專利名稱：一種從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本方法屬于天然產(chǎn)物提取方法，特別涉及一種從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
卷柏全草為卷柏科植物卷柏(Selaginella tamariscina)的全草(中藥大詞典M，上海科學技術(shù)出版社，2000.1472-1473)，卷柏中含有多種黃酮類化合物，包括芹菜素(Apigenin)、穗花杉雙黃酮(Amentoflavone)、扁柏雙黃酮(Hinokiflavone)和異柳杉素(Isocryptomerin)，穗花杉雙黃酮又名阿曼托雙黃酮，在很多種中草藥如銀杏葉、貫葉連翹中均存在(Jane R.Hanrahan，Mary Chebib，Neil L.M.Davucherron，et al.Semisynthetic preparation of amentoflavoneanegative modulator at GABA receptors[J].Bioorganic & medicinal chemistry letters，2003，132281-2284.)，而卷柏中穗花杉雙黃酮的含量又遠遠高于其他中草藥，如貫葉連翹中穗花杉雙黃酮的質(zhì)量百分含量在0.01％-0.05％，而卷柏中穗花杉雙黃酮的含量卻高達0.8％(Jiri patocka.The chemistry，pharmacology，andtoxicology of the biologically active constituents of the herb Hyperitum perforatumL.[J].Journal of applied biomedicine，2003，161-70.)。雙黃酮類化合物具有抗菌性，能增進血液循環(huán)、控制皮炎，在發(fā)蠟或發(fā)乳中加入雙黃酮類化合物，能刺激毛發(fā)的生長，在護膚用品中加入雙黃酮具有活血調(diào)理作用(王建新，天然活性化妝品M，中國輕工業(yè)出版社，1997.27-229.)。
本發(fā)明以前，國內(nèi)外各種文獻及專利對穗花杉雙黃酮的提取僅局限于實驗室中，并未在工業(yè)化生產(chǎn)中應用，所提取的也都是穗花杉雙黃酮的單體。例如，鄭興等(墊狀卷柏化學成分研究[J].中草藥，2001，32(1)17-18.)介紹提取分離方法是1.0kg墊狀卷柏，粉碎，用工業(yè)乙醇熱回流提取，減壓回收溶劑后，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，分別減壓濃縮，回收溶劑，得到石油醚部分和乙酸乙酯部分，然后分別進行硅膠柱層析，得到4種結(jié)晶化合物。
戴忠等(中華卷柏的化學成分研究[J].中草藥，2001，32(9)784-785.)介紹提取分離方法是中華卷柏的干燥全草5kg，用10倍量95％乙醇回流提取3次，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮物置水浴上揮盡乙醇，得中華卷柏浸膏。分別用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取部分濃縮后用硅膠柱層析，得到4種結(jié)晶化合物。
上述方法得到的是單一化學成分，適用于化合物鑒定與研究，而本發(fā)明應用沉降法和大孔吸附樹脂脫除雜質(zhì)，利用冷凍干燥法干燥產(chǎn)品，得到以穗花杉雙黃酮為主要有效成分的混合提取物，產(chǎn)品中穗花杉雙黃酮含量在10～50％，可用于化妝品和藥品，產(chǎn)品產(chǎn)率高達1～5％，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的具體內(nèi)容是干燥卷柏全草，乙醇提取后，通過控制乙醇濃度使葉綠素等脂溶性雜質(zhì)沉降出來而穗花杉雙黃酮等有效成分溶解在乙醇溶液中，然后過濾去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)；利用苯乙烯型大孔吸附樹脂吸附解析溶解有穗花杉雙黃酮等有效成分的乙醇溶液，從而進一步去除脂溶性雜質(zhì)；富含穗花杉雙黃酮等有效成分的解析液通過調(diào)節(jié)pH值沉降出穗花杉雙黃酮等有效成分，過濾得濾餅，從而與水溶性雜質(zhì)分離；最后利用冷凍干燥確保穗花杉雙黃酮避免受熱發(fā)生化學轉(zhuǎn)化，得到穗花杉雙黃酮含量10～50％、產(chǎn)率1～5％、顏色棕黃色至淺黃色的卷柏提取物。
本發(fā)明工藝操作簡便、重復性好，能有效去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，產(chǎn)品色澤好、不發(fā)粘，冷凍干燥有效保護了穗花杉雙黃酮不受破壞，產(chǎn)品穗花杉雙黃酮含量高，可達40％～50％。

發(fā)明內(nèi)容
本專利發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種從卷柏中提取穗花杉雙黃酮的生產(chǎn)工藝，它是對卷柏全草進行提取分離，目的是通過簡單的工藝得到收率較高的穗花杉雙黃酮提取物。
本發(fā)明的技術(shù)方案是從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其方法的步驟為(1)原料準備采集卷柏全草后，洗凈，晾干或曬干；(2)提取粉碎干燥的卷柏全草，萃取液回流提取兩次。提取液過濾，合并提取液；(3)濃縮提取液真空濃縮，回收萃取溶劑；(4)沉降過濾冷卻沉降后過濾，去除雜質(zhì)；(5)吸附解析沉降過濾液倒入大孔樹脂柱上，控制吸附時流速，然后用純水洗滌。再用解析溶劑進行解析；(6)二次濃縮解析液真空濃縮；(7)調(diào)pH沉降過濾調(diào)pH值為酸性，冷卻沉降后過濾，得濾餅；(8)冷凍干燥濾餅使用冷凍干燥，得產(chǎn)品。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比體現(xiàn)的優(yōu)異在于(1)工藝操作簡便、重復性好，產(chǎn)率高，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
(2)工藝過程未使用有毒有害溶劑，全部使用安全衛(wèi)生的純水和食用乙醇為溶劑。
(3)工藝使用調(diào)醇濃度、調(diào)pH值、大孔吸附樹脂吸附解析的方法充分脫除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，確保產(chǎn)品純度高、不發(fā)粘。
(4)采用冷凍干燥，保持有效成分不受破壞，產(chǎn)品顏色淺。
穗花杉雙黃酮提取物的應用本發(fā)明的穗花杉雙黃酮提取物可以單獨作為活性成分與表面活性劑制備成功能性化妝品，也可以和其他活性成分組合與表面活性劑制備成功能性化妝品，例如洗發(fā)香波、潔面乳、洗面奶、護手霜、洗手液。
(1)穗花杉雙黃酮提取物功能性香波水55g，加溫至70℃，攪拌的同時加入AES 8g，AESA 12g，K12A 5g，OA 5g，甜菜堿5g，6501 2g。溫度降至室溫時，攪拌的同時加入單硬脂酸乙二醇酯3g，SP680 2g，聚丙烯酰胺1g。均勻后，加入甘寶素0.15g，穗花杉雙黃酮提取物0.5g，檸檬香精0.05g，檸檬酸若干。穗花杉雙黃酮提取物功能性香波具有抗菌性，能增進血液循環(huán)、控制皮炎，刺激毛發(fā)的生長、改善頭發(fā)結(jié)構(gòu)使頭發(fā)柔順有光澤。
(2)穗花杉雙黃酮提取物功能性潔面乳氫化羊毛酯1.5g，甘油6g，檸檬酸0.01g，增溶劑0.1g，香精0.1g，穗花杉雙黃酮提取物0.5g，純水加至100g。穗花杉雙黃酮提取物功能性潔面乳具有活血調(diào)理功能，使皮膚保濕、嫩白、有光澤、有彈性。
本發(fā)明的穗花杉雙黃酮提取物還具有多種藥理活性，經(jīng)過實驗證明，穗花杉雙黃酮提取物藥物具有抑菌、止血的功效。
(1)抑菌消炎作用穗花杉雙黃酮提取物在抑菌作用實驗取5個直徑為9cm的無菌平面皿加入1ml待試菌，倒入冷卻到50℃的溶化瓊脂培養(yǎng)基15ml中充分混勻，待瓊脂凝固后，用外徑為5mm的無菌扎孔器在瓊脂上等距離打3個孔，并挖出孔內(nèi)瓊脂培養(yǎng)基，于每孔內(nèi)加入卷柏生品、穗花杉雙黃酮提取物和生理鹽水，置入37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)12小時、24小時和48小時，結(jié)果證明對綠膿桿菌具有抑制作用，實驗數(shù)據(jù)見表1。
表1穗花杉雙黃酮提取物對綠膿桿菌的抑制作用

(2)止血作用穗花杉雙黃酮提取物的止血實驗取健康小鼠，雌雄兼用。測試樣品以0.35mL/10g體重的藥液量灌胃。1h后用內(nèi)徑為1mm的毛細玻璃管插入小鼠內(nèi)眥球后靜脈中取血，至毛細管內(nèi)血柱達4-5cm。每隔30s折斷一小段毛細玻璃管，檢驗有無血凝。計算從采樣到出現(xiàn)凝血的時間作為凝血時間。測試樣品為卷柏、墊狀卷柏、穗花杉雙黃酮提取物與生理鹽水。另外，用同樣的方法，取健康小鼠，雌雄兼用。測試樣品以0.35mL/10g體重的藥液量灌胃。1h后用剪刀在小鼠尾尖3-5mm處橫斷，使鼠尾浸沒于37℃恒溫水中，待血液自行溢出開始計時，直至血液自行停止為止，即出血時間。測試樣品為卷柏、墊狀卷柏、穗花杉雙黃酮提取物與生理鹽水。
小鼠的止血和出血結(jié)果見表2
表2小鼠對卷柏及其提取物的止血作用(x±s，s)

n＝20，與空白對照比*P＜0.05***P＜0.001結(jié)果證明，穗花杉雙黃酮提取物能顯著縮短出血時間和縮短凝血時間。
本發(fā)明的穗花杉雙黃酮提取物還可以制備成臨床藥物制劑，例如片劑、膠囊劑、口服液體制劑等。因此，本發(fā)明還提供了含有穗花杉雙黃酮提取物的藥物組合物，該組合物含有治療有效量的穗花杉雙黃酮提取物，優(yōu)選每天攝入量大于5mg、少于1000mg。
穗花杉雙黃酮提取物片劑制備過程是，穗花杉雙黃酮提取物和輔料(藥用淀粉、微晶纖維素)以1∶4比例，加入70％酒精，混勻，帶攪拌的干燥過程自然形成顆粒，40目過篩，用壓片機壓成片重250mg。
本發(fā)明的藥物組合物作為藥物制劑，優(yōu)選每天攝入5mg～1000mg穗花杉雙黃酮提取物，進一步優(yōu)選每天攝入20mg～500mg穗花杉雙黃酮提取物，更好優(yōu)選每天攝入50mg～300mg穗花杉雙黃酮提取物，最好優(yōu)選每天攝入100mg～200mg穗花杉雙黃酮提取物。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例來更詳細的說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限制。
實施例1干燥墊狀卷柏全草200g，65-95％乙醇回流提取兩次，每次1-3小時、600-1800ml。合并提取液，真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮后控制乙醇濃度30-70％，沉降后過濾以去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，然后倒入HPD100型大孔樹脂柱上，吸附柱內(nèi)裝200-600ml樹脂，吸附時流速控制在1-3倍樹脂體積/小時，然后用2-4倍樹脂體積的純水洗滌樹脂柱，流出液和水洗液排污。用2-6倍樹脂體積的60-90％(v/v)的乙醇水溶液解析。解析液真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮至0.1-0.4g/ml左右，冷凍干燥。凍干產(chǎn)品為棕黃色，穗花杉雙黃酮含量10％～30％。
實施例2干燥墊狀卷柏全草200g，65-95％乙醇回流提取兩次，每次1-3小時、600-1800ml。合并提取液，真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮后控制乙醇濃度30-70％，沉降后過濾以去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，然后倒入HPD100型大孔樹脂柱上，吸附柱內(nèi)裝200-600ml樹脂，吸附時流速控制在1-3倍樹脂體積/小時，然后用2-4倍樹脂體積的純水洗滌樹脂柱，流出液和水洗液排污。用2-6倍樹脂體積的60-90％(v/v)的乙醇水溶液解析。解析液真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮回收乙醇后調(diào)pH值在1～6，沉降后過濾得濾餅，取濾餅冷凍干燥。凍干產(chǎn)品為淺黃色，穗花杉雙黃酮含量20％～50％。
實施例3干燥中華卷柏全草200g，65-95％乙醇回流提取兩次，每次1-3小時、600-1800ml。合并提取液，真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮后控制乙醇濃度30-70％，沉降后過濾以去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，然后倒入D101型大孔樹脂柱上，吸附柱內(nèi)裝200-600ml樹脂，吸附時流速控制在1-3倍樹脂體積/小時，然后用2-4倍樹脂體積的純水洗滌樹脂柱，流出液和水洗液排污。用2-6倍樹脂體積的60-90％(v/v)的乙醇水溶液解析。解析液真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮回收乙醇后調(diào)pH值在2～4，沉降后過濾得濾餅，取濾餅冷凍干燥。凍干產(chǎn)品為淺黃色，穗花杉雙黃酮含量20％～50％。
實施例4干燥墊狀卷柏全草20kg，65-95％乙醇回流提取兩次，每次1-3小時、60-180L。合并提取液，真空濃縮，真空度控制在-0.40--0.99Mpa，濃縮后控制乙醇濃度30-70％，沉降后過濾以去除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，然后倒入HPD100型大孔樹脂柱上，吸附柱內(nèi)裝20-60L樹脂，吸附時流速控制在1-3倍樹脂體積/小時，然后用2-4倍樹脂體積的純水洗滌樹脂柱，流出液和水洗液排污。用2-6倍樹脂體積的60-90％(v/v)的乙醇水溶液解析。解析液真空濃縮，濃縮回收乙醇后調(diào)pH值在2～4，沉降后過濾得濾餅，取濾餅冷凍干燥。凍干產(chǎn)品為淺黃色，穗花杉雙黃酮含量20％～50％。
產(chǎn)品質(zhì)量指標穗花杉雙黃酮含量10～50％，產(chǎn)率1～5％，顏色棕黃色至淺黃色，熔點在200℃以上。
權(quán)利要求
1.一種從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征在于卷柏全草經(jīng)過干燥、提取、濃縮、沉降過濾，然后進行柱吸附解析，二次濃縮、沉降過濾、濾餅干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是上述方法的步驟為(1)原料準備采集卷柏全草后，洗凈，晾干或曬干；(2)提取粉碎干燥的卷柏全草，萃取液回流提取兩次。提取液過濾，合并提取液；(3)濃縮提取液真空濃縮，回收萃取溶劑；(4)沉降過濾濃縮液冷卻沉降后過濾，去除雜質(zhì)；(5)吸附解析沉降過濾液倒入大孔樹脂柱上，控制吸附時流速，然后用純水洗滌。再用解析溶劑進行解析；(6)二次濃縮解析液真空濃縮；(7)調(diào)pH沉降過濾調(diào)pH值為酸性，冷卻沉降后過濾，得濾餅；(8)冷凍干燥濾餅使用冷凍干燥，得產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是所述的卷柏全草優(yōu)選墊狀卷柏或中華卷柏。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是所述的萃取液優(yōu)選乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是用大孔樹脂柱分離提純。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是解析溶劑優(yōu)選為乙醇水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是解析濃縮液優(yōu)選調(diào)pH值為酸性以沉降出穗花杉雙黃酮。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物的生產(chǎn)工藝，其特征是干燥方法是使用冷凍干燥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物，可以用來制備護膚膏、護膚油、護膚液、洗發(fā)液、護發(fā)液和洗滌劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從卷柏中提取穗花杉雙黃酮提取物，可以用來制備凝血藥物、抑菌抗炎藥物及其藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種穗花杉雙黃酮提取物的提取工藝。所述的提取工藝為干燥卷柏全草，回流提取，真空濃縮，然后進行柱吸附純化即得。穗花杉雙黃酮提取物可以廣泛應用在化妝品和藥物制備上。本發(fā)明具有原料來源豐富、工藝合理、收率高、成本低等優(yōu)點。
文檔編號A61P7/04GK1562994SQ20041003400
公開日2005年1月12日 申請日期2004年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月21日
發(fā)明者曹禮群, 李五洲, 蔣永紅, 張可欽, 段建新, 欒興華, 李長城, 王建 申請人:徐州技源天然保健品有限公司