專利名稱：馬藺子甲素及其衍生物、類似物在制備抗腫瘤藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種馬藺子甲素及其衍生物、類似物的制藥用途，具體涉及馬藺子甲素、馬藺子乙素在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
馬藺子甲素和馬藺子乙素為中藥馬藺子中的主要化學成分，其中以馬藺子甲素為主，馬藺子乙素含量較低。馬藺子甲素(Irisquinone A，6-甲氧基-2-Δ10’-順十七烯-1，4苯醌)和馬藺子乙素(Irisquinone B，6-甲氧基-2-十七烷基-1，4-苯醌)的化學結(jié)構(gòu)式、分子式分別為 Irisquinone A，C24H38O3 Irisquinone B，C24H40O3自八十年代起，馬藺子素(主要為甲素和乙素的混合物)作為腫瘤治療中的放療增敏劑得到了廣泛的研究1-4(1.郭繩武等，科學通報，1985，(9)696-699；2.王士賢等，天津醫(yī)藥，1981，(5)300-302；3.梁劍平等，輻射研究與輻射工藝學報，2000，18(1)45-51；4.梁建平等，中國藥理學通報，1999，15(4)313-5)。從九十年代，馬藺子甲素在放射治療食管癌的增敏作用日益受到臨床研究者的重視，與對照組(單獨放療組)相比，馬藺子素合并放射治療食管癌的有效率有顯著性提高5-14(5.賈中耀等，中國腫瘤臨床，1999，26(8)639；6.樊銳太等，河南腫瘤學雜志，1998，11(6)446；7.曲寶璽等，腫瘤，1987，7(5)198；8.樊衛(wèi)，曾宗淵，中山醫(yī)科大學學報，1998，19(2)142；9.賈中耀等，安徽中醫(yī)臨床雜志，1999，11(3)162；10.丘榮良等，中國腫瘤臨床，1999，26(7)547；11.于甬華等，中華放射醫(yī)學與防護雜志，1999，19(5)313；12.李學源等，中國腫瘤臨床，2000，5(4)272；13.林華明等，中國腫瘤臨床，2001，28(6)439；14.李艾恩等，中國腫瘤臨床與康復，2001，8(43)20)。
除具有放療增敏的作用以外，馬藺子甲素也被發(fā)現(xiàn)具有誘導細胞凋亡和殺傷腫瘤細胞的作用，中國專利公開號CN 1362061A公開了馬藺子甲素對白血病、乳腺癌、口腔癌、肺癌、宮頸癌、黑色素瘤和惡性腦瘤細胞有明顯抑制作用。同時，該專利申請還揭示了馬藺子甲素可誘導人白血病細胞K562發(fā)生細胞調(diào)亡。另據(jù)文獻報道，馬藺子甲素也具有抗鼻咽癌及誘導鼻咽癌細胞調(diào)亡的作用15(15.蔡藍等，馬藺子素誘導鼻咽癌細胞調(diào)亡的研究，廣西藥學，2000(10)16～7)；馬藺子素能抑制淋巴肉瘤的生長16(16.Irisquinone，Drugs of the Future 1999，24(6)613-617)。未見文獻報道馬藺子甲素對其他癌株的抑制作用。
由于在馬藺子素混合物中馬藺子乙素的含量較低(約10％)，因而對馬藺子乙素在抗腫瘤方面的作用研究并未受到人們的重視。僅陶遵威等報道了馬藺子乙素對離體培養(yǎng)的HeLa細胞有顯著的放射增敏作用，且對小鼠白血病P388和L1210有顯著抑制活性17(17.陶遵威等，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1991，22(2)57)。關(guān)于馬藺子乙素對其他人腫瘤細胞的殺傷作用未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在尋找并開發(fā)馬藺子甲素及其衍生物、類似物的新的醫(yī)藥用途，提供一種馬藺子甲素及其衍生物、類似物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明涉及下列通式(I)所示的馬藺子甲素及其衍生物、類似物，特別是馬藺子甲素、馬藺子乙素及其可藥用鹽、前藥在制備抗腫瘤藥物中的用途
其中，R1＝CnH2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可為直鏈或支鏈；當R1＝CnH2n-1時，它可為環(huán)狀飽和基團或含有雙鍵的基團，其中雙鍵可位于直鏈或支鏈中的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式；R2代表羥基或氫；特別是，當R1代表 R2代表氫時，所述腫瘤選自食管癌、結(jié)腸癌、胃腺癌、Burkitt’s淋巴瘤或前列腺癌；當R1代表(CH2)16CH3，R2代表氫時，所述腫瘤選自胃腺癌、食管癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤、Burkitt’s淋巴瘤或肝癌。
本發(fā)明的化合物的可藥用鹽包括各種無機或有機酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；各種無機或有機堿鹽如氫氧化鈉、三羥甲基氨基甲烷(TRIS，tromethane)和N-甲基-葡萄糖胺。
本發(fā)明的化合物的前藥包括含有該化合物的羧酸酯(可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法用C1-4的醇濃縮制得)、含有該化合物的羥基酯(可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法用C1-4的羧酸，C3-6的二羧酸或其酸酐，如馬來酸酐，富馬酸酐等濃縮制得)、含有該化合物的烯胺(可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法用C1-4的醛或酮濃縮制得)或含有該化合物的縮醛或者縮酮(可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法用氯甲基甲醚或氯甲基乙醚濃縮制得)等(Albert S.Kearney AdvancedDrug Reviews.19(1996)229-234).。
本發(fā)明還涉及含有治療有效量的馬藺子甲素或馬藺子乙素及可藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，馬藺子甲素和馬藺子乙素可明顯抑制多種腫瘤細胞的活性，故可用于制備抗腫瘤藥物。
本發(fā)明所使用的馬藺子甲素和/或馬藺子乙素可以單獨使用或以藥物組合物的形式使用。藥物組合物包括作為活性成份的馬藺子甲素或馬藺子乙素及可藥用載體。
所述可藥用載體為各種常用的藥物輔料如填充劑(無水乳糖、淀粉、乳糖珠粒、葡萄糖)、粘合劑(微晶纖維素)、崩解劑(交聯(lián)羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)PVP)、潤滑劑(硬酯酸鎂)以及吸收促進劑、吸附載體、香味劑、甜味劑、稀釋劑、賦形劑、潤濕劑等。
所述藥物組合物可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制備并可以通過腸道或非腸道或局部途徑給藥。口服制劑包括片劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液等，非腸道給藥制劑包括注射液；局部給藥制劑包括如霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑等。
所述藥物的給藥途徑可以為口服、舌下、皮下、肌肉、粘膜、尿道、陰道、靜脈等。
本發(fā)明的馬藺子甲素和馬藺子乙素或其藥物組合物可用于多種腫瘤的治療，這些腫瘤包括但不限于宮頸癌、淋巴肉瘤、肝癌、鼻咽癌、白血病、肺癌、乳腺癌、腦瘤、口腔癌、黑色素瘤等。特別是，本發(fā)明的馬藺子甲素可用于食管癌、結(jié)腸癌、胃腺癌或前列腺癌等的治療；本發(fā)明的馬藺子乙素可用于食管癌、胃癌、肺癌、結(jié)腸癌或前列腺癌等的治療。
本發(fā)明的馬藺子甲素和馬藺子乙素或其藥物組合物的用量可根據(jù)給藥途徑，患者的年齡和體重，所治療腫瘤的類型及嚴重程度的不同而不同，其日劑量可以是0.001～100mg/kg，可一次或多次給藥。


圖1 馬藺子甲素、乙素對肺腺癌(SPC-A-1)細胞株的毒性呈劑量依賴關(guān)系；圖2 馬藺子甲素、乙素對食管癌(Eca-109)細胞株的毒性呈劑量依賴關(guān)系；圖3 馬藺子甲素、乙素對Burkitt’s淋巴瘤(Raii)細胞株的毒性呈劑量依賴關(guān)系；圖4 馬藺子甲素、乙素對乳腺癌(MCF-7)細胞株的毒性呈劑量依賴關(guān)系；
具體實施例方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。但并不意味著本發(fā)明僅限于此。
實施例1 在細胞水平上檢測馬藺子甲素和馬藺子乙素對多種腫瘤細胞的生長抑制作用。
實驗材料人腫瘤細胞株及其培養(yǎng)食管癌(Eca-109)、胃腺癌(AGS和BGC-823)、前列腺癌細胞(DU145)、肺腺癌(SPC-A-1)、結(jié)腸癌(Caco-2和LS-174T)、乳腺癌(MCF-7和Bcap-37)、惡性黑色素瘤(A375)、Burkitt’s淋巴瘤(Raji)、肝癌(HepG2)、白血病(K562)等細胞均購自中科院生化細胞研究所。細胞于含10％胎牛血清(Gibco)的RPMI-1640(Gibco)培養(yǎng)基中，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。
馬藺子甲素、馬藺子乙素由山東新華制藥廠提供；其他試劑MTT及DMSO等均為Sigma公司產(chǎn)品。
實驗方法馬藺子甲素和馬藺子乙素對上述腫瘤細胞株的細胞毒性通過MTT法測得。具體步驟如下1.樣品制備將馬藺子甲素和馬藺子乙素分別溶解于二甲亞砜中，得到濃度分別為10mg/ml和1mg/ml的溶液；2.細胞經(jīng)胰酶消化并洗滌后懸浮于含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，經(jīng)胎盤藍染色排除法計活細胞數(shù)，并調(diào)節(jié)細胞懸浮液密度至1×105細胞/ml。
3.在平底96孔板中，每孔加入100微升細胞，每孔中細胞總數(shù)為1×104。于37℃，5％CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
4.每孔加入5微升以細胞生長培養(yǎng)基稀釋的樣品，使反應終濃度分別為0、0.3、1、3、10、30、和100μg/ml。將相應量的DMSO加入不加藥的細胞中作為對照，不加藥物及DMSO的含細胞孔作為背景。每點作三個平行測試。
5.將加藥細胞在37℃，5％CO2細胞培養(yǎng)箱中保溫48小時。
6.每孔中加入10μl 5mg/ml MTT溶液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中保溫3～4小時。
7.將細胞板于1000rpm離心15分鐘，真空吸去培養(yǎng)液，加入150μlPBS洗滌后離心并小心地吸去溶液。
8.每孔加入150μl DMSO，置于搖床上以150rpm搖動15分鐘，使生成的甲簪晶體充分溶解。測定492nm光吸收值。
9.根據(jù)光吸收值計算馬藺子甲素和馬藺子乙素處理后細胞相對存活率。計算公式如下 10.通過XLfit軟件計算馬藺子甲素和馬藺子乙素對各腫瘤細胞的IC50。
實驗結(jié)果1.馬藺子甲素和馬藺子乙素的體外抗腫瘤作用體外實驗結(jié)果表明，馬藺子甲素和馬藺子乙素分別對多種腫瘤細胞具有細胞毒作用，抑制腫瘤細胞增殖與藥物劑量呈依賴關(guān)系，其中馬藺子乙素對腫瘤細胞增殖的抑制活性比馬藺子甲素更強。以馬藺子甲素和馬藺子乙素對肺腺癌(圖1)和食管癌(圖2)的抑制作用為例。
表1.馬藺子甲素和乙素對腫瘤細胞殺傷毒性的IC50(ug/ml)

權(quán)利要求
1.下述通式(I)的化合物或其可藥用鹽、前藥在制備抗腫瘤藥物中的用途 其中，R1＝CnH2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可為直鏈或支鏈；當R1＝CnH2n-1時，它可為環(huán)狀飽和基團或含有雙鍵的基團，其中雙鍵可位于直鏈或支鏈中的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式；R2代表羥基或氫。
2.權(quán)利要求1的用途，其中當R1＝CnH2n+1時，它為直鏈飽和基團；當R1＝CnH2n-1時，它為直鏈含雙鍵基團，且雙鍵可在鏈的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式。
3.權(quán)利要求2的用途，其中當R1代表 R2代表氫時，所述腫瘤選自食管癌、結(jié)腸癌、胃腺癌、Burkitt’s淋巴瘤或前列腺癌。
4.權(quán)利要求2的用途，其中當R1代表(CH2)16CH3，R2代表氫時，所述腫瘤選自胃腺癌、食管癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤、Burkitt’s淋巴瘤或肝癌。
5.一種藥物組合物，包含治療有效量的下述通式(I)的化合物或其可藥用鹽、前藥及可藥用載體 其中，R1＝CnH2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可為直鏈或支鏈；當R1＝CnH2n-1時，它可為環(huán)狀飽和基團或含有雙鍵的基團，其中雙鍵可位于直鏈或支鏈中的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式；R2代表羥基或氫。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物，其中R1代表 或(CH2)16CH3，R2代表氫。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種馬藺子甲素及其衍生物、類似物的制藥用途，具體涉及馬藺子甲素、馬藺子乙素在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明開發(fā)了馬藺子甲素、馬藺子乙素新的醫(yī)藥用途。
文檔編號A61K31/122GK1711995SQ200410049698
公開日2005年12月28日 申請日期2004年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月23日
發(fā)明者嚴孝強, 崔玉敏, 顏建華, 張維漢, 段繼峰, 左劍 申請人:和記黃埔醫(yī)藥企業(yè)有限公司