專利名稱：一種黃芩素液的配制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種配制方法，尤其是一種黃芩素液的配制方法。
背景技術(shù)：
黃芩素是中藥黃芩的重要單體之一，化學(xué)結(jié)構(gòu)屬黃酮類，具有多種藥理作用。它能抗菌、抗病毒、抑制炎癥反應(yīng)、保肝、利膽、利尿、抗癌等，因此具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。黃芩素的主要藥理作用如下1抗菌、抗病毒黃芩抗菌范圍較廣，體外試驗(yàn)證明，其煎劑對(duì)多種革蘭染色陽(yáng)性菌、革蘭染色陰性菌及螺旋體等均有抑制作用.黃芩也具有抗真菌活性，對(duì)多種致病性真菌，如白色念珠菌，許蘭毛癬菌等有一定抑制作用。B是黃芩中抗菌的有效成分。近來(lái)研究顯示，B還具有抗愛(ài)滋病病毒(HIV)的作用，能誘導(dǎo)感染HIV的細(xì)胞發(fā)生凋亡。有學(xué)者通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)B可抑制愛(ài)滋病病毒(HIV-1)，并抑制其逆轉(zhuǎn)錄酶(HIV-1RT)，但是，如果B的6-羥基被遮蔽，則喪失抑制HIV-1RT的活性，說(shuō)明6-羥基為抑制HIV-1RT活性所必需。
2抑制炎癥反應(yīng)2.1抗組胺釋放 B對(duì)合成多胺誘導(dǎo)的大鼠腹膜肥大細(xì)胞組胺釋放有抑制作用。
2.2抗花生四烯酸代謝 B可通過(guò)抑制有絲分裂原激活的蛋白激酶——細(xì)胞溶質(zhì)的磷脂酶A2通道(MAPK-cPLA2)來(lái)減少花生四烯酸的釋放。B對(duì)大鼠血小板花生四烯酸代謝中環(huán)氧酶與脂氧酶均有抑制作用，對(duì)脂氧酶更具選擇性，還對(duì)大鼠白細(xì)胞花生四烯酸代謝中脂氧酶代謝產(chǎn)物5-羥基二十碳四烯酸(5-HETE)及環(huán)氧酶代謝產(chǎn)物12-羥基十七碳三烯酸(HHT)的生成有抑制作用。B在慢性炎癥模型(大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎，ED50＝120.6mg.kg-1)中的抗炎活性大于愛(ài)蘭苔膠誘導(dǎo)的大鼠足趾水腫，其抗炎機(jī)制可能是抑制花生四烯酸代謝中的5-脂氧合酶途徑。
2.3抑制血管通透性 有學(xué)者用3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)抗炎劑(保泰松、消炎痛、地塞米松)作對(duì)照，發(fā)現(xiàn)B可抑制由醋酸誘導(dǎo)的小鼠血管通透性的增加，并減輕合成多胺誘導(dǎo)的大鼠急性足趾水腫及抑制大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的繼發(fā)損害，表明其對(duì)急、慢性炎癥均有效。
2.4抗過(guò)敏 通過(guò)B對(duì)抗原攻擊后的致敏豚鼠肺內(nèi)SRS-A和LT釋放及氣管平滑肌緊張度影響的研究，發(fā)現(xiàn)B可抑制SRS-A和LT釋放，同時(shí)降低LTG4和D4的釋放，并使豚鼠呈收縮狀態(tài)的支氣管平滑肌松弛。對(duì)豚鼠的過(guò)敏性氣喘有緩解作用，能緩解整體動(dòng)物的哮喘，而且與麻黃素有協(xié)同作用，拮抗過(guò)敏性浮腫及炎癥。此外，對(duì)動(dòng)物的被動(dòng)全身性變態(tài)反應(yīng)及皮膚變態(tài)反應(yīng)，亦有一定抑制作用。
3保肝、利膽、利尿B對(duì)培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞顯示強(qiáng)的抗增殖作用，有可能成為一種抗肝纖維化形成的藥物。B是一個(gè)很好的黃嘌呤氧化酶抑制劑，可用于治療肝炎。B具有利膽作用，可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的膽汁分泌量增加。此外，它還具有利尿作用，對(duì)麻醉犬靜脈注射10mg.kg-1或20mg.kg-1的B后有明顯利尿作用。
4清除自由基及抗氧化作用B可清除自由基，可預(yù)防諸如氫過(guò)氧化物酶、超氧化物陰離子等氧自由基引起的成纖維細(xì)胞的損傷?？赏ㄟ^(guò)形成鐵螯合物抑制抗壞血酸誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化物酶。10μmol.L-1的B可有效抑制Fe2+-Vitc，NAPH或NADPH誘導(dǎo)的大鼠腦皮質(zhì)線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化，使細(xì)胞免受H2O2誘導(dǎo)的損傷。在4種黃芩的黃酮類成分中，B是最有效的抗氧化劑。在缺血再灌注模型中，B可使細(xì)胞避免致死量氧化劑的損傷。
5抗凝血和抗血栓形成以標(biāo)準(zhǔn)抗血栓藥阿司匹林和肝素作對(duì)照，B可抑制膠原誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集作用，抑制凝血酶誘導(dǎo)的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白；對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集也有抑制作用，并防止由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的DIC及大鼠血小板和纖維蛋白原的減少。B能抑制凝血酶及凝血酶受體緊張肽誘導(dǎo)的血纖維蛋白溶酶原激動(dòng)劑抑制因子-1(PAI-1)的生成，其機(jī)制也許是降低Ca2+的升高，提示B可能成為一個(gè)治療動(dòng)脈硬化和抗血栓形成的藥物。
6抑制胰酶活性荻田善三朗證實(shí)黃芩的9種黃酮類成分中，B有較強(qiáng)的抗胰蛋白酶作用，其IC50為5×10-7M，而黃芩以外的其它6種黃酮類成分的抗胰蛋白酶作用弱，其IC50為10-5M，推測(cè)其抑制胰蛋白酶作用與其結(jié)構(gòu)中黃酮骨架鄰接的羥基有關(guān)。
7對(duì)生物膜的作用金井成行探討了B對(duì)紅細(xì)胞膜的作用，方法①按常規(guī)制備黃芩的甲醇提取物，經(jīng)乙醚提取后溶于己烷，進(jìn)而以SiO2柱分離精制B后備用；②按阿部等的方法，從體重180g-200g的Wistar雄性大鼠采血，用生理鹽水洗滌兩次后，以等滲緩沖液稀釋制備成體積分?jǐn)?shù)為0.4的紅細(xì)胞混懸液；③測(cè)定溶血活性，熱溶血保護(hù)作用，低滲溶血保護(hù)作用。
7.1溶血活性B在10-4mol.ml-1以上濃度時(shí)對(duì)紅細(xì)胞有損害性，引起溶血。
7.2熱溶血作用B在10-7mol.ml-1-10-5mol.ml-1濃度時(shí)呈保護(hù)作用，但高于10-5mol.ml-1時(shí)反而有促溶血作用。
7.3低滲溶血保護(hù)作用在10-8mol.ml-1-10-4mol.ml-1濃度時(shí)具有低滲溶血保護(hù)作用。
8抗癌B可抑制腫瘤生成，誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株凋亡，B也許能成為一個(gè)治療膀胱癌具有吸引力和前景的藥物。
9對(duì)平滑肌的雙重調(diào)節(jié)作用B可強(qiáng)化離體大鼠腸系膜動(dòng)脈對(duì)脫羥腎上腺素的收縮反應(yīng)，可能是通過(guò)抑制內(nèi)皮一氧化氮形成和/或釋。有學(xué)者在研究B對(duì)游離大鼠腸系膜動(dòng)脈的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，B有收縮、舒張血管平滑肌的雙重作用，在0.3uM-10uM時(shí)引起收縮，30uM-300uM時(shí)引起舒張，認(rèn)為低濃度時(shí)的血管收縮作用可能是通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮合成或釋放，高濃度時(shí)的舒張作用是通過(guò)抑制蛋白激酶C介導(dǎo)的收縮機(jī)制。通過(guò)研究B對(duì)培養(yǎng)兔血管平滑肌細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響，發(fā)現(xiàn)B對(duì)血小板源性生長(zhǎng)因子刺激的增殖反應(yīng)抑制作用強(qiáng)于血清刺激的增殖，B具有抗增殖和脂氧合酶抑制能力，也許是預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄病理改變的較好藥物。
10降血壓作用B不能影響血壓正常大鼠的血壓，但可降低高血壓大鼠的血壓。
11抑制粘附分子的表達(dá)通過(guò)觀察B對(duì)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞IL-1β和TNF-α誘導(dǎo)的粘附分子表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)B可抑制IL-1β和TNF-α誘導(dǎo)的白細(xì)胞粘附分子-1(ELAM-1)和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)，對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的ELAM-1和ICAM-1表達(dá)的IC50分別為2.3×10-5M和4.0×10-5M，對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的ELAM-1和ICAM-1表達(dá)的IC50分別為1.5×10-5M和3.1×10-5M。
目前尚無(wú)國(guó)家藥監(jiān)局正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的黃芩素液用于臨床，而黃芩素藥理活性是多方面的，它在清除氧自由基，減輕組織缺血再灌注損傷，調(diào)節(jié)免疫功能，保肝利膽，抗感染，抗腫瘤等方面均有一定的作用，是多種中藥注射液、口服液、膠囊、飲片、丸散、膏丹的組成成分，具有潛在的臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決上述所述的不足，提供一種黃芩素液的配制方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案。這種黃芩素液的配制方法，1)、稱取黃芩素粉及抗氧化劑，其中黃芩素粉按所需體積及設(shè)定的濃度稱取，抗氧化劑為每100ml加0.1-0.2g，然后添加注射用水至預(yù)配量體積的75-85％；2)、用2％-10％堿性溶液和2％-10％酸性溶液調(diào)節(jié)PH至6.5-8.5，按設(shè)定的濃度加水定容并靜置72小時(shí)，即100毫升含設(shè)定值的黃芩素，測(cè)滲透壓合格；3)、添加適量活性炭，按照每1000ml液體加0.05-0.5g，在60-80℃條件下保溫1小時(shí)，放置冷卻1周后，依次用濾紙、垂熔漏斗、0.22um微孔濾膜過(guò)濾，分裝于玻璃容器內(nèi)，115℃滅菌30分種，燈檢提示澄明，靜置無(wú)沉淀，并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其溶血、熱原、血管脆性、無(wú)菌試驗(yàn)合格后即得。
本發(fā)明所提供的黃芩素液的配制方法還可以進(jìn)行完善。所述的抗氧化劑為無(wú)水亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉或其它抗氧化劑。所述的堿性溶液為NaOH、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉。所述的酸性溶液為鹽酸、磷酸或其他酸性溶液。
在步驟2中可以加入0.2％-5％的助溶劑，所述的助溶劑可為聚乙二醇、乙醇、土溫80或普郎尼克，以增加其穩(wěn)定性。還可以在步驟2中添加氯化鈉、葡萄糖粉或其它增量劑，調(diào)滲透壓到等滲狀態(tài)。
本發(fā)明有益的效果是黃芩素藥理活性是多方面的，它在清除氧自由基，減輕組織缺血再灌注損傷，調(diào)節(jié)免疫功能，保肝利膽，抗感染，抗腫瘤等方面均有一定的作用，是多種中藥注射液、口服液、膠囊、飲片、丸散、膏丹的組成成分，具有潛在的臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1黃芩素的提取及LD50測(cè)定1、黃芩素的提取取黃芩飲片5公斤，加8倍量水煮沸1小時(shí)，用紗布過(guò)濾，藥渣再加6倍量水煮沸1小時(shí)，過(guò)濾。將兩次濾液合并后，用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，一邊加鹽酸一邊攪拌，加熱至80度，使黃芩素粗品析出。80度保溫靜置，放置30分鐘，待上層液澄明，濾取沉淀。加入相當(dāng)于沉淀物8倍量的水，在攪拌的同時(shí)加入40％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至7，使黃芩素成為鈉鹽而溶于水中。再加入等量的乙醇，攪拌，使淀粉及其糊化物沉淀，過(guò)濾。濾液加濃鹽酸調(diào)PH至1-2，攪拌并加熱至50度，使黃芩素沉淀析出，過(guò)濾。以乙醇洗滌沉淀至PH為4。再加入10倍量的蒸餾水，用40％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6-7，使黃芩素溶解。加入適量活性碳，攪拌，于50度保溫半小時(shí)后，加入等量的乙醇攪拌，再過(guò)濾。濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至2-3，于60度下保溫半小時(shí)后，可見(jiàn)黃芩素析出。過(guò)濾，將所得沉淀用50％的乙醇洗滌1-2次，在60度下烘干，即得到黃芩素粗品。經(jīng)薄層分析，發(fā)現(xiàn)有一條雜帶。又反復(fù)重結(jié)晶，得到20克黃色針壯結(jié)晶。經(jīng)高效液相及熔點(diǎn)測(cè)定，確定其為純品，純度＞98％。
2、黃芩素LD50測(cè)定2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察黃芩素液靜脈注射的急性毒性作用，以計(jì)算其LD50。
2.2受試藥物黃芩素液，濃度為1％(0.01g/ml)。
2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重17-18克。
2.4實(shí)驗(yàn)方法取出12只小鼠進(jìn)行預(yù)試，雌雄各半，隨機(jī)分為大、中、小三個(gè)劑量組，每組動(dòng)物數(shù)分別為4、4、4只。以藥物的最大濃度0.01g/ml設(shè)計(jì)為Dm，然后倍比稀釋，靜脈注射的容量為0.4ml/10g，大劑量給藥后10小時(shí)100％死亡，其余組完全存活。因此，Dm為400mg/kg。
正式實(shí)驗(yàn)將50只小鼠分層隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，組間劑量比值為1∶0.8。各組動(dòng)物按0.4ml/10g靜脈注射，并逐日觀察記錄中毒反應(yīng)，死亡數(shù)和死亡情況，對(duì)死亡動(dòng)物逐一進(jìn)行肉眼尸檢，共連續(xù)觀察7日。7日后清點(diǎn)各組小鼠死亡數(shù)，計(jì)算死亡率，用改良寇氏法計(jì)算LD50。
2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果第五組(劑量400mg/kg)的動(dòng)物100％死亡。動(dòng)物在給藥后出安靜、閉眼、不動(dòng)，最后因窒息抽搐而死亡。尸檢發(fā)現(xiàn)有輕微肝臟淤血癥狀。
用改良寇氏法計(jì)算結(jié)果如下組別 動(dòng)物數(shù)(n) 劑量(mg/kg)對(duì)數(shù)劑量(x)死亡率(P)P21 10 163.84 2.214 0.1 0.012 10 204.80 2.311 0.3 0.093 10 256.00 2.408 0.6 0.364 10 320.00 2.505 0.8 0.645 10 400.00 2.602 1.0 1.002.5結(jié)論1％黃芩素液的LD50為240.75±71.57mg/kg。
3、1％黃芩素液配方按所需體積5000ml稱取純度＞95％(如為98％)的黃芩素粉51克(5000ml*1％/98％)及抗氧化劑硫代硫酸鈉(每100ml加0.1-0.2g)，添加注射用水至預(yù)配量體積5000ml的80％左右，用2％-10％NaOH調(diào)節(jié)PH至6.5-8.5，必要時(shí)滴加或噴灑2％-10％HCL，或同時(shí)加入0.2％-5％的助溶劑聚乙二醇，以增加其穩(wěn)定性。按1％濃度定容并靜置72小時(shí)，依據(jù)等滲溶液的要求及所需用途，可分別添加氯化鈉、葡萄糖粉或其它增量劑，調(diào)滲透壓到等滲狀態(tài)。然后再添加適量活性炭(每1000ml加0.1g)，于60-80℃保溫1小時(shí)后放置冷卻。1周后，依次用濾紙、垂熔漏斗、0.22um微孔濾膜過(guò)濾，分裝于玻璃容器內(nèi)，115℃滅菌30分鐘，燈檢提示澄明，靜置無(wú)沉淀，并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其溶血、熱原、血管脆性、無(wú)菌試驗(yàn)合格后即得。
2、保存方法避光、陰涼保存3、制劑用途靜脈注射、腹腔注射、肌肉注射、口服、外用
權(quán)利要求
1.一種黃芩素液的配制方法，其特征在于1)、稱取黃芩素粉及抗氧化劑，其中黃芩素粉按所需體積及設(shè)定的濃度稱取，抗氧化劑為每100ml加0.1-0.2g，然后添加注射用水至預(yù)配量體積的75-85％；2)、用2％-10％堿性溶液和2％-10％酸性溶液以滴加或噴灑方式調(diào)節(jié)PH至6.5～8.5，按設(shè)定的濃度加水定容并靜置72小時(shí)，即100毫升含設(shè)定值的黃芩素，測(cè)滲透壓合格；3)、添加活性炭，按照每1000ml液體加0.05-0.5g，在60-80℃條件下保溫1小時(shí)，放置冷卻1周后，依次用濾紙、垂熔漏斗、0.22um微孔濾膜過(guò)濾，分裝于玻璃容器內(nèi)，115℃滅菌30分種，燈檢提示澄明，靜置無(wú)沉淀，并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其溶血、熱原、血管脆性、無(wú)菌試驗(yàn)合格后即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素液配制方法，其特征在于所述的抗氧化劑為無(wú)水亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉或其它抗氧化劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素液配制方法，其特征在于所述的堿性溶液為NaOH、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素液配制方法，其特征在于所述的酸性溶液為鹽酸、磷酸或其他酸性溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素液配制方法，其特征在于在步驟2中可以加入0.2％-5％的助溶劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的黃芩素液配制方法，其特征在于所述的助溶劑可為聚乙二醇、乙醇、土溫80、普郎尼克。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5或6所述的黃芩素液配制方法，其特征在于可以在步驟2中添加精品氯化鈉、精品葡萄糖粉或其它增量劑，調(diào)滲透壓到等滲狀態(tài)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黃芩素液的配制方法，1)稱取黃芩素粉及抗氧化劑，其中黃芩素粉按所需體積及設(shè)定的濃度稱取，抗氧化劑為每100ml加0.1－0.2g，然后添加注射用水至預(yù)配量體積的75－85％；2)用2％－10％堿性溶液和2％－10％酸性溶液調(diào)節(jié)pH至6.5－8.5，按設(shè)定的濃度加水定容并靜置72小時(shí)，即100毫升含設(shè)定值的黃芩素，測(cè)滲透壓合格；3)添加適量活性炭，每1000ml液體加0.05－0.5g，在60－80℃條件下保溫1小時(shí)，放置冷卻1周過(guò)濾后分裝于容器內(nèi)。本發(fā)明有益的效果是黃芩素藥理活性是多方面的，它在清除氧自由基，減輕組織缺血再灌注損傷，調(diào)節(jié)免疫功能，保肝利膽，抗感染，抗腫瘤等方面均有一定的作用，是多種中藥注射液、口服液、膠囊、飲片、丸散、膏丹的組成成分，具有潛在的臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1559400SQ200410016810
公開(kāi)日2005年1月5日 申請(qǐng)日期2004年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月9日
發(fā)明者張喜平 申請(qǐng)人:杭州市第一人民醫(yī)院