專利名稱：聚氰基丙烯酸正丁酯納米顆粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種對肝癌基因治療藥物納米顆粒的制備方法，特別是一種十六烷基三乙基溴化銨修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒(CTAB-PBCA-NP)的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，隨著基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的日趨成熟，肝癌的基因治療已成為生物科學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。而調(diào)控自殺基因特異性導(dǎo)入肝癌細(xì)胞，或在肝癌細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)特異性表達(dá)，在最大限度地殺傷肝癌細(xì)胞的同時(shí)不損害正常肝細(xì)胞，是決定其療效及可行性的關(guān)鍵。目前，基因治療的研究和臨床應(yīng)用中常用的病毒載體和非病毒載體，都存在無法克服的局限性。納米?；蜣D(zhuǎn)運(yùn)體，是近年發(fā)展起來的一種非病毒基因轉(zhuǎn)運(yùn)載體，它將DNA、RNA等基因治療分子包裹在納米顆粒中或吸附在其表面，通過靶向分子與細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，可望實(shí)現(xiàn)安全有效的靶向性基因治療。納米材料的選擇，是成功進(jìn)行納米基因轉(zhuǎn)運(yùn)和治療的關(guān)鍵。所選擇的材料必須是生物可降解型或者易于從體內(nèi)排泄，而不產(chǎn)生有害的降解產(chǎn)物，且無免疫原性，不引起機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是要提供一種具有良好生物降解性、生物相容性、無免疫原性的十六烷基三乙基溴化銨修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒(CTAB-PBCA-NP)的制備方法。
本發(fā)明聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒(PBCA-NP)的制備方法選用乳化聚合法，其步驟是將吐溫80溶解于適量水中，在恒溫、攪拌下，加入α-氰基丙烯酸正丁脂單體，離心，取上清。過濾，除去上清，制成PBCA-NP膠體儲存液。將PBCA-NP膠體儲存液稀釋，加入到十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)水溶液中，室溫下攪拌、離心去上清，干燥后即制成CTAB修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒。
本發(fā)明以α-氰基丙烯酸正丁脂單體為原料制成的納米顆?；蜣D(zhuǎn)運(yùn)載體，經(jīng)表面的改性后，不僅可有效結(jié)合質(zhì)粒DNA，而且可保護(hù)DNA免受破壞，并具有較高的體外基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明有以下效果1、采用乳化聚合法，優(yōu)化了工藝條件，成功制備出粒徑小、分布均勻的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒。用CTAB修飾該納米顆粒表面，使其帶正電荷從而可逆的結(jié)合基因治療質(zhì)粒DNA，組裝成PBCA納米顆?；蜣D(zhuǎn)運(yùn)體系，確定其用于體外基因轉(zhuǎn)染的安全使用濃度為低于100ng/μl。2、PBCA納米顆?；蜣D(zhuǎn)運(yùn)體系，可保護(hù)所攜帶DNA免受核酸酶的降解和超聲剪切作用的破壞。3、采用綠色熒光報(bào)道基因，證實(shí)PBCA納米顆粒基因轉(zhuǎn)運(yùn)體系外可成功轉(zhuǎn)運(yùn)外源DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率達(dá)47％。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例具體介紹本發(fā)明。
將吐溫80溶解于適量雙蒸水中，用0.1N HCl調(diào)節(jié)溶液的PH值至2.8以下。在恒溫磁力攪拌器作用下，向溶液中緩緩加入α-氰基丙烯酸正丁脂單體，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)。室溫、5000rpm離心15min，取上清，用直徑0.22μm的濾膜過濾，產(chǎn)物為PBCA-NP。40000rpm離心1小時(shí)，除去上清，用雙蒸水洗滌兩次，干燥后稱重，用適量雙蒸水重懸沉淀，制成PBCA-NP膠體儲存液。
將PBCA-NP膠體儲存液稀釋為0.625％的水溶液，在磁力攪拌器作用下，取PBCA-NP稀釋液16.67ml緩漫加入到33.33ml濃度為0.25％的十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)水溶液中，室溫，攪拌1小時(shí)。40000rpm離心30min，去上清，用雙蒸水洗滌，干燥后稱重，即制得CTAB修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒。
權(quán)利要求
1.一種用十六烷基三乙基溴化銨修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒(CTAB-PBCA-NP)的制備方法，其步驟是將吐溫80溶解于適量水中，在恒溫、攪拌下，加入α-氰基丙烯酸正丁脂單體，離心，取上清，過濾，除去上清，制成PBCA-NP膠體儲存液；將PBCA-NP膠體儲存液稀釋，加入到十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)水溶液中，室溫下攪拌、離心去上清，干燥后即制成CTAB修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒。
2.按權(quán)利要求1所述的納米顆粒(CTAB-PBCA-NP)的制備方法，其步驟是a、將吐溫80溶解于適量雙蒸水中，用0.1N HCl調(diào)節(jié)溶液的PH值至2.8以下，在恒溫磁力攪拌器作用下，向溶液中緩緩加入α-氰基丙烯酸正丁脂單體，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)；室溫、5000rpm離心15min，取上清，用直徑0.22μm的濾膜過濾，產(chǎn)物為PBCA-NP，40000rpm離心1小時(shí)，除去上清，用雙蒸水洗滌兩次，干燥后稱重，用適量雙蒸水重懸沉淀，制成PBCA-NP膠體儲存液；b、將PBCA-NP膠體儲存液稀釋為0.625％的水溶液，在磁力攪拌器作用下，取PBCA-NP稀釋液16.67ml緩漫加入到33.33ml濃度為0.25％的十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)水溶液中，室溫，攪拌1小時(shí)；40000rpm離心30min，去上清，用雙蒸水洗滌，干燥后稱重，即制得CTAB修飾的聚氰基丙烯酸正丁脂納米顆粒。
全文摘要
一種用十六烷基三乙基溴化銨修飾的聚氰基丙烯酸正丁酯納米顆粒(CTAB－PBCA－NP)的制備方法，其步驟是將吐溫80溶解于適量水中，在恒溫、攪拌下，加入α－氰基丙烯酸正丁酯單體，離心，取上清。過濾，除去上清，制成PBCA－NP膠體儲存液。將PBCA－NP膠體儲存液稀釋，加入到十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)水溶液中，室溫下攪拌、離心去上清，干燥后即制成CTAB修飾的聚氰基丙烯酸正丁酯納米顆粒。本發(fā)明不僅可有效結(jié)合質(zhì)粒DNA，而且可保護(hù)DNA免受破壞，并具有較高的體外基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率。PBCA納米顆?；蜣D(zhuǎn)運(yùn)體系，可保護(hù)所攜帶DNA免受核酸酶的降解和超聲剪切作用的破壞。
文檔編號A61K47/32GK1733313SQ200410046649
公開日2006年2月15日 申請日期2004年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月11日
發(fā)明者張陽德 申請人:張陽德