專利名稱：一種含丹參素、三七總皂苷和冰片的藥物組合組及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含丹參素、三七總皂苷和冰片的藥物組合組及其制備和應(yīng)用。這種藥物組合物我們又稱之為復(fù)方丹參凍干粉針劑。
背景技術(shù)：
冠心病、心絞痛在臨床上是常見病、多發(fā)病，近年來，隨著人們生活水平的提高，冠心病發(fā)病年齡有所提前，加上人口結(jié)構(gòu)的老齡化，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，開發(fā)治療心腦血管疾病的藥物漸成研究的熱點。越來越多的臨床報道顯示，中藥在治療冠心病、心絞痛方面具有良好的應(yīng)用前景，特別是中藥的副作用少，日益受到人們的喜愛。由丹參、三七和冰片組成的復(fù)方丹參制劑，臨床上主要用于心血管疾病方面的治療，具有較好的效果，如復(fù)方丹參滴丸在市場上銷量一直很好。最新的文獻報道由天津中醫(yī)學(xué)院院長張伯禮教授領(lǐng)銜的“復(fù)方丹參方的藥效物質(zhì)及作用機制研究”，證實了復(fù)方丹參方多組分、多靶點治療心血管病科學(xué)性。研究人員在保持中藥原方配伍特點的同時，借鑒西藥的分析方法，從該方劑的配伍配比、作用機制、藥效物質(zhì)等方面進行了系統(tǒng)研究。最終證實復(fù)方丹參方不僅具有抗心肌缺血作用，而且有增強缺血預(yù)適應(yīng)效果，作用機制可能是擴張冠狀動脈和激活內(nèi)源性保護物質(zhì)的釋放；丹參的作用靶點側(cè)重于血管，三七的作用靶點側(cè)重于心肌，丹參與三七配伍后存在協(xié)同互補效應(yīng)[復(fù)方丹參方作用機制已探明?，F(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志2004，13(8)999]。
由丹參、三七、冰片三味藥組成的復(fù)方丹參制劑在臨床上有多種劑型，但只限于口服制劑[專利文獻CN02158104.5]。對于復(fù)方丹參制劑的專利，對其固體劑型報道的較多，專利CN01136155.7和專利CN02158104.5分別公開了該復(fù)方制劑的固體劑型及其制備方法；專利CN01133333.2則公開了該復(fù)方制劑的緩釋和控釋劑型和制備方法；專利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382則公開了包括復(fù)方丹參的整個固體劑型。申請?zhí)枮镃N98103032、CN02133724、CN02144600、CN031112650的專利文獻中有復(fù)方丹參注射液的報道，但原料是由丹參和降香兩味藥組成。由三七或丹參單味藥有效部位制成的注射制劑有較多報道。專利CN99106223公開了由三七總皂苷制成的注射劑。
丹參的水溶性有效成分藥理作用強，其中包括丹參素和多種酚酸類成分。丹參素為咖啡酸的水解產(chǎn)物3，4二羥基苯基乳酸，迷迭香酸為咖啡酸與丹參素酯化縮合而成，原紫草酸由二分子的咖啡酸縮合，它進一步與一分子或兩分子的丹參素進一步縮合，形成紫草酸和紫草酸乙，其它的寡聚咖啡酸類化合物結(jié)構(gòu)中亦都含有丹參素的單元。這些丹酚酸類成分在提取、純化的過程中很不穩(wěn)定，在加熱條件下就容易水解成為丹參素[陳彥，等。不同提取方法測定丹參藥材中丹參素含量的比較研究。江蘇中醫(yī)藥，2003，24(6)55]。在現(xiàn)有的丹參的制備工藝中，為了防止丹酚酸在提取過程中發(fā)生水解，采用了例如超聲提取、旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮、聚酰胺除雜、大孔吸附樹脂除雜、冷凍干燥等工藝，在制劑中還必須加入一些穩(wěn)定劑，來防止在貯藏、運輸過程中發(fā)生水解。這些措施，不但使得藥物的制備過程非常繁瑣，造成有效成分的損失，而且生產(chǎn)周期長，投資大，藥物成本高。制成的藥物，以丹酚酸為指標(biāo)進行含量測定，也存在一定的困難；以丹酚酸含量為指標(biāo)，其成分的少量水解，便會使藥物中的丹酚酸類成分下降，使得藥物含量不合格。所以現(xiàn)有的復(fù)方丹參注射液是以丹參素的含量為指標(biāo)。但是，丹參素含量測定的結(jié)果并不能真實的反映出藥物中最初的丹參素含量的高低，因而藥品合格與否無法判斷，從而在臨床上給個體差異較大的患者的準(zhǔn)確用藥帶來困難。劑量過大會引起患者的不良反應(yīng)增加，劑量過小又達不到預(yù)期的治療效果。史亦麗等和張建華等通過對市售的不同廠家和同一廠家的不同批號的8個復(fù)方丹參注射液中的丹參素進行了含量測定，結(jié)果樣品間的丹參素含量有非常顯著性的差異[史亦麗，等。復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量考核研究。中國藥學(xué)雜志，2002，37(4)300；張建華，等。復(fù)方丹參注射液中丹參活性成份考察。浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，25(4)64]。不同廠家和同一廠家用相同的生產(chǎn)方法制備的復(fù)方丹參注射劑中丹參素的含量有如此大的差別，說明除了藥材本身含量差異的原因之外，制劑所含成分的不穩(wěn)定是含量差異顯著的最大影響因素。因此，制備質(zhì)量可控、療效確切的丹參提取物非常重要。
采用水提醇沉工藝除去丹參提取物中的雜質(zhì)時，乙醇的濃度對于有效成分的含量也起者很重要的作用。乙醇濃度小，達不到醇沉的效果；但隨著乙醇濃度的增大，提取液中丹參素的含量明顯降低[李淑莉，等。不同濃度乙醇沉淀對丹參素回收率影響的研究?；鶎又兴庪s質(zhì)，1995，9(1)21]。申請?zhí)枮镃N02144600、CN02133724、CN90107488的專利申請文獻，在丹參提取物的制備工藝中，為了盡可能除去多的雜質(zhì)，都采用高濃度的乙醇沉淀除雜的工藝，這會對丹參素的含量造成很大損失。
冰片為脂溶性成分，在注射液中的溶解度較小，也給制備成注射制劑帶來困難。
在專利檢索中未見有丹參、三七、冰片三味藥組方的注射液，特別是凍干粉針劑的報道。凍干粉針劑具有起效迅速，穩(wěn)定便于運輸、貯存等優(yōu)點，對于穩(wěn)定性不好的丹參提取物更為適合。因此，進一步開發(fā)復(fù)方丹參制劑特別是其凍干粉針劑型，將會具有廣闊的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是對復(fù)方丹參片(見《藥典》2000年版一部，國家藥典委員會編)的劑型改進，目的在于提供一種起效迅速、劑型先進、制劑穩(wěn)定、質(zhì)量可控、用藥安全的注射用復(fù)方丹參凍干粉針劑及其制備方法。本發(fā)明采用水提，堿水解、醋酸乙酯萃取的方法從丹參中提取以丹參素為主的有效成分；采用水提醇沉法、過大孔吸附樹脂柱的方法從三七中提取和純化三七總皂苷類有效成分；利用羥丙基β-環(huán)糊精(HP-β-CD)對處方中的冰片進行包合，解決了其在注射液水溶液中溶解難的問題，提高了制劑的質(zhì)量和臨床療效。本發(fā)明的制備方法中還采用超濾法，保證了注射液的澄明度和熱原合格，使注射劑的質(zhì)量和療效得到顯著提高。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)一、工藝制法(1)原料藥的處方為丹參400-500重量份，冰片6-10重量份，三七120-160重量份；(2)取丹參藥材飲片粉碎，加6-10倍量的水煎煮2-4次，每次1-3小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入堿液調(diào)pH值9-11，煮沸0.5-3小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用有機酸或無機酸調(diào)節(jié)pH值為2-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.15-1.16，加乙醇使含醇量達60％-70％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達70％-85％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用3-6倍柱體積的水洗脫，再用5-8倍柱體積的40％-80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(4)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入凍干賦型劑，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至7.0-8.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
二、不同方法制備的丹參提取物中丹參素的含量比較1.儀器與試藥 高效液相色譜儀包括LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外可見檢測器(日本島津公司)；N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；KQ3200型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。色譜純甲醇(北京化學(xué)試劑有效公司)；水為三蒸水(自制)；其它試劑均為分析純。丹參素對照品(中國藥品生物制品檢定所)。
1號丹參提取物，100g丹參藥材按專利CN95115854的方法制備；2號丹參提取物，100g丹參藥材按專利CN98103032的方法制備；3號丹參提取物，100g丹參藥材按本發(fā)明丹參提取物的制備方法制備；三份樣品均由北京乾露春科技有限公司實驗室提供。
2.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱迪馬公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流動相甲醇-5％乙酸(25∶75)；流速1.0ml/min；檢測波長280nm。理論板數(shù)按丹參素峰記算應(yīng)不低于3000。
3.對照品溶液制備 精密稱取丹參素對照品5.0mg，置入10ml量瓶中，加入甲醇，超聲使溶解，再加甲醇至刻度，搖勻，即得。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取上述對照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，在上述測定條件下進樣測定，結(jié)果丹參素在0.5μg～6.0μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y＝9726483X+3989，r＝0.9997。
5.供試品溶液的制備 精密稱定各丹參提取物約10mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液離心(12000rpm)10min，上清液作為供試品溶液。
6.測定法 精密吸取供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。結(jié)果見表1。
表1 不同方法制備的丹參提取物中丹參素含量比較樣品編號 丹參素含量(％)1 4.462 6.723 28.57由以上測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明的丹參提取物中的有效成分丹參素的含量，明顯高于其它兩種丹參提取物的含量，說明本發(fā)明的制備工藝更加合理，更加科學(xué)，更具有實際意義。
三、不同方法制備的丹參提取物的穩(wěn)定性考察取不同方法制備的丹參提取物，用注射用水溶解，定容至等體積。在80℃的恒溫水浴(溫差±1℃)內(nèi)加熱放置2天。時間到后，立即取樣，迅速以冰水浴冷卻，依照上述方法測定丹參素的含量。結(jié)果見表2。
表2 不同方法制備的丹參提取物的穩(wěn)定性考察丹參素含量(mg/ml)樣品編號0天2天1 4.46 6.462 6.72 8.823 28.57 28.62
由以上檢查結(jié)果可以看出，本發(fā)明丹參提取物的溶液中的丹參素的含量穩(wěn)定，而其它方法制備的丹參提取物的丹參素的含量顯著增加。說明本發(fā)明的制備工藝在制備的過程中已使有效成分基本上為丹參素，因而更易于質(zhì)量控制、更易于臨床用藥。說明本制備方法更加合理，更加科學(xué)，更具有實際意義，完全符合注射制劑的要求。
四、本發(fā)明的丹參提取物中丹參素和三七提取物中三七總皂苷的含量測定五批丹參提取物和三七提取物由北京乾露春科技有限公司提供。丹參素的含量測定方法按照上述方法測定；三七總皂苷的含量測定方法按照參考文獻[魏鳳玲，等。三七總皂苷提取工藝優(yōu)選。中國中藥雜志，2000，25(12)722]中的三七總皂苷含量測定方法測定；結(jié)果見表3表3 五批提取物中的成分含量測定結(jié)果含量(w/w，％)批號丹參素三七總皂苷128.57 67.58226.75 56.34329.73 63.52427.28 57.63530.37 60.08由以上測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明的丹參提取物中丹參素重量百分含量大于25％，三七提取物中三七總皂苷重量百分含量大于55％。
五、藥理實施例1.對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重20～24g。隨機分成對照組，復(fù)方丹參注射液組、本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水，1次/d，連續(xù)7d。于末次給藥后1h，將小鼠分別置于體積為150ml磨口瓶中，內(nèi)放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時間。結(jié)果見表4。
表4 對小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)組別鼠數(shù)(只)平均存活時間(min)對照組 10 16.44±2.57復(fù)方丹參注射液組 1026.85±2.25*本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑組 10 30.94±3.245*#注與對照組比較*P＜0.001 ；與復(fù)方丹參注射液組比較#P＜0.05復(fù)方丹參注射液、本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑均能提高小鼠常壓缺氧耐力，平均存活時間比對照組顯著延長(P＜0.01)；本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑和復(fù)方丹參注射液相比，平均存活時間也有差異(P＜0.05)。說明復(fù)方丹參凍干粉針劑的作用強于復(fù)方丹參注射液。
2.對小鼠心肌缺氧的保護作用實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重18～22g，隨機分成3組，對照組，復(fù)方丹參注射液組、本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑組。每組雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水，給藥方法1次/d，連續(xù)6d。于末次給藥后1h用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，并用秒表記下小鼠夾閉氣管后至心電消失的時間。結(jié)果見表5。
表5 對小鼠心肌缺氧的影響(X±SD)組別鼠數(shù)(只)平均存活時間(min)對照組105.83±0.64復(fù)方丹參注射液組 1010.52±0.87*本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑組1012.14±0.74*#注與對照組比較*P＜0.001；與復(fù)方丹參注射液組比較#P＜0.05
復(fù)方丹參注射液、本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑均能對小鼠心肌缺氧起保護作用，平均存活時間比對照組顯著延長(P＜0.01)；本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑和復(fù)方丹參注射液相比，平均存活時間也有差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑的藥理作用強于復(fù)方丹參注射液。
3.對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響取體重250～300g Wistar大鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，連續(xù)ip.給藥7d。各組動物于末次給藥30min后，腹腔注射25％烏拉坦0.4ml/100g麻醉，仰臥固定，標(biāo)準(zhǔn)電壓1mv＝15mm，走紙速度50mm/s，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖。舌下靜脈注射垂體后葉素0.75u/kg于5s內(nèi)注射完。每30s記錄一次心電圖。大鼠靜脈注射垂體后葉素1min內(nèi)，大多數(shù)表現(xiàn)為心率減慢，T波高聳，ST段抬高等變化。分別觀察用藥前后30s、1min及50min上T波增殖的變化。結(jié)果見表6。
表6 對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響。
鼠數(shù)T波增值(mV)組別(只)30s 1min5min生理鹽水組 10 0.37±0.17 0.26±0.15 0.19±0.031復(fù)方丹參注射液組 10 0.25±0.07*0.17±0.06*0.092±0.014*本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑組 10 0.21±0.06*# 0.13±0.04*# 0.063±0.018*#注與對照組比較*P＜0.01；與復(fù)方丹參注射液組比較#P＜0.05本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑和復(fù)方丹參注射液均能顯著降低30s、1min及5min時的T波增殖(P＜0.01)；本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑和復(fù)方丹參注射液相比，降低的程度也有差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑的藥理作用強于復(fù)方丹參注射液。
六、制備實施例實施例1(1)原料藥的處方為丹參500g，冰片10g，三七160g；
(2)取丹參藥材飲片粉碎，加10倍量的水煎煮4次，每次3小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入Na(OH)2堿液調(diào)pH值為9，煮沸3小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為1，用3倍的醋酸乙酯萃取9次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物(經(jīng)檢測丹參素重量百分含量為28.57％)。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用12倍量水煎煮提取3次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.15，加乙醇使含醇量達60％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達70％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用8倍柱體積的80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物(經(jīng)檢測三七總皂苷重量百分含量為67.58％)。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至8.5，灌裝，冷凍干燥，即得復(fù)方丹參凍干粉針劑500瓶。
實施例2(1)原料藥的處方為丹參400g，冰片6g，三七120g；
(2)取丹參藥材飲片粉碎，加6倍量的水煎煮2次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入NaCO3堿液調(diào)pH值11，煮沸0.5小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用硫酸調(diào)節(jié)pH值為3，用0.5倍的醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物(經(jīng)檢測丹參素重量百分含量為26.75％)。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用6倍量水煎煮提取1次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.16，加乙醇使含醇量達70％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達85％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的40％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物(經(jīng)檢測三七總皂苷重量百分含量為56.34％)。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.0，灌裝，冷凍干燥，即得復(fù)方丹參凍干粉針劑500瓶。
實施例3(1)原料藥的處方為丹參450g，冰片8g，三七141g；
(2)取丹參藥材飲片粉碎，加8倍量的水煎煮3次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入Ca(OH)2堿液調(diào)pH值為10，煮沸2小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2，用1.5倍的醋酸乙酯萃取7次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物(經(jīng)檢測丹參素重量百分含量為29.73％)。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.15，加乙醇使含醇量達65％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達80％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗脫，再用6倍柱體積的70％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物(經(jīng)檢測三七總皂苷重量百分含量為63.52％)。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖和果糖，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.5，灌裝，冷凍干燥，即得復(fù)方丹參凍干粉針劑500瓶。
實施例4(1)原料藥的處方為丹參430g，冰片9g，三七130g；
(2)取丹參藥材飲片粉碎，加9倍量的水煎煮3次，每次3小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入KOH堿液調(diào)pH值為10，煮沸1小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)pH值為1，用2.5倍的醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物(經(jīng)檢測丹參素重量百分含量為27.28％)。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用10倍量水煎煮提取3次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.15，加乙醇使含醇量達68％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達73％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的50％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物(經(jīng)檢測三七總皂苷重量百分含量為57.63％)。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和右旋果糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至8.0，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例5(1)原料藥的處方為丹參480g，冰片7g，三七150g；(2)取丹參藥材飲片粉碎，加7倍量的水煎煮2次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液放冷，高速離心(15000rpm)，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入CaCO3和KCO3堿液調(diào)pH值為9，煮沸2.5小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為2，用1倍的醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物(經(jīng)檢測丹參素重量百分含量為30.37％)。
(3)取三七藥材飲片粉碎，用9倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.16，加乙醇使含醇量達63％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達77％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的NKA型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再用7倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物(經(jīng)檢測三七總皂苷重量百分含量為60.08％)。
(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇和乳糖，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.2，灌裝，冷凍干燥，即得復(fù)方丹參凍干粉針劑500瓶。
權(quán)利要求
1.一種含丹參素、三七總皂苷和冰片的藥物組合組，其特征在于它是由丹參提取物、三七提取物和冰片的羥丙基β-環(huán)糊精包合物以及藥用輔料制備而成的；其特征還在于丹參提取物中丹參素重量百分含量大于或等于25％，三七提取物中三七總皂苷重量百分含量大于或等于55％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物為凍干粉針劑。
3.一種含丹參素、三七總皂苷和冰片的藥物組合組的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥的處方為丹參400-500重量份，冰片6-10重量份，三七120-160重量份；(2)取丹參藥材飲片粉碎，加6-10倍量的水煎煮2-4次，每次1-3小時，合并提取液過濾，濾液放冷，以15000轉(zhuǎn)/分離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液加入堿液調(diào)pH值9-11，煮沸0.5-3小時，放冷，冷藏(4℃)24小時后過濾，濾液用有機酸或無機酸調(diào)節(jié)pH值為2-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，減壓濃縮干燥，得到以丹參素為主要成分的丹參提取物。(3)取三七藥材飲片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.15-1.16，加乙醇使含醇量達60％-70％，靜置后過濾，濾液加乙醇使含醇量達70％-85％，靜置后過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋(溶液∶藥材為1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用3-6倍柱體積的水洗脫，再用5-8倍柱體積的40％-80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，濃縮，干燥，粉碎，得到以三七皂苷為主要成分的三七提取物。(4)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液緩慢滴加到HP-β-CD飽和液中，并不停攪拌。加完后，50℃再繼續(xù)攪拌3小時，冷藏過夜，濾過，去沉淀，得冰片HP-β-CD包合物。(5)取上述丹參提取物、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入凍干賦型劑，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至7.0-8.5，灌裝，凍冷干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的堿液是氫氧化鈉、碳酸鈉、氫氧化鈣、碳酸鈣、氫氧化鉀、碳酸鉀等無機堿的水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大孔吸附樹脂可以是非極性或弱極性的大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的凍干賦形劑是甘露醇、葡聚糖、葡萄糖、果糖、右旋果糖、聚乙烯吡咯烷酮和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含丹參素、三七總皂苷和冰片的藥物組合物及其制備和應(yīng)用。它是由以丹參素為主要有效成分的丹參提取物、以三七總皂苷為主要有效部位的三七提取物和冰片的羥丙基β－環(huán)糊精包合物以及藥用輔料組成的復(fù)方丹參凍干粉針劑。本發(fā)明采用水提、超濾、堿水解、醋酸乙酯萃取相結(jié)合的方法從丹參中提取以丹參素為主的有效成分；采用水提醇沉法、過大孔樹脂柱的方法從三七中提取和純化三七總皂苷類有效成分；利用羥丙基β－環(huán)糊精(HP－β－CD)對處方中的冰片進行包合，解決了其在注射液水溶液中溶解難的問題，提高了制劑的質(zhì)量和臨床療效。本發(fā)明用于預(yù)防和治療心腦血管疾病。含量測定和藥理實驗表明，本發(fā)明復(fù)方丹參凍干粉針劑具有有效成分含量高，療效顯著的特點。
文檔編號A61P9/10GK1586492SQ200410071050
公開日2005年3月2日 申請日期2004年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月28日
發(fā)明者張正生 申請人:張正生