專利名稱：知母提取物注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是知母提取物的注射劑型，包括粉針劑、小針劑、葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，還涉及其治療缺血性腦血管疾病的新用途。
背景技術(shù)：
知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根莖，具有滋陰降火、潤燥滑腸的功效。
知母的化學(xué)成分主要為皂苷、黃酮類成分。知母皂苷類成分具有顯著的防治老年性癡呆作用(發(fā)明專利申請公開說明書，公開號CN 1301166，申請?zhí)?9806158.1；發(fā)明專利申請公開說明書，公開號CN 1212966，申請?zhí)?7119680.X)、保護(hù)心肌I/R損傷(首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1994；15(2)138)、抗血小板聚集活性(Clin Chim Acta，1999；289(1-2)79-88)、雌激素樣抗骨質(zhì)疏松作用、抗炎、抑制中性粒細(xì)胞過氧化物產(chǎn)生的作用(發(fā)明專利申請公開說明書，公開號CN 1370537，申請?zhí)?1106195.2)等；以知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷E、知母皂苷B、知母皂苷AIII等為主要成分的知母提取物具有治療腦卒中活性，可明顯改善大鼠腦缺血再灌注損傷引起的行為癥狀、縮小腦梗塞體積、降低腦缺血大鼠腦水腫，可用于制備防治腦卒中(腦中風(fēng))的藥物(發(fā)明專利申請公開說明書，公開號CN 1451384A，申請?zhí)?3116824.8)。
目前知母藥用時主要為單味知母飲片、與其他中藥配伍煎湯或制備成固體制劑后口服。由于口服具有療效慢、有效成分生物利用度低等缺陷，不能滿足發(fā)病較快的心腦血管疾病的治療需要，尤其是腦卒中患者發(fā)病急性期還存在吞咽困難，因此，若將知母的活性物質(zhì)-以皂苷為主要成分的知母提取物制備成注射劑型就能克服口服制劑的不足，特別適用于心腦血管疾病的治療。但目前未見有關(guān)知母提取物注射劑型的報道，也未見知母用作治療缺血性腦血管疾病藥物的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明將知母提取物制備成注射劑型，包括粉針劑、小針劑、葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，同時還提供將該制劑用于治療缺血性腦血管疾病的新用途。
本發(fā)明的知母提取物注射劑由知母提取物、藥用輔料組成，藥用輔料選自賦形劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、稀釋劑等。
本發(fā)明所說知母提取物的制備方法為按常規(guī)將粉碎的知母藥材用20～95％醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的4～8倍；或?qū)⒎鬯榈闹杆幉挠?0～95％乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4～12倍；提取液濃縮，濃縮液離心或過濾；濃縮液的離心上清液或過濾液通過非極性或弱極性大孔樹脂吸附(非極性或弱極性大孔樹脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹脂等)，用水及20％以下的乙醇淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級醇洗脫，低級醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為30～95％，體積用量為生藥的5～15倍，收集低級醇洗脫液，濃縮至無醇；濃縮液按上述方法再通過大孔樹脂吸附洗脫，收集低級醇洗脫液，濃縮至無醇，干燥后粉碎或噴霧干燥、冷凍干燥，即為本發(fā)明的知母提取物；或?qū)饪s液通過聚酰胺色譜，以水洗脫，收集水洗脫液，濃縮，干燥后粉碎或噴霧干燥、冷凍干燥，也可得本發(fā)明的知母提取物。
本發(fā)明知母提取物中含有效成分知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷B之和占總量80％以上，知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷B的含量百分比例為78～92∶2～12∶0～6。
本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取知母提取物，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含知母提取物5～50mg。
本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取知母提取物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含知母提取物5～50mg。
本發(fā)明制備小針劑時，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含知母提取物5～50mg。
本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含知母提取物5～50mg。
本發(fā)明對知母提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定。
分離純化取前面所述知母提取物10g，以蒸餾水溶解，過sephadex LH20柱色譜，以不同比例H2O-Me2CO洗脫。收集H2O-Me2CO(2∶1)洗脫部分，干燥，得干燥物0.6g，為組份1。收集H2O-Me2CO(1∶1)洗脫部分，干燥，得干燥物7.8g，為組份2。收集H2O-Me2CO(1∶2)洗脫部分，干燥，得干燥物0.7g，為組份3。
取3個組份各500mg，分別用H2O溶解，進(jìn)行中壓液相色譜分離純化，色譜條件LobarC18反相制備柱，以不同比例的H2O-Me2CO作流動相，反相硅膠TLC檢測，收集出峰流份。組份1的流動相為H2O-Me2CO(70∶30，V∶V)，得白色粉末125mg，為化合物1。組份2的流動相為H2O-Me2CO(60∶40，V∶V)，得白色粉末396mg，為化合物2。組份3的流動相為H2O-Me2CO(35∶65，V∶V)，得白色粉末183mg，為化合物3。
結(jié)構(gòu)鑒定綜合應(yīng)用UV、IR，MS，1H-NMR，13C-NMR，2D-NMR分析技術(shù)鑒定結(jié)構(gòu)?；衔?、2、3分別鑒定為知母皂苷E1、知母皂苷B-II、知母皂苷B。它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 知母皂苷E1的結(jié)構(gòu)式 知母皂苷B-II的結(jié)構(gòu)式
知母皂苷B的結(jié)構(gòu)式知母皂苷E1的鑒定白色粉末，mp164～167℃；IR(KBr，cm-1)3418(OH)，2929(CH2)，1455(CH2)，1076(C-O-C)；ESI-MSm/z936；1H-NMR(C5D5N，δ，ppm)5.33(1H，d，J＝8Hz，Glc-1H)、4.89(1H，d，J＝8Hz，Gal-1H)、4.82(1H，d，J＝8Hz，Glc-1H)，1.32(3H，d，21-CH3)，1.03(3H，d，27-CH3)，1.03(3H，s，19-CH3)，0.91(3H，s，18-CH3)；13CNMR(C5D5N，δ)見表1。
知母皂苷B-II的鑒定白色粉末，mp246～248℃；IR(KBr，cm-1)3424(OH)，2929(CH2)，1450(CH2)，1076(C-O-C)；ESI-MSm/z920；1H-NMR(C5D5N，δ，ppm)5.28(1H，d，J＝7Hz，Glc-1H)、4.91(1H，d，J＝8Hz，Gal-1H)、4.80(1H，d，J＝8Hz，Glc-1H)，1.32(3H，d，21-CH3)，1.03(3H，d，27 CH3-)，0.98(3H，s，19-CH3)，0.88(3H，s，18-CH3)；13CNMR(C5D5N，δ)見表2。結(jié)構(gòu)式見圖2。
知母皂苷B的鑒定 白色粉末，mp＞226℃(dec)；IR(KBr)cm-13385(OH)，2921(CH2)，1712(C＝C)，1451(CH2)，1074(C-O-C)；ESI-MSm/z902；1HNMR(DMSO-d6，δ)δ0.61(18-CH3，3H，s)，0.87(27-CH3，3H，s)，1.55(21-CH3，3H，s)，0.89(19-CH3，3H，d)，δ4.08(1-H，1H，d，J＝8Hz)，4.27(1′-H，1H，d，J＝7Hz)，4.41(1″-H，1H，d，J＝8Hz)；13CNMR(DMSO-d6，δ)見表3。
表1知母皂苷E1的13C-NMR數(shù)據(jù)(δ，ppm，C5D5N)C δ 化學(xué)類型 C δ 化學(xué)類型1 30.8CH226 75.0 CH22 26.8CH227 17.7 CH33 75.0CH galactose4 30.6CH21 102.1 CH5 36.7CH 2 81.4 CH6 26.7CH23 76.7 CH7 26.4CH24 69.5 CH8 35.2CH 5 76.5 CH9 40.3CH 6 62.5 CH210 35.0C Glucose11 20.8CH21 105.7 CH12 40.5CH22 75.1 CH13 40.9C 3 78.1 CH14 60.5CH 4 71.4 CH15 78.7CH 5 78.3 CH16 91.1CH 6 62.5 CH217 61.1CH Glucose18 16.4CH31′ 104.8 CH19 23.9CH32′ 74.9 CH20 40.1CH 3′ 78.0 CH21 16.2CH34′ 71.4 CH22 110.0 C 5′ 77.7 CH23 36.8CH26′ 61.0 CH224 28.0CH225 34.1CH
表2知母皂苷B-II的13C-NMR數(shù)據(jù)(δ，ppm，C5D5N)C δ 化學(xué)類型 C δ 化學(xué)類型1 30.6 CH226 75.1CH22 26.7 CH227 17.2CH33 74.8 CH galactose4 30.6 CH21 102.2 CH5 36.6 CH 2 81.4CH6 26.5 CH23 76.2CH7 26.5 CH24 69.5CH8 35.2 CH 5 76.5CH9 40.3 CH 6 62.5CH210 34.9 C Glucose11 20.9 CH21 105.7 CH12 40.1 CH22 75.2CH13 40.9 C 3 78.0CH14 56.1 CH 4 71.3CH15 32.1 CH25 78.3CH16 80.9 CH 6 62.5CH217 63.7 CH Glucose18 16.4 CH31′ 104.8 CH19 23.7 CH32′ 74.9CH20 40.1 CH 3′ 78.1CH21 16.1 CH34′ 71.4CH22 110.4 C 5′ 77.7CH23 36.8 CH26′ 61.9CH224 28.0 CH225 34.1 CH
表3知母皂苷B的13C-NMR數(shù)據(jù)(δ，ppm，DMSO-d6)C δ化學(xué)類型 Cδ 化學(xué)類型1 30.1CH226 73.8 CH22 26.4CH227 16.7 CH33 73.7CHgalactose4 29.8CH21103.2 CH5 35.9CH278.9 CH6 26.4CH2373.3 CH7 25.9CH2467.9 CH8 34.6CH573.0 CH9 39.7CH661.0 CH21034.0C Glucose1134.5CH21103.6 CH1239.4CH2274.6 CH1343.2C 376.6 CH1454.1CH470.0 CH1530.5CH2576.8 CH1683.5CH661.0 CH21763.7CHGlucose1814.0CH31′ 100.6 CH1923.5CH32′ 74.9 CH20102.8 C 3′ 75.9 CH經(jīng)動物試驗，本發(fā)明知母提取物靜注給藥，可明顯改善大鼠腦缺血再灌注損傷引起的行為癥狀、縮小腦梗塞體積、降低腦缺血大鼠腦水腫。另外，知母提取物靜注給藥還能顯著延長小鼠斷頭后張口呼吸持續(xù)時間、增加麻醉犬的腦血流量、抑制家兔血栓形成、降低家兔全血粘度等。表明以本發(fā)明知母提取物為原料制備而成的注射劑型，還能夠應(yīng)用于缺血性腦血管疾病的治療。
本發(fā)明提供了一種知母提取物的藥物制劑，是將知母提取物制備成注射劑型。知母提取物注射劑藥理作用較強(qiáng)，其原料來源豐富、價廉，制備工藝簡單。


圖1為本發(fā)明知母提取物的色譜圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。
實施例1知母提取物的制備將知母藥材切成薄片，取10kg，以30％乙醇30L浸潤12小時后滲漉提取，收集240L滲漉液。將滲漉液濃縮到15L；濃縮液過濾，濾液通入裝有20L的D101型樹脂的色譜柱中，依次用蒸餾水300L、20％乙醇300L、60％乙醇120L洗脫，收集60％乙醇洗脫部分；60％乙醇洗脫液減壓濃縮到10L，通入裝有20L的D101型樹脂的色譜柱中；依次用20％乙醇300L、60％乙醇120L洗脫，收集60％乙醇洗脫部分，減壓濃縮，干燥，得淡黃色結(jié)晶狀粉末，即為本發(fā)明知母提取物，共重0.14kg，按生藥重量計得率為1.4％。
實施例2知母提取物的制備將知母藥材切成薄片，取10kg，在90～100℃依次用50％乙醇50L熱提3次，每次提取時間為90分鐘，合并3次提取液，濃縮至20L，過濾，濾液通入裝有25L的ZTC-1型樹脂的色譜柱中，依次用蒸餾水500L、20％乙醇250L、50％乙醇150L洗脫，收集50％乙醇洗脫部分；50％乙醇洗脫液減壓濃縮到8L，通入裝有10kg聚酰胺的色譜柱中，用蒸餾水洗脫，收集蒸餾水洗脫液30L，減壓濃縮，噴霧干燥得淡黃色粉末，即為本發(fā)明知母提取物，共重0.17kg，按生藥重量計得率為1.7％。
實施例3粉針劑的制備取知母提取物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。
實施例4粉針劑的制備取知母提取物15g，加入甘露醇40g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實施例5粉針劑的制備取知母提取物20g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實施例6小針劑的制備取知母提取物1g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。
實施例7小針劑的制備取知母提取物5g，加入丙二醇20g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。
實施例8葡萄糖輸液的制備取知母提取物1g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。
實施例9葡萄糖輸液的制備取知母提取物1g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
實施例10氯化鈉輸液的制備取知母提取物1g，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
本發(fā)明知母提取物的主要化學(xué)成分的含量測定采用高效液相色譜法進(jìn)行。
色譜條件Waters高效液相色譜儀，510泵；迪馬公司SEDEX 75型蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)；SR2000工作站(上海軍銳科技有限公司)；大連依利特hypersil ODS柱(4.6×250mm，5μ)色譜柱；流動相為乙腈-水(30∶70)；流速為0.8mL/min，載氣壓力3.5bar，漂移管溫度40℃，GAIN＝7。
測定法1.配制乙腈-水溶液 以乙腈∶水＝30∶70配制成乙腈-水溶液2.以乙腈-水溶液為溶劑，配制以下溶液(1)知母皂苷B-II對照品溶液，濃度250μg/mL；(2)知母皂苷E1對照品溶液，濃度25μg/mL；(3)知母皂苷B對照品溶液，濃度10μg/mL；(4)本發(fā)明知母提取物溶液，濃度300μg/mL。
3.檢測分別取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。按外標(biāo)法以峰面積的對數(shù)計算，即得。
經(jīng)多次檢測，知母提取物中知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷B的含量百分比例為78～92∶2～12∶0～6；知母提取物中知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷B的含量之和在80％以上。
本發(fā)明對知母提取物通過靜脈注射對SD(Sprague-Dawley)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了試驗。
試驗方法將SD大鼠(中國科學(xué)院上海分院動物中心提供)隨機(jī)分為5組假手術(shù)組、陰性對照組、陽性對照組、知母提取物低劑量組及知母提取物高劑量組，每組30只，雌雄各半，體重180～230g。假手術(shù)組僅結(jié)扎單側(cè)頸總動脈，以排除手術(shù)本身對實驗結(jié)果的影響；陰性對照組即栓塞大鼠大腦中動脈，作為局灶性腦缺血2小時再灌注24小時損傷模型，給予等量的生理鹽水；陽性對照金納多注射液(粉針，德國魏瑪舒培博士藥廠，批號5530701)，其推薦臨床平均劑量為2.0mg/kg/人/日(人按60kg體重計算)，折算為大鼠的劑量為12mg/kg，設(shè)計陽性藥劑量相當(dāng)受試藥物的中劑量，故取為36mg/kg。知母提取物低劑量組為1.8mg/kg，低、中、高劑量比為1∶3∶6，相應(yīng)中、高劑量分別為5.4mg/kg和11mg/kg。各組均靜注給藥。
用栓線法制備SD大鼠腦缺血再灌注模型(制備方法詳見《西藥新藥臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》的藥理學(xué)部分，中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局，199373；《藥理實驗方法學(xué)》第二版，人民衛(wèi)生出版社，1982830、1113)，除假手術(shù)組外，其余各組均用該模型鼠試驗。各組在缺血1小時后靜注給藥，再缺血1小時后再灌注24小時，然后觀察以下指標(biāo)(1)對神經(jīng)病學(xué)的影響觀察存活鼠24小時后行為變化，進(jìn)行行為學(xué)評分，參考Zea Longa的5分制評分標(biāo)準(zhǔn)0分為正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分為不能完全伸展對側(cè)前爪；2分為向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分為向?qū)?cè)傾倒；4分為不能自發(fā)行走，意識喪失。
(2)對腦組織含水量的影響每組取8只大鼠快速斷頭取大腦，分別稱左右腦半球濕重，置160℃烤箱內(nèi)烘干，24小時后稱干重，按以下公式計算腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％。
(3)對腦梗塞體積的影響每組取8只大鼠，處死取大腦，切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％氯化三苯基四氮唑溶液中，37℃孵育30分鐘。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。數(shù)碼相機(jī)拍攝記錄，用Medbrain 2.0軟件(南京美易科技公司)測腦片總體積及梗塞區(qū)體積，計算梗塞區(qū)占整個腦組織的百分比(％)。
試驗結(jié)果(1)對神經(jīng)病學(xué)的影響各組隨機(jī)取10只大鼠，觀察存活鼠的行為。結(jié)果詳見表4。
表4知母提取物對大鼠腦缺 2h再灌注24h的神經(jīng)病學(xué)評分影響(x±SD)組別 劑量 動物數(shù)(n) 行為評分假手術(shù)組 4ml/kg10 0溶劑對照組 4ml/kg10 1.7±0.67知母提取物 1.8mg/kg 10 1.2±0.92知母提取物 5.4mg/kg 10 0.9±0.32*知母提取物 11.0mg/kg 10 0.6±0.52**金納多注射液 36mg/kg 10 0.6±0.70**與溶劑對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01從表4看出，知母提取物中、高劑量組均可顯著降低行為評分，與溶劑對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，降低程度有一定劑量依賴關(guān)系。說明知母提取物靜注可以明顯改善因缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷癥狀。
(2)對腦組織含水量的影響實驗結(jié)果見表5。
表5知母提取物對大鼠缺血再灌注腦組織含水量的影響(x±D)組別劑量動物數(shù)(n) 大腦左半球含水量(％) 大腦右半球含水量(％)假手術(shù)組4ml/kg 8 80.52±0.91 80.52±0.95**溶劑對照組 4ml/kg 8 80.48+0.48 85.46±1.18△△知母提取物 1.8mg/kg8 81.02±0.74 83.34±1.81△△**知母提取物 5.4mg/kg8 80.81±0.67 82.31±2.51**知母提取物 11.0mg/kg 8 80.81±0.67 81.46±0.60**金納多注射液36mg/kg 8 80.80±0.87 81.87±1.35**與溶劑對照組比較，**P＜0.01 與假手術(shù)組比較，△△P＜0.01從表5看出，溶劑對照生理鹽水組缺血側(cè)(大腦右半球)的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)，知母提取物低劑量組的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)，但低于溶劑對照組，兩者間有顯著性差異(P＜0.01)；知母提取物中、高劑量組和金納多注射液組的腦組織含水量顯著低于溶劑對照組(P＜0.01)，與假手術(shù)組無顯著性差異。結(jié)果表明，知母提取物靜注可顯著降低大鼠缺血再灌注損傷腦組織的含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度。
(3)對腦梗塞體積的影響實驗結(jié)果見表6。
表6知母提取物對大鼠腦缺血再灌注的腦梗塞體積的影響(x±SD)組別劑量動物數(shù)(n) 梗塞體積占整個腦組織百分比(％)假手術(shù)組4ml/kg 8 0溶劑對照組 4ml/kg 8 31.80±3.63知母提取物 1.8mg/kg8 21.05±3.83**知母提取物 5.4mg/kg8 13.23±4.38**知母提取物 11mg/kg 8 5.65±5.79**金納多注射液36mg/kg 8 9.61±7.31**與溶劑對照組比較，**P＜0.01從表6看出，假手術(shù)組腦組織無梗塞，溶劑對照組缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象，梗塞區(qū)占整個腦組織的百分比為31.80±3.63％，知母提取物低、中、高3個劑量組和陽性對照金納多注射液組均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積，與溶劑對照組相比有非常顯著差異(P＜0.01)，分別降低了33.81％，58.4％，82.23％及69.78％；并且高劑量組縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積作用強(qiáng)于陽性對照金納多注射液組。結(jié)果表明，知母提取物靜注對大鼠腦缺血再灌注損傷引起的腦梗塞有顯著保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1.知母提取物注射劑，由知母提取物、藥用輔料組成，包括粉針劑、小針劑、葡萄糖輸液及氯化鈉輸液，所說的知母提取物由如下方法制得將粉碎的知母藥材用20～95％醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的4～8倍；或?qū)⒎鬯榈闹杆幉挠?0～95％乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4～12倍；提取液濃縮，濃縮液離心或過濾；濃縮液的離心上清液或過濾液通過非極性或弱極性大孔樹脂吸附，用水及20％以下的乙醇淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級醇洗脫，低級醇選自C1～C5醇類，其濃度為30～95％，體積用量為生藥的5～15倍，收集低級醇洗脫液，濃縮至無醇；濃縮液按上述方法再通過大孔樹脂吸附洗脫，收集低級醇洗脫液，濃縮至無醇，干燥后粉碎或噴霧干燥、冷凍干燥，即為知母提取物；或?qū)饪s液通過聚酰胺色譜，以水洗脫，收集水洗脫液，濃縮，干燥后粉碎或噴霧干燥、冷凍干燥，也可得知母提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母提取物注射劑，其特征在于所說知母提取物的有效成分知母皂苷B-II、知母皂苷E1、知母皂苷B的含量百分比例為78～92∶2～12∶0～6，含量之和占知母提取物總重量的80％以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的知母提取物注射劑，其特征在于所說的粉針劑是由知母提取物采用甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷中的一種或幾種作賦形劑，經(jīng)冷凍干燥后，按需分裝即可。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的知母提取物注射劑，其特征在于所說的粉針劑是由知母提取物采用注射用水或乙醇，或注射用水和乙醇的混合液作為溶媒，經(jīng)噴霧干燥后，按需分裝即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的知母提取物注射劑，其特征在于所說的小針劑是由知母提取物采用注射用水作為溶媒配制后按需分裝即可；也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的知母提取物注射劑，其特征在于所說的葡萄糖輸液或氯化鈉輸液是由知母提取物采用注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制后按需分裝即可；也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。
7.權(quán)利要求1所述的知母提取物在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是知母提取物的注射劑型，包括粉針劑、小針劑、葡萄糖輸液及氯化鈉輸液。本發(fā)明的知母提取物主要有效成分為知母皂苷B－II、知母皂苷E
文檔編號A61K9/14GK1628790SQ20041005414
公開日2005年6月22日 申請日期2004年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月31日
發(fā)明者陳萬生, 鐘延強(qiáng), 婁子洋, 原源, 陶朝陽, 丁毅, 孫連娜, 殷學(xué)平 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)