專利名稱：米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體注射劑及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的制劑，具體說(shuō)是涉及一種米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體注射劑，本發(fā)明還涉及該藥物的制備工藝。
背景技術(shù)：
米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌為蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，其作用機(jī)制主要是米托蒽醌分子進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合，從而抑制核酸的合成和有絲分裂而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌主要用于惡性淋巴瘤、乳腺癌和急性白血病，對(duì)肺癌、黑色素瘤、軟組織肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、肝癌、大腸癌、腎癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、睪丸腫瘤、卵巢癌和頭頸部癌也有一定療效。
相對(duì)于鹽酸阿霉素而言，米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的長(zhǎng)期和短期毒性較低，但是當(dāng)累積劑量加大時(shí)會(huì)產(chǎn)生骨髓抑制，引起白細(xì)胞和血小板減少。臨床上出現(xiàn)的毒副作用還有惡心、嘔吐、食欲減退、腹瀉等消化道反應(yīng)，另外也有乏力、脫發(fā)、皮疹、口腔炎等毒副作用發(fā)現(xiàn)。上述毒副作用使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的臨床應(yīng)用受到了很大的限制。
脂質(zhì)體(Liposome)最初是由英國(guó)學(xué)者Bangham和Standish將磷脂分散在水中進(jìn)行電鏡觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)的。磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均為脂質(zhì)的雙分子層；囊泡中央和各層之間被水相隔開(kāi)，雙分子層厚度約為4納米。后來(lái)，將這種具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層小囊稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可分為多室脂質(zhì)體和單室脂質(zhì)體。單室脂質(zhì)體又分為小單室脂質(zhì)體和大單室脂質(zhì)體。Bangham和Standish最初發(fā)現(xiàn)的就是多室脂質(zhì)體，它們較易制備，尺寸一般為佳0.5-5微米。小單室脂質(zhì)體為球形，尺寸一般為佳20-50納米；大單室脂質(zhì)體的尺寸為微米數(shù)量級(jí)。1971年英國(guó)萊門等人開(kāi)始將脂質(zhì)體用于藥物載體，主要作用機(jī)理是將藥物粉末或溶液包裹在脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜所封閉的水相中或嵌入脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜中，這種微粒具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。目前用作藥物載體的脂質(zhì)體多為大單室脂質(zhì)體，粒徑一般位于100-1000納米之間。70年代中后期，人們開(kāi)始研究將脂質(zhì)體用作蒽環(huán)類抗癌藥物的有效載體，80年代末已有臨床實(shí)驗(yàn)開(kāi)始進(jìn)行，到90年代中期歐美已有脂質(zhì)體藥物上市。當(dāng)此類藥物被包裹在特定的脂質(zhì)體再通過(guò)靜脈注射進(jìn)入人體后，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其毒副作用明顯減少，藥物半衰期顯著延長(zhǎng)，但其藥效卻并不減弱反而得到加強(qiáng)。
目前世界上研制成功并上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品有美國(guó)Alza Pharmaceuticals醫(yī)藥公司研制的Doxil和Caelyx，主要用于治療復(fù)發(fā)性卵巢癌和AIDS相關(guān)的Kaposi’s肉瘤；美國(guó)伊蘭醫(yī)藥公司(Elan Pharmaceuticals，Inc.)主要用于治療乳腺癌的MyocetTM；美國(guó)Gilead生產(chǎn)的AmBisome和DaunoXome，其藥學(xué)活性成分分別為兩性霉素B和柔紅霉素。Doxil，Caelyx和MyocetTM的藥學(xué)活性成分都為阿霉素或鹽酸阿霉素，其中Doxil和Caelyx是運(yùn)用“隱形”(stealth)技術(shù)將鹽酸阿霉素包裹在脂質(zhì)體微粒中，同時(shí)在每個(gè)脂質(zhì)體微粒表面再包裹上聚乙二醇(PEG)以進(jìn)一步延長(zhǎng)其在體內(nèi)循環(huán)半衰期，它們的半衰期可達(dá)55小時(shí)。另外美國(guó)的APHOIS公司已經(jīng)成功的將紫杉醇(paclitaxel)和喜樹(shù)堿(camptothecin)等難溶性藥物制成了脂質(zhì)體制劑并用于乳腺癌的治療。但到目前為止，世界上還沒(méi)有米托蒽醌的脂質(zhì)體產(chǎn)品在市場(chǎng)上銷售。本發(fā)明涉及的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的制劑不僅添補(bǔ)了我國(guó)自行研制和生產(chǎn)米托蒽醌脂質(zhì)體制劑的空白，而且將使我國(guó)在這個(gè)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)技術(shù)上處于國(guó)際領(lǐng)先地位。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體注射劑。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供該注射劑的制備工藝。
本發(fā)明的技術(shù)方案是根據(jù)脂質(zhì)體的特性，選用特定的磷脂來(lái)制備包裹米托蒽醌或米托蒽醌的脂質(zhì)雙層膜，配方中還加入膽固醇和自由基捕捉劑維生素E來(lái)增加脂質(zhì)體米托蒽醌的穩(wěn)定性，采用pH梯度法促進(jìn)藥物包裹，藥物包裹率高達(dá)95％以上，并通過(guò)特殊的加工工藝來(lái)控制該制劑注射入人體后米托蒽醌從脂質(zhì)體中釋放到人體內(nèi)的速度，降低了鹽酸米托蒽醌的毒副作用而使其藥效增加。脂質(zhì)體主要由天然和/或合成磷脂組成，這些磷脂可分為三大類，即中性磷脂，帶正電磷脂和帶負(fù)電磷脂，本發(fā)明脂質(zhì)體制備主要選用中性的卵磷脂。另外，配方中還加入膽固醇，它使脂質(zhì)體雙分子層膜固化，從而減少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂質(zhì)體穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。同時(shí)為了進(jìn)一步降低形成脂質(zhì)體的磷脂和脂質(zhì)體所包裹藥物的化學(xué)降解，配方中還加入了維生素E。維生素E是一種有效的抗氧化劑，被認(rèn)為是通過(guò)與磷脂過(guò)氧化自由基反應(yīng)并猝滅單一態(tài)的氧分子和對(duì)磷脂的雙分子層進(jìn)行排序(如限制類脂層分子的流動(dòng)性)等分子機(jī)制而發(fā)揮其抗氧化作用。維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。已有的研究結(jié)果表明，卵磷脂、飽和大豆磷脂和磷脂酰甘油酯等的水解都受pH值的影響，而且水解產(chǎn)物可以使脂質(zhì)體懸浮液的pH值下降，加速脂質(zhì)體的進(jìn)一步水解。這些磷脂成分均在pH 6.5時(shí)最穩(wěn)定，水解速度常數(shù)最小。因此，本發(fā)明在把米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌有效地包裹在空白脂質(zhì)體中后，又將米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體置于加入緩沖劑的脂質(zhì)體分散液中，進(jìn)一步增強(qiáng)了米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌可采用“離子梯度法”來(lái)包裹到空白脂質(zhì)體中，它通過(guò)脂質(zhì)體雙分子脂質(zhì)層內(nèi)外離子濃度的差異來(lái)使藥物更容易被包裹到脂質(zhì)體中，這些離子包括Na+，K+，Li+，NH4+，H+等，使用H+時(shí)的方法被稱作“pH梯度法”。本發(fā)明將采用“離子梯度法”中效果較好的“pH梯度法”來(lái)包裹米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌。該方法通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)體內(nèi)外環(huán)境的pH差異來(lái)使脂質(zhì)體外的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌較易進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)，而脂質(zhì)體內(nèi)的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌不易釋放到脂質(zhì)體外，從而使藥物包裹率很高，一般可達(dá)95％以上。具體措施通過(guò)將米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌在被包裹到脂質(zhì)體時(shí)用堿粉沫或堿水溶液來(lái)調(diào)節(jié)脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層膜外液相環(huán)境中的pH值來(lái)增加藥物包裹率，藥物處于脂質(zhì)體雙層脂質(zhì)膜所包裹的酸性水溶液中，酸性水溶液由0.01M-0.5M的有機(jī)酸制備。脂質(zhì)體的粒度及均勻度可通過(guò)高壓均粒機(jī)制備，也可通過(guò)擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過(guò)相應(yīng)孔徑的微孔膜來(lái)達(dá)到。在包裹藥物后通過(guò)滲析過(guò)濾法然后將米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體置于與人體生理環(huán)境類似的脂質(zhì)體分散液中。
空白脂質(zhì)體的制備可采用薄膜分散法(TFV)，也可用逆相蒸發(fā)法(REV)、乙醇注入法來(lái)制備。制備過(guò)程中確切溫度隨脂質(zhì)體組份不同而不同。成品米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體的分散液中為增加其在儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性加入了緩沖劑。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下措施來(lái)為實(shí)現(xiàn)一種米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，每1000ml制劑的原料配方為米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌 500mg-2.5g磷脂500mg-25g
膽固醇 25mg-14.3g抗氧化劑 0.28mg-1.6g有機(jī)酸 30mg-30g堿 25mg-42g糖 28g-150g緩沖劑 1g-100g注射用水 定容至1000ml同時(shí)滿足米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌和磷脂的摩爾比例為0.05∶1-0.5∶1，膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中磷脂可以是蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化蛋黃卵磷脂(HEPC)、雙硬脂酸卵磷脂(DSPC)、大豆卵磷脂(soy PC)、氫化大豆卵磷脂(HSPC)、雙軟脂酸卵磷脂(DPPC)或雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC)。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中有機(jī)酸可以是檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中堿可以是碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀、磷酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫鈉、氫氧化鈉。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中糖為乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其中緩沖劑可以是甘氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其劑型可以是注射液、凍干粉。
所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑的制備方法，包含下列步驟1)制備脂質(zhì)薄膜根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；2)制備含米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體懸浮液a.配制0.01M-0.5M的米托蒽醌有機(jī)酸溶液，用米托蒽醌酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液；
b.配制0.1M-2.0M的堿水溶液或準(zhǔn)備堿粉末，用堿水溶液或堿粉末調(diào)節(jié)米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液至弱堿性并在40℃-70℃下保溫一段時(shí)間；3)均化脂質(zhì)體包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度，也可通過(guò)擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過(guò)相應(yīng)孔徑的微孔膜來(lái)達(dá)到，脂質(zhì)體的粒徑控制在50-300nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；4)制備米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體按重量百分比配制濃度為3％-15％的糖水溶液并加入緩沖劑，調(diào)節(jié)至pH5-pH7，得脂質(zhì)體的分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質(zhì)體的分散液洗滌含米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH5-pH7的脂質(zhì)體的分散液，使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將所得米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的脂質(zhì)體脂質(zhì)體的粒徑位于50nm-300nm之間，藥物包裹率可達(dá)95％以上，非包裹米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌含量少，一般小于5％。同時(shí)，配方加入膽固醇和抗氧化劑維生素E，使得米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體的穩(wěn)定性大大提高。另外，由于脂質(zhì)體鹽酸鹽酸的生產(chǎn)過(guò)程中關(guān)鍵的均粒步驟可由高效的高壓均粒機(jī)來(lái)完成，而且該制劑也可通過(guò)凍干制成凍干劑型來(lái)保存，這不僅使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體的穩(wěn)定性進(jìn)一步提高，并且使該制劑的工業(yè)化生產(chǎn)成為可能。本發(fā)明凍干粉在2℃-8℃下的一年穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其平均粒徑變化率小于10％，藥物包裹率的變化率小于5％，顯示了本發(fā)明米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體制劑優(yōu)異的穩(wěn)定性。
米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體制劑的制備采用了國(guó)產(chǎn)原料，大大降低了其生產(chǎn)成本，使我國(guó)癌癥患者能承受這種藥效高且毒副作用低的抗癌新藥。
本發(fā)明的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)毒副作用實(shí)驗(yàn)米托蒽醌脂質(zhì)體(L-MITOX)制劑按實(shí)例4制備，濃度為1.0mg/ml，傳統(tǒng)鹽酸米托蒽醌(F-MITOX)制劑由鹽酸米托蒽醌溶于無(wú)菌生理鹽水配制，濃度為1.0mg/ml。L-MITOX和F-MITOX分別由小鼠尾靜脈注射入小鼠體內(nèi)。毒性實(shí)驗(yàn)表明小鼠對(duì)F-MITOX的最大耐藥劑量(MTD)為10mg/Kg，而對(duì)L-MITOX的最大耐藥劑量(MTD)顯著增加到30mg/Kg。在10mg/Kg劑量組中，注射L-MITOX的小鼠體重在兩周內(nèi)的減少量小于3％，注射F-MITOX的小鼠體重在注射后體重持續(xù)減少，在第12天體重減少達(dá)30％。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明米托蒽醌脂質(zhì)體的毒副作用明顯低于傳統(tǒng)鹽酸米托蒽醌。
2)米托蒽醌脂質(zhì)體對(duì)白血病L1210細(xì)胞的藥效實(shí)驗(yàn)白血病L1210細(xì)胞由小鼠尾靜脈注入小鼠體內(nèi)。24小時(shí)后由小鼠尾靜脈注入按實(shí)例1制備的濃度為1.0mg/ml的脂質(zhì)體米托蒽醌(L-MITOX)。對(duì)照組的小鼠在同樣條件下注射溶于無(wú)菌生理鹽水的濃度為1.0mg/ml的傳統(tǒng)鹽酸米托蒽醌(F-MITOX)。實(shí)驗(yàn)中使用三種不同劑量的L-MITOX和F-MITOX5mg/Kg，10mg/Kg和20mg/Kg，實(shí)驗(yàn)期為60天。
在注射L-MITOX的小鼠中，10mg/Kg和20mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為零，平均存活期超過(guò)60天。5mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為100％，平均存活期約15天。
在注射F-MITOX的小鼠中，5mg/Kg，10mg/Kg和20mg/Kg劑量組的小鼠死亡率均為100％。5mg/Kg劑量組的小鼠平均存活期約12天；10mg/Kg劑量組的小鼠平均存活期約15天；20mg/Kg劑量組的小鼠平均存活期約10天。
上述藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脂質(zhì)體米托蒽醌對(duì)L1210白血病不僅有明顯的治療效果，而且毒副作用明顯減輕，療效大大優(yōu)于傳統(tǒng)米托蒽醌。而且本發(fā)明的脂質(zhì)體米托蒽醌制劑可明顯增加藥物在病體的攝入量并增強(qiáng)其抗腫瘤的治療功能。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡明，實(shí)施例不是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌 500mg雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC)6g膽固醇1.3g維生素E 7.8mg檸檬酸1150mg無(wú)水碳酸鈉800mg蔗糖 90g
組氨 5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為15-30分鐘；用0.5M的無(wú)水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為100nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例2制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌 1000mg雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC) 12g膽固醇 2.5g維生素E15mg檸檬酸 2300mg無(wú)水碳酸鈉 1600mg蔗糖 90g組氨酸 5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為15-30分鐘；用0.5M的無(wú)水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為80nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例3制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌1000mg氫化大豆卵磷脂(HSPC)13.9g膽固醇 2.5g維生素E 15mg檸檬酸 2300mg無(wú)水碳酸鈉 1600mg蔗糖90g組氨酸 5g注射用水定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為30-60分鐘；用0.5M的無(wú)水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為100nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例4制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌 1000mg雙軟脂酸卵磷脂(DPPC) 13g膽固醇 2.5g維生素E 15mg檸檬酸 2300mg氫氧化鈉 1200mg蔗糖 90g組氨酸 5g注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為30-60分鐘；用1.0M的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為100nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例5制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌 1000mg雙硬脂酸卵磷脂(DSPC) 14g
膽固醇 2.5g維生素E 15mg檸檬酸 2300mg無(wú)水碳酸鈉 1600mg蔗糖90g組氨酸 5g注射用水定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為30-60分鐘；用0.5M的無(wú)水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為88nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實(shí)施例6制劑處方(1000ml容量)米托蒽醌 2500mg雙硬脂酸卵磷脂(DSPC) 35g膽固醇 6.3g維生素E38mg檸檬酸 5800mg無(wú)水碳酸鈉 4000mg蔗糖 90g組氨酸 5g
注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；配制50mM的檸檬酸溶液并加入配方量的米托蒽醌，用所得米托蒽醌的檸檬酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在60℃-65℃之間，水化時(shí)間為30-60分鐘；用0.5M的無(wú)水碳酸鈉水溶液調(diào)節(jié)所得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液的pH至7.2±0.2，然后在60℃-65℃之間保溫10-30分鐘；包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為110nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；配制9％的蔗糖水溶液并加入0.5％的組氨酸，得脂質(zhì)體分散液；采用脂質(zhì)體分散液洗滌含米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH為7.0±0.2的脂質(zhì)體分散液，用注射用水定容并調(diào)節(jié)至米托蒽醌的濃度為1.0mg/ml溶液，將米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
權(quán)利要求
1.一種米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于每1000ml制劑的原料配方為米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌 500mg-2.5g磷脂500mg-25g膽固醇 25mg-14.3g抗氧化劑0.28mg-1.6g有機(jī)酸 30mg-30g堿 25mg-42g糖 28g-150g緩沖劑 1g-100g注射用水定容至1000ml同時(shí)滿足米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌和磷脂的摩爾比例為0.05∶1-0.5∶1，膽固醇和磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
2.權(quán)利要求1中脂質(zhì)體中的磷脂選自蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙肉豆寇酸卵磷脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.001∶1-0.1∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于有機(jī)酸可以是檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于堿可以是碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀、磷酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫鈉或氫氧化鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于糖可以是乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于緩沖劑可以是甘氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑，其特征在于其劑型可以是注射液、凍干粉。
9.權(quán)利要求1所述的米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體注射劑的制備方法，其特征在于包含下列步驟1)制備脂質(zhì)薄膜根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；2)制備含米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體懸浮液a.配制0.01M-0.5M的米托蒽醌有機(jī)酸溶液，用米托蒽醌酸溶液來(lái)水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液；b.配制0.1M-2.0M的堿水溶液或準(zhǔn)備堿粉末，用堿水溶液或堿粉末調(diào)節(jié)米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液至弱堿性并在40℃-70℃下保溫一段時(shí)間；3)均化脂質(zhì)體包裹完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度，也可通過(guò)擠壓設(shè)備把空白脂質(zhì)體懸浮液在壓力下擠過(guò)相應(yīng)孔徑的微孔膜來(lái)達(dá)到，脂質(zhì)體的粒徑控制在50-300nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；4)制備米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體按重量百分比配制濃度為3％-15％的糖水溶液并加入緩沖劑，調(diào)節(jié)至pH5-pH7，得脂質(zhì)體的分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質(zhì)體的分散液洗滌含米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌的脂質(zhì)體，利用滲析過(guò)濾法使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體外溶液置換為pH5-pH7的脂質(zhì)體的分散液，使米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將所得米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體懸浮液用微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌脂質(zhì)體注射劑及其制備工藝。該注射劑由米托蒽醌或鹽酸米托蒽醌、磷脂、膽固醇、抗氧化劑、有機(jī)酸、堿、糖、緩沖劑、注射用水組成，該制備工藝包括制備脂質(zhì)薄膜、包裹藥物、均化脂質(zhì)體、純化和固化脂質(zhì)體、定容、除菌、分裝、保存等步驟。該注射劑穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少，該制備工藝簡(jiǎn)單易行。
文檔編號(hào)A61K31/136GK1602844SQ20041004161
公開(kāi)日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2004年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月5日
發(fā)明者賀明, 賀欣, 周金鴻 申請(qǐng)人:常州太平洋藥物研究所有限公司