專利名稱：胡蘆巴提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種胡蘆巴提取物及其制備方法，以及含有該胡蘆巴提取物的藥物組合物，所述提取物具有很強的降血糖和降血脂的活性，該提取物及其藥物組合物主要用于治療糖尿病和高血脂疾病。
背景技術(shù)：
胡蘆巴為豆科一年生草本植物胡蘆巴Trigonella foenum-graecum的干燥成熟種子，該藥材原產(chǎn)阿拉伯地區(qū)，唐代傳入我國。性溫，味苦，無毒；具有補腎陽，祛寒濕的作用；在中醫(yī)中常單味或復(fù)方用于治療寒疝、寒濕腳氣、腎虛腰酸及陽痿等；被2000版藥典收載。作為外來藥用植物，胡蘆巴原產(chǎn)中東地中海沿岸地區(qū)，在中東、非洲以及印度等地區(qū)作為食物和藥物已有悠久的歷史。胡蘆巴的幼苗以及種子均可食用，種子作為一種咖喱調(diào)料為印度人廣泛食用；作為民間傳統(tǒng)藥物，胡蘆巴常作為滋補、強壯藥物，開胃藥和解熱藥物使用。
與傳統(tǒng)使用習(xí)慣不同，目前研究表明胡蘆巴種子具有顯著的降糖和降血脂作用，現(xiàn)代研究方向也主要針對胡蘆巴種子的降糖和降脂方面的藥理作用。例如，國外有文獻報道，胡蘆巴脫脂粉顯著降低了受試者膽固醇、甘油三酯和極低密度脂蛋白值，其試驗結(jié)果表明胡蘆巴可以有效調(diào)節(jié)改善高血脂患者的血脂水平，但以上均為藥物原粉入藥，用藥量受原藥材質(zhì)量控制，有效成分模糊不清，難以定量。
申請?zhí)枮?3144071.1的專利申請披露了一種胡蘆巴提取物，其是以皂苷為提取物唯一的活性成分(即有效成分)進行降血糖和降血脂的相關(guān)研究。事實上，具有降血糖和降血脂作用的絕非僅限于含有單一皂苷的胡蘆巴提取物，而是至少含有多糖、總黃酮和皂苷的有效部位。實驗證明，若胡蘆巴提取物中不含或僅含有少量的多糖類、總黃酮類，其藥效大打折扣。
針對目前國內(nèi)外關(guān)于胡蘆巴的研究現(xiàn)狀，相對于我國具有豐富的胡蘆巴藥材資源，原藥材價格低廉，同時糖尿病患者人群龐大的現(xiàn)狀，國外僅有使用脫脂粉的報道，因此向深度和廣度進一步研究胡蘆巴提取物，應(yīng)該具有良好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
經(jīng)過大量的研究，本發(fā)明人得到了一種具有顯著生物活性的胡蘆巴提取物，胡蘆巴提取物具有劑量小，作用顯著，攜帶、服用方便等特點。
本發(fā)明的目的是提供一種胡蘆巴提取物，其含有重量百分比分別為15-50％的多糖、5-15％的總黃酮和10-30％的皂苷，該提取物具有降血糖和降血脂的作用。
本發(fā)明的目的還在于提供一種制備胡蘆巴提取物的方法，通過采用醇/水溶劑進行提取，濃縮除雜，干燥而得的提取物具有顯著降糖、降脂作用。
本發(fā)明的目的還在于提供一種含有上述胡蘆巴提取物的藥物組合物，其具有降血糖、降血脂的作用。
本發(fā)明的目的還在于提供胡蘆巴提取物在制備治療糖尿病和高血脂的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的還在于提供一種含有胡蘆巴提取物的藥物組合物在治療糖尿病和高血脂中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種胡蘆巴提取物，其含有重量百分比分別為15-50％的多糖、5-15％的總黃酮和10-30％的皂苷。
本發(fā)明還提供了上述胡蘆巴提取物的制備方法，將胡蘆巴藥材粉碎后，以醇濃度為20％-90％的醇水混合溶媒，進行提取。
本發(fā)明還提供了胡蘆巴提取物在制備治療糖尿病和高血脂的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其含有治療有效量的上述胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在治療糖尿病和高血脂中的應(yīng)用。
本發(fā)明的胡蘆巴提取物含有多糖、黃酮和皂苷，該三種主要活性物質(zhì)在一起因協(xié)同作用而具有顯著降糖、降脂作用，該提取物的制備過程中除了常規(guī)的醇水滲漉提取和除雜外，還進行了有效的富集，使得上述三種有效成分以一定的含量存在于提取物中。
本發(fā)明的胡蘆巴提取物，其中各組分重量百分比優(yōu)選為多糖40％，總黃酮10％，皂苷20％；其中所述總黃酮的含量為5-15％，標(biāo)示性成分為葒草素，該提取物中葒草素的含量為0.3-1.2％，優(yōu)選0.7％；總皂苷以薯蕷皂苷元計的含量為10-30％。該提取物具有降糖和降血脂的功效。
本發(fā)明的胡蘆巴提取物的制備方法為將胡蘆巴藥材粉碎后，以醇水混合溶媒進行提取，該提取方法可以為任何常規(guī)提取方法，優(yōu)選滲漉法，其中醇可為甲醇、乙醇等低級醇，優(yōu)選乙醇，乙醇的濃度為20％-95％，優(yōu)選50-75％，再經(jīng)過富集精制而得。
本發(fā)明的藥物組合物，其含有治療有效量的胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料，該胡蘆巴提取物含有重量百分比分別為15-50％的多糖、5-15％的總黃酮和10-30％的皂苷；優(yōu)選各組分重量百分比優(yōu)選為多糖40％，總黃酮10％，皂苷20％。
本發(fā)明的上述組合物，其可為任何口服劑型或注射劑型，優(yōu)選口服劑型，更優(yōu)選片劑、膠囊或顆粒劑。
上述的優(yōu)選劑型，例如片劑，其含有治療有效量的上述胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的片劑輔料，其中該胡蘆巴提取物在組合物中的含量為0.1～99.9％(重量)，優(yōu)選為40～90％(重量)，更優(yōu)選為65～75％(重量)，和所述輔料為常規(guī)輔料，例如選自微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、預(yù)膠化淀粉、微粉硅膠和硬脂酸鎂中至少一種。
上述藥物組合物可用于治療糖尿病和高血脂等疾病。
本發(fā)明人針對胡蘆巴中含有的三類主要活性物質(zhì)多糖、黃酮和皂苷，在提取工藝中采用醇/水溶劑進行提取，濃縮除雜，同時將該三類物質(zhì)進行了有效的富集，具體富集方法如下將胡蘆巴干燥藥材粗粉用50-75％乙醇滲漉提取，滲漉液低溫減壓濃縮至相對密度約為1.15-1.20，分別可以采用3種不同方法進行精制(1)提取液用等量水飽和正丁醇萃取，萃取液回收溶劑后干燥得提取物。
(2)提取液用醋酸乙酯萃取脫脂，母液直接干燥得提取物。
(3)提取液用D101樹脂柱進行純化，用水洗脫除去大極性多糖類物質(zhì)，然后用95％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑后干燥即得提取物。
通過上述精制方法可得到本發(fā)明的固態(tài)提取物，干燥方式可以是任何常規(guī)干燥法，優(yōu)選噴霧干燥。
經(jīng)過大量的實驗，獲得了上述三種胡蘆巴提取物，其中方法(1)和(3)得到的提取物中多糖類含量極少，而(2)的方法得到的提取物則含有較多的多糖、總黃酮和皂苷，結(jié)合藥理試驗，結(jié)果證明(2)的方法比其他兩種方法獲得到提取物有更顯著的降糖、降脂活性，說明胡蘆巴中大極性的多糖類化合物也是其不可缺少的有效成分，實驗證明多糖、總黃酮和皂苷協(xié)同作用，才是胡蘆巴提取物發(fā)揮其降糖、降脂活性的關(guān)鍵所在。
優(yōu)選地，本發(fā)明的富集方法采用方法(2)。
實際上，各種理論也教導(dǎo)，多糖類具有顯著的降糖作用，皂苷類則具有顯著的降脂作用，黃酮類可以改善微循環(huán)，對糖尿病患者的多種合并癥具有調(diào)節(jié)作用，因此，胡蘆巴的治療作用是該三類成分協(xié)同多靶點調(diào)控的結(jié)果，缺一不可。
通過對該提取物質(zhì)量的系統(tǒng)研究，胡蘆巴提取物的特征如下所述1、多糖類物質(zhì)多糖類物質(zhì)的含量測定采用紫外衍生化法，具體操作如下對照品溶液的制備取80℃干燥恒重的葡萄糖約36mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度；搖勻，精密量取10ml，置100量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含葡萄糖36μg)。
供試品溶液的制備取胡蘆巴提取物，研細(xì)，精密稱定約450mg，置50ml量瓶中，加入適量水，超聲5min，冷至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取續(xù)濾液2ml，過大孔樹脂DIAION HP20柱(直徑1.0cm，高度20cm)，用水洗脫，收集前100ml洗脫液，搖勻，即得。
測定法分別精密量取對照品溶液、樣品溶液2ml，置10ml具塞試管中，加1.0ml的5％苯酚溶液，混勻；然后加入5.0ml濃硫酸，混勻，靜止，測其在490nm處的吸收度(同時以水依法操作做空白)，計算含量。
結(jié)論胡蘆巴提取物當(dāng)中多糖的含量為15-50％。
2、皂苷類物質(zhì)皂苷類物質(zhì)的測定采用紫外衍生化法，皂苷類含量測定方法來自相關(guān)參考文獻(Pierre R.Petit等，Yves D. Sauvaire，et al.Steroidsaponinsfrom fenugreek seedsExtraction，purification，and pharmacologicalinvestigation on feeding behavior and plasma cholesterol.Steroids.1995，60674-680)，具體如下對照品溶液的制備精密稱取薯蕷皂苷元對照品20mg，置100ml量瓶中，加乙醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含薯蕷皂苷元0.02mg)。
供試品溶液的制備取胡蘆巴提取物，研細(xì)，精密稱取約20mg，置100ml量瓶中，加水10ml，超聲5分鐘，放置室溫后加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。
試液的配制0.5％茴香醛醋酸乙酯溶液；50％硫酸醋酸乙酯溶液。
測定法分別精密量取供試品及對照品溶液2ml，置10ml具塞試管中，蒸干，待試管冷至室溫后，精密加入無水醋酸乙酯2ml，然后加入1ml 0.5％茴香醛醋酸乙酯溶液，及1ml 50％硫酸醋酸乙酯溶液；溶液混勻后，置60℃水浴中反應(yīng)30分鐘，取出冷卻至室溫，加入5ml無水酸醋酸乙酯，搖勻。測430nm處的吸收度，計算含量。
結(jié)論胡蘆巴提取物當(dāng)中皂苷的含量為10-30％。
3、總黃酮類物質(zhì)總黃酮類成分的含量測定法如下對照品溶液的制備精密稱定葒草素對照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml含葒草素0.01mg)。
供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，精密稱取約100mg，置100ml量瓶中，先加入甲醇適量，超聲5min，然后加入甲醇至刻度，搖勻，精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法測定對照品溶液和供試品溶液在334nm處的吸收度，計算。
結(jié)論胡蘆巴提取物中總黃酮的含量為5-15％。
4、胡蘆巴提取物當(dāng)中的薯蕷皂苷類成分的鑒別試驗胡蘆巴當(dāng)中含有的皂苷類物質(zhì)主要為薯蕷皂苷的衍生物，其苷元主要為薯蕷皂苷元，通過鑒別提取物當(dāng)中的薯蕷皂苷類成分可以較為明確的描述胡蘆巴提取物。對照品薯蕷皂苷元購自中國生物制品檢定所。
鑒別試驗如下所述
胡蘆巴提取物適量研細(xì)，取約0.5g的粉末，置150ml圓底燒瓶中，加6％的硫酸乙醇溶液50ml(取硫酸60ml，緩緩注入適量的40％乙醇溶液中，放冷，加40％乙醇至1000ml，搖勻)，超聲5分鐘，濾過，濾液置沸水浴中回流5小時，放冷，加水100ml，搖勻，濾過，殘渣用水洗滌至濾液不顯酸性，105℃烘干，用5ml醋酸乙酯溶解，溶液作為供試品溶液。另取薯蕷皂甙元對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含薯蕷皂苷元對照品2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI D)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚∶醋酸乙酯(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴3％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘。在供試品色譜中，在對照品色譜相應(yīng)的位置，顯相同顏色的斑點。
5、胡蘆巴提取物當(dāng)中葒草素的鑒別胡蘆巴當(dāng)中的黃酮類物質(zhì)主要為黃酮苷，葒草素為其標(biāo)示性成分，通過HPLC法對胡蘆巴提取物當(dāng)中的葒草素進行鑒別。
以高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-異丙醇-水(8∶4∶88)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.2)為流動相；檢測波長為334nm。理論板數(shù)按葒草素計算應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取葒草素對照品(自制)10mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml含葒草素0.05mg)。供試品溶液的制備取重量差異項下的本品，研細(xì)，混勻，精密稱取約500mg，至100ml量瓶中，加入水適量，超聲5分鐘，放置室溫后加甲醇至刻度，搖勻，即得。
分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀即得。記錄葒草素含量測定色譜圖，樣品中葒草素與對照品的保留時間一致。
本發(fā)明的胡蘆巴提取物中葒草素的含量為0.3-1.2％。
本發(fā)明提供的藥物組合物，其含有臨床治療有效量的胡蘆巴提取物以及常規(guī)藥物輔料。該藥物的臨床推薦有效劑量為1.8g/日。
上述藥物組合物包括口服劑型，例如片劑、膠囊、滴丸、丸劑或顆粒劑等。
上述制劑可通過常規(guī)方法制備?？捎玫奶砑觿┌ㄙx形劑(例如糖類衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纖維素衍生物如結(jié)晶纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉；阿拉伯膠；右旋糖酐；硅酸鹽衍生物如偏硅酸鎂鋁；磷酸鹽衍生物如磷酸鈣；碳酸鹽衍生物如碳酸鈣；硫酸鹽衍生物如硫酸鈣等)、粘合劑(例如明膠、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇)、崩解劑(例如纖維素衍生物如羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮)、潤滑劑(例如滑石、硬脂酸鎂、鯨蠟或硼酸)、穩(wěn)定劑(對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯等)、矯味劑(例如甜味劑和香料等)、助流劑(微粉硅膠)、稀釋劑和其他輔用溶劑(例如水、乙醇和甘油等)。
本發(fā)明還提供了上述含有該提取物的藥物組合物在制備治療糖尿病和高血脂的藥物中的用途，實驗證明本發(fā)明的胡蘆巴提取物也可以不加任何藥用輔料直接以提取液或干燥后固體形式施用給患者。
在本發(fā)明的一優(yōu)選實施例中，藥物組合物具體為片劑，其特征為以300g胡蘆巴提取物，加微晶纖維素95g，L-HPC 25g，交聯(lián)CMC-Na 25g，硬脂酸鎂4.5g，以95％乙醇制粒后壓成1000片，片劑以7％LE包薄膜衣。
在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施例中，藥物組合物具體為膠囊劑，其特征為以200g胡蘆巴提取物，加預(yù)膠化淀粉80g，交聯(lián)CMC-Na 12g，微粉硅膠3g，以95％乙醇制粒，裝膠囊即得。
目前的研究表明胡蘆巴當(dāng)中具有降糖、降脂以及改善糖尿病合并癥的有效物質(zhì)主要為多糖類、總黃酮類和皂苷類。多糖類具有顯著的降糖作用，皂苷類則具有顯著的降脂作用，黃酮類可以改善微循環(huán)，對糖尿病患者的多種合并癥具有調(diào)節(jié)作用，因此，胡蘆巴的治療作用是該三類成分協(xié)同多靶點調(diào)控的結(jié)果，相當(dāng)于1個復(fù)方制劑。
本發(fā)明利用了上述的協(xié)同作用，通過提取、精制、富集等制備方法，得到了含有該三種有效成分的胡蘆巴提取物，并以該提取物為有效部位和主要活性成分，開發(fā)了含有上述三種成分的藥物，實驗證明，該胡蘆巴提取物及含有該提取物的藥物在治療糖尿病和高血脂病癥方面有顯著的療效。
藥理學(xué)研究一、胡蘆巴提取物的降糖活性研究胡蘆巴提取物對四氧嘧啶(AX)所致大鼠高血糖試驗?zāi)Ｐ偷挠绊懘笫?40只，禁食12h后，于試驗前用生理鹽水配制四氧嘧啶，以200mg/kg經(jīng)腹腔注入，誘導(dǎo)成高血糖動物模型，并準(zhǔn)備高滲葡萄糖溶液，以便在給藥初期低血糖痙攣發(fā)作時及時給予。待3天其血糖穩(wěn)定后，采血、離心、測血糖值，取空腹血糖值在180mg/dl以上的大鼠按血糖均衡分為7組，每組10只，分別灌胃給胡蘆巴提取物(140mg/kg、70mg/kg、35mg/kg)，糖脈康顆粒(1350mg/kg)及降糖靈(75/kg)，空白對照和模型對照組每天灌胃給相當(dāng)體積的0.5％CMC-Na(CMC-羧甲基纖維素鈉)。連續(xù)給藥4周，每天一次，每給藥7天測定一次空腹血糖進行組間比較并于末次給藥(第28天)后不同時間(1，2，4，24h)采血，測血糖(詳參3.1.1)，進行比較。給藥后第7天胡蘆巴提取物(140mg/kg)組開始出現(xiàn)明顯降糖作用，給藥后第14天胡蘆巴提取物(140mg/kg，70mg/kg)組都出現(xiàn)明顯降糖作用，并隨給藥時間延長，降糖作用日趨明顯。胡蘆巴提取物停藥后，其降糖作用仍可維持4小時。結(jié)果見下表1、表2和表3。
表1 胡蘆巴提取物連續(xù)給藥對四氧嘧啶誘導(dǎo)高血糖大鼠血糖的影響(X±SD)組別劑量 動物數(shù) 血糖濃度給藥前 給藥后mg/kg (mg/dl) 7d 14d 21d 28dCMC - 10 75.7±6.9 76.9±8.878.7±10 80.2±13.3 1±12.7CMC+AX- 10 236.5±42.1ΔΔ233.5±36.2ΔΔ232.9±36.9ΔΔ247.4±74.8ΔΔ222.6±50.3ΔΔ胡蘆巴提取物 14010 229.6±39.6 193.7±48.5* 185.3±49.1* 172.3±61.7**166.1±36.2**70 10 235.4±56.1 195.5±52.4 185.5±31.3**177.8±73.1* 172.4±42.3**35 10 232.1±45.5 201.6±54.1 196.8±44.4 192.4±67.5 177.5±19.2糖脈康1350 10 241.2±56.5 202.6±44.8 191.1±36.1* 198.5±74.1 176.8±39.3*降糖靈75 10 230.9±37.8 184.6±30.7**168.9±33.8**156.5±32.6**135.5±32.9**ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01對比CMC，*P＜0.05，**P＜0.01對比CMC+AX
表2 胡蘆巴提取物連續(xù)給藥四周對四氧嘧啶誘導(dǎo)高血糖大鼠血糖影響的時效關(guān)系(X±SD)劑量 動物數(shù) 血糖濃度(mg/dl)組別Mg/kg1h2h 4h 24hCMC - 1071.1±12.7 76.2±11.7 92.4±13.4 106.4±12.7CMC+AX- 10222.6±50.3ΔΔ225.1±53.9ΔΔ229.9±53.9ΔΔ227.4±57.9ΔΔ胡蘆巴提取物 140 10166.1±36.2**168.3±41.2* 179.5±57.3* 194.8±63.47010172.3±42.3* 170.0±41.1* 179.5±35.1* 197.2±43.83510177.5±59.2 181.9±51.9 186.3±40.2 202.2±65.2糖脈康1350 10176.8±39.3* 175.9±36.8* 183.3±58.2 190.8±43.4降糖靈7510135.5±32.9**156.2±23.6**162.2±28.9**203.2±76.9ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01對比CMC，*P＜0.05，**P＜0.01對比CMC+AX給藥前后血糖差值進行組間配對t檢驗結(jié)果如下表3 胡蘆巴提取物連續(xù)給藥對四氧嘧啶誘導(dǎo)高血糖大鼠血糖的影響(X±SD)組別 劑量動物數(shù)mg/kg 7d 14d 21d28dCMC- 10-1.2±12.3 -3.0±20.2 -4.5±16.3 4.6±21.2CMC+AX - 103.0±25.6 3.6±28.7 -10.9±41.6 13.9±47.5胡蘆巴提取物 140 1035.9±32.1**44.1±35.6**57.3±41.1**63.5±47.9**70 1039.9±35.4**50.1±39.8**57.6±42.5**63.1±52.1**35 1030.5±32.9* 35.3±36.9* 39.7±37.1**54.6±41.9**糖脈康13501038.6±40.1* 50.1±47.8**42.7±43.6* 64.4±56.2**降糖靈75 1046.3±41.4**62.0±47.9**74.4±56.6**95.4±68.9**給藥前后組間差值比較*P＜0.05 **P＜0.01二、胡蘆巴提取物的降脂活性研究小鼠60只，隨機分為6組，各給藥組分別給胡蘆巴提取物(200mg/kg，100mg/kg，50mg/kg)及脂必妥(800mg/kg)，模型對照組和空白對照組給等體積0.5％CMC-Na，每天一次，連續(xù)7天，于末次給藥后1小時，除正常對照組外，均腹腔注射75％蛋黃乳劑(DH)0.5ml/只，20小時后，由小鼠眶靜脈取血，分離血清，用總膽固醇試劑盒測膽固醇含量。結(jié)果顯示胡蘆巴提取物連續(xù)給藥七天后其高劑量(200mg/kg)能降低高膽固醇血癥小鼠血清膽固醇含量。結(jié)果見表4。
表4 胡蘆巴提取物連續(xù)給藥對高膽固醇血癥小鼠血清膽固醇含量的影響(X±SD)組別 劑量動物數(shù)膽固醇(mmol/l)(mmg/kg)CMC - 10 3.14±0.45CMC+DH- 10 12.07±4.27ΔΔ胡蘆巴提取物 200 10 7.95±2.24*100 10 10.07±3.185010 10.60±2.15脂必妥800 10 9.94±0.96ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01對比CMC，*P＜0.05，**P＜0.01對比CMC+DH三、胡蘆巴提取物的生物活性對胡蘆巴提取物進行了下述藥效學(xué)研究，受試藥物為胡蘆巴提取物，對照藥物為優(yōu)降糖、降糖靈、糖脈康(降糖模型)和脂必妥(降脂模型)，試驗項目依次為胡蘆巴提取物對正常小鼠血糖的影響；胡蘆巴提取物對糖皮質(zhì)激素致家兔、小鼠高血糖模型血糖的影響；胡蘆巴提取物對四氧嘧啶致大鼠高血糖模型血糖的影響；胡蘆巴提取物對受試小鼠血脂的影響；胡蘆巴提取物對II型糖尿病大鼠模型血脂的影響。
試驗結(jié)果表明給予正常小鼠胡蘆巴提取物(劑量為200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)對小鼠血糖無影響，對照藥物優(yōu)降糖則顯著降低血糖，對正常動物的血糖不產(chǎn)生影響，是胡蘆巴提取物的主要特點之一。
給予糖皮質(zhì)激素致高血糖家兔胡蘆巴提取物(80mg/kg、40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg)，可以明顯拮抗外源性葡萄糖引起的家兔短暫性血糖升高，中高劑量胡蘆巴提取物(80mg/kg、40mg/kg)能明顯促進家兔給糖后血清胰島素的分泌。給予糖皮質(zhì)激素致高血糖小鼠胡蘆巴提取物，在高劑量(200mg/kg)條件下能夠改善激素誘發(fā)的小鼠胰島素抵抗。
對四氧嘧啶致大鼠高血糖模型，給予胡蘆巴提取物，劑量為140mg/kg、70mg/kg，可以顯著降低大鼠空腹血糖值，明顯降低II型糖尿病大鼠由于外源性葡萄糖引起的血糖短暫升高，提高受試動物的糖耐受性。
胡蘆巴提取物(200mg/kg)能夠降低高膽固醇血癥小鼠血清膽固醇含量；能夠降低II型糖尿病大鼠的血清甘油三酯，但對高密度脂蛋白不產(chǎn)生影響。
具體實施例方式
實施例1胡蘆巴提取物的制備取干燥胡蘆巴藥材，粉碎，過2號篩；照流浸膏劑及浸膏劑項下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄13頁)，以60％乙醇為提取溶媒，浸漬，用三氯乙酸檢驗滲出液，滲漉至滲出液對三氯乙酸反應(yīng)陰性為止；滲漉濾液低溫減壓濃縮至相對密度約為1.15-1.20；以醋酸乙酯脫脂；水溶性部分噴霧干燥，得到胡蘆巴提取物，經(jīng)測定，該提取物中含有多糖40％，總黃酮10％，皂苷20％。
實施例2含有胡蘆巴提取物的片劑的處方和配比及其制法處方胡蘆巴提取物 300g微晶纖維素 95g低取代羥丙基纖維素 25g95％乙醇 q.s.
交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 25g硬脂酸鎂 4.5g制成1000片按照上述制劑處方，取胡蘆巴提取物，加入微晶纖維素、低取代羥甲基纖維素(L-HPC)，以95％乙醇作為粘合劑，過20目篩制軟材，60℃干燥，整粒，加交聯(lián)CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)和硬脂酸鎂混勻壓片；以7％的LE薄膜包衣即得(LE天津愛勒易醫(yī)藥包裝有限公司的產(chǎn)品代號)。
實施例3胡蘆巴提取物膠囊的處方和配比及其制法處方胡蘆巴提取物 200g預(yù)膠化淀粉 80g75％乙醇 q.s.
交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 12g微粉硅膠3g制成1000粒取胡蘆巴提取物，加入預(yù)膠化淀粉，以95％乙醇作為粘合劑，過20目篩制軟材，60℃干燥，整粒；干顆粒加入過100目的交聯(lián)CMC-Na和微粉硅膠混勻，測定顆粒中指標(biāo)成份含量，裝膠囊，裝量約0.3g；包裝即得。
實施例4胡蘆巴提取物顆粒劑的處方和配比及其制法處方胡蘆巴提取物1000g預(yù)膠化淀粉 300g低取代羥丙基纖維素 200g95％乙醇q.s.
制成1000袋取胡蘆巴提取物，加入預(yù)膠化淀粉和低取代羥丙基纖維素，以95％乙醇作為粘合劑，過20目篩制軟材，60℃干燥，整粒；裝袋，裝量約1.5g；包裝即得。
以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對在此公開的實施方案可進行并不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進和變化。
權(quán)利要求
1.一種胡蘆巴的提取物，其特征在于該提取物中含有重量百分比分別為15-50％的多糖、5-15％的總黃酮和10-30％的皂苷。
2.如權(quán)利要求1所述的提取物，其中該提取物中含有重量百分比分別為40％的多糖、10％的總黃酮和20％的皂苷。
3.如權(quán)利要求1或2所述的提取物，其特征在于，所述總黃酮的標(biāo)示性成分為葒草素，該提取物中葒草素含量為0.2-1.2％。
4.權(quán)利要求1所述的胡蘆巴提取物的制備方法，其特征在于，胡蘆巴藥材粉碎后，以醇水混合溶媒進行提取，其中醇濃度為20％-90％，得到的提取液再經(jīng)富集而得。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中的富集方法包括，將提取液用醋酸乙酯萃取脫脂，該醋酸乙酯的用量至少為提取液體積的1/4。
6.一種藥物組合物，其含有治療有效量的胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料，其中所述的胡蘆巴提取物為含有重量百分比分別為15-50％的多糖、5-15％的總黃酮和10-30％的皂苷的混合物。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其為口服劑型，包括片劑、膠囊劑和顆粒劑，含有治療有效量的胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，所述輔料選自微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、預(yù)膠化淀粉、微粉硅膠和硬脂酸鎂中至少一種。
9.權(quán)利要求1所述的提取物在制備治療糖尿病和高血脂的藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求4所述的藥物組合物在治療糖尿病和高血脂中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從胡蘆巴中提取得到的胡蘆巴提取物及其制備方法，該提取物含有3類有效活性成分，其中多糖15－50％，總黃酮5－15％和皂苷10－30％，以及含有該提取物的藥物組合物及其應(yīng)用，所述該胡蘆巴提取物具有顯著的降糖和降脂作用，對糖尿病及其合并癥具有較好的治療作用。
文檔編號A61P3/06GK1605357SQ20041007010
公開日2005年4月13日 申請日期2004年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月30日
發(fā)明者董詩文, 張樹祥, 劉文輝 申請人:北京星昊現(xiàn)代醫(yī)藥有限公司