專利名稱：一種靜脈注射用注射液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療上呼吸道感染、肺炎，抗上呼吸道病毒的注射液。具體地說是以中草藥為原料制備的注射劑，同時涉及該藥物的制備方法。
背景技術：
在我國，咽炎、氣管炎等上呼吸道感染、肺炎、呼吸道病毒感染是一類常見病多發(fā)病。不但本身常遷延不愈，而且可以引起多種并發(fā)癥，危害人類健康。隨著工業(yè)社會的發(fā)展，空氣被不同程度地污染，使得鼻炎、咽炎等上呼吸道感染和肺炎類疾病的發(fā)病率增高。現(xiàn)代醫(yī)學認為本病雖主要致病菌為鏈球菌，但細菌與病毒混合感染者并不少見，由此引發(fā)的急性淋巴炎、風濕熱、腎炎等癥給患者帶來了巨大痛苦。因此將該病消滅在初期是十分必要的。
目前治療本病的首選藥物為抗生素素，但青霉素類藥物有嚴重的過敏反應，使對青霉素有過敏反應的患者無法使用，且該藥對細菌和病毒混合感染者療效差、耐藥性強；中藥方面應用較廣泛的是雙黃連注射液、粉針劑和各種銀黃制劑有口服液、含化片、沖劑等劑型。雙黃連注射液、粉針劑療效較確切但是其有效成分也不太明確，目前已有多起過敏反應(《中國中藥雜志》1994年754頁、《現(xiàn)代應用藥學》1994年第十一卷第一期25頁)、劇烈嘔吐(《武警醫(yī)學》1995年第六卷第二期110頁)、血尿(《現(xiàn)代應用藥學》1995年12月第12卷第六期42頁)等不良反應的報道。研究表明其不良反應主要由連翹苷引起。中國專利1398626和1424084公開了靜脈注射用銀黃粉針劑及其制備方法和注射用銀黃粉針劑及其制備方法。的，它們和其它銀黃注射液一樣采用常規(guī)提取精制方法金銀花提取以綠原酸為指標而忽略了異綠原酸等有效成分的作用，且綠原酸含量太低，大量雜質(zhì)和無效成分對用藥的安全性、穩(wěn)定性造成很大威脅；黃芩的提取過程以黃芩苷為指標有的雖然純度較高但忽略了漢黃芩苷等有效成分的作用，反而影響了藥品的療效。常規(guī)制劑以提取物入藥，分別以綠原酸、黃芩苷為指標，有效成分含量低，提取物中成分不明確，給藥品的安全性、穩(wěn)定性留下隱患。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療上呼吸道感染注射液，它從各有效組分入手，較全面研究了制劑中各組分及含量范圍和比例，有效成分含量高，雜質(zhì)和無效成分含量小，用藥安全、穩(wěn)定，療效可靠。除用于治療上呼吸道感染外，對肺炎、抗上呼吸道病毒感染也有較好療效。本發(fā)明的另一個目的是提供該藥物的制備方法。
為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取以下技術方案本發(fā)明所提供的注射是由下述原料制成的金銀花1-10重量份，黃芩1-10重量份。
本發(fā)明所提供的注射液基本上由以下成分組成綠原酸0.1-25mg/ml、黃芩苷1-40mg/ml，所述注射劑的溶劑為注射用水，不含連翹苷及梔子苷。
如上所述主要活性成分及濃度優(yōu)選為綠原酸1-8mg/ml、黃芩苷1.5-10mg/ml。
其主要活性成分及濃度為綠原酸2.5mg/ml、漢黃芩苷4mg/ml。
如上所述注射液還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸0.03-8.0mg/ml、漢黃芩苷0.1-10mg/ml。
其主要活性成分及濃度優(yōu)化為異綠原酸0.05-3.5mg/ml、漢黃芩苷0.05-4.0mg/ml。
本發(fā)明藥物注射液的制備方法是(1)綠原酸、異綠原酸的制備工藝取金銀花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金銀花提取物，溶于相當于其重量1-20倍量體積的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿層棄去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量異戊醇取1-5次，合并異戊醇層，減壓濃縮，真空干燥，取適量溶于40-90％乙醇溶液適量，拌入200克硅膠，水浴揮干(60℃)，作為柱層析分離樣品，稱取200-300目硅膠2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)為溶劑，濕法裝柱，干法上樣。用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脫，等體積收集，每份500ml，梯度洗脫，每500ml加甲醇10ml，TLC追蹤檢查，合并相同部分，再經(jīng)小柱反復層析及結合重結晶技術，得到化合物氯原酸，化合物異氯原酸；(2)黃芩苷，漢黃芩苷的制備工藝黃芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5--3小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮，加入0.5-4個摩爾/LHCl溶液適量調(diào)PH＝0.5～4.0，保溫0.5-3小時，放置8-24小時，濾過，沉淀加4-20倍量水，調(diào)PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，攪拌使溶解，濾過。濾液用HCl溶液調(diào)PH＝1.0～5.5，保溫0.5-3小時，放置8-24小時，濾過，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅膠(200-300目)硅膠濕法裝柱進行層析分離，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)為洗脫劑，薄層檢查洗脫液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分為2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，從一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脫液中析出針狀結晶，進一步重結晶得到化合物2；B部分經(jīng)過硅膠柱層析(200-300目)，葡聚糖凝膠(LH-20)柱層析分離得到化合物1；化合物1，黃芩苷；化合物2，漢黃芩苷，即得；(3)該制劑的制備工藝為將投料量的綠原酸，黃芩苷等溶于適量的注射用水中，使?jié)舛葹榫G原酸0.1-25毫克/毫升，黃芩苷1-40毫克/毫升，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使溶解，用注射用水補至全量，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使藥液的PH值在4.0～9.0的范圍內(nèi)，灌裝，熔封，包裝，即得。
本綠原酸、異綠原酸的制備工藝中所使用的藥材為任意含綠原酸、異綠原酸的藥材優(yōu)選為金銀花。
為了減少藥物的刺激性，減少病人的疼痛常加入5-10毫克/毫升的等滲調(diào)節(jié)劑(如氯化鈉、葡萄糖)。
本發(fā)明還區(qū)別與以往制劑體現(xiàn)在以下方面①提高藥物有效成分的純度有增加制劑穩(wěn)定性、減少毒性、減少服用量、便于制備現(xiàn)代化制劑等重要作用。在以往的制劑和工藝中金銀花多以綠原酸為指標，而忽略了異綠原酸等其它成分，綠原酸的純度也較低多在20％以下，本發(fā)明金銀花以總有機酸和綠原酸為指標，提高藥物療效的同時提高了總有機酸的純度。傳統(tǒng)工藝黃芩苷的純度達90％以上，卻忽略了漢黃芩苷等有效成分的作用，本發(fā)明以黃芩總黃酮和黃芩苷為指標提高了藥物療效。
②藥材提取物中各組分的組成與比例對制劑的穩(wěn)定性、療效等有密切聯(lián)系，我們通過研究分出金銀花提取物中綠原酸、異綠原酸等組分，并對各組分的含量比例作界定；從黃芩總黃酮中分出了黃芩苷、漢黃芩苷、等組分并通過指紋圖譜界定了各組分的含量。同時對藥物注射液中綠原酸、異綠原酸、黃芩苷、漢黃芩苷等組分做了含量界定，提高了藥品質(zhì)量標準，保證了制劑的安全性、穩(wěn)定性和有效性。
③注射液適宜的PH值能減少藥液對肌體的不良反應、增加注射液的穩(wěn)定性、加速藥物的吸收，所以注射液必須有適當?shù)腜H值。黃芩苷等黃酮類成分易溶于堿液，酸性條件下易結晶析出；綠原酸等有機酸類在甲醇、乙醇、70％乙醇、丙酮中易溶，在乙酸乙酯、水中溶解。我們通過大量試驗證明本發(fā)明pH值范圍在5.0～8.0之間當pH值小于5.0時黃芩苷等黃酮類成分有結晶析出；綠原酸為咖啡酸奎尼酸酯，因而既能被酸也能被堿催化水解，當pH值大于8.0時綠原酸等有機酸類成分很不穩(wěn)定，易發(fā)生顏色變化。
④由綠原酸、黃芩苷制成的很多制劑作為一種治療咽炎、氣管炎等上呼吸道感染的常用藥物為廣大醫(yī)務工作者和患者接受。我單位經(jīng)過仔細研究和長期試驗發(fā)現(xiàn)本發(fā)明還有治療肺炎、抗呼吸道病毒作用，療效確切，值得推廣應用。綠原酸和異綠原酸對多種致病菌和病毒有較強的抑制和殺滅作用。綠原酸對急性咽喉炎癥及皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細菌性感染疾病及放、化療所致的白細胞減少癥，綠原酸還有降壓利膽作用。研究表明上述有機酸組合物對多種致病菌，如痢疾桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、肺炎球菌等有一定抑制作用。黃芩苷體外對乙肝病毒(HBV)的三種抗原均有顯著的抑制作用；黃芩苷對正常體溫大鼠無致低溫作用，而對發(fā)熱大鼠有顯著的解熱作用，并呈一定量效關系；黃芩苷、漢黃芩苷等組合物對過氧化脂質(zhì)的生成具有明顯的抑制作用，對流感病毒PRs有一定抑制作用，對豚鼠被動皮膚過敏反應及離體小腸、氣管對抗原所致的過敏性收縮反應均有抑制作用，能抑制肥大細胞釋放組織胺，還能抑制環(huán)加氧酶和脂加氧酶的活性，阻斷前列腺素及白三烯的合成，從而發(fā)揮抗炎、抗過敏作用。
另外，本發(fā)明雖然比雙黃連注射液少了連翹苷，但療效并沒有下降，反而大多都有了提高。
本發(fā)明，療效好、毒副作用少。為表明本發(fā)明藥物的治療作用和毒副作用，我們做了大量的實驗研究，下面實驗例用于進一步說明本發(fā)明。
本發(fā)明注射液對2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的解熱作用摘要本試驗用2，4-二硝基苯酚復制大鼠發(fā)熱模型，觀察本發(fā)明注射液靜脈注射給藥對化學致熱物所致大鼠發(fā)熱的解熱作用。各組皮下注射2，4-二硝基苯酚后，本發(fā)明注射液各個劑量均有非常明顯的降低發(fā)熱大鼠的體溫，中劑量組的效果為優(yōu)。在該試驗中，本發(fā)明注射液對內(nèi)毒素致兔發(fā)熱有明顯的解熱作用。
一、試驗目的本發(fā)明注射液為北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所研制的7類中藥新藥，本試驗旨在觀察本發(fā)明注射液對化學刺激物-2，4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱模型的解熱作用，以評價該藥的解熱療效。
二、試驗材料1.受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次，臨床最大用量為X生藥/Mml)。
2.試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號030415322；2，4-二硝基苯酚，規(guī)格25g，由中國軍事醫(yī)學科學院提供，批號860419。
3.動物及飼料Wistar大鼠，102只，雄性，購進后進行3天預飼養(yǎng)，用于試驗時體重150～200g(體重差異小于30g)，購自軍事醫(yī)學科學院動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標準顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
4.器材DT-1TB數(shù)字式電子體溫計，購自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司。
三、試驗方法(一)試驗前的準備1.供試用大鼠處于同一溫度的環(huán)境預飼養(yǎng)3天，實驗室的溫度在17～25℃，在試驗全部過程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾。
2.試驗期間，每次抓取大鼠的動作要輕柔，體溫計插入大鼠肛門的深度和時間相同，每只大鼠固定體溫計，固定檢測人員；3.體溫預測試驗前3日用電子體溫計測正常體溫，每日2次，連續(xù)3日；4.當日使用的大鼠，正常體溫應在36.6～38.3℃的范圍內(nèi)。每隔30分鐘測量體溫一次，測量三次的平均值作為大鼠的正常體溫。
5.2，4-二硝基苯酚溶液的配制精密稱取2，4-二硝基苯酚300mg，置于80ml左右生理鹽水中，滴加5mol/LNaOH溶液，不斷攪拌，待藥液澄明變?yōu)榱咙S色，再加入氯化鈉注射液至100ml備用。
(二)試驗方法1.試驗藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組雙黃連對照組600mg/10ml/kg；模型組10ml生理鹽水/kg；正常對照組10ml生理鹽水/kg。
2.方法102只大鼠稱重后隨機分為本發(fā)明注射液低劑量組、中劑量組和高劑量組、模型組、雙黃連對照組和正常對照組6組。各組按上述給藥量靜脈給藥0.5小時后，每鼠于背部皮下注射化學致熱物——2，4-二硝基苯酚33mg/11ml/kg，正常動物對照組以相同體積的生理鹽水來代替2，4-二硝基苯酚。致熱后每30分鐘測量體溫1次，連續(xù)測定3h。
四、試驗結果在本試驗條件下，皮下注射化學致熱物-2，4-二硝基苯酚，大鼠的體溫開始升高，在1h時出現(xiàn)發(fā)熱高峰，3h仍未恢復至基礎體溫；本發(fā)明注射液各個比例及雙黃連非常明顯的降低2，4-二硝基苯酚致發(fā)熱大鼠的體溫(p＜0.001)(結果詳見表1)表1 本發(fā)明注射液對2，4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響正常 給予2，4-二硝基苯酚后體溫升高值/℃組別 體重/kg體溫/℃ 30min 60min 90min 120min 150min 180min正常組 37.49±0.40 37.49±0.40 0.13±0.29 0.03±0.29 0.00±0.30 0.07±0.36 0.01±0.39-0.03±0.33模型組 37.42±0.29 2.53±0.32 3.17±0.48 2.73±0.39 2.18±0.43 1.88±0.67 1.55±0.58高劑量組37.56±0.33 1.91±0.54 1.79±0.43 1.50±0.58 1.34±0.60 1.04±0.55 0.73±0.42中劑量組37.60±0.28 1.35±0.59 1.51±0.67 1.12±0.78 0.74±0.68 0.54±0.52 0.43±0.52低劑量組37.55±0.35 1.54±0.70 1.95±0.65 1.72±0.64 1.35±0.62 1.02±0.55 0.90±0.43雙黃連 37.59±0.32 1.22±0.55 1.93±0.78 1.64±0.56 1.30±0.53 0.82±0.62 0.55±0.38五、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液原料各比例均可非常明顯的降低2，4-二硝基苯酚所致發(fā)熱大鼠的體溫；中劑量組的效果最好，優(yōu)于雙黃連及其他比例組。
本發(fā)明注射液對細菌內(nèi)毒素致兔發(fā)熱的解熱作用摘要本試驗用內(nèi)毒素復制兔發(fā)熱模型，觀察本發(fā)明注射液靜脈注射給藥對細菌內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱的解熱作用。各組靜脈注射內(nèi)毒素后1h，本發(fā)明注射液低、高劑量兔體溫明顯低于模型組，降溫效果優(yōu)于中劑量；給予內(nèi)毒素2h、3h、4h與5h時，各給藥組兔體溫明顯低于模型組，高劑量組的降溫效果最好，在5h時體溫恢復正常。在該試驗中，本發(fā)明注射液對內(nèi)毒素致兔發(fā)熱有明顯的解熱作用。
一、試驗目的本發(fā)明注射液由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供，本試驗旨在觀察本發(fā)明注射液對細菌內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱的解熱作用，以評價該藥的解熱療效。
二、試驗材料1.受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml。
2.試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號030415322；細菌內(nèi)毒素由中國藥品生物制品研究所提供，效價每支含9000EU，批號981。
3.動物及飼料大耳白兔54只，雄性，由北京科宇動物養(yǎng)殖中心提供，合格證號SCXK京2002-005，購進后進行1周預飼養(yǎng)，用于試驗時體重1.6～2.2kg。飼養(yǎng)條件金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予標準顆粒兔飼料，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
4.器材DT-1TB數(shù)字式電子體溫計，購自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司。
三、試驗方法(一)試驗前的準備1.供試用家兔處于同一溫度的環(huán)境預飼養(yǎng)1周，實驗室的溫度在17～25℃，在試驗全部過程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾；2.試驗期間，每次抓取兔的動作要輕柔，體溫計插入各兔肛門的深度和時間相同，每只兔子固定體溫計，固定檢測人員；3.體溫預測試驗前2日用電子體溫計測正常體溫，每日2次，連續(xù)2日；4.當日使用的兔，正常體溫應在38.0～39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過1℃。每隔30分鐘測量體溫一次，測量兩次，兩次體溫之差不得超過0.2℃，以此二次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。
(二)試驗方法1.試驗藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組雙黃連對照組600mg/5ml/kg；模型組5ml生理鹽水/kg；正常對照組5ml生理鹽水/kg。
2.方法54只大耳白兔試驗前每隔0.5h測量一次體溫，測量2次，2次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。體溫合格的大耳白兔隨機分為本發(fā)明注射液高劑量組、中劑量組和低劑量組、雙黃連組、模型組和正常對照組6組，每組9只，各組耳緣靜脈分別給予溫浴至38℃的相對應的藥液，給藥40min時耳緣靜脈注射內(nèi)毒素1200EU/ml/kg，給予內(nèi)毒素后1h、2h、3h、4h與5h各測量一次肛溫。
四、試驗結果在本試驗條件下，靜脈注射內(nèi)毒素后，兔體溫開始升高，在1h與3h時分別出現(xiàn)發(fā)熱峰的雙峰熱。5h時仍未恢復至基礎體溫。給予內(nèi)毒素1h時，雙黃連、本發(fā)明注射液低劑量與高劑量對體溫的升高有明顯的降低作用，且降溫效果優(yōu)于中劑量組，中劑量組的體溫升高值有降低的趨勢。
給予內(nèi)毒素2h時，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明注射液三個給藥組對體溫的升高有降低作用；本發(fā)明注射液高劑量組動物體溫比雙黃連組有降低的趨勢，二者的降溫效果優(yōu)于本發(fā)明注射液低劑量與中劑量。
給予內(nèi)毒素3h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明注射液三個給藥組對體溫的升高有降低作用；本發(fā)明注射液高劑量的降溫效果優(yōu)于雙黃連、該藥低劑量與中劑量。
給予內(nèi)毒素4h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明注射液三個給藥組對體溫的升高有降低作用；本發(fā)明高劑量的降溫效果優(yōu)于本發(fā)明注射液低劑量與中劑量，該組體溫升高值比雙黃連組有降低的趨勢。
給予內(nèi)毒素5h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明注射液三個給藥組對體溫的升高有降低作用本發(fā)明注射液中劑量組的效果優(yōu)于低劑量組。(結果詳見表2)表2本發(fā)明注射液對內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱的影響正常 給予內(nèi)毒素后體溫升高值/℃組別 體重/kg體溫/℃ 1h 2h 3h 4h 5h模型組 1.80±0.15 39.0±0.37 1.44±0.35 1.64±0.24 1.87±0.15 1.44±0.27 1.12±0.53雙黃連 1.77±0.13 38.8±0.25 1.09±0.26 0.77±0.10 1.31±0.18 0.84±0.12 0.53±0.23高劑量組1.74±0.11 38.8±0.23 1.46±0.19 1.46±0.11 1.76±0.53 1.23±0.52 0.68±0.40中劑量組1.77±0.11 38.9±0.32 1.32±0.19 1.15±0.15 1.53±0.20 0.96±0.35 0.29±0.31低劑量組1.77±0.13 39.0±0.28 1.33±0.14 1.17±0.28 1.67±0.35 1.59±0.17 0.71±0.24正常組 1.88±0.26 38.8±0.31-0.04±0.08-0.03±0.11 -0.02±0.14 -0.08±0.13-0.08±0.14五、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液各個組對細菌內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱均有解熱作用中劑量組治療效果好。
本發(fā)明注射液對二甲苯致鼠耳腫脹的抑制作用摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用。結果表明所試本發(fā)明注射液對二甲苯引起的鼠耳腫脹有一定的抑制作用。
一、試驗目的本發(fā)明注射液為北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所研制新藥，本試驗旨在觀察本發(fā)明注射液對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用，以評價該藥的抗炎療效。
二、試驗材料1.動物及飼養(yǎng)條件KM小鼠，100只，雄性，健康二級，購進后進行3天預飼養(yǎng)，用于試驗時體重18～22g，購自軍事醫(yī)學科學院動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標準顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
2.儀器JA5003電子天平HANGPING3.藥品及試劑本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供，規(guī)格10ml，每10ml含25mg金銀花總有機酸提取物—以綠原酸計算，40mg黃芩總黃酮提取物—以黃芩總苷計算(制劑的配比以有效部位群的量來計)，(臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次)；氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司提供，批號030415322；雙黃連粉針劑，600mg/安瓿，由哈藥集團中藥二廠生產(chǎn)，批號0306225；二甲苯。
三、試驗方法1.試驗藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組雙黃連對照組900mg/20ml/kg；模型組20ml生理鹽水/kg；2.試驗方法雄性KM小鼠100只，按體重隨機分為本發(fā)明注射液低劑量組、中劑量組與高劑量組、模型組和雙黃連對照組5組，每組20只。按上述給藥劑量上、下午各靜脈給藥一次，次日早上給藥一次，共給藥3次。末次給藥30min時于右耳滴50ul二甲苯，左耳不做任何處理，15min后脫臼處死，沿耳廓剪下雙耳后用7mm直徑打孔器分別在同一部位打下左右兩圓耳片后，電子天平稱耳片濕重，每鼠用右耳片的重量減去左耳片的重量即為腫脹度，并計算腫脹抑制率。
抑制率＝(模型組腫脹度-用藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100％四、試驗結果本研究發(fā)現(xiàn)與模型組比較，雙黃連與本發(fā)明注射液各組可明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹；結果見表3。
表3 本發(fā)明注射液對鼠耳腫脹的抑制作用(n＝20)體重/g 腫脹度/g腫脹抑制率％模型組16.3±6.92 0雙黃連組 7.7±6.55 52.8本發(fā)明低劑量組8.9±4.28 45.4本發(fā)明中劑量組10.7±3.15 34.4本發(fā)明高劑量組12.7±5.28 22.1
五、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液對二甲苯引起的鼠耳腫脹有抑制作用，且抑制程度與劑量呈反比。
本發(fā)明注射液抗呼吸系統(tǒng)病毒作用摘要本發(fā)明采用組織細胞培養(yǎng)法、MTT染色法，檢測本發(fā)明注射液對不同病毒株的作用，通過改變給藥時間、途徑，探討本發(fā)明注射液抗病毒作用環(huán)節(jié)。通過建立病毒性流感動物模型，采用組織病理學檢查法，觀察本發(fā)明注射液對感染動物的保護作用。在該試驗中，本發(fā)明注射液具有明顯的抗流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒的作用，抗病毒作用是多途徑的。結論本發(fā)明注射液是一個較廣譜的抗呼吸道病毒針劑。
一、試驗目的本發(fā)明注射液為北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所研制新藥，本試驗旨在觀察本發(fā)明注射液對各病毒株的抑制作用，以評價該藥的抗病毒療效。
二、試驗材料1.動物及飼養(yǎng)條件動物昆明種小鼠，雌雄各半，18～20g，4周齡購自軍事醫(yī)學科學院動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標準顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
2.試劑病毒呼吸道合胞病毒(RSV)Long株，源自美國ATCC菌種庫，批號990521；腺病毒Ad3V，中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所保存。甲1型流感病毒(AlV)，鼠肺病毒液由中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所保存。雙黃連粉針劑，600mg/安瓿，由哈藥集團中藥二廠生產(chǎn)，批號0306225；培養(yǎng)基IMDM(美國GIBC產(chǎn)品)；噻唑藍(MTT)購自華美公司。Eagle′s維持液，由中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所提供。
3.受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所。
4.儀器儀器酶標測定儀、LBK紫外可見分光光度計均由美國產(chǎn)，LC-9A輸液泵，低溫離心機，Olympus相差顯微鏡均為日本島津公司產(chǎn)品。
三、試驗方法1.細胞的篩選與制備所用3種病毒分別接種于VERO、HEP2細胞以測定敏感性，細胞按常規(guī)方法傳代。同時制成2×10-5/mL細胞懸液，每孔01mL，24h后形成單層細胞備用。
2.初篩與分組實驗形成單層細胞孔棄去培養(yǎng)液，加入對細胞無毒性濃度的藥物作用24h，吸出藥液加入病毒液，按一般病毒吸附的時間，均采用37℃吸附1h吸出，加入含藥的維持液，置37℃、5％CO2恒溫箱培養(yǎng)48～96h，待病毒對照孔病變達+++～++++，細胞對照正常時測結果。將初篩有意義的病毒分4組進行實驗，探討藥物的具體作用環(huán)節(jié)。高劑量感染前24h給藥，吸出藥液，用Hank′s液洗3遍，加入病毒液。中劑量組感染后給藥，先加液置37℃吸附1h洗去病毒加含藥維持液。低劑量組藥液與病毒同時加入細胞層。IV組藥液與病毒混合置37℃、2h后加入細胞層。以上均設正常對照及病毒對照。
3.感染動物模型的建立及給藥方案病毒性肺炎模型建立[1]。實驗動物隨機分為病毒感染模型組、正常對照組、抗病毒不同濃度給藥組，陽性對照藥比較組，每組10只，均在相同條件下飼養(yǎng)，均為靜脈給藥，劑量如下本發(fā)明注射劑及陽性對照藥雙黃連粉針劑均為320，160，80，40mg/kg。
四、結果利用光鏡檢查細胞病變(CPE)，結果表明本發(fā)明注射劑可以不同程度地抑制上述病毒對組織細胞的CPE，見表4。
表4本發(fā)明注射劑對病毒引起細胞病變抑制作用病毒 細胞對照病毒對照 試驗RSV - ++++-AD3V - ++++-A1V - ++++-分組結果在鏡下觀察CPE基礎上，用MTT染色細胞，測定吸光度，以便進一步客觀地反映加藥與不加藥之差別。高劑量實驗目的是觀察藥物能否進入細胞或吸附于細胞表面，以阻止病毒的吸附與穿入。結果表明，本發(fā)明注射劑此法對RSV，Ad3V，A1V3種病毒有意義(P＜0 05)。中劑量組實驗目的是觀察藥物能否對已進入細胞內(nèi)的病毒起作用，抑制其生物合成及成熟釋放。結果表明，本發(fā)明注射劑此法對3種病毒有意義(P＜0 05)。III、IV組為藥物與病毒在不同條件下作用，觀察藥物對病毒直接滅活作用，結果表明，本發(fā)明注射劑對3種病毒均有作用。說明本發(fā)明注射劑無論是藥物與病毒同時加入細胞層或是藥物與病毒先作用2h然后加入細胞層，均具有抗病毒效應。對細胞的保護率最高可達96％，見表5。
表5本發(fā)明注射液藥物對病毒直接滅活作用NO.RSV AD3V A1V PI 91.684.394.1＜0.05II 90.184.794.6＜0.05III88.979.280.5＜0.05IV 66.480.273.4＜0.05
組織病理學檢查本發(fā)明注射劑對FM1感染所致的病毒性炎有明顯的保護作用，治療組鼠肺組織結構基正常，病毒對照組鼠肺部有大量病變，藥物對組織細胞保護率用下式計算。保護率(％)＝加藥孔A值-病毒對照孔A值/細胞對照孔A值×100％。見表6。
表6本發(fā)明注射劑對FM1感染所致的病毒性肺炎的保護作用NO比例 Index 保護率(％)(x±s)病毒對照組 - 1.785±0.312 -正常對照組 - 0.910±0.103 -1.401±0.17130.73API 1.232±0.06941.421.199±0.06248.68五、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液的抗病毒作用不僅在細胞水平上得以證實，即能顯著的抑制、延緩細胞病變出現(xiàn)，也表現(xiàn)在整體水平上，即可有效抑制流感病毒等呼吸道病毒性肺炎的發(fā)生與發(fā)展，有著較好的療效。關于本發(fā)明注射液抗病毒的作用機制，從分組實驗結果可以看出，作用是多途徑的，不僅有直接滅活病毒的作用，而且對吸附于細胞表面和進入細胞內(nèi)的病毒也有抑制作用。
本發(fā)明注射液熱原檢查摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液靜脈注射給藥對大耳白兔體溫的影響。結果表明本發(fā)明注射液靜脈注射給藥，兔體溫升高程度在規(guī)定范圍之內(nèi)，所含熱原符合規(guī)定。
一、試驗目的本發(fā)明注射液由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供，將一定劑量的藥液靜脈注入大耳白兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。
二、試驗材料(一)受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml/60kg體重。
(二)儀器與試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號030415322；DT-1TB電子體溫計，上海華辰醫(yī)用儀表有限公司生產(chǎn)。
(三)動物及飼料大耳白兔，雄性，由北京科宇動物養(yǎng)殖中心提供，合格證號SCXK京2002-005，購進后進行一周預飼養(yǎng)，用于試驗時體重2.3～2.4kg。飼養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒兔飼料，濕度50％～70％，溫度18～22℃。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
三、試驗方法(一)試驗前的準備1.熱原檢查前供試用兔處于同一溫度的環(huán)境預飼養(yǎng)，實驗室的溫度在17～25℃，在試驗全部過程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾；2.兔在試驗前禁食不禁水，操作要輕柔；3.體溫計插入各兔肛門的深度和時間相同；4.每隔30分鐘測量體溫一次，測量二次，二次體溫之差不得超過0.2℃，以此二次體溫的平均值作為該兔的正常體溫；5.當日使用的兔，正常體溫應在38.0～39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過1℃。
(二)動物的挑選挑選的條件與檢查供試品時相同，僅不注射藥液，每隔30分鐘測量體溫一次，測量四次，四次體溫之差不得超過0.4℃。
(三)檢查法取適用的大耳白兔3只，測定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，以無菌操作法自耳緣靜脈緩緩注入溫熱至38℃的本發(fā)明注射液，然后每隔30min按前法測量其體溫一次，共測六次，以六次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫升高的度數(shù)(℃)，如果給藥后體溫低于正常體溫，則體溫升高度數(shù)以“0”計。
四、結果判斷(一)判斷復試1.如3只兔中有1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上；2.3只兔體溫升高均低于0.6℃，但升高的總數(shù)達1.4℃或1.4℃以上出現(xiàn)上述情況之一應另取5只兔復試，檢查方法同上。
(二)熱原檢查合格1.初試的3只兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只兔體溫升高總數(shù)低于1.4℃；2.復試的5只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)僅有1只，并且初試、復試合并8只兔的體溫升高總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下。
符合上述情況之一均認為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。
(三)熱原檢查不合格1.在初試的3只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過1只；2.在復試的5只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過1只；3.在初試和復試合并8只大耳白兔的體溫升高總數(shù)超過3.5℃。
出現(xiàn)上述情況之一均認為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。
五、試驗結果靜脈給予所試本發(fā)明注射液，2只家兔體溫不升高，1只體溫升高0.1℃低于0.6℃，3只體溫升高總數(shù)(0.1℃)低于1.4℃，結果見表7。
表7本發(fā)明注射液熱原檢查結果體重 給藥量 正常體溫 給藥后最高 體溫升高號數(shù)(kg) (mg生藥/kg) (℃) 體溫(℃) (℃)12.4X38.538.60.132.3X38.938.8052.4X38.938.80六、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液所含熱原的限度符合規(guī)定。
本發(fā)明注射液異常毒性檢查摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液靜脈注入小鼠體內(nèi)，小鼠的死亡情況。結果表明所試本發(fā)明注射液靜脈注射給藥，在規(guī)定時間內(nèi)小鼠無死亡，異常毒性符合規(guī)定。
一、試驗目的將一定劑量的本發(fā)明藥液靜脈注入小鼠體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察小鼠的死亡情況，以判定供試品的異常毒性是否符合規(guī)定。
二、試驗材料(一)受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，1-2支/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml/60kg體重。
(二)動物及飼料5只KM小鼠，雄性，健康二級，購進后進行3天預飼養(yǎng)，用于試驗時體重17～20g，購自軍事醫(yī)學科學院動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件5只/籠群養(yǎng)，標準飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～25℃，濕度50％～70％，光照明暗各12小時，實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。全價營養(yǎng)顆粒鼠飼料，由軍事醫(yī)學科學院動物中心研制。
三、試驗方法小鼠5只，稱重后由靜脈注射給藥0.5ml/只，正常飼養(yǎng)，48小時內(nèi)不得死亡，稱重。
四、結果判斷(一)判斷復試5只小鼠中有死亡情況時，應另取體重18～19g的小鼠10只復試，檢查方法同上。
(二)異常毒性檢查合格1.初試的5只小鼠在48小時內(nèi)無死亡；2.復試的10只小鼠在48小時內(nèi)無死亡。
符合上述情況之一均認為供試品的異常毒性檢查符合規(guī)定。
(三)異常毒性檢查不合格初試的5只小鼠在48小時內(nèi)有死亡； 復試的10只小鼠在48小時內(nèi)有死亡。
符合上述情況認為供試品的異常毒性檢查不符合規(guī)定。
五、試驗結果全部小鼠在給藥后48小時內(nèi)無死亡。
六、試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液異常毒性符合規(guī)定。
本發(fā)明注射液小鼠急性毒性試驗摘要KM小鼠單次靜脈(iv)和灌胃(ig)給予本發(fā)明注射液的最大耐受量分別為＞Ag生藥/kg和＞Sg生藥/kg。
一.試驗目的本發(fā)明注射液的毒性較低，測不出來半數(shù)致死量(LD50)，觀察單次靜脈和灌胃給予小鼠本發(fā)明注射液所產(chǎn)生的急性毒性反應和死亡情況，得出iv和ig給藥的最大耐受量，對其安全性進行評價，為臨床提供參考。
二.材料(一)受試物1.受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次，臨床最大用量為Dg生藥，即Fg生藥/60kg體重。
2.試劑蒸餾水，購自中國人民解放軍總醫(yī)院。
(二)動物60只KM小鼠，雌雄各半，健康二級，購進后進行3天預飼養(yǎng)，用于試驗時體重18～22g，購自軍事醫(yī)學科學院動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件5只/籠群養(yǎng)，標準飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～25℃，濕度50％～70％，光照明暗各12小時，實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。全價營養(yǎng)顆粒鼠飼料，由軍事醫(yī)學科學院動物中心研制。
三.試驗方法(一)給藥量的確定所用本發(fā)明注射液的濃度Ag生藥/ml，根據(jù)小鼠單次靜脈(iv)給藥最大容量為aml/bg，確定小鼠iv的劑量為vg生藥/kg；小鼠單次灌胃(ig)給藥最大容量為dml/10g，確定小鼠ig的劑量為fg生藥/kg。
(二)給藥方法1.給藥途徑iv與臨床靜脈給藥的途徑是一致的。
2.給藥容量小鼠iv vml/10g；ig dml/10g。
3.供試藥藥物由本所制劑室提供。
(三)試驗依據(jù)根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局《中藥新藥研究指南》和《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編》中的“急性毒性試驗”的方法要求及本科室制定的“藥理試驗標準操作規(guī)程”(SOP)進行。
(四)方法KM小鼠60只，按照體重隨機分為本發(fā)明iv組、本發(fā)明ig組與對照組三組，每組20只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12小時，本發(fā)明iv組小鼠按照0.25ml/10g的給藥容量靜脈給藥；本發(fā)明ig組小鼠按照0.4ml/10g的給藥容量灌胃給藥。給藥后即刻觀察動物的反應，包括動物的形態(tài)、行為活動、精神狀態(tài)、食欲、大小便及其顏色、皮毛、鼻、眼、口有無異常分泌物以及動物死亡情況，死亡的動物及時尸檢，若有肉眼可見的病變則進行病理組織學檢查。給藥第1天每1小時觀察一次，以后每天觀察一次，連續(xù)觀察7天，記錄動物毒性反應及死亡情況。稱量小鼠在試驗前、試驗后第三天及第七天的體重。從體重和動物的反應情況綜合評價試驗結果，得到本發(fā)明注射液對小鼠單次靜脈與灌胃給藥的最大耐受量。若出現(xiàn)死亡，則進行急性半數(shù)致死量(LD50)的測定。
四.試驗結果(一)iv的MTDKM小鼠單次靜脈給予所試本發(fā)明注射液17.075g生藥/kg，相當于人臨床最大日用量的187.5倍，給藥后即刻動物的翻正反射消失，心跳加快，3min內(nèi)翻正反射恢復，心跳恢復正常，動物無異常表現(xiàn)，整個試驗期間未出現(xiàn)任何異常，體重隨試驗時間的延長而增加，與同期對照組無差異(p＞0.05)，試驗期間未見動物死亡。觀察期結束時處死小鼠，尸檢無肉眼可見的變化。
(二)ig的MTDKM小鼠單次灌胃給予所試本發(fā)明注射液27.320g生藥/kg，相當于人臨床最大日用量的300倍，給藥后即刻及整個試驗期間未出現(xiàn)任何異常，體重隨試驗時間的延長而增加，與同期對照組無差異(p＞0.05)，試驗期間未見動物死亡。觀察期結束時處死小鼠，尸檢無肉眼可見的變化。
五.試驗結論在本試驗條件下，本發(fā)明注射液給小鼠單次靜脈給藥的最大耐受量＞Ag生藥/kg，相當于人臨床最大日用量的187.5倍；單次灌胃的最大耐受量＞Sg生藥/kg，相當于人臨床最大日用量的300倍，本試驗提示該藥的臨床用量是一個相當安全的劑量。
本發(fā)明注射液血管刺激性試驗摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液靜脈注射給藥對大耳白兔血管的刺激性。結果表明所試本發(fā)明注射液靜脈注射給藥，連續(xù)給藥3d和7d，不產(chǎn)生血管壁的變性、壞死及血栓形成，會產(chǎn)生可逆性、輕度血管病變。
一、試驗目的本試驗旨在觀察本品每日連續(xù)耳緣靜脈給藥，對兔耳緣靜脈有無血管刺激作用，為臨床用藥安全提供參考。
二、試驗材料1.受試藥物本發(fā)明注射液，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，2-4支/次。
2.試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號030415322。
3.動物及飼料大耳白兔，雄性，由北京科宇動物養(yǎng)殖中心提供，合格證號SCXK京2002-005，購進后進行1周預飼養(yǎng)，用于試驗時體重2.2～2.6kg。飼養(yǎng)條件金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予標準顆粒兔飼料，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
三、試驗方法1.取健康、耳緣無傷大耳白兔6只，隨機分為本發(fā)明注射液組和氯化鈉注射液對照組兩組，每組3只。給藥組以無菌操作法耳緣靜脈注射給藥91.07mg生藥/0.67ml/kg，對照組給予同體積氯化鈉注射液，控制給藥速度3ml/min，分別于每日9:00am各組兔左側耳緣靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥3d。
2.取健康、耳緣無傷大耳白兔6只，隨機分為本發(fā)明注射液組和氯化鈉注射液對照組兩組，每組3只。給藥組以無菌操作法耳緣靜脈注射給藥mg/0.67ml/kg，對照組給予同體積氯化鈉注射液，控制給藥速度3ml/min，分別于每日9:00am各組兔左側耳緣靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥7d。
四、觀察指標1.每日給藥后，肉眼觀察給藥局部的靜脈血管及周圍組織的紅腫情況。
2.末次給藥后24h將動物敲擊頭部處死，分別于注射部位近心端1.5cm至3cm處剪取耳緣靜脈，用10％福爾馬林溶液固定，常規(guī)病理切片HE染色，觀察有無組織變性或壞死、血栓形成及內(nèi)皮損傷等刺激反應。
五、試驗結果本發(fā)明注射液耳緣靜脈注射給藥91.07mg生藥/0.67ml/kg，連續(xù)3d和7d，對兔耳局部血管具有擴張、出血作用，及炎細胞浸潤，未見血管壁變性、壞死損傷和血栓形成，給藥7天比給藥3天血管變化略重?？傮w上本藥物血管刺激病變屬于可逆性、輕度血管病變。
六、試驗結論該試驗條件下，本發(fā)明注射液不產(chǎn)生血管壁的變性、壞死及血栓形成。
本發(fā)明注射液體外溶血試驗摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液對兔紅細胞的溶血作用。試驗結果表明所試本發(fā)明注射液對兔紅細胞無體外溶血及致凝集作用。
一、試驗目的本試驗旨在觀察本發(fā)明注射液對兔紅細胞有無溶血和致凝集作用。
二、試驗材料1.受試藥物同前2.試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號0304153223.儀器800B型臺式離心機，上海安亭科學儀器廠生產(chǎn)；SY21-Ni電熱恒溫水浴鍋，北京市長風儀器儀表公司生產(chǎn)。
三、試驗方法1.2％紅細胞混懸液的制備兔心臟取血20ml，放入盛有玻璃珠的三角瓶中輕輕振搖10分鐘除去纖維蛋白，使成脫纖血液，加10倍量的生理鹽水搖勻，離心3min(轉速2000rpm/min)，除去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水洗滌至上清液無色透明為止。將所得紅細胞用生理鹽水配成2％的混懸液備用。
2.試驗方法取試管7只，按表1依次加入2％紅細胞混懸液和生理鹽水，混勻后于37℃溫浴半小時，然后按表1加入不同量的藥液(第6管不加受試品，作為空白對照組；第7管不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為陽性對照組)，將各管輕輕搖勻后置37℃水浴保溫4h。開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，如表2所示觀察溶血與凝集現(xiàn)象。
表8 本發(fā)明注射液體外溶血試驗加樣表管號 12345672％紅細胞懸液(ml)2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5生理鹽水(ml) 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 -
蒸餾水(ml)----- -2.5受試品(ml)0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 --表9 紅細胞溶血、凝集判斷標準全溶血 溶液澄明紅色，管底無細胞殘留；部分溶血 溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留；無溶血 紅細胞全部下沉，上層液體無色澄明；凝集 紅細胞聚集成塊，振搖后不能分散；四、結果判斷1.以0.3ml注射劑(第3管)，在2小時內(nèi)不產(chǎn)生溶血作用者認為可供注射用。
2.如有紅細胞凝聚的現(xiàn)象，可按下法進一步判定是真凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散，或將聚集物放在載玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴生理鹽水，顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚，供試品可供臨床應用。若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚，供試品不宜供臨床使用。
五、試驗結果1-6管4h內(nèi)沒有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象；1-4管在不同的時間點出現(xiàn)凝聚現(xiàn)象，振搖后紅細胞均勻分散，屬于假凝聚；7管完全溶血。(結果見表10)表10 本發(fā)明注射液體外溶血試驗結果時間 1 2 3 4 5 6715min- - - - - -+30min- - - - - -+45min- - - - - -+1h * * - - - -+2h ** ** ** ******-+3h ***************-+4h ***************-+備注“-”表示無溶血；“+”表示完全溶血；“±”表示部分溶血；“*”表示假凝聚六、試驗結論該試驗條件下，所試本發(fā)明注射液對兔紅細胞無溶血作用，有不同程度的假凝聚現(xiàn)象發(fā)生。
本發(fā)明注射液全身過敏試驗摘要本試驗觀察了本發(fā)明注射液對豚鼠有無全身致敏作用。試驗結果表明所試本發(fā)明注射液全身過敏試驗陰性，無全身致敏作用。
一、試驗目的本發(fā)明注射液為北京福瑞康正醫(yī)藥技術研究所研制的中藥新藥，本試驗旨在考察本發(fā)明注射液有無全身致敏作用，為臨床安全用藥提供參考。
二、試驗材料1.受試藥物同前2.試劑氯化鈉注射液，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號030415322；新鮮卵白蛋白，以生理鹽水配制成10％濃度供試驗用。
3.動物白色豚鼠，雌雄各半，由北京科宇動物養(yǎng)殖中心提供，合格證號SCXK京2002-005，購進后進行一周預飼養(yǎng)，用于試驗時體重270～350g。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)9只/籠，顆粒豚鼠飼料喂養(yǎng)，自由攝水，室溫20～22℃，濕度50％～70％。實驗設施合格證醫(yī)動字第01-2049號。
四、試驗方法1.分組健康豚鼠18只，按體重隨機分為本發(fā)明注射液組、卵白蛋白陽性對照組及氯化鈉注射液陰性對照組三組，每組6只，雌雄各半。
2.受試動物致敏各組動物按無菌操作隔日分別腹腔注射給予本發(fā)明注射液、10％卵白蛋白和氯化鈉注射液0.5ml/只，共致敏三次。
3.攻擊將各組動物分為2批，每批3只，一批于首次致敏后14d分別靜脈注射相應藥液1ml/只攻擊；另一批于首次致敏后21d靜脈注射相應藥液1ml/只攻擊。
五、觀察指標于攻擊給藥后15min內(nèi)，觀察動物有無咳嗽、抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克及死亡等情況，并按表4所列標準評分，評分≥2時，判定為過敏試驗陽性。(結果見表11)表11 全身過敏性反應評分標準評分 體征0無明顯反應1輕微抓鼻、顫抖或豎毛2出現(xiàn)咳嗽，多次抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難或痙攣、抽搐4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡六、試驗結果陽性組6只豚鼠15min內(nèi)出現(xiàn)痙攣、抽搐、大小便失禁、最后死亡，評分4分，為過敏反應陽性；陰性組和本發(fā)明注射液組6只豚鼠無明顯反應，評分0分，為過敏反應陰性。(結果見表12)
表12 本發(fā)明注射液全身過敏試驗結果注射液組 陽性組 陰性組動物號性別 評分動物號性別 評分動物號性別 評分4♀07♀41♀05♀08♀42♀06♀09♀43♀04♂07♂41♂05♂08♂42♂06♂09♂43♂0七、試驗結論該試驗條件下，本發(fā)明注射液全身過敏反應陰性，無全身致敏作用。
具體實施例方式
實施例1綠原酸0.1g黃芩苷1g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入適量水中，使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌下溶解。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至5.0。依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例2綠原酸25g黃芩苷40g注射用水 (加至)1000ml投料量綠原酸、黃芩苷投入適量水中，使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌下溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至8.0。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例3綠原酸 0.1g黃芩苷 40g
注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.0。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例4綠原酸25g黃芩苷1g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.0。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例5綠原酸1.0g黃芩苷1.5g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至5.5。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例6綠原酸8.0g黃芩苷10.0g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.5。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例7綠原酸1.0g黃芩苷10.0g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.5。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例8綠原酸 8.0g黃芩苷 1.5g注射用水 (加至)1000ml將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至8.5。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例9綠原酸 2.5g黃芩苷 4.0g氯化鈉 7.6g注射用水(加至)1000ml稱取7.6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?.6％，將投料量綠原酸、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至9.0。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例10綠原酸 1.0g黃芩苷 10g
異綠原酸 8g漢黃芩苷 10g氯化鈉6g注射用水 (加至)1000ml稱取6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.4。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例11綠原酸8g黃芩苷1.5g異綠原酸 8g漢黃芩苷 10g注射用水 加至1000ml將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.8。依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例12綠原酸8g黃芩苷10g異綠原酸 0.03g漢黃芩苷 10g注射用水 (加至)1000ml將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.8。依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例13綠原酸8g黃芩苷10g異綠原酸 8g漢黃芩苷 0.01g氯化鈉7.6g注射用水 (加至)1000ml稱取7.6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?.6％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.2。依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例14綠原酸1g黃芩苷10g異綠原酸 3.5g漢黃芩苷 4.0g氯化鈉7.6g注射用水 (加至)1000ml稱取7.6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?.6％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.8。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例15綠原酸 8g黃芩苷 1.5g
異綠原酸3.5g漢黃芩苷4g氯化鈉 7.6g注射用水(加至)1000ml稱取7.6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?.6％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.6。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例16綠原酸 8g黃芩苷 10g異綠原酸0.05g漢黃芩苷4g葡萄糖 8g注射用水(加至)1000mlg稱取8g葡萄糖，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.6。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例17綠原酸 10g黃芩苷 8.0g異綠原酸 3.5g漢黃芩苷 0.05g葡萄糖 5g注射用水 (加至)1000ml稱取5g葡萄糖，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加加注射用水使至1000ml，用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.8。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例18綠原酸2.5g黃芩苷4.0g異綠原酸 0.03g漢黃芩苷 10g葡萄糖10g注射用水 (加至)1000ml將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.4。依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例19綠原酸 2.5g黃芩苷 4.0g異綠原酸 8g漢黃芩苷 0.01g氯化鈉 10g注射用水 (加至)1000ml稱取10g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?0％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.5。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例20綠原酸2.5g黃芩苷4.0g異綠原酸 0.05g
漢黃芩苷4.0g氯化鈉 5g注射用水(加至)1000ml稱取5g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.2。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
實施例21綠原酸 2.5g黃芩苷 4.0g異綠原酸3.5g漢黃芩苷0.05g氯化鈉 7.6g注射用水(加至)1000ml稱取7.6g氯化鈉，加入注射用水攪拌混勻，使?jié)舛葹?.6％，將投料量漢黃芩苷、黃芩苷投入其中，用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)，攪拌溶解，加入綠原酸、異綠原酸，攪拌溶解。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過濾。使用1mol/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.6。使用過濾機將藥液過濾，依半成品質(zhì)量標準測定半成品的含量、pH值。開始灌封，并定時測定裝量。100℃滅菌30分鐘，檢漏，燈檢、包裝、貯存。
權利要求
1.一種靜脈注射用注射液，其特征在于它是由包含下述原料制成的金銀花1-10重量份，黃芩1-10重量份。
2.一種靜脈注射用注射液，其特征在于其成分主要包含綠原酸0.1-25毫克/毫升，黃芩苷1-40毫克/毫升，不含連翹苷，梔子苷。
3.如權利要求2所述的注射液，其特征在于所述活性成分及濃度為綠原酸1-8毫克/毫升，黃芩苷1.5-10毫克/毫升。
4.如權利要求3所述的注射液，其特征在于所述活性成分及濃度為綠原酸2.5毫克/毫升，漢黃芩苷4毫克/毫升。
5.如權利要求3或4所述的注射液，其特征在于還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸0.03-8.0毫克/毫升，漢黃芩苷0.01-10毫克/毫升。
6.如權利要求3或4所述的注射液，其特征在于還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸0.05-3.5毫克/毫升，漢黃芩苷0.05-4.0毫克/毫升。
7.如權利要求1-6所述的注射液，其特征在于所述藥物制劑PH值在4.0～9.0之間。
8.如權利要求1-7所述的注射液在制備治療肺炎藥物中的應用。
9.如權利要求1-8所述的注射液在制備治療上呼吸道感染藥物中的應用。
10.根據(jù)權利要求1-9所述藥物制劑，其特征在于它的制備工藝為(1)綠原酸、異綠原酸的制備工藝取金銀花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金銀花提取物，溶于相當于其重量1-20倍量體積的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿層棄去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量異戊醇取1-5次，合并異戊醇層，減壓濃縮，真空干燥，取適量溶于40-90％乙醇溶液適量，拌入200克硅膠，水浴揮干(60℃)，作為柱層析分離樣品，稱取200-300目硅膠2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)為溶劑，濕法裝柱，干法上樣。用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脫，等體積收集，每份500ml，梯度洗脫，每500ml加甲醇10ml，TLC追蹤檢查，合并相同部分，再經(jīng)小柱反復層析及結合重結晶技術，得到化合物氯原酸，化合物異氯原酸；(2)黃芩苷，漢黃芩苷的制備工藝黃芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5--3小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮，加0.5-4個摩爾/LHCl溶液適量調(diào)PH＝0.5～4.0，保溫0.5-3小時，放置8-24小時，濾過，沉淀加4-20倍量水，調(diào)PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，攪拌使溶解，濾過。濾液用HCl溶液調(diào)PH＝1.0～5.5，保溫0.5-3小時，放置8-24小時，濾過，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅膠(200-300目)硅膠濕法裝柱進行層析分離，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)為洗脫劑，薄層檢查洗脫液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分為2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，從一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脫液中析出針狀結晶，進一步重結晶得到化合物2；B部分經(jīng)過硅膠柱層析(200-300目)，葡聚糖凝膠(LH-20)柱層析分離得到化合物1；化合物1，黃芩苷；化合物2，漢黃芩苷，即得；(3)該制劑的制備工藝為將投料量的綠原酸，黃芩苷等溶于適量的注射用水中，使?jié)舛葹榫G原酸0.1-25毫克/毫升，黃芩苷1-40毫克/毫升，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使溶解，用注射用水補至全量，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使藥液的PH值在4.0～9.0的范圍內(nèi)，灌裝，熔封，包裝，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種靜脈注射用注射液及其制備方法。該藥物主要有效成分是綠原酸0.1－25毫克/毫升，黃芩苷1－40毫克/毫升，不含連翹苷，梔子苷。本藥物對上呼吸道感染、肺炎和呼吸道病毒感染具有顯著的療效。
文檔編號A61P11/00GK1626224SQ200410057370
公開日2005年6月15日 申請日期2004年8月30日 優(yōu)先權日2004年5月12日
發(fā)明者趙志全 申請人:魯南制藥股份有限公司