專利名稱：紫草素納米顆粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于納米技術(shù)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域二.
背景技術(shù)：
紫草主要分布于我國(guó)新疆、遼寧、湖北、湖南等地區(qū)，春秋兩季采挖除去莖葉，曬干。紫草作為中藥應(yīng)用已有悠久的歷史。它們甘寒清熱，專入心肝二經(jīng)血分，長(zhǎng)于涼血活血解毒兼以利尿滑腸。性寒質(zhì)滑，有輕泄作用?，F(xiàn)代研究表明具有顯著的抗菌活性，對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和卵黃色八疊菌有抑制作用(田中康雄等藥學(xué)雜志(日)，1972，92，525)，具有較強(qiáng)的抗炎作用。臨床曾用粗制品治療傳染性肝炎和皮膚病，療效較好(吉林醫(yī)科大學(xué)中草藥通訊，1972(5)42)，尤其在治療糖尿病造成的足部大面積潰瘍傷口的愈合上，效果很好。還有抗癌、抗生育、抗甲狀腺、抗免疫低下、降血糖、保肝護(hù)肝等多種作用。
紫草在中藥中多以復(fù)方，紫草油形式作為藥用。紫草主要成份是紫草素即Shikonin及其衍生物，但是Shikonin很難溶于水，這限制了它的應(yīng)用。
現(xiàn)代藥物治療學(xué)不但要求藥物能夠以一種預(yù)定的速率釋放出來，而且要求藥物盡可能的濃集到靶向(病灶)部位，從而提高藥物的生物利用度和療效，減少藥物的毒副作用。如何使藥物達(dá)到這個(gè)預(yù)想的效果，成為當(dāng)今藥物學(xué)和藥物制劑學(xué)的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。人們期待著更好的、能夠解決目前問題的藥物問世。載藥納米微粒(Drug-loaded Nanoparticles)正是為解決這兩個(gè)問題而發(fā)展起來的新型載藥體系(J.Kreuter，Nanoparticles，inJ.Kreuter(Ed.)，Colloidal Drug Delivery Systems，Marcel Dekker，New York，1994，pp.219-342)。被公認(rèn)為21世紀(jì)初關(guān)鍵技術(shù)-納米科技的出現(xiàn)，也為廣大藥學(xué)研究人員提供了另一種改進(jìn)藥物劑型的手段，必將使得藥物的應(yīng)用越來越接近臨床的需要，為臨床治療帶來可喜的飛躍。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是采用高分子材料將紫草素包埋，形成紫草素納米顆粒溶液，有利于紫草素的生物利用。
本發(fā)明中的材料紫草素(Shikonin及其衍生物)和聚酯(PCL-PEG2000-PCL)，均由本實(shí)驗(yàn)室分別提取、制備。
紫草素納米顆粒具有納米顆粒特有的特性，可以均勻地融解在水中，能通過靜脈注射，在動(dòng)物體內(nèi)有一定的靶向作用。
技術(shù)方案1.紫草素納米顆粒的制備將適量的聚酯(PCL-PEG2000-PCL)和紫草素按照比例8～15∶1，一起溶于一定體積的丙酮中，再將所得溶液緩慢滴加到高速攪拌的20～30ml水中，微微加熱在50～60℃，形成紫草素納米顆粒溶液，冷卻后用孔徑600nm的濾膜過濾。
2.納米顆粒形態(tài)和粒徑分布將納米微粒的乳液滴到銅網(wǎng)上，干燥后，用1％的磷鎢酸鈉溶液染色10分鐘。用投射電鏡觀察納米顆粒的形態(tài)(納米顆粒的照片見附圖1)。用90Plus ParticleSizeAnalyzer測(cè)納米微粒的溶液中納米顆粒的粒徑分布，粒徑在100～200nm(粒徑分布見附圖2)。
3.載藥納米顆粒在體外藥物釋放的研究取紫草素納米顆粒溶液，放入浸泡過的透析袋中。再將透析袋置于37℃的PBS(1M)400ml溶液中，定時(shí)取出4ml溶液，補(bǔ)回4ml PBS溶液，測(cè)量所取出溶液的紫外吸收(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖3)。
4.載藥納米顆粒在小鼠體內(nèi)代謝的初步研究。
將紫草素納米顆粒溶液濃縮，取1ml該溶液尾靜脈注射到小白鼠體內(nèi)，分別在1小時(shí)、4小時(shí)后，處死小鼠，取小鼠組織血、肝、脾、腎、肺、心、腦，放入離心管內(nèi)，勻漿，然后在55℃條件下用蛋白酶K處理8小時(shí)，再加入4ml乙酸乙酯，振蕩，離心取上清，揮干乙酸乙酯后用0.6ml甲醇定容。用HPLC測(cè)每個(gè)組織內(nèi)紫草素的含量(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖4)。
發(fā)明效果實(shí)驗(yàn)制得透明澄清的紫草素納米顆粒溶液，納米顆粒的粒徑在100～200nm，具有納米微粒特有的特性，均勻地分散在水中，在體外可以緩慢釋放，并通過實(shí)驗(yàn)證明了該納米顆粒溶液靜脈注射到小鼠體內(nèi)后，納米微粒在小鼠體內(nèi)有一定的靶向分布。本發(fā)明制備的紫草素納米顆粒可以緩釋及靶向分布，使紫草素更好地發(fā)揮它的抗腫瘤、保肝護(hù)肝的藥物作用，可作為制備抗腫瘤、保肝護(hù)肝的藥物。
四.


圖1紫草素納米顆粒在透射電鏡下的照片圖2紫草素納米顆粒的粒徑分布圖3紫草素納米顆粒溶液在體外的釋放曲線圖4紫草素納米溶液靜脈注射小鼠后在小鼠體內(nèi)的組織分布五.
具體實(shí)施例方式1.紫草素納米微粒的制備將15mg聚酯(PCL-PEG2000-PCL)和1mg紫草素一起溶于2ml的丙酮中，再將所得溶液緩慢滴加到高速攪拌的20ml水中，微微加熱至50℃，等溶液冷卻后，用孔徑600nm的濾膜過濾，濾液即為紫草素納米顆粒溶液。
2.納米顆粒形態(tài)和粒徑分布將納米微粒的乳液滴到銅網(wǎng)上，干燥后，用1％的磷鎢酸鈉溶液染色10分鐘。用投射電鏡觀察納米顆粒的形態(tài)(納米微粒照片詳見附圖1)。用90Plus ParticleSizeAnalyzer測(cè)納米微粒的溶液中納米顆粒的粒徑分布(粒徑分布詳見附圖2)。
3.載藥納米顆粒在體外藥物釋放的研究將載藥納米顆粒溶液，放入浸泡過的透析袋中。再將透析袋置于37℃的PBS(1M)400ml溶液中，定時(shí)取出4ml溶液，補(bǔ)回4ml PBS溶液，測(cè)量所取出溶液的紫外吸收(體外釋放曲線詳見附圖3)。
4.載藥納米顆粒在小鼠體內(nèi)代謝的研究。
將載藥納米顆粒溶液，濃縮至5ml。取1ml該溶液尾靜脈注射到小白鼠體內(nèi)，分別在1小時(shí)，4小時(shí)后，處死小鼠，取小鼠組織血、肝、脾、腎、肺、心、腦，放入離心管內(nèi)，勻漿，然后在55℃條件下用蛋白酶K處理8小時(shí)，再加入4ml乙酸乙酯，振蕩，離心取上清，揮干乙酸乙酯后用0.6ml甲醇定容。用HPLC測(cè)每個(gè)組織內(nèi)紫草素的含量(體內(nèi)分布詳見附圖4)。
權(quán)利要求
1.一種紫草素納米微粒，其特征是由聚酯及紫草素混合后制備而成。
2.權(quán)利要求1中所述的紫草素納米微粒的制備方法，其特征是將適量的聚酯和紫草素按照比例8～15∶1，一起溶于一定體積的丙酮中，再將所得溶液緩慢滴加到高速攪拌的20～30ml水中，微微加熱在50～60℃，形成紫草素納米顆粒溶液，冷卻后用孔徑600nm的濾膜過濾。
3.權(quán)利要求1中所述紫草素納米微粒在制備抗腫瘤、保肝護(hù)肝藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于納米技術(shù)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，主要方案是將適量的聚酯(PCL－PEG2000－PCL)和紫草素一起溶于一定體積的丙酮中，再將所得溶液緩慢滴加到高速攪拌的水中，微微加熱，冷卻后過濾即可形成紫草素納米顆粒溶液。該紫草素納米顆粒溶液在體外有緩慢釋放的特性，在小鼠體內(nèi)還有一定的靶向作用?？蓱?yīng)用于制備抗腫瘤和保肝護(hù)肝的藥物。
文檔編號(hào)A61P5/00GK1634001SQ200410065589
公開日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2004年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月25日
發(fā)明者楊永華, 蔣寶華, 龐延軍, 蔣錫群, 張峻峰, 肖雄健, 薛白 申請(qǐng)人:南京大學(xué)