專利名稱：雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(h120、h52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品的冷凍干燥技術(shù)，保藏輔助劑及其制造方法。
背景技術(shù)：
我國目前常用的獸醫(yī)生物制品保護(hù)劑主要為5％蔗糖脫脂牛奶和5-10％蔗糖，1.5-3％明膠，制品要求低溫保存(-15℃以下)，2-8℃條件的保存期僅3-9個月，在常溫下必須盡快用完。這就為獸醫(yī)生物制品的保存、運(yùn)輸、使用等帶來許多困難和不便，同時由于必需低溫保存造成能源消耗及儲存成本大。
目前，國際上發(fā)達(dá)的國家獸醫(yī)生物凍干制品幾乎全部是2-8℃保存24個月以上。但未見方法的詳細(xì)報道。中國專利CN1176827A“一種動物用凍干活疫苗的制造方法”提出采用以聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉，羅望子膠，谷氨酸鈉，海藻糖等為主要基質(zhì)凍干保護(hù)劑的配方配制成的凍干保護(hù)劑，采用與之相適應(yīng)的凍干曲線與新城疫疫苗病毒抗原制成雞新城疫凍干活疫苗的方法，該苗在2-8℃條件下可長期保存。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備工藝，降低保護(hù)條件，延長使用期并降低使用成本。
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗，包括常用的明膠、蔗糖，其特征是耐熱凍干保護(hù)劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質(zhì)組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
上述疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑的制備工藝，按組份、比例混合，其特征是對保護(hù)劑的有效組份分別處理除菌對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(K90)、酪蛋白胨；按制劑比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份牛血清白蛋白、山梨醇、谷氨酸鈉、Vc也按制劑比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護(hù)劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
本發(fā)明的制備工藝制備的制劑在2-8℃條件下可保存24個月以上，能達(dá)到《中華人民共和國獸醫(yī)生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的各項指標(biāo)。
具體實施例方式
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，包括常用的明膠、蔗糖，其特征是耐熱凍干保護(hù)劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質(zhì)組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備工藝，包括將上述耐熱凍干保護(hù)劑的干物質(zhì)組份按比例混合，其特征是對保護(hù)劑的有效組份進(jìn)行除菌處理對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸鈉、Vc，也按比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm的濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護(hù)劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
技術(shù)參數(shù)及檢測方法1.產(chǎn)品的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、特異性檢驗、安全檢驗、剩余水分測定和真空度測定按《中華人民共和國獸醫(yī)生物制品規(guī)程》的方法及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
2.凍干周期不超過48h。
3.保護(hù)劑的毒性試驗禽類疫苗按產(chǎn)品當(dāng)中含保護(hù)劑量的10倍量，對7日齡健康雛雞分別進(jìn)行滴鼻、點(diǎn)眼、飲水及皮下注射各20只，觀察20d，雛雞全部健活；無任何不良反應(yīng)。
4.病毒含量測定及標(biāo)準(zhǔn)
(1)測定方法A.將疫苗用生理鹽水稀釋至1羽份/0.5mL，分別裝入2支試管內(nèi)，每管1mL。第1管加入等量的雞新城疫抗血清，第2管加入等量的雞傳染性支氣管炎抗血清。在室溫下中和1h，此時病毒含量為1羽份/0.1mL，即10-1。第1管繼續(xù)10倍系列稀釋，測定雞傳染性支氣管炎部分。第2管繼續(xù)10倍系列稀釋，測定雞新城疫部分，其方法同雞傳染性支氣管炎及雞新城疫凍干苗。
B.將疫苗用生理鹽水按實含組織量稀釋至500倍，分別裝入兩支試管中，每管1mL，第1管加入等量的雞新城疫抗血清，第2管加入等量雞傳染性支氣管炎抗血清。此時即為10-3，在室溫下中和1h后再作10倍系列稀釋，其它方法同上。
(2)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)一.雞新城疫弱毒凍干苗的標(biāo)準(zhǔn)A、凍干后病毒損失率小于0.4個滴度。
B.凍干后每羽份病毒含量≥106.7EID50。
C.凍干后的產(chǎn)品放37℃保存10d及30d進(jìn)行病毒含量測定，病毒含量下降率前者在1個滴度之內(nèi)，后者在2個滴度之內(nèi)。
D.凍干后產(chǎn)品放25℃保存30d，病毒含量下降率在0.6個滴度之內(nèi)。
E.產(chǎn)品放2-8℃保存24個月，每羽份病毒含量≥106.17EID50。
二.雞傳染性支氣管炎凍干苗的標(biāo)準(zhǔn)A、凍干后病毒損失率小于0.4個滴度。
B.凍干后H52每羽份病毒含量≥104.5EID50。
C.產(chǎn)品放37℃保存10d及30d，病毒含量下降率分別為1個至2個滴度之內(nèi)。
D.產(chǎn)品放25℃保存30d，病毒含量下降率不超過1個滴度。
E.產(chǎn)品放2-8℃保存24個月，H52每羽份病毒含量≥103.5EID50。
權(quán)利要求
1.一種雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，包括常用的明膠、蔗糖、脫脂奶粉，其特征是耐熱凍干保護(hù)劑的組份配比是明膠2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸鈉1％、Vc 0.2-0.3％；制劑中為干物質(zhì)組份，百分比剩余份均為蒸餾水。
2.制備權(quán)利要求1所述的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的工藝，包括將上述耐熱凍干保護(hù)劑的干物質(zhì)組份按比例混合，其特征是對保護(hù)劑的有效組份進(jìn)行除菌處理對可高壓滅菌的明膠、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30-40分鐘；將不耐高溫的組份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸鈉、Vc，也按比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm的濾膜過濾除菌；分別完成除菌后把兩種成分混合，即為凍干耐熱保護(hù)劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
全文摘要
雞新城疫、雞傳染性支氣管炎(H120、H52)二聯(lián)凍干疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備工藝，其特征是制備工藝對保護(hù)劑的有效組份分別進(jìn)行除菌處理對可高壓滅菌的按制劑比例溶于蒸餾水中，116℃滅菌30－40分鐘；將不耐高溫的組份也按制劑比例溶于蒸餾水中用孔徑0.22μm濾膜過濾除菌；再將兩種成分混合，即為凍干耐熱保護(hù)劑，使用時按1∶1比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。產(chǎn)品在2－8℃保存24個月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國家獸醫(yī)生物制品規(guī)程的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明是一種低成本、長效制品及制備方法，為獸醫(yī)生物制品使用解決了長久以來運(yùn)輸、儲存的高成本問題。
文檔編號A61K39/295GK1528458SQ20041002958
公開日2004年9月15日 申請日期2001年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月21日
發(fā)明者衛(wèi)廣森, 王文成, 張萬林 申請人:衛(wèi)廣森