(100倍)，右圖為吉姆薩染色顯示凋亡細(xì)胞(100倍)。
圖6RT-PCR檢測多巴胺和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞SK-N-SH凋亡中乙酰膽堿酯酶的表達(dá)情況。顯示乙酰膽堿酯酶只在經(jīng)過多巴胺和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞中表達(dá)。Con示正常對照即未誘導(dǎo)的細(xì)胞；M示Marker；DA示多巴胺誘導(dǎo)組；6-OHDA示6-羥基多巴胺誘導(dǎo)組；P示凋亡細(xì)胞陽性對照。
圖7乙酰膽堿酯酶抑制劑Huperzine A對多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抑制率，石杉堿甲(1μM和10μM)可以有效部分抑制細(xì)胞死亡，*表示p＜0.05，給藥后細(xì)胞死亡率顯著降低；#表示p＞0.05，顯示乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉堿甲的抑制效率沒有劑量依賴性(Fisher T-test)。
圖8FACS檢測多巴胺誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率，石杉堿甲(10μM)可以使細(xì)胞凋亡率從70％下降到40％。其中A正常細(xì)胞B多巴胺誘導(dǎo)C石杉堿甲(10uM)+多巴胺。
圖9正常SD大鼠海馬組織AChE組織化學(xué)染色作為陽性對照，顯示海馬膽堿能神經(jīng)元胞質(zhì)著色，非細(xì)胞核著色。其中，左圖為放大20倍，右圖為放大100倍。
圖10多巴胺(1μM)MFB注射正常SD大鼠48小時(shí)后組織化學(xué)染色檢測中腦黑質(zhì)乙酰膽堿酯酶，顯示注射48小時(shí)后中腦黑質(zhì)有乙酰膽堿酯酶表達(dá)，染色位于細(xì)胞核，少部分位于細(xì)胞質(zhì)。其中，左圖為放大100倍，右圖為放大200倍。
圖116-羥基多巴胺(10μg)MFB注射正常SD大鼠2周后檢測其中腦黑質(zhì)乙酰膽堿酯酶，顯示注射2周后中腦黑質(zhì)有乙酰膽堿酯酶表達(dá)，著色位于細(xì)胞核。其中，左圖為放大50倍，右圖為放大100倍。
圖12MPTP(30mg/kg/day)連續(xù)7天皮下注射C57BL/6J小鼠后，檢測中腦黑質(zhì)乙酰膽堿酯酶，顯示中腦黑質(zhì)部表達(dá)乙酰膽堿酯酶，著色位于細(xì)胞核。其中，左圖為放大100倍，右圖為放大200倍。
圖13MPTP制作小鼠PD模型的行為學(xué)檢測方法，A圖示游泳檢測(swimtest)；B圖示滾筒檢測(Rotarod test)。
圖14示MPTP注射后小鼠出現(xiàn)行為改變，模型制作成功，A圖示僵直狀態(tài)；B圖示后腳趾分開；C圖示豎尾。
圖15游泳實(shí)驗(yàn)評價(jià)結(jié)果。*表示p＜0.05，表明L-DA治療有效；**表示p＜0.001，表明石杉堿甲治療顯著有效；#表示p＞0.05，表明石杉堿甲治療組與正常組比較(運(yùn)動(dòng)缺陷)沒有顯著差異。其中Control示生理鹽水處理組(n＝6)；Saline示MPTP+生理鹽水治療組(n＝6)；L-DA示MPTP+左旋多巴治療組(n＝6)；Huperzine A示MPTP+石杉堿甲組(n＝6)(one-way AVONA)。
圖16滾筒實(shí)驗(yàn)評價(jià)結(jié)果。*表示p＜0.05，表明L-DA有效改善運(yùn)動(dòng)障礙及石杉堿甲改善比L-DA效果顯著；**表示p＜0.001，表明石杉堿甲改善運(yùn)動(dòng)障礙的效果(評分)顯著高于未治療組(Saline組)；而#表示p＞0.05，Huperzine組(評分)與正常組比較差異無顯著性。Control示生理鹽水處理組；Saline示MPTP+生理鹽水；L-DA示MPTP+左旋多巴；Huperzine A示MPTP+石杉堿甲(one-way AVONA)。
圖17顯示了正常小鼠黑質(zhì)和紋狀體TH免疫組化染色和尼氏染色。其中A，C黑質(zhì)部； B紋狀體部；D尼氏染色。
圖18顯示了saline+MPTP注射組的黑質(zhì)和紋狀體TH免疫組化染色和尼氏染色，其中，A黑質(zhì)；B紋狀體；C黑質(zhì)尼氏染色。
圖19顯示了MPTP+L-DA組的黑質(zhì)和紋狀體TH免疫組化染色和尼氏染色，其中，A黑質(zhì)；B紋狀體；C黑質(zhì)尼氏染色。
圖20顯示了MPTP+石杉堿甲(0.1mg/kg)組的黑質(zhì)和紋狀體TH免疫組化染色和尼氏染色，其中，A黑質(zhì)；B紋狀體；C黑質(zhì)尼氏染色。
圖21示MPTP誘導(dǎo)的小鼠PD模型的各治療組多巴胺能神經(jīng)元丟失率。其中，Saline組saline+MPTP；L-DA組L-DA+MPTP；huperzine A組石杉堿甲+MPTP。saline組丟失為67％；L-DA組為76％；huperzine A組為14.5％。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過深入研究認(rèn)為，選擇有效藥物阻止或減緩多巴胺能神經(jīng)元凋亡速度，對于改變PD疾病病程發(fā)展以及阻止癥狀惡化具有重要的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用價(jià)值，是帕金森病藥物治療的最佳選擇。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶抑制劑可非常有效地通過抑制乙酰膽堿酯酶達(dá)到阻止神經(jīng)細(xì)胞凋亡的目的，從而保護(hù)了PD病人的多巴胺能神經(jīng)元，提高了黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能。同時(shí)，乙酰膽堿酯酶抑制劑還在抑制乙酰膽堿酯酶同時(shí)也可提高內(nèi)源性乙酰膽堿濃度，從而通過煙堿樣膽堿能β2受體調(diào)控紋狀體多巴胺的釋放。因此，乙酰膽堿酯酶抑制劑可有效地對帕金森病的進(jìn)行標(biāo)本兼治，特別對患有癡呆的PD患者更能提高療效。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的體外研究表明，乙酰膽堿酯酶在多巴胺能神經(jīng)毒性藥物誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞中表達(dá)，而不在未誘導(dǎo)的細(xì)胞中出現(xiàn)；huperzine A可以有效地降低多巴胺能神經(jīng)毒性誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
體內(nèi)研究結(jié)果顯示，在所有多巴胺神經(jīng)毒性藥物誘導(dǎo)的動(dòng)物模型中，乙酰膽堿酯酶均有表達(dá)，且定位于細(xì)胞核；在MPTP誘導(dǎo)的動(dòng)物模型行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中huperzine A可以有效地改善動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)障礙，病理檢測發(fā)現(xiàn)huperzine A應(yīng)用組可以有效地防止中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞丟失。
這些結(jié)果表明，無論是體外還是體內(nèi)，乙酰膽堿酯酶都參與到多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的凋亡中；而其抑制劑可以有效地阻止細(xì)胞凋亡所造成的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞丟失，有效改善PD的運(yùn)動(dòng)障礙。由于乙酰膽堿酯酶抑制劑本身具有改善患者認(rèn)知障礙的作用，因此，乙酰膽堿酯酶抑制劑可以安全有效地治療PD患者的錐體外系運(yùn)動(dòng)功能障礙及認(rèn)知障礙。
在本發(fā)明中，使用如下定義本文中，術(shù)語“含有”表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的藥物組合物。因此，術(shù)語“主要由...組成”和“由...組成”包含在術(shù)語“含有”中。
本文中，“藥學(xué)上可接受的”成分是適用于人和/或動(dòng)物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。更佳地，“藥學(xué)上可被接受”是指不影響中樞乙酰膽堿酯酶抑制劑活性的無毒物質(zhì)。
本文中，術(shù)語“安全有效量”指按本發(fā)明的方式使用時(shí)足以獲得需要的治療反應(yīng)而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的成分的量。顯然，具體的“安全有效量”因各種因素而異，如受治療的特殊病情、患者的身體條件、受治療的哺乳動(dòng)物的種類、療程、同時(shí)進(jìn)行的治療的種類(如果有的話)、所應(yīng)用的具體制劑和化合物或其衍生物的結(jié)構(gòu)。
本文中，“活性成分”包括乙酰膽堿酯酶抑制劑及其藥學(xué)上可接受的鹽。代表性的鹽包括(但并不限于)鈉鹽、鉀鹽、鋅鹽等。
在本文中，術(shù)語“乙酰膽堿酯酶抑制劑”包括乙酰膽堿酯酶抑制劑及其鹽。
本文中，“藥物載體”是用于將乙酰膽堿酯酶抑制劑傳送給動(dòng)物或人的藥學(xué)上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體，可根據(jù)給藥方式而選擇的。
活性化合物本發(fā)明用于治療帕金森病的活性化合物是乙酰膽堿酯酶抑制劑。乙酰膽堿酯酶抑制劑是一類抑制乙酰膽堿酯酶活性的化合物，代表性的抑制劑包括(但并不限于)(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮、3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮、(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯、1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯、9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶、11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇、(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮、O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯、四異丙基焦磷酰胺、Fasciculin-I和Fasciculin-II以及它們的衍生物等。列舉化合物結(jié)構(gòu)參見圖1。這些化合物都是已知的，可按照常規(guī)方法(如文獻(xiàn)和專利中報(bào)道的方法)合成或從市場上購買。
一種特別優(yōu)選的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮(huperzine A，石杉堿甲)乙酰膽堿酯酶抑制劑可以以由藥學(xué)上或生理學(xué)可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下無機(jī)酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機(jī)酸形成的鹽，而有機(jī)酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)的“前體藥物”的形式(當(dāng)以這種形式給藥時(shí)，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。
劑量在本發(fā)明中，對乙酰膽堿酯酶抑制劑的劑量沒有特別限制，可用任何合適的劑量。帕金森病包括原發(fā)性和繼發(fā)性，如外傷、腫瘤及寄生蟲等所致的帕金森病綜合癥。在使用乙酰膽堿酯酶抑制劑治療PD時(shí)，藥物的用量取決于疾病的性質(zhì)、病程、輕重、藥物反應(yīng)情況以及病人接受治療的情況等，最終由處方醫(yī)生決定給予病人多少劑量，一般可參考應(yīng)用于AD患者的用量。
一般，合適的含量是乙酰膽堿酯酶抑制劑占藥物組合物總重量的0.01％-99％，較佳地0.1-90％。在治療帕金森病時(shí)，乙酰膽堿酯酶抑制劑的有效劑量范圍通常為0.005-50毫克/千克·天或更高，較佳地為0.01-5毫克/千克·天，更佳地為0.05-1毫克/千克·天。
劑量單元包括一種乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物，或者多種乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物所形成的混合物。劑量單元還可含有稀釋劑、填充劑、載體等。劑量單位是固體或凝膠形式，如丸劑、片劑、膠囊等，或者是液體形式，它們適合口服給藥、直腸給藥、局部給藥或腸胃外給藥、或者靜脈內(nèi)給藥。
劑型本發(fā)明的經(jīng)口給藥的固體組合物可采用片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滴劑等形式。這些固體組合物中混合了1種或1種以上的活性物質(zhì)和至少1種惰性稀釋劑，例如，乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、果膠、硅鋁酸鎂、鋁酸鎂。還可按照常用方法使組合物中含有除了惰性稀釋劑之外的添加劑，例如，硬脂酸鎂等潤滑劑、纖維素乙醇酸鈣等崩解劑、乳糖等穩(wěn)定劑、谷氨酸或天冬氨酸等助溶劑。如是片劑或丸劑，還可根據(jù)需要，在其外部包裹上蔗糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等糖衣或胃溶性、腸溶性薄膜。
經(jīng)口給藥的液體組合物包括藥劑上允許的乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、酏劑等，通常使用的惰性稀釋劑包括精制水、乙醇。該組合物中除了惰性稀釋劑之外，還可包含濕潤劑、懸浮劑等助劑，甜味劑、矯味劑、芳香劑和防腐劑。
非經(jīng)口給藥的注射劑包括無菌水性或非水性溶液劑、懸浮劑和乳濁劑。水性溶液劑和懸浮劑中包含注射劑用蒸餾水及生理鹽水。非水溶性溶液劑和懸浮劑中包含丙二醇，聚乙二醇，可可脂、橄欖油、蓖麻油等植物油，乙醇等醇類，阿拉伯膠、吐溫80(商品名)等。這些組合物中還可包含等滲劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑(例如，乳糖)、助溶劑(例如，谷氨酸、天冬氨酸)。用濾菌膜過濾上述組合物，再配合使用滅菌劑就可達(dá)到無菌的目的。然后，利用上述組合物制得無菌的固體組合物，在使用前用水或無菌注射用溶劑溶解就可加以利用。
可用于配制本發(fā)明口服劑型的、具體的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑例子，在美國專利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本發(fā)明的有用劑型的技術(shù)和組合物，在下列文獻(xiàn)中有描述7種現(xiàn)代制劑(7 ModernPharmaceutics).第9和10章(Banker & Rhodes編輯，1979)；Lieberman等人，藥物劑型片劑(Pharmaceutical Dosage FormsTablets)(1981)；和Ansel，藥物劑型導(dǎo)論(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)2版(1976)。
治療方法治療方法可以是，治療帕金森病的任何合適有效方法。治療可以是口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、靜脈內(nèi)給藥。施用有效量藥物的方法還取決于待治療的帕金森病的癥狀和病情程度。據(jù)信，通過將乙酰膽堿酯酶抑制劑與合適的載體或稀釋劑一起配制，并通過口服、靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥的腸胃外治療方法，是將化合物施用于溫血?jiǎng)游锏膬?yōu)選方法。
本發(fā)明的乙酰膽堿酯酶抑制劑還可與其他治療和輔助治療帕金森病的物質(zhì)聯(lián)用，以進(jìn)一步提高治療效果。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于乙酰膽堿酯酶抑制劑可非常有效地通過抑制乙酰膽堿酯酶達(dá)到阻止神經(jīng)細(xì)胞凋亡的目的，從而保護(hù)了PD病人的多巴胺能神經(jīng)元，提高了黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能。同時(shí)，乙酰膽堿酯酶抑制劑還在抑制乙酰膽堿酯酶同時(shí)也可提高內(nèi)源性乙酰膽堿濃度，從而通過煙堿樣膽堿能β2受體調(diào)控紋狀體多巴胺的釋放。因此，乙酰膽堿酯酶抑制劑可有效地對帕金森病的進(jìn)行標(biāo)本兼治，特別對患有癡呆的PD患者更能提高療效。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
材料以下實(shí)驗(yàn)所用主要藥品來源huperzine A購自Sigma公司，左旋多巴胺購自Roche公司；TH抗體購自Vector Laboratories公司。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物SD大鼠和C57BL/6J小鼠購自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)用的藥物注射液的配制huperzineA溶于生理鹽水0.1mg/ml；多巴胺輾碎溶于生理鹽水按40mg/kg灌胃。
實(shí)施例1 體外檢測凋亡細(xì)胞表達(dá)乙酰膽堿酯酶(組織化學(xué)方法)細(xì)胞培養(yǎng)SK-N-SH細(xì)胞、CHO細(xì)胞在37.5℃，5％CO2的濕潤條件下，將細(xì)胞培養(yǎng)于10％小牛血清(華美)的RMBI-1640(Gibco)培養(yǎng)基中，添加HEPES和谷氨酰胺，100IU/ml氨芐青霉素，100μg/ml鏈霉素；細(xì)胞以每周1∶10的分裂比例傳代，培養(yǎng)8-12天，傳代約4-20代，提前2天接種于48孔培養(yǎng)板(Costar)長滿備用。在CHO細(xì)胞系中永久表達(dá)大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的DAT-CHO細(xì)胞系(命名為D8細(xì)胞系)。D8與CHO細(xì)胞培養(yǎng)相同，除了添加Geneticin(G418)400μg/ml(Gibco/BRL)；SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)用DMEM/F12(Gibco)取代RMBI-1640，其它條件不變。
多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞毒誘導(dǎo)細(xì)胞爬片，多巴胺(200μM)和6-羥基多巴胺(20μg/ml)作用SH-S55Y24小時(shí)，多巴胺(500μM)作用D8細(xì)胞24小時(shí)和多巴胺(100μM)作用SK-N-SH細(xì)胞24小時(shí)。
AChE免疫組化染色1)10％福爾馬林固定20-26分鐘；2)蒸餾水洗三次；3)入孵育液，室溫或37℃，恒溫孵育1-2小時(shí)；4)蒸餾水洗；5)甘油明膠封固。
孵育液(臨用前30分鐘配制混勻至亮綠色)乙酰硫膽堿碘鹽 5mg0.1M磷酸緩沖液pH6.07.5ml0.1M檸檬酸鈉 0.5ml30mMCuSO41.0ml5mM鐵氰化鉀1.0mlpH5.5-6.5 10mlHoechst 33258染色和吉姆薩染色Hoechst 33258染色多巴胺能神經(jīng)毒性物質(zhì)加入誘導(dǎo)細(xì)胞加入10μl0.1mg/ml Hoechst 33258/ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)12小時(shí)，PBS洗三次，在熒光顯微鏡(藍(lán)光)觀察、照相。
吉姆薩染色誘導(dǎo)后細(xì)胞，PBS洗，涼干；甲醇固定1分鐘，涼干；加吉姆薩工作液，5分鐘；水洗，室溫24小時(shí)，透明，封膠。
結(jié)果多巴胺、6-羥基多巴胺和MPP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡細(xì)胞核內(nèi)有乙酰膽堿酯酶出現(xiàn)(圖2-5)，未經(jīng)過誘導(dǎo)的細(xì)胞沒有乙酰膽堿酯酶表達(dá)，說明乙酰膽堿酯酶參與多巴胺神經(jīng)毒物質(zhì)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并且高表達(dá)。
實(shí)施例2 從mRNA水平檢測乙酰膽堿酯酶在多巴胺能神經(jīng)毒誘導(dǎo)細(xì)胞中的表達(dá)誘導(dǎo)方法同上，收集多巴胺和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞，以取血清培養(yǎng)誘發(fā)凋亡的細(xì)胞作為陽性對照和未經(jīng)誘導(dǎo)的正常細(xì)胞作為陰性對照；取7×106細(xì)胞用1ml Trizol裂解后，用氯仿、異丙醇、75％的乙醇提取總RNA；取2μg總RNA至20μl反應(yīng)體系，用隨機(jī)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA；依據(jù)乙酰膽堿酯酶cDNA序列設(shè)計(jì)上游引物和下游引物5’-CGGGTCTACGCCTACGTCTTTGAACACCGTGCTTC-3’和5’-CACAGGTCTGAGCAGCGATCCTGCTTGCTG-3’。
產(chǎn)物長度為482bp。使用PE480型PCR儀，PCR反應(yīng)條件變性94℃，60sec；退火60℃，70sec；延伸72℃，90sec；30個(gè)循環(huán)；β-actin作為內(nèi)參。
結(jié)果在未經(jīng)誘導(dǎo)的正常細(xì)胞中沒有乙酰膽堿酯酶的表達(dá)，而在多巴胺和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞中和陽性對照組均有乙酰膽堿酯酶的表達(dá)，呈強(qiáng)陽性(圖6)，再次證明乙酰膽堿酯酶參與多巴胺能神經(jīng)毒誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞凋亡。
實(shí)施例3 MTT法檢測細(xì)胞生存活性SH-SY5Y細(xì)胞稀釋到合適的濃度200μl體積接種到96孔板中。培養(yǎng)24小時(shí)后誘導(dǎo)處理。多巴胺誘導(dǎo)完成后換培養(yǎng)基，加入20μl(5mg/ml)的MTT，37℃4小時(shí)，去培養(yǎng)基，加二甲基亞砜150μl，振蕩溶解15分鐘，酶標(biāo)儀590nm處測O.D.值，每組最少重復(fù)3次，取平均值。
結(jié)果多巴胺(200μM)誘導(dǎo)細(xì)胞大量死亡，而加入石杉堿甲(1μM)后可以部分阻止細(xì)胞死亡，有顯著性差異(p＜0.05)。用藥后細(xì)胞活性與未處理組相比，細(xì)胞活性提高了52％(處理組O.D.值-未處理組O.D.值)/未處理組O.D.值×100％；而與對照組比較，細(xì)胞生存活性提高了23％(處理組O.D.值-未處理組O.D.值)/對照組O.D.值×100％。但是，當(dāng)升高石杉堿甲的濃度(10μM)時(shí)并沒有提高細(xì)胞生存活力(p＞0.05)，因此，體外乙酰膽堿酯酶抑制劑可以部分抑制多巴胺能神經(jīng)毒所致的細(xì)胞死亡(圖7)。
實(shí)施例4 用FACS檢測石杉堿甲抑制多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡收集待測細(xì)胞1×106，用預(yù)冷的檸檬酸(pH7.3-7.4)固定，室溫放置30分鐘；用Propidium iodide(25mg/ml)染色15分鐘；隨后用FACS calibur(BectonDickinson)檢測至少10000個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞的DNA含量計(jì)算凋亡細(xì)胞的比例。
結(jié)果正常細(xì)胞凋亡率為4.3％；經(jīng)多巴胺誘導(dǎo)后細(xì)胞凋亡率可達(dá)到72.1％；加入石杉堿甲(10μm)后，細(xì)胞凋亡率可降低到40.05％(圖8)，表明乙酰膽堿酯酶抑制劑可以有效地抑制多巴胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
實(shí)施例5 體內(nèi)驗(yàn)證乙酰膽堿酯酶參與多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞凋亡1、多巴胺和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的偏側(cè)多巴胺模型SD大鼠(210±20克)，雄性，用10％水合氯醛(3ml/kg)麻醉完全后，固定于立體定向儀上(切牙桿置于內(nèi)耳線下3.3mm)(David Kopf)，頭部常規(guī)備皮消毒，按以下靶點(diǎn)做頭皮切口、鉆孔，前腦內(nèi)側(cè)束(MFB)前囟后4.4mm、矢中線旁1.2mm、硬膜下7.8mm，注射含1μm的多巴胺或含6-羥基多巴胺10μg 2μl，加維生素C至終濃度10μm，對照組注射PBS加維生素C 2μl，注射時(shí)間最少5分鐘。術(shù)后一周平穩(wěn)后行行為檢測多巴胺能神經(jīng)元損傷程度，其中Apomorphine(0.25mg/kg)(Sigma)皮下注射誘發(fā)旋轉(zhuǎn)行為，360度對側(cè)旋轉(zhuǎn)＞7圈，表明手術(shù)成功，位置準(zhǔn)確。
2、MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型C57BL/6J小鼠，30mg/kg/day頸部皮下注射MPTP，連續(xù)7天。
檢測乙酰膽堿酯酶多巴胺組48小時(shí)后斷頸處死，取出腦部，行冰凍切片；6-羥基多巴胺組2周后斷頸處死，取出腦部，行冰凍切片；MPTP誘導(dǎo)組7天后，斷頸處死，取出腦部，冰凍切片。切片用丙酮酸固定20分鐘，水洗后入孵育液(同上)，37℃3小時(shí)，水洗后甘油明膠封固。
結(jié)果由于海馬部細(xì)胞存在有較多量的膽堿能神經(jīng)元，海馬部神經(jīng)元AChE染色位于胞質(zhì)，未見到胞核著色。中腦黑質(zhì)細(xì)胞核部至今尚未見到有表達(dá)AChE的報(bào)道。但是，多巴胺注射組、6-羥基多巴胺組和MPTP誘導(dǎo)組的中腦黑質(zhì)部均出現(xiàn)乙酰膽堿酯酶染色陽性，且著色部位多位于細(xì)胞核(圖9-12)，說明乙酰膽堿酯酶確實(shí)參與到多巴胺能神經(jīng)元凋亡過程中。
實(shí)施例6 石杉堿甲保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元，有效治療MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠(27±3g)24只，分為4組，其中一組給予生理鹽水(I.P)作為對照，另外組分別給予MPTP(30mg/kg/day)+生理鹽水；MPTP(30mg/kg/day)+L-DA(40mg/kg/day)(P.O)；MPTP(30mg/kg/day)+石杉堿甲(0.2mg/kg/day)(I.P)。MPTP連續(xù)給予7天，藥物連續(xù)給予11天。
行為學(xué)檢測游泳實(shí)驗(yàn)(圖13A)受試小鼠放入一個(gè)20×30×25cm規(guī)格的水箱中，水溫為22℃-25℃。評分標(biāo)準(zhǔn)受試時(shí)間內(nèi)連續(xù)不斷游泳者記3分；大部分時(shí)間游泳偶爾漂浮者記2.5分；飄浮時(shí)間占整個(gè)受試時(shí)間50％以上者記2分；偶爾游泳者記1.5分；偶爾用后肢游動(dòng)并漂浮在一邊者記1分。游泳實(shí)驗(yàn)計(jì)時(shí)5分鐘。由于實(shí)驗(yàn)容易導(dǎo)致小鼠發(fā)展為抑郁癥狀，為了保證各個(gè)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的相互獨(dú)立性，游泳實(shí)驗(yàn)在其它實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。
滾筒實(shí)驗(yàn)(圖13B)滾筒由兩部分組成，一部分為控制器械，保證0-80cmp，另一部分為直徑為7.2cm的滾動(dòng)軸，分為5個(gè)單位，能夠使5只小鼠可以同時(shí)受到檢測。用藥前首先在滾筒上訓(xùn)練小鼠3-5次；用藥后第7，9和11天，檢測小鼠在滾筒上的時(shí)間/20cmp，取平均值。
免疫組化和尼氏染色實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組取三只小鼠，經(jīng)10％水合氯醛麻醉后用4％多聚甲醛灌注，取腦組織后在4％多聚甲醛固定24小時(shí)，隨后在25％蔗糖溶液中浸泡48小時(shí)，行連續(xù)冰凍切片(20μm)；TH免疫組化按試劑盒說明書操作(漂浮法)，最后DAB染色，顯微鏡下觀察。尼氏染色常規(guī)過二甲苯、梯度酒精和水化，在0.25％焦油紫蘭溶液染色15分鐘，水洗、脫水、透明和封片。取10個(gè)不同中腦黑質(zhì)視野(不包括VTA區(qū)計(jì)數(shù)TH陽性細(xì)胞)計(jì)數(shù)TH陽性細(xì)胞數(shù)。
結(jié)果MPTP作為多巴胺能神經(jīng)元選擇性神經(jīng)毒，能夠選擇性使多巴胺能神經(jīng)元凋亡丟失，造成黑質(zhì)紋狀體多巴胺能系統(tǒng)損傷。當(dāng)皮下注射MPTP后，小鼠出現(xiàn)一系列的典型癥狀，如僵直狀態(tài)(圖14A)、后腳趾分開(圖14B)、豎尾(圖14C)以及多動(dòng)、嗜睡等，表明MPTP發(fā)揮作用。
行為學(xué)檢驗(yàn)游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，左旋多巴組和石杉堿甲組評分與生理鹽水治療組有顯著性差異(p＜0.05)，而與對照組無顯著性差異(p＞0.05)，表明在用多巴胺替代治療后，小鼠的運(yùn)動(dòng)缺損得到了有效改善，這與臨床上早期應(yīng)用多巴胺治療帕金森病得到滿意效果是相一致的；石杉堿甲用藥組與對照組和左旋多巴組比較，顯示石杉堿甲也可以有效地改善小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性(圖15)。滾筒實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果顯示左旋多巴組雖然也能夠有效地改善運(yùn)動(dòng)障礙，但是與石杉堿甲組比較，由于滾筒能全面檢測小鼠的協(xié)調(diào)性，使多巴胺替代治療部分改善運(yùn)動(dòng)缺陷的特征顯露無疑，而石杉堿甲組效果顯著好于左旋多巴組(p＜0.05)，可能與其保護(hù)細(xì)胞免受損傷有關(guān)系(圖16)。
TH免疫組化和尼氏染色結(jié)果如圖17，18，19和20所示，中腦黑質(zhì)多巴胺能細(xì)胞呈陽性結(jié)果，胞質(zhì)呈棕黃色著色(圖17C)。正常小鼠中腦黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞密集、均勻，相應(yīng)紋狀體染色密度深；MPTP+生理鹽水組，中腦黑質(zhì)TH 陽性細(xì)胞數(shù)顯著減少，而VTA區(qū)細(xì)胞較少受到損傷，紋狀體區(qū)TH染色密度也顯著降低(圖18)；左旋多巴組中腦黑質(zhì)部TH細(xì)胞數(shù)量降低更多，紋狀體TH染色更淺(圖19)；石杉堿甲組中腦黑質(zhì)TH細(xì)胞數(shù)稍有損失。同樣，紋狀體TH染色密度與正常組比較變化不大(圖20)。尼氏染色結(jié)果與TH免疫組化染色結(jié)果一致。計(jì)數(shù)TH陽性細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示細(xì)胞丟失量與正常組比較，石杉堿甲組細(xì)胞丟失細(xì)胞數(shù)約為14％，而左旋多巴組細(xì)胞數(shù)丟失達(dá)到76％，比生理鹽水治療組的68％還要多(圖21)。結(jié)果表明雖然多巴胺替代治療可以有效地改善MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型，但是并不能使中腦黑質(zhì)的多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞損失量減少，并且具有加速損失的趨勢，而石杉堿甲不僅可以有效地改善小鼠的運(yùn)動(dòng)缺陷，并且可以有效地保護(hù)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞免受多巴胺能神經(jīng)毒的損傷，減少或阻止細(xì)胞丟失。
實(shí)施例7 治療帕金森病的乙酰膽堿酯酶抑制劑注射液的制備將0.1克、0.2克和0.5克乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉堿甲分別溶于1升水中，混合均勻后分別分裝成0.1mg/2ml/支、0.2mg/2ml/支、0.5mg/2ml/支濃度的注射液，于安瓿瓶中密封，消毒殺菌，制成產(chǎn)品，避光保存。
實(shí)施例8 治療帕金森病的乙酰膽堿酯酶抑制劑片劑的制備按常規(guī)的制片技術(shù)，取石杉堿甲1克，糊精130克，淀粉100克。羥甲基淀粉50克，一起放入粉碎機(jī)內(nèi)充分混合25-30分鐘，粉碎至約80-120目，再加入硬脂酸鎂3克，均勻混合，經(jīng)制片機(jī)制成1000片，每片重約0.28克，每片含石杉堿甲1mg。
討論AChE除了具有快速地水解乙酰膽堿，終止膽堿能神經(jīng)信號傳遞的功能外，在神經(jīng)細(xì)胞的分化、遷移、突觸形成以及造血細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增值與分化調(diào)控過程中具有重要作用(Small，DH.，Neurochem Int，1996，28453-483)。最近發(fā)現(xiàn)AChE還參與細(xì)胞凋亡過程(Yang Lei et al.，Neuroscience Res，2002，42261-268)。
以前曾有報(bào)道，在研究紋狀體部煙堿樣膽堿能活性與多巴胺遞質(zhì)釋放的關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性乙酰膽堿可以通過煙堿樣膽堿能β2受體調(diào)節(jié)多巴胺釋放，增加紋狀體內(nèi)多巴胺濃度(Fuming et al.，Nature neuroscience，2001，41224-1229)。也就是說，紋狀體內(nèi)乙酰膽堿對多巴胺的濃度關(guān)系并非象原先認(rèn)為的那樣為拮抗關(guān)系，實(shí)際上乙酰膽堿對紋狀體內(nèi)多巴胺釋放有促進(jìn)作用。
本發(fā)明的研究證實(shí)了AChE為靶標(biāo)的化合物(即乙酰膽堿酯酶抑制劑)對保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元和改善PD運(yùn)動(dòng)障礙具有良好的生理功能。乙酰膽堿酯酶抑制劑治療帕金森病的機(jī)理是通過抑制乙酰膽堿酯酶達(dá)到阻止神經(jīng)細(xì)胞凋亡的目的，從而保護(hù)了PD病人的多巴胺能神經(jīng)元，提高了黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能；抑制乙酰膽堿酯酶同時(shí)也可提高內(nèi)源性乙酰膽堿濃度，從而通過煙堿樣膽堿能β2受體調(diào)控紋狀體多巴胺的釋放，達(dá)到對PD的標(biāo)本兼治效果，特別對患有癡呆的PD患者更能提高療效。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療帕金森病藥物中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物含有0.005-99重量百分比的乙酰膽堿酯酶抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述藥物含有0.01-90重量百分比的乙酰膽堿酯酶抑制劑。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的乙酰膽堿酯酶抑制劑選自下組(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮；3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮；(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯；1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯；9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶；11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇；(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮；O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯；四異丙基焦磷酰胺；Fasciculin-I、或Fasciculin-II；以及藥學(xué)上可接受的鹽。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑選自下組1，5-二[4-烯丙基二甲基銨苯基戊-3-酮]，十烴季銨，N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺，加拉碘銨，3，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶，(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮，3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮，伊立替康，(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯，N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺，安貝氯銨，1-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯，1-萘基甲基氨基甲酸酯，2-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯，2，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯，鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯，間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯，苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯，9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶，7-甲氧基他克林，11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇，(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1 H)酮，7-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮，12-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉，12-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環(huán)辛[b]喹啉，N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲，12-(2′-羧基-5′-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮，O，O-二異丙基氟代磷酸酯，N-(磷酸甲基)甘氨酸，O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯，O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯，O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯，苯甲基磺酰氟，甲基磺酰氟，四異丙基焦磷酰胺，F(xiàn)asciculin-I，F(xiàn)asciculin-II或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮。
7.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物為片劑、顆粒劑、針劑、粉劑或膠囊。
8.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物用于治療同時(shí)患有老年癡呆病和帕金森病的病人。
9.(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(b)吡啶-2(1H)酮的用途，其特征在于，用于制備治療帕金森病藥物。
10.一種治療帕金森病的方法，其特征在于，給予需要治療的病人安全有效量的乙酰膽堿酯酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療帕金森病藥物中的應(yīng)用。所述的抑制劑包括所有能抑制乙酰膽堿酯酶活性具有治療帕金森病作用的化合物。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這類抑制劑能夠改善帕金森病的運(yùn)動(dòng)缺陷和保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元免受損傷，具有標(biāo)本兼治的作用，可有效地治療或改善帕金森病癥狀。
文檔編號A61P25/16GK1640399SQ20041001574
公開日2005年7月20日 申請日期2004年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月12日
發(fā)明者郭禮和, 栗超躍, 暨荀鶴, 惠國楨 申請人:上海賽達(dá)生物技術(shù)研究中心有限公司