專利名稱：一種復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，特別是一種有效組分明確、具有調(diào)血脂作用的復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病是當(dāng)前死亡率最高的疾病，嚴(yán)重威脅人類健康，脂質(zhì)代謝紊亂是導(dǎo)致心腦血管疾病的重要因素。目前，常用的他汀類降血脂藥物長期應(yīng)用具有較大毒副作用，甚至產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此，從天然藥物，特別是傳統(tǒng)中醫(yī)方劑中開發(fā)降血脂的有效藥物是降血脂藥物開發(fā)的熱點(diǎn)。現(xiàn)有中藥制劑大多是在古方或驗(yàn)方的基礎(chǔ)上制成的復(fù)方中藥制劑，存在藥效物質(zhì)不明確、難以進(jìn)行質(zhì)量控制等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有調(diào)血脂作用的復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法，組成該組合物的組合單元A和組合單元B是從川芎、紅花、桃仁、赤芍、枳殼、柴胡藥材中提取分離獲取，組合物處方中，含組合單元A 1～5g，組合單元B 1.5～5g。
本發(fā)明提供的制備方法通過以下幾步實(shí)現(xiàn)(1)溶劑提取法獲取復(fù)方中藥提取物；(2)柱層析法分離獲取組合單元，并進(jìn)行組合構(gòu)成中藥提取物組合物。
溶劑提取法是取全方藥材，以水或10％～80％乙醇溶液為溶劑，單獨(dú)或混合提取。采用的提取方法有煎煮、加熱回流、超聲等，提取液常壓或減壓濃縮。
柱層析分離獲取各組合單元是采用大孔樹脂、聚酰胺等柱層析方法，分離獲取各組合單元，采用噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥法獲得各組合單元浸膏粉。
制備方法主要有(1)取全方藥材飲片，加水煎煮，提取液濃縮，濃縮液上大孔樹脂柱，分別以水及10％～80％乙醇梯度洗脫。收集30％以下濃度乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元A；收集40％～60％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元B；(2)取全方藥材飲片，加60％乙醇回流提取，提取液減壓濃縮除去乙醇，加適量水后，上大孔樹脂柱，分別以水及10％～80％乙醇梯度洗脫。收集30％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元A；收集70％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元B；(3)取方中赤芍藥材飲片，加70％乙醇回流提取。提取液減壓濃縮除去乙醇，加適量水后，上大孔樹脂柱分別以水、20％乙醇、40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元A；全方其它藥材飲片，加60％乙醇回流提取。提取液減壓濃縮除去乙醇，加適量水后，上大孔樹脂柱，分別以水、30％乙醇、70％乙醇洗脫。收集70％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧或真空干燥成浸膏粉，得組合單元B。
組合物中的組合單元A和組合單元B主要含有芍藥苷類化合物和黃酮類化合物，有效組分主要有芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、阿魏酸、苦杏仁苷等。組合物中芍藥苷類化合物含量為15％～40％，黃酮類化合物含量為15％～40％。
本發(fā)明提供的復(fù)方中藥提取物組合物具有降血脂作用，可在制備防治高脂血癥及心腦血管疾病藥物中應(yīng)用。制備的藥物制劑形式為口服制劑，包括口服液、顆粒劑、片劑、膠囊劑等。
本發(fā)明主要特點(diǎn)是本組合物源于川芎、桃仁、赤芍、紅花、枳殼、柴胡組成的中藥方劑，通過現(xiàn)代分離技術(shù)獲取有效組分并組成組合單元，由組合單元組成復(fù)方組合物，該組合物保留且突出了原方調(diào)血脂主效應(yīng)，藥效物質(zhì)明確，組合物藥效優(yōu)于原方及各組合單元，體現(xiàn)了配伍增效作用。
具體實(shí)施例實(shí)施例1復(fù)方中藥提取物組合物制備方法1將川芎、桃仁、赤芍、紅花、枳殼、柴胡六種藥材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，分別加7倍、6倍、5倍量水煎煮2.0h、1.5h、1.0h。過濾，合并濾液，70℃減壓濃縮至1g藥材/ml的濃度，濃縮液過濾。以濾液樹脂量(ml∶g)為1∶3的比例將濾液上于D-101型大孔樹脂柱中，分別以水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇洗脫，收集各洗脫液。取30％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥成浸膏粉，得組合單元A；合并40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥成浸膏粉，得組合單元B。
實(shí)施例2復(fù)方中藥提取物組合物制備方法2將川芎、桃仁、赤芍、紅花、枳殼、柴胡六種藥材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，加10倍量60％乙醇煎煮3次，每次1.5h。過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，加水適量稀釋至1.5g藥材/ml的濃度，過濾。以濾液樹脂量(ml∶g)為1∶4.5的比例將濾液上于D-101型大孔樹脂柱中，分別以4倍樹脂床體積水、5倍樹脂床體積10％乙醇、3倍樹脂床體積30％乙醇、3倍樹脂床體積70％乙醇洗脫。收集30％乙醇洗脫液減壓回收溶劑，真空干燥成浸膏粉，得組合單元A；收集70％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥成浸膏粉，得組合單元B。
實(shí)施例3復(fù)方中藥提取物組合物制備方法3取方中赤芍藥材飲片，加8倍量70％乙醇回流提取3次，每次1.0。提取液減壓濃縮除去乙醇，加適量水后，上大孔樹脂柱。分別以5倍樹脂床體積20％乙醇、4倍樹脂床體積40％乙醇洗脫。收集40％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，噴霧干燥成浸膏粉，得組合單元A。將川芎、桃仁、紅花、枳殼、柴胡五種藥材按3∶3∶2∶2∶1比例混合，加10倍量60％乙醇，回流提取3次，每次1.5h。過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液加適量水稀釋至1g藥材/ml的濃度，過濾。以濾液樹脂量(ml∶g)為1∶4.5的比例將濾液上于D-101型大孔樹脂柱中，分別以4倍樹脂床體積的30％乙醇、3倍樹脂床體積70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫物，回收乙醇，回收液加適量水稀釋，過濾，濾液噴霧干燥得組合單元B。噴霧干燥條件液體比重1.08，進(jìn)口溫度160℃，出口溫度70℃。
實(shí)施例4復(fù)方中藥提取物各組合單元組合方式組合方式1A∶B為5∶2得組合物1組合方式2A∶B為4∶5得組合物2組合方式3A∶B為3.8∶5得組合物3組合方式4A∶B為2∶3得組合物4組合方式5A∶B為2∶5得組合物5實(shí)施例5復(fù)方中藥提取物組合物總黃酮含量測定
1儀器和試藥722型分光光度計(jì)，柚皮甙對照品Sigma試劑。其余試劑均為分析純。
2對照品溶液和供試品溶液制備精密稱取柚皮甙對照品適量，加50％甲醇溶解并定容，制成濃度為0.5mg/ml的溶液，作為對照品溶液。另取約0.5g供試品，精密稱定，熱水溶解，定容于100ml量瓶中。精密吸取此溶液10ml，過聚酰胺柱，先用20.0ml水洗，棄去水洗液，再用95％乙醇洗脫于100ml量瓶中并定容，作為供試品溶液。
1.3含量測定精密吸取一定量對照品溶液與供試品溶液于50ml量瓶中，精密加入5％NaNO21.0ml，放置6min，再加入10％Al(NO3)31.0ml，放置6min，加4％NaOH10.0ml，用95％乙醇定容，放置60min，以空白試劑為空白，在420nm波長處測定吸光度，外標(biāo)法計(jì)算含量。
組合物1含黃酮類化合物11％組合物2含黃酮類化合物18％組合物3含黃酮類化合物24％組合物4含黃酮類化合物19％組合物5含黃酮類化合物22％實(shí)施例6復(fù)方中藥提取物組合物芍藥苷含量測定1儀器和藥品日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，CLSS-VP色譜處理系統(tǒng)，SPD-M10A二極管陣列檢測器(DAD)，SIL-10AD自動(dòng)進(jìn)樣器。芍藥苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。
2芍藥苷對照品溶液和供試品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，加50％甲醇溶解并定容，制成濃度為0.25mg/ml的溶液，取樣品約0.1g，精密稱定，用50％甲醇溶解，定容于100ml量瓶中，作為供試品溶液。臨用前用0.45μm微孔濾膜過濾。
3色譜條件色譜柱Shim-pack C18(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相甲醇-0.5％醋酸水30∶70；流速1.0ml/min；柱溫30℃；DAD檢測器，檢測波長230nm；進(jìn)樣量20μl；CLASS-VP色譜工作站。
4樣品測定精密吸取20μl對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中芍藥苷含量。
組合物1含芍藥苷類37％組合物2含芍藥苷類26％組合物3含芍藥苷類22％組合物4含芍藥苷類24％組合物5含芍藥苷類19％實(shí)施例7復(fù)方中藥提取物組合物組分分析采用LC/MS、LC/MS/MS聯(lián)用技術(shù)，確定組合物中主要含有下列成分芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、阿魏酸、苦杏仁苷等。
實(shí)施例8復(fù)方中藥提取物及組合物降脂藥效實(shí)驗(yàn)11實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物雄性Wistar大鼠，6～8周，體重160-190g。
1.2藥物全方提取物采用上述提取方法獲取的總提取物；組合單元A、組合單元B、提取物組合物A∶B為3∶2。陽性對照藥心血康。
1.3高脂飼料4％膽固醇、10％豬油、0.2％甲基硫氧嘧啶、0.5％膽鹽、85％普通飼料。
2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)分組所用動(dòng)物分為空白組、模型組、對照組、樣品組。
2.2檢測指標(biāo)總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇。
3統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，統(tǒng)計(jì)用F檢驗(yàn)。
4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，結(jié)果表明，組合得到的提取物組合物能夠顯著降低大鼠血液中總膽固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白膽固醇含量，其降血脂效果優(yōu)于各組合單元，存在配伍增效作用。
表1降脂藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別總膽固醇甘油三酯低密度脂蛋白膽固醇空白1.57±0.23 0.41±0.14 0.48±0.25模型5.40±2.64 0.50±0.11 4.08±2.44對照3.58±1.74**0.31±0.07*2.03±1.19*組合單元A 3.22±1.93 0.39±0.09*2.14±1.50組合單元B 3.86±2.66 0.33±0.09**2.60±2.27提取物組合物1.99±0.67**0.26±0.13**0.98±0.42**全方提取物 3.00±1.80 0.34±0.14*1.73±1.64注*與模型組相比具有顯著差異(P＜0.05)，**與模型組相比，具有非常顯著差異(P＜0.01)
實(shí)施例9復(fù)方中藥提取物及組合物降脂藥效實(shí)驗(yàn)21實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物雄性Wistar大鼠，6～8周，體重160-190g。
1.2藥物中藥提取物各組合物。陽性對照藥血脂康。
1.3高脂飼料4％膽固醇、10％豬油、0.2％甲基硫氧嘧啶、0.5％膽鹽、85％普通飼料。
2.實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)分組所用動(dòng)物分為空白組、模型組、對照組、樣品組。
2.2檢測指標(biāo)總膽固醇，低密度脂蛋白膽固醇。
3.統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，統(tǒng)計(jì)用F檢驗(yàn)。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，該提取物組合物能夠顯著降低大鼠血液中總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇含量，且其降血脂效果優(yōu)于陽性藥。
表2藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別 總膽固醇 低密度脂蛋白膽固醇空白 1.77±0.28 0.74±0.20模型 7.10±3.59 5.27±3.22對照 5.33±1.44 3.68±1.61組合物1 4.28±1.47*2.96±1.47組合物2 4.24±0.78*2.82±0.78*組合物3 4.13±0.98*2.70±1.12*組合物4 4.41±0.90*2.88±0.93*組合物5 3.49±0.86**2.04±0.64**注*與模型組相比具有顯著差異(P＜0.05)，**與模型組相比，具有非常顯著差異(P＜0.01)無需進(jìn)一步詳細(xì)闡述，相信采用前面所公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可最大限度地應(yīng)用本發(fā)明。因此，前面的具體實(shí)施例應(yīng)理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法，其特征是組成該組合物的組合單元A和組合單元B是從川芎、紅花、桃仁、赤芍、枳殼、柴胡藥材中提取分離獲取，組合物處方中，含組合單元A 1～5g，組合單元B 1.5～5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥提取物組合物的制備方法，其特征是通過以下幾步實(shí)現(xiàn)(1)溶劑提取法獲取復(fù)方中藥提取物；(2)柱層析法分離獲取組合單元，并進(jìn)行組合構(gòu)成中藥提取物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)方中藥提取物組合物的制備方法，其特征是所述的溶劑提取法是取全方藥材，以水或10％～80％乙醇溶液為溶劑，采用回流、超聲等方法分別或混合提取，提取液常壓或減壓濃縮。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)方中藥提取物組合物的制備方法，其特征是所述的柱層析分離獲取各組合單元是采用大孔樹脂、聚酰胺等柱層析方法，分離獲取各組合單元，采用噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥法獲得各組合單元浸膏粉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥提取物組合物，其特征是組合單元A和B主要含有芍藥苷類化合物和黃酮類化合物，有效組分主要為芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、阿魏酸、苦杏仁苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥提取物組合物，其特征是組合物中芍藥苷類化合物含量15％～40％，黃酮類化合物含量15％～40％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法，其特征是提取物組合物可在制備防治高脂血癥及心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法，其特征是該中藥提取物組合物可按常規(guī)工藝制成口服液、顆粒劑、片劑、膠囊等口服劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)方中藥提取物組合物及其制備方法，該組合物含組合單元A和組合單元B，是從川芎、紅花、桃仁、赤芍、枳殼、柴胡藥材中提取分離獲取，經(jīng)噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥法獲得各組合單元浸膏粉，并進(jìn)行組合構(gòu)成中藥提取物組合物，其中含組合物單元A 1～5g、組合物單元B 1.5～5g，組合物中有效組分含量為芍藥苷類化合物15％～40％，黃酮類化合物15％～40％。該組合物能顯著降低高脂血癥大鼠總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇含量，可用于制備防治血脂膽固醇過高及心腦血管疾病的藥物。制劑劑型為口服液、顆粒劑、片劑、膠囊等口服制劑。與傳統(tǒng)復(fù)方相比，具有組方明確，工藝穩(wěn)定，療效顯著等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61K9/10GK1559538SQ20041001663
公開日2005年1月5日 申請日期2004年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月25日
發(fā)明者程翼宇, 欒連軍, 邵青, 王毅, 史大卓, 劉建剛, 王永炎 申請人:浙江大學(xué)