專利名稱：知母提取物在制備防、治快速性心率失常和原發(fā)性高血壓藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥知母提取的有效成分知母提取物在制備防、治快速性心率失常和原發(fā)性高血壓疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中藥知母是百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的干燥根莖。知母是我國傳統(tǒng)中藥，在古漢方中均有應(yīng)用，典籍上有清熱除煩、瀉肺滋腎、主消渴熱中、除邪氣肢體浮腫、下水、補(bǔ)不足、益氣等。臨床應(yīng)用均是用來配伍治療。
流行病學(xué)研究證實(shí)，甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、高血壓的發(fā)病率有提高的趨勢。針對快速性心率失常，臨床上大量應(yīng)用的β受體阻斷劑如“普萘洛爾”(Propranolol)、“美多洛爾”，雖然可以抑制受體功能，使心血管系統(tǒng)癥狀如心悸、心動(dòng)過速得到控制，但不能改善患者口干、易怒、燥熱、失眠等癥狀，尤其是在同時(shí)患者有其他疾病時(shí)，這些藥物更應(yīng)慎用。
治療原發(fā)性高血壓的藥物，臨床上主要有β-受體阻斷劑如上述“普萘洛爾”、“美多洛爾”等；鈣拮抗劑如尼群地平、洛活喜等，神經(jīng)節(jié)阻斷劑如地巴唑等，血管緊張素酶抑制劑如開博通等，輕度高血壓還可采用利尿劑如雙氫克尿噻，但這些藥物均存在著一定的毒副作用，不適合長期應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了提供提取一種可以長期使用的、毒副作用較小的知母提取物在制備預(yù)防、治療快速性心率失常和原發(fā)性高血壓的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。
知母提取物的提取方法采用本技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)，可采用乙醇水混合物浸泡提取，減壓回收乙醇至稠膏狀，加水溶解，冷藏，棄去沉淀，上層清液減壓濃縮至干，放冷后加少量甲醇或乙醇溶解，加丙酮析出白色沉淀，沉淀用丙酮洗滌，減壓干燥即得。其中乙醇水混合物中乙醇的體積百分比為30～80％，優(yōu)選50％；其中知母提取物占知母原藥材的重量比率約2～3％，這種知母提取物為溶于乙醇水混合溶劑而在丙酮中沉淀的物質(zhì)，以知母總皂苷為主。
上述知母提取物進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)及急性毒性試驗(yàn)、長期毒性試驗(yàn)。小鼠急性毒性試驗(yàn)表明小鼠口服知母提取物的最大耐受劑量在每千克體重1000mg以上，大鼠口服途徑給藥三個(gè)月的長期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，知母提取物給藥高劑量(相當(dāng)于臨床用藥量的100倍)以下的劑量為基本安全劑量。藥效學(xué)試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)表明本發(fā)明的上述知母提取物能防、治快速性心率失常及原發(fā)性高血壓。本發(fā)明的知母提取物可以加工成各種口服制劑，如片劑、顆粒劑、口服液、膠囊等。
正常人口服知母提取物制成的藥物每日二～三次，每次0.025～0.1克知母總皂苷。
經(jīng)進(jìn)一步純化的知母總皂苷同樣具有本發(fā)明的效果。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1 知母提取物的提取方法及其口服制劑的制備。
取知母藥材，加入相當(dāng)于6倍藥材體積的50％體積百分比的乙醇，浸泡30分鐘，回流提取21小時(shí)。傾出提取液，再加5倍藥材體積的50％乙醇提取一至二次，每次1小時(shí)。合并提取液，減壓回收乙醇至稠膏狀，加水適量使溶解，冷藏，離心棄沉淀，上層清液減壓濃縮至干，放冷，加少量甲醇或乙醇溶解，加丙酮析出白色沉淀，離心，沉淀用丙酮洗滌，減壓干燥得知母提取物(主要成分為知母總皂苷)。知母藥材約提取到提取物2～3％。
取知母提取物，加適量淀粉制粒，加入適量滑石粉、硬脂酸鎂按常規(guī)方法加工成片劑，每片含10mg知母總皂苷。
取知母提取物，加適量淀粉制粒，分裝成顆粒劑。
取知母提取物，加適量淀粉制粒，加入少量硬脂酸鎂，裝膠囊。
取知母提取物，加適量水溶解，加口服調(diào)味劑適量，添加水至刻度，加工成口服液，滅菌，即得。
實(shí)施例2 知母提取物的動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)1、受試藥物與劑量知母提取物研成細(xì)粉，加水成糊狀物，每毫升含知母總皂苷10mg；2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，雌雄各半，日齡5～6周，飼養(yǎng)觀察一周，剔除非正常動(dòng)物。
2.1 取健康小白鼠10只，體重18～22克，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前16小時(shí)開始禁食，一天內(nèi)每只小白鼠灌胃一次，每次灌胃0.5ml/10g體重，總劑量相當(dāng)于每天每千克體重500mg知母總皂苷，給藥后觀察七天。
2.2 取上述健康小白鼠20只，體重18～22克，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前16小時(shí)開始禁食，一天內(nèi)每只小鼠灌胃二次，每次間隔時(shí)間為6小時(shí)，每次灌胃0.5ml/10g體重，總劑量相當(dāng)于每天每千克1000mg知母總皂苷，給藥后觀察七天。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果對兩種給藥劑量進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)每次小白鼠經(jīng)灌胃后，活動(dòng)量明顯減少，爬行緩慢或扎堆聚集，倦伏于鼠籠內(nèi)，三、四個(gè)小時(shí)后逐漸恢復(fù)正常。
在給藥后的七天觀察期間內(nèi)，小白鼠的大小便，飲水飲食等均正常，每只小白鼠每天平均食用標(biāo)準(zhǔn)飼料5～6克，且雄鼠比雌鼠食用略多，外觀皮毛光滑、行動(dòng)活動(dòng)正常，與同等飼養(yǎng)條件下空白組小白鼠一樣，七天后，所有小白鼠無一死亡，正常存活。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小白鼠一天灌胃知母提取物的劑量為每千克體重500mg時(shí)，相當(dāng)于臨床用量的200倍左右。為每千克體重1000mg時(shí)，相當(dāng)于臨床用量的400倍左右。根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)機(jī)率原理，有99.9％的把握證明，小鼠口服給藥LD50大于40g/kg體重，說明本品安全性高。
4、結(jié)論小鼠口服知母總皂苷的最大耐受劑量在每千克體重1000mg以上。
實(shí)施例3 知母提取物的動(dòng)物長期毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SD大白鼠，雌雄各半，日齡5～6周。將知母提取物混入標(biāo)準(zhǔn)化飼料讓動(dòng)物自食。
因知母提取物毒性低，難以選出中毒反應(yīng)或死亡的劑量，故本實(shí)驗(yàn)參照預(yù)計(jì)臨床劑量(ACD)推算法，設(shè)計(jì)知母提取物高、中、低三個(gè)劑量進(jìn)行口服途徑連續(xù)給藥三個(gè)月的長期毒性試驗(yàn)。高劑量組為臨床用量的100倍；中劑量組為臨床用量的30倍；低劑量組為臨床用量的10倍。
知母提取物給藥期間各給藥組大鼠體重與對照比較均有減輕，尤其高、中劑量組大鼠更為明顯，并有一定的劑量—效應(yīng)關(guān)系，但停藥4周后，高劑量組大鼠的體重已能基本恢復(fù)到正常對照組的大鼠的水平，說明本藥物的對大鼠體重的影響是可逆的。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，連續(xù)給藥三個(gè)月及停藥4周后，各給藥組大鼠的生理、生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，與對照組比較沒有差異，表現(xiàn)知母提取物對肝、腎功能及血象等生理指標(biāo)均沒有毒性作用。此外，給藥三個(gè)月及停藥4周后，各劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、睪丸(或卵巢)肉眼和病理切片檢查表明，均未見病理性改變，說明知母提取物片在連續(xù)用藥三個(gè)月后對實(shí)質(zhì)器官無損害作用。
總論知母提取物對大鼠口服途徑連續(xù)給藥三個(gè)月的長期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，給藥期間各給藥組大鼠體重均有減輕作用，但停藥后能恢復(fù)。各組動(dòng)物體征無異常變化。知母提取物對大鼠的肝、腎功能、血常規(guī)及網(wǎng)織紅細(xì)胞等生理指標(biāo)沒有影響，對心、肝、脾、肺、腎、睪丸(或卵巢)等重要臟器的肉眼和病理組織學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)異常改變，上述結(jié)果表明，知母提取物給藥高劑量(相當(dāng)于臨床用量的100倍)以下的劑量為基本安全劑量。
實(shí)施例4 知母提取物治療心動(dòng)過速的藥效學(xué)的試驗(yàn)。
1、高甲狀腺激素型模型動(dòng)物按性別體重隨機(jī)分為5組，對照組、病理組、普萘洛爾(心得安)組(9mg/kg)、知母提取物組二個(gè)劑量(大鼠9mg/kg，27mg/kg；豚鼠7.2mg/kg，22.5mg/kg；病理組皮下注射三碘甲狀腺原酸(大鼠及豚鼠0.5mg/kg)隔日一次，共3次，蒸餾水灌胃，1ml/只，每日一次；心得安處理組除同病理組皮下注射T3外，腹膜下注射心得安20mg/kg，每日一次；知母提取物處理組除同病理組皮下注射T3外，知母提取物溶液灌胃，溶液體積均為1ml；正常對照組皮下注射生理鹽水，蒸餾水灌胃同病理組。
2、觀察對心率的影響豚鼠將豚鼠置于特制的小木盒里，皮下固定電級，連接心電圖II導(dǎo)聯(lián)(ECG-6511型)，避光，待豚鼠安靜20分鐘后測定基礎(chǔ)心率。分別將造型前后及心得安、知母提取物處理后心率加以比較。
對大鼠心率的影響大鼠，腹膜內(nèi)注射水合氯醛(50mg/kg)麻醉，30分鐘后皮下固定電極，連接心電圖機(jī)II導(dǎo)聯(lián)，測定心率。分別將造型前后及心得安、知母提取物處理后心率加以比較。
3、結(jié)果(以大鼠為例，豚鼠的結(jié)果與大鼠類似)。
組別(n＝10)基礎(chǔ)心率(X±SD) 變化量(X±SD)造型前 造型后對照組 318.2±24.6324.2±25.8 5.9±22.6病理組 286.3±26.7391.5±37.5 105.1±36.5低劑量 293.3±37.6361.1±49.3 68.2±50.1高劑量 308.7±38.3343.5±34.9 31.9±32.1心得安 304.0±33.5332.1±50.8 27.9±40.1
結(jié)果表明低劑量、高劑量提取物均能顯著降低高甲狀腺激型心動(dòng)過速模型動(dòng)物的心率(P＜0.01)，其中高劑量組與心得安相比無顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)施例5 知母提取物治療原發(fā)性高血壓的藥效學(xué)試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，正常Wistar大鼠10只，雌雄各半，3月齡，體重180～210克；自發(fā)性高血壓大鼠18只，雌雄各半，3月齡，體重180～210克，購自北京中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
2、動(dòng)物分組及處理，①正常對照組(n＝10)，正常Wistar大鼠，普通飼養(yǎng)，自動(dòng)飲水，不作任何處理；②自發(fā)性高血壓組(簡稱SHR組，n＝8)；SHR大鼠，灌蒸餾水6周；③知母提取物組(n＝10)SHR大鼠，前4周灌蒸餾水，后2周每日灌服知母提取物溶液，相當(dāng)于10毫克千克體重知母總皂苷。
3、觀察指標(biāo)與方法，①一般行為觀察包括毛色是否光澤、雙眼結(jié)膜顏色是否加深變紅以及易激惹程度的變化，易激惹程度分為三級；I級，指捉持頸部時(shí)尖叫、驚跳；II級，指捉持頸部時(shí)咬人；III級指提尾尖叫、驚跳，甚至咬人或同籠大鼠頻繁打斗。②血壓測定采用《中國應(yīng)用生理學(xué)雜志》1991，7(1)62～64報(bào)道的尾動(dòng)脈博動(dòng)法測定。
4、結(jié)果4.1 各組大鼠外觀及易激惹程度變化整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，各級大鼠毛色光澤，雙眼靈活，食量可，第6周末各組體重比較組間差異無顯著意義。SHR組易激惹程度多為I、II級，治療組易激惹程度在治療前后有顯著減少。
表2 各類大鼠外觀及易惹怒程度比較

4.2 各組大鼠血壓測定結(jié)果SHR組無論收縮壓、舒張壓、均高于正常組，治療組動(dòng)物經(jīng)治療后，其收縮壓、舒張壓均較治療前與SHR組顯著降低(P＜0.01)，與正常組比較差異不顯著(P＞0.05)表3

實(shí)施例4、實(shí)施例5的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明知母提取物能治療快速性心率失常及原發(fā)性高血壓。經(jīng)人體臨床試驗(yàn)，取得了與實(shí)施例4、實(shí)施例5相類似的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.知母提取物在制備防治快速性心率失常藥物中的應(yīng)用，其中知母提取物為溶于乙醇水混合溶劑而在丙酮中沉淀的物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母提取物在制備防治快速性心率失常藥物中的應(yīng)用，其特征在于知母提取物為知母總皂苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的知母提取物在制備防治快速性心率失常藥物中的應(yīng)用，其特征在于知母提取物的制劑加工成片劑、顆粒劑、口服液或膠囊的口服劑型。
4.知母提取物在制備防治原發(fā)性高血壓藥物中的應(yīng)用，其中知母提取物為溶于乙醇水混合溶劑而在丙酮中沉淀的物質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的知母提取物在制備防治原發(fā)性高血壓藥物中的應(yīng)用，其特征在于知母提取物為知母總皂苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的知母提取物在制備防治原發(fā)性高血壓藥物中的應(yīng)用，其特征在于知母提取物的制劑加工成片劑、顆粒劑、口服液或膠囊的口服劑型。
全文摘要
知母提取物在制備防治快速性心率失常和原發(fā)性高血壓藥物中的應(yīng)用，其中提取物為溶于乙醇水混合溶劑而在丙酮中沉淀的物質(zhì)，加工成口服劑型。本發(fā)明的知母提取物具有長期使用、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61K9/20GK1562276SQ20041002664
公開日2005年1月12日 申請日期2004年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月26日
發(fā)明者于圣臣, 呂華沖, 李儉洪 申請人:悅康藥業(yè)集團(tuán)有限公司