專利名稱：人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑。具體涉及包含5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑衍生物的分子設(shè)計(jì)和合成方法。
背景技術(shù)：
人表皮生長因子受體2(簡寫HER2/neu)酪氨酸激酶在腫瘤中是發(fā)生改變頻率最高的癌基因之一，研究表明，在許多上皮腫瘤，25％-30％乳腺癌、25％-32％卵巢癌、30％-40％原發(fā)性腎細(xì)胞癌、與部分前列腺癌、小細(xì)胞肺癌和鼻炎癌中可見到HER2/neu過度表達(dá)，HER2/neu信號傳導(dǎo)通路的活化增強(qiáng)了多種腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性能，也致使腫瘤細(xì)胞對常規(guī)治療藥物耐受，促成向惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化。HER2/neu的過度表達(dá)至少是患者不良預(yù)后和死亡率高的部分原因，可以認(rèn)為受體酪氨酸激酶及其家族酪氨酸激酶受體和多肽生長因子在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著極為重要的作用。因此，抑制HER2/neu受體酪氨酸激酶能有效地阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，防止腫瘤向惡性轉(zhuǎn)化和產(chǎn)生耐藥性。本發(fā)明的目的是篩選具有HER2/neu受體酪氨酸激酶抑制抑制活性的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明設(shè)計(jì)了以5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑?yàn)槟阁w結(jié)構(gòu)、具有如圖1和圖2所示的分子結(jié)構(gòu)通式的化合物，并設(shè)計(jì)了合成方法。
經(jīng)試驗(yàn)這些化合物具有良好的抑制HER2/neu受體酪氨酸激酶的活性，其半數(shù)抑制率(IC50)在10nmole/L～100nmole/L之間。


圖1和圖2為本發(fā)明所設(shè)計(jì)的以5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑?yàn)槟阁w結(jié)構(gòu)的人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑。
圖1中，R1、R2、R3分別或同時(shí)為H，NO2，CN，F(xiàn)，Cl，Br，CH3O，C6H5O，4-CH3C6H4，3-CH3C6H4，2-CH3C6H4，HO，NH2，CH3NH，(CH3)2N，CH3COO，CH3CH2COO，(CH3)2CHCOO，(CH3)3CCOO，CF3COO，(CF3)2CHCOO，(CF3)3CCOO，CH3，CH3CH2，(CH3)2CH，(CH3)3C，CF3。
圖2中，R4、R5分別或同時(shí)為H，NO2，CN，F(xiàn)，Cl，Br，CH3O，C6H5O，4-CH3C6H4，3-CH3C6H4，2-CH3C6H4，HO，NH2，CH3NH，(CH3)2N，CH3COO，CH3CH2COO，(CH3)2CHCOO，(CH3)3CCOO，CF3COO，(CF3)2CHCOO，(CF3)3CCOO，CH3，CH3CH2，(CH3)2CH，(CH3)3C，CF3。
本發(fā)明所設(shè)計(jì)的以5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑?yàn)槟阁w結(jié)構(gòu)的人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑，合成方法如下方法一1-芳基-2-腈基-2-三苯基膦基乙酮，用干燥的四氫呋喃為溶劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)、-50℃～-70℃下，經(jīng)1∶1.1摩爾比的丁基鋰作用15分鐘后，與1∶1.1摩爾比的對甲基苯磺?；B氮反應(yīng)6～12小時(shí)，得1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入冷水讓沉淀析出，得圖1、圖2中所示化合物，得率分別為55％～86％。
方法二1-腈基-2-芳基-2-雜環(huán)基乙烯，雜環(huán)基分別為1-哌啶基、1-哌嗪基或4-嗎啡啉基，用二氯甲烷溶解，與等摩爾的對甲基苯磺酰基疊氮反應(yīng)2～4天。得1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。所得的1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入冷水讓沉淀析出，圖1、圖2中所示化合物，得率分別為30％～45％。
方法三疊氮鈉或疊氮鉀懸浮在干燥的N，N-二甲基甲酰胺溶劑中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，反應(yīng)介質(zhì)加熱至50℃～90℃，與1.5∶1摩爾比的1-腈基-2-芳基乙炔反應(yīng)1～3小時(shí)，反應(yīng)殘餾物用去離子水溶解，用10％的稀鹽酸將溶液pH調(diào)至2～4左右。再用乙醚將水溶液萃取。萃取液蒸除溶劑后殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-腈基-5-芳基-1H-1，2，3-三氮唑，圖1、圖2中所示化合物得率分別為40％～64％。
方法四等摩爾的芳基苯乙腈和芐基疊氮用干燥的四氫呋喃溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)下與1∶1.1摩爾的叔丁醇鉀反應(yīng)24～48小時(shí)，將反應(yīng)混合物倒入冰水中放置析出沉淀，得1-芐基-4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑。再將1-芐基-4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑溶入-70℃的液氨中，與1∶2摩爾比的金屬鈉作用。再用過量的氯化銨分解，用4M的氫氧化鈉溶液將瓶內(nèi)殘餾洗出，再用二氯甲烷將不溶物萃除，澄清的水溶液用10％的鹽酸將pH調(diào)至2～4左右，然后用乙酸乙酯萃取。萃取液蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑。4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑，用95％乙醇溶解并用硫酸酸化。在低于5℃以下與過量的亞硝酸鈉作用30～40分鐘后，然后與1∶1.1摩爾比的腈化亞銅反應(yīng)3～12小時(shí)。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物。萃取液蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。圖1、圖2中所示化合物得率分別為35％～53％。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1在250mL的三頸瓶中加入0.15mol的1-(4-甲氧基苯基)-2-腈基-2-三苯基膦基乙酮，用150mL干燥的四氫呋喃將瓶中物質(zhì)溶解，攪拌下將三頸瓶浸入干冰浴中冷卻至-70℃。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下經(jīng)滴液漏斗將含0.165mol的丁基鋰戊烷溶液，滴加的速率控制在使瓶內(nèi)溫度不超過-50℃，加完后繼續(xù)維持干冰浴中冷卻攪拌15分鐘。然后在攪拌下經(jīng)滴液漏斗將含0.165mol的對甲基苯磺?；B氮四氫呋喃溶液慢慢加入，加完后維持在-50℃左右繼續(xù)攪拌反應(yīng)6～12小時(shí)。將瓶內(nèi)反應(yīng)混合物過慮，濾液減壓濃縮。殘留物用溶劑重結(jié)晶，得1-對甲基苯磺?；?4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。
在250mL的三頸瓶中加入0.1mol的1-對甲基苯磺?；?4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用100mL90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入500mL水中，冷卻讓沉淀析出。過慮收集固體，干燥，得4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，得率86％。
實(shí)施例2在250mL的燒瓶中依次加入100mL二氯甲烷，0.1mol的對甲基苯磺酰基疊氮和0.1mol的1-腈基-2-(4-甲氧基苯基)-2-雜環(huán)基乙烯，雜環(huán)基分別為1-哌啶基、1-哌嗪基或4-嗎啡啉基。混合物在室溫?cái)嚢柘路磻?yīng)2～4天。然后將反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘留物用溶劑重結(jié)晶，得1-對甲基苯磺酰基-4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。
在100mL的三頸瓶中加入0.02mol的1-對甲基苯磺酰基-4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用50mL90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入200mL水中，冷卻讓沉淀析出。過慮收集固體，干燥，得4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，得率45％。
實(shí)施例3在250mL的三頸瓶中加入0.15mol的疊氮鈉或疊氮鉀，加入100mL干燥的N，N-二甲基甲酰胺，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌加熱至50℃～90℃，然后加入0.1mol的1-腈基-2-(4-甲氧基苯基)乙炔溶于30mL干燥的N，N-二甲基甲酰胺溶液，維持加熱繼續(xù)反應(yīng)1～3小時(shí)，減壓蒸除溶劑，殘餾物用200mL去離子水溶解，在用10％的稀鹽酸將溶液pH調(diào)至2～4左右。用100mL乙醚將水溶液萃取三次，合并乙醚溶液，再用50mL去離子水洗滌兩次。乙醚溶液用無水硫酸鎂干燥過夜后蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-(4-甲氧基苯基)-1H-1，2，3-三氮唑，得率64％。
實(shí)施例4在500mL的三頸瓶中依次加入300mL干燥的四氫呋喃、0.22mol的叔丁醇鉀、0.2mol的芳基苯乙腈和0.2mol的芐基疊氮，在室溫氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌反應(yīng)24～48小時(shí)，將反應(yīng)混合物慢慢倒入3L的冰水中，放置1小時(shí)后析出沉淀，過慮收集固體，干燥后用溶劑重結(jié)晶，得1-芐基-4-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑。
在500mL的三頸瓶中加入0.07mol的1-芐基-4-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑，將三頸瓶浸入干冰浴中冷卻，加入250mL-70℃的液氨，攪拌下將0.14mol的金屬鈉小塊加入瓶內(nèi)。待金屬鈉全部溶解且瓶內(nèi)反應(yīng)物的藍(lán)色消失后，將0.28mol的氯化銨分?jǐn)?shù)次加入瓶內(nèi)，再在攪拌下反應(yīng)30分鐘。然后撤除干冰浴讓液氨慢慢揮發(fā)，用4M的氫氧化鈉溶液100mL將瓶內(nèi)殘餾洗出，再用50mL二氯甲烷將不溶物萃除，澄清的水溶液用10％的鹽酸將pH調(diào)至2～4左右，然后用50mL乙酸乙酯萃取三次。乙酸乙酯溶液用無水硫酸鎂干燥過夜后蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑。
在250mL的三頸瓶中加入0.02mol的4-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑，用100mL95％乙醇將其溶解并用冰鹽浴冷至-5℃，再加入10mL6M的硫酸。然后在攪拌下經(jīng)滴液漏斗將22mL 1M的亞硝酸鈉溶液緩慢加入，確保瓶內(nèi)溫度低于5℃以下，亞硝酸鈉溶液加完后再反應(yīng)30分鐘，然后加入少量的尿素將未反應(yīng)的亞硝酸鈉清除。在0℃經(jīng)滴液漏斗將預(yù)先制備好的10mL含0.022mol的腈化亞銅溶液慢慢加入瓶內(nèi)，保持瓶內(nèi)溫度低于5℃以下反應(yīng)0.5～3小時(shí)，再升至室溫反應(yīng)3～12小時(shí)。減壓蒸除乙醇后用50mL乙酸乙酯萃取三次。乙酸乙酯溶液用無水硫酸鎂干燥過夜后蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-(4-甲氧基苯基)-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，得率53％。
實(shí)施例5取對數(shù)生長期的細(xì)胞加入96孔板中，每孔2000個(gè)細(xì)胞，100μl/孔。加入由實(shí)施例1～4中制備的4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，每組設(shè)3個(gè)平行孔，置37℃培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)終止前4小時(shí)加入10μl5mg/mlMTT液，再培養(yǎng)4小時(shí)，棄去培養(yǎng)液，加入0.2ml DMSO，待結(jié)晶溶解后在酶聯(lián)儀上檢測570mm波長下每孔的OD值，按生長抑制率(％)＝((1-用藥組OD值)/對照組平均OD值)×100％，再按BLISS法計(jì)算機(jī)程序求出半數(shù)抑制率(％)為6.6μmole/L。如圖1、圖2所示結(jié)構(gòu)的5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑衍生物對HER2/neu受體酪氨酸激酶的半數(shù)抑制率(IC50)在10nmole/L～100nmole/L之間。
權(quán)利要求
1.一種人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑，其特征是具有式(1)或式(2)結(jié)構(gòu)的化合物 式(1)中，R1、R2、R3分別或同時(shí)為H，NO2，CN，F(xiàn)，Cl，Br，CH3O，C6H5O，4-CH3C6H4，3-CH3C6H4，2-CH3C6H4，HO，NH2，CH3NH，(CH3)2N，CH3COO，CH3CH2COO，(CH3)2CHCOO，(CH3)3CCOO，CF3COO，(CF3)2CHCOO，(CF3)3CCOO，CH3，CH3CH2，(CH3)2CH，(CH3)3C，CF3；式(2)中，R4、R5分別或同時(shí)為H，NO2，CN，F(xiàn)，Cl，Br，CH3O，C6H5O，4-CH3C6H4，3-CH3C6H4，2-CH3C6H4，HO，NH2，CH3NH，(CH3)2N，CH3COO，CH3CH2COO，(CH3)2CHCOO，(CH3)3CCOO，CF3COO，(CF3)2CHCOO，(CF3)3CCOO，CH3，CH3CH2，(CH3)2CH，(CH3)3C，CF3。
2.一種人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑的合成方法，其特征是1-芳基-2-腈基-2-三苯基膦基乙酮，用干燥的四氫呋喃為溶劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)、-50℃～-70℃下，經(jīng)1∶1.1摩爾比的丁基鋰作用15分鐘后，與1∶1.1摩爾比的對甲基苯磺?；B氮反應(yīng)6～12小時(shí)，得1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑；1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入冷水讓沉淀析出，得式(1)或式(2)所示化合物。
3.一種人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑的合成方法，其特征是1-腈基-2-芳基-2-雜環(huán)基乙烯，雜環(huán)基分別為1-哌啶基、1-哌嗪基或4-嗎啡啉基，用二氯甲烷溶解，與等摩爾的對甲基苯磺酰基疊氮反應(yīng)2～4天；得1-對甲基苯磺酰基-4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑。所得的1-對甲基苯磺?；?4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑，用90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入冷水讓沉淀析出，得式(1)或式(2)所示化合物。
4.一種人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑的合成方法，其特征是疊氮鈉或疊氮鉀懸浮在干燥的N，N-二甲基甲酰胺溶劑中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，反應(yīng)介質(zhì)加熱至50℃～90℃，與1.5∶1摩爾比的1-腈基-2-芳基乙炔反應(yīng)1～3小時(shí)，反應(yīng)殘餾物用去離子水溶解，用10％的稀鹽酸將溶液pH調(diào)至2～4左右；再用乙醚將水溶液萃??；萃取液蒸除溶劑后殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-腈基-5-芳基-1H-1，2，3-三氮唑，得式(1)或式(2)所示化合物。
5.一種人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑的合成方法，其特征是等摩爾的芳基苯乙腈和芐基疊氮用干燥的四氫呋喃溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)下與1∶1.1摩爾的叔丁醇鉀反應(yīng)24～48小時(shí)，將反應(yīng)混合物倒入冰水中放置析出沉淀，得1-芐基-4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑。再將1-芐基-4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑溶入-70℃的液氨中，與1∶2摩爾比的金屬鈉作用。再用過量的氯化銨分解，用4M的氫氧化鈉溶液將瓶內(nèi)殘餾洗出，再用二氯甲烷將不溶物萃除，澄清的水溶液用10％的鹽酸將pH調(diào)至2～4左右，然后用乙酸乙酯萃取。萃取液蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑；4-芳基-5-氨基-1H-1，2，3-三氮唑，用95％乙醇溶解并用硫酸酸化。在低于5℃以下與過量的亞硝酸鈉作用30～40分鐘后，然后與1∶1.1摩爾比的腈化亞銅反應(yīng)3～12小時(shí)；用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物。萃取液蒸除溶劑，殘餾物用溶劑重結(jié)晶得4-芳基-5-腈基-1H-1，2，3-三氮唑；得式(1)或式(2)所示化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及人表皮生長因子受體2酪氨酸激酶抑制劑。設(shè)計(jì)了以5－腈基－1H－1；2，3－三氮唑?yàn)槟阁w結(jié)構(gòu)、具有如圖1和圖2所示的分子結(jié)構(gòu)通式的化合物。合成方法包括1－芳基－2－腈基－2－三苯基膦基乙酮，用干燥的四氫呋喃為溶劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)、－50℃～－70℃下，經(jīng)1∶1.1摩爾比的丁基鋰作用15分鐘后，與1∶1.1摩爾比的對甲基苯磺?；B氮反應(yīng)6～12小時(shí)，得1－對甲基苯磺?；?－芳基－5－腈基－1H－1，2，3－三氮唑；1－對甲基苯磺?；?－芳基－5－腈基－1H－1，2，3－三氮唑，用90％乙醇將其溶解，再加熱回流1小時(shí)，然后將瓶內(nèi)溶液導(dǎo)入冷水讓沉淀析出，得圖1、圖2中所示化合物。經(jīng)試驗(yàn)這些化合物具有良好的抑制HER2/neu受體酪氨酸激酶的活性，其半數(shù)抑制率(IC
文檔編號A61P35/00GK1651418SQ20041005249
公開日2005年8月10日 申請日期2004年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月6日
發(fā)明者成志毅, 朱孝峰 申請人:中山大學(xué)