專利名稱：吡非尼酮治療肝損傷壞死和急性肺損傷的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，更具體地涉及吡非尼酮用于治療肝損傷壞死和急性肺損傷的新用途。
背景技術(shù)：
肝臟是體內(nèi)最大的器官，具有消化與代謝、解毒、對代謝產(chǎn)物的再利用以及維持個體內(nèi)態(tài)穩(wěn)定的極為重要的功能，其代謝活動十分復雜。它不但以生物合成與降解功能在物質(zhì)代謝上發(fā)揮著重要作用，還是營養(yǎng)物質(zhì)的貯存庫。肝臟中含有特殊的酶系統(tǒng)有解毒功能，又是內(nèi)分泌的控制站，可降解通過肝血流的許多激素。在人整個生命過程中經(jīng)常有某些外來異物(如毒物、藥物、致癌物)進入體內(nèi)，代謝過程中體內(nèi)也不斷產(chǎn)生一些生物活性物質(zhì)及代謝物(激素、胺類等)，這些外來及內(nèi)生物質(zhì)大部分在肝內(nèi)進行代謝轉(zhuǎn)化。任何破壞肝臟內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的過程都可能造成肝細胞損傷，從而影響肝臟正常的生理功能。
各種致病因素包括物理的、化學的和生物性的，作用于肝組織，都會引起損傷與抗損傷反應(yīng)。肝損傷主表現(xiàn)為肝細胞變性與壞死。抗損傷反應(yīng)則包括局部和全身的炎癥反應(yīng)，肝細胞再生與修復。
各種損傷因素所致的肝細胞代謝功能喪失及胞質(zhì)聯(lián)結(jié)構(gòu)完整性破壞稱為肝細胞壞死，其形態(tài)學變化特征是細胞膜通透性增加，細胞質(zhì)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，線粒體腫脹，進而溶酶體破壞、細胞膜破裂和細胞漿外溢。引起肝細胞損傷的原因是多種多樣的，有生物性的、化學性的(包括酒精和藥物)、缺血性、金屬(Fe、CM)、生物毒性以及免疫性、寄生蟲性、射線等。盡管原因不同，但最后發(fā)生肝細胞壞死的機往往理往往是相同的。損傷因素導致肝細胞壞死的機理一般分為以下幾類①胞質(zhì)膜完整性喪失；②胞內(nèi)穩(wěn)定的離子環(huán)境破壞；③細胞氧化；④線粒體功能障礙，ATP缺乏；⑤降解性水解酶激活。在人體肝臟疾病中肝細胞損傷和壞死涉及病毒復制、炎癥介質(zhì)釋放、免疫功能紊亂、自由基損傷等環(huán)節(jié)，是多種機理共同作用的結(jié)果，它們之間相互聯(lián)系、相互促進。
抗損傷的目的在于消除病因，使肝組織得以恢復正常。肝組織在修復過程中可有肝細胞再生，但當損傷嚴重時則可能造成大量纖維組織異常增生，網(wǎng)狀纖維的支架可發(fā)生塌陷、凝縮，塌陷的網(wǎng)狀纖維凝縮而發(fā)生膠原化，殘存的肝細胞呈代償性再生，肝臟結(jié)構(gòu)嚴重紊亂。隨著肝細胞活動性炎癥及其損傷的發(fā)展，膠原在肝竇周圍發(fā)生沉著，變成了較粗的膠原纖維，輕者為纖維化，重者進而使肝小葉結(jié)構(gòu)改建、形成假小葉及結(jié)節(jié)，成為肝硬化。
肝壞死，國內(nèi)多為重型肝炎，國外稱為暴發(fā)性肝功能衰竭(fulminanthepatic failure，F(xiàn)HF)，是指病人原來無肝臟疾病，突發(fā)性大量肝細胞壞死或出現(xiàn)嚴重的肝功能損害，并在起病8周內(nèi)出現(xiàn)肝昏迷的一種綜合征，表現(xiàn)為病情重、發(fā)展快、并發(fā)癥多、病死率高，迄今仍是肝病領(lǐng)域中亟待解決的難題。由于由于肝臟在體內(nèi)起著重要的作用，當肝衰竭發(fā)生后，肝臟的功能如利膽、凝血、合成等能力都會喪失，并產(chǎn)生一系列臨床癥狀。病因在國外以藥物性多見，在國內(nèi)則半數(shù)以上為肝炎病毒所致，但國內(nèi)外均有20％左右的患者原因不明。在我國85.5-90％的暴發(fā)性肝功能衰竭是由于急性重型肝炎所致，甲肝、乙肝、丙肝都可能發(fā)展為重型肝炎。重型肝炎是臨床愈后最差、死亡率最高、病程最重的疾病，其發(fā)病率占肝炎總數(shù)的0.4％，死亡率卻高達70％。
此外，藥物中毒也可能導致肝損害和肝功能衰竭。能引起不同程度肝損害的藥物至少在200種以上，據(jù)統(tǒng)計，藥物性肝損害的病例，約占所有藥物反應(yīng)病例的10％-15％；少數(shù)毒蕈、生魚膽等的誤食也可發(fā)生中毒性肝炎而導致暴發(fā)性肝功能衰竭。肝炎病毒中大多為乙型肝炎病毒，少數(shù)為甲型、丙型、丁型和戊型則常與乙型肝炎病毒合并存在；其它暴發(fā)性肝功能衰竭的少見病因包括Wilson病、妊娠脂肪肝、淋巴瘤或惡性腫瘤的廣泛肝浸潤、Budd-chari綜合征、Reye綜合征、缺血(如中暑、低血壓等)、肝移植后移植肝無功能等。暴發(fā)性肝功能衰竭死亡率很高，大約在80％以上。
對于暴發(fā)性肝衰竭(或重型肝炎)，至今尚無特效的治療方法，在處理上大多數(shù)是根據(jù)臨床表現(xiàn)的嚴重程度和進展情況，選擇采用支持療法(每日靜脈補給一定量的葡萄糖、肌苷、維生素K1和大劑量維生素C并酌情使用降黃、降酶的藥物)、對癥治療(主要是控制并發(fā)癥)、促進肝細胞再生和保護肝細胞的藥物如促肝細胞生長素等。盡管采取多種措施，成年患者能存活者仍很少，兒童患者預后略好一些。對這類患者，細心的護理和認真地治療特殊的并發(fā)癥有助于病情的恢復。
現(xiàn)已證實，大劑量使用糖皮質(zhì)激素、換血、前列腺素治療都無效。肝功能衰竭能否逆轉(zhuǎn)，取決于存活的肝細胞的數(shù)量多少，如果肝細胞壞死殆盡，即喪失了再生的基礎(chǔ)，欲用藥物治療，即便生物人工肝的使用，也很難逆轉(zhuǎn)肝衰竭。近年來進行肝臟的移植已取得一定的成功，對服入超大劑量藥物或原有肝病基礎(chǔ)而發(fā)生的大塊肝壞死病例，一般的內(nèi)科治療措施，包括保護藥及解毒藥，多無法阻止和逆轉(zhuǎn)病情的發(fā)展。肝移植手術(shù)可能是唯一治療的希望，然而肝移植手術(shù)價格昂貴，且供肝來源極為有限。因此目前缺乏對肝損傷壞死的有效治療方法。
與特發(fā)性肺纖維化、和間質(zhì)性肺病不同，急性肺損傷(acute lunginjury，ALI)是由于各種原因引起的肺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生特征性的病理改變而出現(xiàn)的臨床綜合征。其病理特點為肺泡毛細血管內(nèi)皮細胞和肺泡上皮細胞損傷，表現(xiàn)為廣泛肺水腫和微小肺不張。病理生理改變主要是肺內(nèi)分流增加和肺順應(yīng)性下降。臨床上表現(xiàn)為低氧血癥、呼吸頻速和X線胸片出現(xiàn)雙肺彌漫性浸潤。ALI有著從輕到重的連續(xù)過程，重癥ALI即急性呼吸窘迫綜合征(adultrespiratory distress syndrome，ARDS)。ARDS晚期多誘發(fā)或合并多臟器功能障礙綜合征甚至多臟器功能衰竭，病情兇險，預后惡劣。據(jù)國內(nèi)不完全資料統(tǒng)計，病死率一般為30％，重癥者達50％以上，晚期幾乎為100％。目前尚無特效的治療方法，主要根據(jù)其病理生理改變和臨床表現(xiàn)，采取針對性或支持性治療措施。
常見的急性肺損傷由不同的因素引起1)放射損傷放射性肺損傷一急性放射性肺炎(radiation pneumonitis)，是危害性較大的放療并發(fā)癥。照射劑量3000-4000cGy，3-4周后，所照射的肺呈現(xiàn)急性滲出性炎癥。放射量超過6000rad者，必有放射性肺炎。放射野越大發(fā)生率越高；大面積放射的肺組織損傷較局部放射為嚴重，照射速度越快，越易產(chǎn)生肺損傷。其他影響因素如個體對放射線的耐受性差，肺部原有病變?nèi)绶窝住⒙灾夤苎?、慢性阻塞性肺部疾病以及再次放射治療等均易促進放射性肺炎的發(fā)生。2)休克以膿毒性、菌血性休克為常見；3)創(chuàng)傷多發(fā)性創(chuàng)作、雙肺挫傷、廣泛性肺損傷為常見起因，頭部創(chuàng)傷因中樞性交感神經(jīng)傳出障礙，導致高阻抗血管系統(tǒng)的血液流向低阻抗血管床，使肺動脈壓升高和血容量增多，肺毛細血管通透性增加，并使肺表面活性物質(zhì)被沖洗出或被破壞，肺泡的通透性直接受到損害。如脂肪栓塞于肺毛細血管，被肺脂肪蛋白酶轉(zhuǎn)化為游離脂肪酸，可破壞血管內(nèi)膜，來活肺泡表面物質(zhì)，導致肺水腫；4)感染肺內(nèi)外的細菌、病毒、原蟲等感染；5)吸入有毒氣體如高濃度氧、NO2、NH3、Cl2、SO2、光氣、醛類、煙霧等；6)藥物過量巴比妥類、水楊酸、噻嗪類、丙氧酚等；7)代謝紊亂肝功能衰竭、尿毒癥、糖尿癥酮癥酸中毒等；8)血液系統(tǒng)??；9)急性胰腺炎、子癇、顱內(nèi)壓升高等。
急性肺損傷及急性呼吸窘迫綜合癥的發(fā)病機理錯綜復雜，目前仍未完全闡明。現(xiàn)認為其病理改變的中心環(huán)節(jié)是急性肺泡毛細血管膜損傷。創(chuàng)傷、感染使中性粒細胞和單核巨噬細胞等激活，釋放出大量炎癥介質(zhì)誘發(fā)肺部的炎癥反應(yīng)。同時體內(nèi)還產(chǎn)生抗炎物質(zhì)，損傷機體免疫功能，兩方面共同作用使炎癥反應(yīng)失控。
急性肺損傷的治療20余年來沒有大的進展。盡早除去導致ARDS的原發(fā)病或誘因，當是ARDS治療的首要措施。特別強調(diào)感染的控制，休克的糾正，骨折的復位和傷口的清創(chuàng)等。機械通氣是主要的治療手段，目的是維持基本的氣體交換。另外改善微循環(huán)障礙、支持營養(yǎng)等對治療也有一定的積極作用。但目前缺乏有效的治療急性肺損傷的藥物和方法。
美國專利5789426公開了一種通過施用蛋白羥基化抑制劑來治療纖維化疾病的方法，其中該抑制劑是N-取代的羥基吡啶酮衍生物。
美國專利6090822公開了將N-取代的2(1H)吡啶酮或N-取代的3(1H)吡啶酮用于治療細胞生長因子造成的疾病。
WO00/44381公開了將N-取代的2(1H)吡啶酮或N-取代的3(1H)吡啶酮用于治療淋巴瘤和白血病等癌癥。
EP 1138329公開了將5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮用于治療纖維損傷。
吡非尼酮(Pirfenidone)，是在70年代發(fā)明的具有藥理作用的化合物，目前正在美國進行治療特發(fā)性肺纖維化(IPF)臨床III試驗。最初的研究發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗炎作用，近年來發(fā)現(xiàn)它對于組織的纖維化有抑制作用，能夠抑制膠原蛋白合成，減少炎性細胞因子的分泌，阻止成纖維細胞增生，具體藥物作用靶點基因尚不清楚。在各種動物模型的研究中已證實，吡非尼酮顯示對心、腎、肺、肝以及血管內(nèi)壁等組織和器官的纖維化具有抑制作用。
吡非尼酮(Pirfenidone)是在70年代發(fā)明的一種具有藥理作用的化合物。吡非尼酮(Pirfenidone)的原始專利于1976年授權(quán)(US3974281)，隨后研究人員在發(fā)現(xiàn)其可用于治療間質(zhì)性肺病(AU5427080)、預防組織纖維化(WO9426249)。目前正在美國進行治療特發(fā)性肺纖維化(IPF)臨床III試驗。最初的研究發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗炎作用，近年來發(fā)現(xiàn)它對于組織的纖維化有抑制作用，能夠抑制膠原蛋白合成，減少炎性細胞因子的分泌，阻止成纖維細胞增生，具體藥物作用靶點基因尚不清楚。在各種動物模型的研究中已證實，吡非尼酮顯示對心、腎、肺、肝以及血管內(nèi)壁等組織和器官的纖維化具有一定的抑制作用。
研究表明吡非尼酮對于治療肝纖維化有較好療效。以四氯化碳(CCl4)及膽管結(jié)扎(BDL)造成肝硬化模型的大鼠給予吡非尼酮500mg/kg/day治療后，治療組(n＝11)動物的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶水平顯著降低，凝血酶原活性及膽紅素降低。與較低的羥脯氨酸含量及活化的HSC減少和較高的活性細胞再生一致的是，病理分析纖維化記分減輕40％和50％。[J Hepatol.2002Dec；37(6)797-805]。另一項研究同樣證實吡非尼酮口服每日500mg/kg，可以有效阻斷DMN誘導的大鼠實驗性肝纖維化進展，肝臟病理定量分析治療組纖維化程度減低40％[Clin Exp Pharmacol Physiol.2001 Jul；28(7)522-7]。然而，在本發(fā)明之前尚沒有吡非尼酮治療肝損傷壞死和急性肺損傷的報道。
綜上所述，目前對于肝損傷壞死和急性肺損傷還缺乏有限的治療方法，因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的療效好的藥物，用于減輕或治療肝損傷壞死和急性肺損傷癥狀，并降低死亡率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種新的療效好的用于減輕肝損傷壞死和急性肺損傷癥狀的藥物，及其在治療肝損傷壞死和急性肺損傷病人方面的應(yīng)用。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種吡非尼酮及其衍生物的用途，它被用于制備治療肝損傷壞死或急性肺損傷的藥物。
在另一優(yōu)選例中，所述的肝損傷壞死包括選自炎癥、毒性損害、肝血流改變、肝臟感染(如病毒、細菌、真菌、寄生蟲)、先天性代謝障礙引起物質(zhì)在肝臟貯積、化學物質(zhì)和藥物、肝內(nèi)循環(huán)紊亂(如慢性心衰、Budd-Chiari綜合征、靜脈閉塞疾病、門靜脈栓塞)或膽汁流動阻塞等所引發(fā)的肝細胞損傷及壞死。
在另一優(yōu)選例中，所述的急性肺損傷包括放射性肺損傷(如急性放射性肺)、休克、創(chuàng)傷、感染、中毒、藥物過量、及并發(fā)癥等所造成的急性肺損傷。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種藥物組合物，它含有藥學上可接受的載體、吡非尼酮以及選自下組的輔助活性成分(a)抗病毒藥干擾素、免疫調(diào)節(jié)劑胸腺素、胸腺肽、護肝藥腺苷蛋氨酸、谷胱甘肽；(b)以下中藥或其提取物丹參、黃芪、鱉甲、或其混合物；(c)蛋白酶抑制劑、抗炎藥物、非固醇類抗炎藥，磷酸二酯酶抑制劑，抗氧化劑、抗內(nèi)毒素單抗、IL-1受體拮抗劑、TNFα及其受體拮抗劑。
在另一優(yōu)選例中，所述的吡非尼酮的重量百分比是0.01-99.99％，較佳地0.1-99％，更佳地1-90％，按組合物總重量計。
在另一優(yōu)選例中，所述的輔助活性成分其重量百分比是0.01-90％，較佳地0.1-50％，更佳地1-25％，按組合物總重量計。


圖1顯示了吡非尼酮(PF)對DMN致肝損傷大鼠的生存率的影響。
圖2顯示了DMN模型組4周Masson三重染色結(jié)果，其中中央靜脈周肝細胞出血壞死，膠原沉積。
圖3顯示了DMN+吡非尼酮(PF)組4周Masson染色結(jié)果，其中中央靜脈周圍少量膠原沉積。
圖4顯示了DMN模型組8周HE染色結(jié)果，其中中央靜脈周有新壞死灶，向肝小葉內(nèi)放射狀新鮮出血及壞死。
圖5顯示了DMN+吡非尼酮組8周HE染色結(jié)果，其中中央靜脈周壞死程度小。
圖6顯示了PF治療DMN致大鼠肝損傷的病理組織學評分比較。
圖7顯示了肝壞死和肝纖維化的照片。
圖8顯示了急性肺損傷模型組的天狼星紅染色結(jié)果。
圖9顯示了急性肺損傷+吡非尼酮治療組的天狼星紅染色結(jié)果。
圖10顯示了急性肺損傷模型組的HE染色結(jié)果。
圖11顯示了急性肺損傷+吡非尼酮治療組的HE染色結(jié)果。
具體實施例方式
本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，吡非尼酮對肝損傷壞死和急性肺損傷有極其顯著的治療效果，不僅可緩解癥狀，甚至還可治愈部分病例，并使死亡率大幅下降。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
一方面，吡非尼酮對于DMN造成的大鼠實驗性肝損傷有顯著療效。大鼠每日口服給予250mg/kg，即可以明顯減輕肝炎炎癥，保護肝細胞，改善肝臟功能，治療肝壞死。
另一方面，吡非尼酮對于油酸等造成的大鼠急性肺損傷有顯著療效。大鼠每日口服給予25mg/kg的吡非尼酮可以明顯減輕肺部炎癥，緩解肺損傷的作用。
雖然本發(fā)明的作用機理還不清楚，但是，本申請的動物學實驗明確表明，吡非尼酮可以有效地減輕或治愈肝損傷壞死和急性肺損傷。因此，吡非尼酮特別適合治療肝損傷壞死和急性肺損傷。
本發(fā)明藥物組合物的活性成分是吡非尼酮和類似結(jié)構(gòu)的吡啶酮化合物?？捎糜诒景l(fā)明的所述的吡非尼酮沒有特別限制，包括藥學上可接受的鹽、酯等形式。吡非尼酮可以單獨、或者結(jié)合任何醫(yī)學上可接受的藥用賦形劑或載體給藥。
在治療肝損傷壞死(包括肝炎)時，本發(fā)明的藥物組合物含有藥學上可接受的載體和吡非尼酮。其中，吡非尼酮的含量是0.01-99.99％，較佳地0.1-95％，更佳地0.5-90％。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可含有選自下組的物質(zhì)抗病毒藥干擾素、免疫調(diào)節(jié)劑胸腺素、胸腺肽、護肝藥腺苷蛋氨酸、谷胱甘肽等。此外還可含有以下中藥或其提取物丹參、黃芪、鱉甲、或其混合物。
在治療急性肺損傷時，本發(fā)明的藥物組合物含有藥學上可接受的載體和吡非尼酮。其中，吡非尼酮的含量是0.01-99.99％，較佳地0.1-95％，更佳地0.5-90％，。此外，還可含有選自下組的物質(zhì)蛋白酶抑制劑如西維來司納(SivelestatSodium)，抗炎藥物如如布洛芬(Ibuprofen)及其它新型非固醇類抗炎藥，磷酸二酯酶抑制劑如己酮可可堿(Pentoxifylline)，抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(Acetylcysteine)、針對炎癥細胞及其介質(zhì)和其些致病因子的抗內(nèi)毒素單抗、IL-1受體拮抗劑(IL-1ra)、TNFα及其受體拮抗劑。此外還可含有以下中藥或其提取物丹參、黃芪、鱉甲、或其混合物。
本發(fā)明的藥物組合物的劑型沒有特別限制，可以固體、半固體或液體的形式。此外，本發(fā)明的藥物制劑可通過靜脈、皮下以及其他適合的途徑給藥。一種優(yōu)選方式是口服有效。另一種優(yōu)選方式是非腸道給藥方式，如靜脈注射，這樣可縮短藥物在體內(nèi)起效的時間。
可用本發(fā)明的藥物組合物和方法治療的對象是哺乳動物，尤其是人。
盡管吡非尼酮的有效治療劑量所治療患者的年齡和病情，但在治療疾病時常用的每日劑量為約0.0001-1000mg，優(yōu)選0.01-500mg，更優(yōu)選0.1-200mg，更優(yōu)選50-100mg。給藥次數(shù)可以是每天一次，或數(shù)次。
本發(fā)明提供一種治療肝損傷壞死或急性肺損傷的方法。該方法包括給肝損傷壞死或急性肺損傷病人施用有效治療劑量的吡非尼酮，施用1-60天。
在本發(fā)明中，治療肝損傷壞死或急性肺損傷時，吡非尼酮可以單獨使用，也可以與前體藥物聯(lián)合使用。
例如，在治療肝損傷壞死時，吡非尼酮可與治療重型肝炎(暴發(fā)性肝衰竭)的藥物聯(lián)合使用，如抗病毒藥干擾素、免疫調(diào)節(jié)劑胸腺素、胸腺肽、護肝藥腺苷蛋氨酸、谷胱甘肽等以及含丹參、黃芪、鱉甲等單味或復方中藥聯(lián)合使用。
在治療急性肺損傷時，吡非尼酮可與以下物質(zhì)聯(lián)用蛋白酶抑制劑如西維來司納(Sivelestat Sodium)，抗炎藥物如如布洛芬(Ibuprofen)及其它新型非固醇類抗炎藥，磷酸二酯酶抑制劑如己酮可可堿(Pentoxifylline)，抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(Acetylcysteine)、針對炎癥細胞及其介質(zhì)和其些致病因子的抗內(nèi)毒素單抗、IL-1受體拮抗劑(IL-1ra)、TNFα及其受體拮抗劑。此外還可與以下中藥或其提取物聯(lián)用丹參、黃芪、鱉甲、或其混合物。
吡非尼酮還可用于預防或治療中毒性肝炎(藥物性肝中毒、化學性肝中毒、慢性酒精性肝中毒等)或病毒性肝炎及其他肝病造成的肝壞死等一系列疾病，并且抑制了肝纖維化和肝硬化的病變。
吡非尼酮還可用于預防或治療急性肺損傷(藥物性肺損傷、化學性肺損傷、放射性肺炎等)等疾病，并且預防轉(zhuǎn)向急性呼吸衰竭的可能。
本發(fā)明的主要優(yōu)點在于(1)口服有效，便于患者使用。
(2)吡非尼酮對肝損傷壞死和急性肺損傷的治療效果顯著，藥物的毒副作用少，使用安全。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1
吡非尼酮治療后，DMN致肝損傷大鼠的死亡率下降DMN(二甲基甲酰胺，Dimethylformamide)，是常見的引起肝損害的化學物質(zhì)，表現(xiàn)為中毒性肝病，嚴重者導致急性壞死性肝炎，預后兇險。
以DMN造成大鼠損傷性肝炎模型，方法如下I％DMN腹腔注射，10mg/Kg，一周兩次，連續(xù)4周或8周。
自建立模型第0日起，予以吡非尼酮灌胃，劑量為250mg/Kg，連續(xù)4或8周。觀察大鼠的體重和死亡率。
結(jié)果表明，DMN處理后可造成大鼠體重下降及并引起死亡。施用吡非尼酮后，能使體重保持正常，明顯降低動物的死亡率，與對照組相比有顯著差異。(4周和8周時，對照組大鼠存活7/25(28％)和2/25(8％)，而吡非尼酮治療組為24/25(96％)和19/25(76％)(見圖1)。
實施例2吡非尼酮在抗肝炎藥效動物模型中實驗方法同上。取實驗動物血液分離血清，測定AST(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶)、ALT(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶)；取肝臟組織作病理切片檢查。
結(jié)果實驗4周，模型組明顯可見中央靜脈周圍肝細胞壞死，出血和膠原沉積，竇周纖維化；8周時，中央靜脈周細胞壞死后形成纖維化，局部病灶炎細胞浸潤，向外有新出血和大片壞死(圖2、3)。吡非尼酮治療組的病變程度較模型組有明顯減輕，中央靜脈周圍偶見少量壞死后的膠原沉積，中央靜脈區(qū)細胞壞死及炎癥范圍小，竇周多見于正常(圖4、5)。治療組與模型組的病理學評分有顯著性差異(P＜0.001)。(圖6)吡非尼酮顯著降低DMN誘導的肝損傷大鼠血清ALT水平，正常對照組27±5.09、DMN模型組74±18.25、DMN+吡非尼酮組49±15.79。(P＜0.05)。
實施例3吡非尼酮對于急性肺損傷的顯著療效在本實施例中，以博萊霉素(Bleomycin)造成肺損傷及纖維化和油酸(Oleic acid)所致的急性肺損傷的大鼠動物模型進行了吡非尼酮治療作用的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，吡非尼酮對博萊霉素和油酸造成的大鼠實驗性肺損傷有顯著療效。大鼠每日口服給予25mg/kg的吡非尼酮可以明顯減輕肺部炎癥，緩解肺損傷的作用。
動物模型博萊霉素(B)模型博萊霉素長期應(yīng)用可導致肺纖維化。早期肺泡壁Cap通透性增加，肺泡及間質(zhì)水腫，形成間質(zhì)性肺類，繼而肺泡及間質(zhì)纖維素滲出，透明膜形成，肺泡呈不典型增生及遠端上皮細胞鱗狀化生，晚期則表現(xiàn)為肺泡和間質(zhì)廣泛纖維化，因而普遍用作肺纖維化的動物模型。以2mg/kg的劑量對大鼠氣管內(nèi)注射博萊霉素，造成大鼠肺損傷模型，至2周后肺損傷漸變成纖維化。在致模前2天開始治療，共給藥28天。觀察動物的死亡率和肺部炎癥及纖維化情況。
油酸(O)模型油酸是毒性較強的脂肪酸，可引起化學性炎癥，產(chǎn)生肺損傷，常用靜脈注射油酸來復制ARDS動物模型。以0.15ml/kg的油酸給予大鼠靜脈注射，造成大鼠急性肺損傷模型。在致模前3天起以吡非尼酮治療，一共治療7天。觀察動物的死亡率和肺部炎癥情況。
結(jié)果死亡率從兩個模型的均可看到，治療組的動物死亡率明顯低于模型組。
B模型0(0/10)和33％(4/12)(治療組vs.模型組)O模型0(0/6)和30％(2/7)(治療組vs.模型組)病理變化B模型模型組肺臟腫脹已基本消退，肺臟顏色蒼白，彈性差，部分肺組織表面有肺大皰。鏡下顯示中央氣道和大血管周圍仍有明顯炎癥細胞浸潤，但肺泡間隔仍明顯增厚伴細胞浸潤，且可見較多的纖維組織增生及成纖維細胞灶。天狼猩紅染色可見炎癥區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)大量膠原纖維，以亮紅色/黃色的I型膠原為主(圖8和圖10)。
吡非尼酮治療組中，肺臟與正常肺臟相似，外觀光滑，肺彈性較好鏡下所見肺泡間隔僅見輕微增厚，散在少量成纖維細胞灶。天狼星紅染色其膠原基本接近正常組(圖9和圖11)。
O模型模型組大鼠肺組織出現(xiàn)嚴重的肺間質(zhì)及肺泡水腫、出血，局部組織萎陷，肺泡內(nèi)有透明膜形成；小血管高度擴張充血及微血栓形成；細支氣管腔內(nèi)有炎細胞及滲出液，肺間質(zhì)有大量白細胞浸潤；部分肺組織壞死、結(jié)構(gòu)消失。
治療組肺泡和肺間質(zhì)水腫明顯減輕，出血和充血多數(shù)消失，肺泡透明膜比模型組少，局限性肺不張有不同程度恢復，較大面積壞死、微血栓少見，間質(zhì)白細胞浸潤明顯減少。
實施例4制備含吡非尼酮的藥物組合物(a)注射液吡非尼酮20-100mg氯化鈉 1-5mg注射用水加至10ml按上述配方，稱取吡非尼酮和氯化鈉，配制成溶液后灌裝于10ml注射液瓶中，滅菌后包裝。供注射用。
(b)膠囊吡非尼酮50-500mg羥丙基甲基纖維素2-10mg淀粉50-100mg乳糖2-10mg按1000個膠囊的用量，稱取以上各輔料分別研細過篩后混合均勻，然后用等量遞加法加入吡非尼酮，充分研磨，使其分散均勻，再過80目篩，然后灌制成膠囊。
(c)緩釋片吡非尼酮50-500mg羥丙基甲基纖維素20-100mg海藻酸鈉50-100mg乳糖100-200mg微晶纖維素 50-200mg硬脂酯鎂2-10mg按1000個片劑(配方如上)的用量，稱取吡非尼酮、乳糖、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉分別研細過80目篩后，混勻，再與微晶纖維素混勻，以水潤濕，用16-18目篩制成顆粒，于60℃干操，整粒，加硬脂酯鎂混勻壓制成片。
(d)膠囊吡非尼酮50-500mg丹參提取物 50mg羥丙基甲基纖維素2-10mg淀粉50-100mg乳糖2-10mg按1000個膠囊的用量，稱取以上各輔料分別研細過篩后混合均勻，然后用等量遞加法加入吡非尼酮和丹參提取物，充分研磨，使其分散均勻，再過80目篩，然后灌制成膠囊。
(e)膠囊吡非尼酮50-500mg干擾素 20mg羥丙基甲基纖維素2-10mg淀粉50-100mg乳糖2-10mg
按1000個膠囊的用量，稱取以上各輔料分別研細過篩后混合均勻，然后用等量遞加法加入吡非尼酮和干擾素，充分研磨，使其分散均勻，再過80目篩，然后灌制成膠囊。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.吡非尼酮及其衍生物的用途，其特征在于，用于制備治療肝損傷壞死或急性肺損傷的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肝損傷壞死包括選自炎癥、毒性損害、肝血流改變、肝臟感染、先天性代謝障礙引起物質(zhì)在肝臟貯積、化學物質(zhì)和藥物、肝內(nèi)循環(huán)紊亂或膽汁流動阻塞所引發(fā)的肝細胞損傷及壞死。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的急性肺損傷包括放射性肺損傷、休克、創(chuàng)傷、感染、中毒、藥物過量、及并發(fā)癥所造成的急性肺損傷。
4.一種藥物組合物，其特征在于，它含有藥學上可接受的載體、吡非尼酮以及選自下組的輔助活性成分(a)抗病毒藥干擾素、免疫調(diào)節(jié)劑胸腺素、胸腺肽、護肝藥腺苷蛋氨酸、谷胱甘肽；(b)以下中藥或其提取物丹參、黃芪、鱉甲、或其混合物；(c)蛋白酶抑制劑、抗炎藥物、非固醇類抗炎藥，磷酸二酯酶抑制劑，抗氧化劑、抗內(nèi)毒素單抗、IL-1受體拮抗劑、TNFα及其受體拮抗劑。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述的吡非尼酮的重量百分比是0.01-99.99％，按組合物總重量計。
6.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述的吡非尼酮的重量百分比是0.1-99％，按組合物總重量計。
7.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述的輔助活性成分其重量百分比是0.01-90％，按組合物總重量計。
8.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述的輔助活性成分其重量百分比是0.1-50％，按組合物總重量計。
全文摘要
本發(fā)明涉及吡非尼酮用于治療肝損傷壞死和急性肺損傷的新用途。更具體的，涉及將吡非尼酮用于減輕肝損傷壞死和急性肺損傷病人的癥狀，和降低死亡率。本發(fā)明還提供了用于治療肝損傷壞死和急性肺損傷的藥物組合物。
文檔編號A61K31/44GK1701793SQ20041001858
公開日2005年11月30日 申請日期2004年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月24日
發(fā)明者吳駿 申請人:上海睿星基因技術(shù)有限公司