專利名稱：一種治療糖尿病的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療糖尿病的中藥組合物，具體地說(shuō)是以中藥材為原料，制備而成的中成藥，同時(shí)涉及該藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種復(fù)合病因的綜合病癥，是由于體內(nèi)胰島素缺乏或拮抗胰島素的激素增加，或胰島素在靶細(xì)胞內(nèi)不能發(fā)揮正常生理作用而引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合病癥。其特征為血循環(huán)中葡萄糖濃度異常升高及尿糖、血糖過(guò)高時(shí)出現(xiàn)典型的“三多一少”癥狀，即多次、多尿、多食及體重減輕，且伴有疲乏無(wú)力。嚴(yán)重者可發(fā)生酮癥酸中毒、高滲性糖尿病昏迷，且易合并多種感染。隨著病程的延長(zhǎng)，其代謝紊亂可導(dǎo)致眼、腎、神經(jīng)、血管及心臟等組織器官的慢性病變。若得不到及時(shí)、恰當(dāng)?shù)闹委煟瑒t發(fā)生心臟病變、腦血管病變、腎功能衰竭、雙目失明、下肢壞死等情況，成為致殘、致死的主要原因。且糖尿病發(fā)病率高，1995-1996年的全國(guó)抽樣調(diào)查，20歲以上自然人群患病率為高達(dá)3.21％，1980年全國(guó)30萬(wàn)人口調(diào)查結(jié)果，60歲以上患病率4.21％，單江蘇老年人群糖尿病、糖耐量低減患病率則分別為14.49％和10.21％，而且無(wú)論是發(fā)達(dá)國(guó)家或發(fā)展中國(guó)家，糖尿病的發(fā)病率都在逐年上升。
目前臨床治療2型的藥物除胰島素外，多是化學(xué)藥物，應(yīng)用廣泛的大致可分為磺脲類、雙胍類、其他降糖藥及輔助用藥。磺脲類降糖藥物是最主要的糖尿病治療藥物。能使肝糖原合成增多，再通過(guò)對(duì)細(xì)胞受體或受體后的作用，使周圍組織對(duì)胰島素的敏感性增強(qiáng)，對(duì)葡萄糖的攝取增多，從而達(dá)到降低血糖的作用。但較易引發(fā)低血糖、粒細(xì)胞減少及心血管疾病等不良反應(yīng)。雙胍類降糖藥大劑量可引起消化道反應(yīng)，在肺、肝、腎有病變的患者易致乳酸性酸中毒。給廣大患者用藥安全帶來(lái)隱患，為改變這種狀況，長(zhǎng)期以來(lái)，臨床上一直嘗試用植物中草約進(jìn)行治療。中醫(yī)對(duì)糖尿病的病因看法較一致，認(rèn)為主要是過(guò)食肥甘、五志過(guò)極、房室不節(jié)、熱病火燥及先天稟賦不足幾個(gè)因素。《吉林中醫(yī)藥》2003，23(8)14報(bào)道劉廣慶用固本降糖膠囊(由黃芪、人參、山茱萸、熟地黃、山藥、枸杞子、五味子、生龍骨、生牡蠣、生地黃、天花粉、丹參、山楂制成)治療139例糖尿病患者，結(jié)果顯效48例，有效71例，無(wú)效20例，總有效率86％。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是是提供一種有效治療糖尿病的中藥組合物，本發(fā)明的另一個(gè)目的提供該中藥組合物的制備方法。
為達(dá)到上述目的，我們采用了以下的技術(shù)方案本發(fā)明中藥組合物是由下述重量比的原料制成的人參皂苷4-8重量份黃芪80-150重量份地黃150-250重量份麥冬45-80重量份 天花粉40-80重量份 枸杞80-160重量份五味子40-80重量份山藥40-80重量份 覆盆子20-50重量份茯苓40-80重量份 澤瀉40-80重量份。
本發(fā)明中藥組合物的原料的重量比優(yōu)選為人參(莖葉)皂苷6重量份 黃芪124重量份 地黃186重量份麥冬62重量份天花粉62重量份枸杞124重量份五味子62重量份 山藥62重量份 覆盆子31重量份茯苓62重量份澤瀉62重量份。
本發(fā)明中藥組合物，可以通過(guò)常規(guī)的制劑工藝制備成為臨床可接受的各種劑型如顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊劑、注射劑或口服液、酊劑、栓劑、合劑、散劑、洗劑、膜劑、滴丸等。
本發(fā)明中藥組合物的劑型優(yōu)選為顆粒劑。
本發(fā)明顆粒劑每克顆粒含人參皂苷Re0.1-10mg，每克顆粒含黃芪甲苷0.02-0.5mg。
本發(fā)明顆粒劑的測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定；(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定；本發(fā)明組合物的制備方法為將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸提1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并浸提液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03-1.40的稠膏，五味子用40-70％乙醇滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度約為1.10-1.40稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮1-4次，每次0.5-3小時(shí)，合并煎煮液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為40％-80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.1-1.40，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并或干燥，加藥用輔料按常規(guī)制劑工藝制成臨床所需劑型。
為了防止藥粉在液體制劑或顆粒中分層或沉淀常在制劑中加入助懸劑如乙基羥乙基纖維素、甲殼素、甲基纖維素、西黃芪膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、海藻酸鉀、海藻酸鈣、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、糊精等。
如上所述的制備方法可用下法代替
麥冬用溫水浸提1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并浸提液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03-1.40的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮1-4次，每次0.5-3小時(shí)，合并煎煮液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為40％-80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏人參皂甙合并或干燥后再與人參皂甙，加藥用輔料按常規(guī)制劑工藝制成臨床所需劑型。
本發(fā)明藥物治療糖尿病具有很好的療效。為表明本發(fā)明藥物對(duì)糖尿病的治療作用，我們做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
一、本發(fā)明對(duì)造成大鼠腎上腺素高血糖模型的影響II型糖尿病是老年人的常見(jiàn)病、多發(fā)病。經(jīng)臨床療效及實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明具有一定的降血糖作用。本實(shí)驗(yàn)是用腎上腺來(lái)加速大鼠體內(nèi)糖元及脂肪分解，使大鼠血中葡萄糖濃度增高。腎上腺素還能抑制大鼠體內(nèi)的胰島素釋放。同時(shí)再給大鼠灌一定劑量葡萄糖加速造成高血糖模型。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，給藥組與對(duì)照組比較，本發(fā)明有很明顯的降血糖作用，同時(shí)我們與固本降糖膠囊作為陽(yáng)性對(duì)照組。
材料動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，體重為230±30g藥物1、本發(fā)明原粉，為淺棕色至棕褐色，味甘，微澀。藥效劑量分別為臨床用藥量的50倍、37.5倍、25倍)。
2、固本降糖膠囊，本制藥廠實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
方法與結(jié)果取大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。第一組為陰性對(duì)照組，給予蒸餾水。第二組為陽(yáng)性對(duì)照組，給固本降糖膠囊。第三、四、五組分別為本發(fā)明的高、中、低三個(gè)劑量組，劑量分別為臨床用藥量的50倍、37.5倍、25倍，動(dòng)物灌胃給藥，藥程一個(gè)月，末次給藥后1小時(shí)，按500μg/kg的劑量注射腎上腺素，造成腎上腺高血糖模型，同時(shí)與葡萄糖1g/kg的劑量灌胃，加速模型的建立，采用葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定空腹、半小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)的血糖變化，其結(jié)果見(jiàn)表1。
表1本發(fā)明對(duì)腎上腺素造型大鼠血糖含量的影響血糖含量(mg％)X±SD空腹 半小時(shí) 1小時(shí)2小時(shí) 3小時(shí)82.8±18.3 233.5±65.3 247.6±57.1 144.0±67.695.9±10.3對(duì)照組(n＝12) (n＝10) (n＝10) (n＝10)(n＝11)94.1±31.8 195.6±39.1 220.0±39.3 150.4±57.790.7±21.0陽(yáng)性對(duì)照組(n＝10) (n＝11) (n＝10) (n＝11)(n＝10)本發(fā)明高劑97.9±23.4 244.6±44.3 154.6±35.4 101.9±33.3100.1±14.3量組 (n＝10) (n＝12) (n＝13)***(n＝13)(n＝12)本發(fā)明中劑95.9±22.9 236.8±42.7 185.0±42.1 109.2±32.699.1±10.1量組 (n＝10) (n＝10) (n＝10)***(n＝9) (n＝9)本發(fā)明低劑95.4±22.5 224.1±41.7 156.5±48.0 113.8±47.598.4±10.4量組 (n＝10) (n＝10) (n＝8)***(n＝9) (n＝10)***P＜0.001結(jié)果及討論腎上腺素所致動(dòng)物高血糖模型是用模擬應(yīng)激性血糖增高的一種方法，相當(dāng)于成人II型糖尿病患者的精神應(yīng)激性刺激后的發(fā)病狀態(tài)，因此具有一定的臨床意義。
固本降糖膠囊能明顯降低腎上腺素性高血糖已為過(guò)去的研究所證實(shí)。因此選用于本實(shí)驗(yàn)作為中藥的陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，固本降糖膠囊組的血糖反應(yīng)曲線較陰性對(duì)照組為低，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)結(jié)果是可信的。本發(fā)明三個(gè)劑量組所呈現(xiàn)的血糖反應(yīng)曲線也較陰性對(duì)照組為低，尤以1小時(shí)差異非常顯著(P＜0.01)。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明可以較好地抑制由腎上腺素所致的大鼠血糖增高反應(yīng)。
二、本發(fā)明對(duì)小鼠四氧嘧啶糖尿病模型的影響材料與方法1、藥品四氧嘧啶造型用藥劑量100mg/kg(由日本和光制藥工業(yè)株式會(huì)社出品)，其余試劑均為國(guó)家市場(chǎng)銷售產(chǎn)品。
2、藥物本發(fā)明粉為淺棕色，味甘、微澀。藥物劑量分別相當(dāng)于臨床成人用量的50倍、37.5倍、25倍。
“固本降糖膠囊”本制藥廠實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
3、動(dòng)物遠(yuǎn)交系昆明種小鼠50只，體重20±2g。
4、分組測(cè)定空腹血糖后配對(duì)均分五組。第一組本發(fā)明成人用量的50倍，第二組本發(fā)明成人用量的37.5倍，第三組本發(fā)明成人用量的25倍，第四組固本降糖膠囊，第五組對(duì)照組給予蒸餾水(按大劑量給藥劑量算)。
5、病理造型及給藥方法動(dòng)物ig給藥，1次/日，連續(xù)7天，七天給藥后ihr由尾靜脈注射四氧嘧啶，劑量100mg/kg造成糖尿病模型，并于第9、10、14、18、22、24天分別自小鼠眼眶后靜脈采血測(cè)定血糖含量，同時(shí)，記錄動(dòng)物死亡數(shù)。
6、觀察指標(biāo)按前述采血日測(cè)定血糖含量，在第24天處死動(dòng)物后即刻檢胰腺，用Bovw氏固定后進(jìn)行A、B、細(xì)胞組織化學(xué)染色、計(jì)數(shù)。
結(jié)果1、各組動(dòng)物存活情況注射四氧嘧啶后第二天，各組血糖明顯升高，死亡情況見(jiàn)表1。在注射四氧嘧啶第4天(即全療程的第11天)，陰性對(duì)照組和固本降糖膠囊組開(kāi)始出現(xiàn)死亡，療程結(jié)束時(shí)陰性對(duì)照組總死亡率為70％，固本降糖膠囊組總死亡率為50％，本發(fā)明高劑量組(成人用量的50倍)及中劑量組(成人用量的37.5倍)總死亡率為20％，低劑量組(成人用量的25倍)，無(wú)1例死亡。
2、各組動(dòng)物血糖情況各組在造型后血糖都有明顯升高，但總的趨勢(shì)本發(fā)明及固本降糖膠囊組均低于對(duì)照組，由于對(duì)照組發(fā)病嚴(yán)重的小鼠在觀察期間死亡，因此血糖均值在對(duì)照組中并不顯著升高。即使如此，在造型后第11天，本發(fā)明低劑量組、中劑量組及固本降糖膠囊組血糖與對(duì)照組比較，仍有顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明本發(fā)明對(duì)四氧嘧啶造型小鼠糖病具有一定的保護(hù)作用及降血糖作用。
3、胰島A、B細(xì)胞病理檢查結(jié)果對(duì)照組，胰島數(shù)目減少，形態(tài)不規(guī)則，HE片中尚可見(jiàn)胰島中少量壞死細(xì)胞核碎片，淋巴細(xì)胞及組織細(xì)胞浸潤(rùn)，A細(xì)胞增多，B細(xì)胞減少，大部分胰島中B細(xì)胞減少。
本發(fā)明低劑量組，大部分標(biāo)本胰島數(shù)目基本正常，部分胰島中(3例)A細(xì)胞與B細(xì)胞比例正常，其他切片屬于中度損傷，B細(xì)胞稍有減少，A細(xì)胞增多。
本發(fā)明中劑量組，屬于輕度損傷，部分胰島中出現(xiàn)B細(xì)胞減少，A細(xì)胞增多。
本發(fā)明高劑量組，屬于輕度損傷，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，病變損傷明顯減輕。
固本降糖膠囊組1例為輕度病變，其余為中度病變。
以上結(jié)果表明本發(fā)明及固本降糖膠囊組對(duì)四氧嘧啶造型小鼠胰島B細(xì)胞具有一定保護(hù)作用，并能降低胰腺損傷程度和小鼠死亡率，其中用藥組低劑量最為明顯。
三、本發(fā)明對(duì)過(guò)氧化脂質(zhì)、單胺氧化酶、超氧化物歧化酶的影響過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)是化合物中或游離的不飽和脂肪酸受自由基作用生成的過(guò)氧化物，成人糖尿病由于代謝障礙(糖和肪質(zhì))致使過(guò)氧化脂質(zhì)增加，并可促進(jìn)糖尿病合并癥的發(fā)展。因此，測(cè)定過(guò)氧化脂質(zhì)對(duì)觀察本發(fā)明的療效是一項(xiàng)重要的指標(biāo)。
單胺氧化酶(Monoamine oxdase MAO)是一類廣泛存在于生物體不同組織中的單胺氧化酶類，它具有催化不同類型單胺的氧化脫氧作用。有人發(fā)現(xiàn)人腦血和血小板中單胺氧化酶(WAO、EC、1、4、1、3)的活性隨著年齡的增長(zhǎng)而明顯增多，特別是70年代以來(lái)，由于發(fā)現(xiàn)衰老過(guò)程和某些老年性疾病與單胺氧化酶B(MAO-B)的活性有密切關(guān)系。人們一直尋求應(yīng)用適當(dāng)?shù)膯伟费趸敢种苿?MAOI)來(lái)選擇地抑制MAO--B以達(dá)到治療某些老年性疾病之目的。
超氧化物歧化酶(SOD)是具有消除自由基作用的主要酶類之一，從而降低過(guò)氧化脂質(zhì)的水平。在某些病理的情況下，例如輻射損傷和衰老，自由基增高時(shí)可引起過(guò)氧化脂質(zhì)的增高。因此測(cè)定血清或組織中的LPO和SOD可以了解自由基的代謝情況。糖尿病患者的血管損傷性合并癥與LPO及SOD相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)之目的即在于了解本發(fā)明在此方面的作用。
材料與方法用LCR純系小鼠，體重25-30g，配對(duì)分組，設(shè)正常對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組(固本降糖膠囊)，本發(fā)明設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。高劑量(成人用量的50倍)，中劑量(成人用量的37.5倍)，低劑量(成人用量的25倍)。給藥途徑灌胃，每天一次，給藥二周后放血處死。分別采集血、腦、肝做MAO-B、LPO、SOD測(cè)定。
一、LPO的測(cè)定，鼠肝或腦作10％組織勻漿，取0.1ml→加8.1％SDS0.2ml；PH3.5，20％HACbufferl？1.5ml；0.8％TBA 1.5ml；蒸餾水0.5ml→攪拌后95℃水浴1小時(shí)→水沖試管冷卻→加正丁醇吡啶(15∶1)3ml振蕩后離心(3000轉(zhuǎn)/分)15分鐘→在532nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值(O、D)二、MAO-B的測(cè)定，取→組織稱重→加10倍體積的予冷的PH7.4，0.2MP.B緩沖液研磨成勻漿→1000g4℃離心10分鐘→除沉淀取上清4℃下17000g離心30分鐘→取沉淀用0.3ml0.2MP.B緩沖液懸浮即得粗酶，在帶有磨口蓋的試管中加入0.3ml80mM芐胺；2.4ml0.2MPH7.4P.B→37℃水浴振蕩3小時(shí)→加60％PCAO0.3ml終止反應(yīng)，再加環(huán)己烷3ml振蕩3分鐘→3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘→取上清在242nm波長(zhǎng)上下測(cè)光密度(O.D值)。
三、SOD的測(cè)定參照丁克祥微量指血超氧化物歧化酶快速測(cè)定方法進(jìn)行。
結(jié)果與討論本發(fā)明對(duì)小鼠腦LPO的影響組別(n＝8)X±SD(0.D值)LP正常對(duì)照 0.55±0.046陽(yáng)性對(duì)照(固本降糖膠囊)0.220±0.06411.84 ＜0.01低劑量組 0.424±0.0346.23＜0.0 1中劑量組 0.315±0.0737.70＜0.01高劑量組 0.250±0.06111.10 ＜0.01本發(fā)明對(duì)小鼠肝LPB的影響組別(n＝8)X±SD(0.D值) LP正常對(duì)照 0.54±0.035陽(yáng)性對(duì)照(固本降糖膠囊)0.370±0.0646.59＜0.01低劑量組 0.460±0.0832.51＜0.05中劑量組 0.430±0.0753.76＜0.01高劑量組 0.355±0.0855.69＜0.01
本發(fā)明對(duì)小鼠腦MAOB的影響組別(n＝8) X±SD(0.D值) L P正常對(duì)照 0.466±0.07陽(yáng)性對(duì)照(固本降糖膠囊) 0.213±0.0786.28 ＜0.01低劑量組 0.332±0.0234.38 ＜0.01中劑量組 0.315±0.0464.42 ＜0.01高劑量組 0.217±0.0557.23 ＜0.01本發(fā)明對(duì)小鼠SOD的影響組別(n＝8)X±SD(0.D值) L P正常對(duì)照 0.147±0.013陽(yáng)性對(duì)照(固本降糖膠囊)0.171±0.011 3.99 ＜0.01低劑量組 0.165±0.014 2.66 ＜0.05中劑量組 0.169±0.010 3.79 ＜0.01高劑量組 0.170±0.015 3.28 ＜0.01上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有明顯降低小鼠腦、肝過(guò)氧化脂質(zhì)的作用，為阻止糖尿病合并癥的發(fā)展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)對(duì)小鼠腦單胺氧化酶B有明顯的降低作用，起到了單胺氧化酶抑制劑的作用，對(duì)超氧化物歧化酶有明顯的增強(qiáng)作用。本發(fā)明的這些作用可能為臨床防治糖尿病及其并發(fā)癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
四、本發(fā)明對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞胰島素受體及腎上腺皮質(zhì)激素受體的影響材料與方法動(dòng)物(1)取純系ICL小鼠，6月齡，體重(18±2)g，雄性10只，均分4組，I組為陰性對(duì)照，II組為已知藥物陽(yáng)性對(duì)照(固本降糖膠囊)，III組為本發(fā)明低劑量組(成人用量的12.5倍)，IV組為本發(fā)明高劑量組(成人用量的25倍)。
(2)取純系ICL小鼠，18月齡，體重(35±2)g，雄性40只，均分4組，每組用藥情況同(1)，以上各組均為測(cè)定胰島素受體用。
(3)Weistar大鼠20只，雄性，體重(200±10)g，均分4組，各組給藥情況同(1)，用于測(cè)定腎上腺皮質(zhì)激素受體。
1、試劑(1)1-14-A-單碘原子胰島素，由四川華西醫(yī)科大學(xué)同位素室提供。放射強(qiáng)度223μci/mg，非標(biāo)記胰島素為Sigma產(chǎn)品。
(2)6、7-[A]Atdosterone放射強(qiáng)度為72ci/nnik(New England Nucleor Comp)非標(biāo)記Atdosterone(Slgma CO)出品。
3、測(cè)定方法(1)胰島素受體測(cè)定取小鼠骨髓細(xì)胞按常規(guī)方法制成細(xì)胞懸液使成5-7×107/ml反應(yīng)管總液量為1ml，其中I胰島素為0.1ml，CPM值為按需要量調(diào)整，并加1000倍的非標(biāo)記物，22℃孵育2小時(shí)，0℃冰水浴中止反應(yīng)，置49型纖維濾膜抽濾，清洗后置Fi2003型免疫計(jì)數(shù)器，測(cè)定CPM值并計(jì)算。
CV 2.44并繪制Scatchard Plot，以[I]胰島素20nM至20nM問(wèn)取7個(gè)點(diǎn)，結(jié)果有明顯飽和現(xiàn)象，Scatchard Plot計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1。分別測(cè)定6月齡及18月齡小鼠的骨髓細(xì)胞胰島素受體數(shù)目(取一點(diǎn)法10nM)結(jié)果見(jiàn)表II。
(2)腎上腺皮質(zhì)激素受體測(cè)定大鼠麻醉后以冷緩沖液A(20nM Na-Phosphate PH7.4 1mM disodium EDTA 2mM 2-hydroxyethymercaptane and10％giycerol(Wt/Vol)心臟灌注，除血。0℃冷室內(nèi)操作，取腦，稱重，加2ml緩沖液A，用玻璃勻漿器勻漿，離心85000×9×45min，取上清勻漿用Lowryis法測(cè)定蛋白含量，Dexamethasone取6個(gè)點(diǎn)(0.5nM-10nM)100倍非標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)，以羥基磷灰石為分離劑，離心10000×g 10min取上清加入閃爍液內(nèi)測(cè)定CPM，并作Schathard Plot，結(jié)果見(jiàn)表III。
結(jié)果與討論1、本發(fā)明可使18月齡小鼠骨髓細(xì)胞胰島素受體數(shù)目上升，但對(duì)6月齡無(wú)作用，老齡鼠胰島素受體數(shù)目有隨齡增而下降之勢(shì)，故本發(fā)明起到恢復(fù)作用。
2、本發(fā)明可以干擾腎上腺皮質(zhì)激素受體，使之結(jié)合力下降，Bamx降低，這對(duì)于防治糖尿病也是有利的。
以上結(jié)果表明本發(fā)明用于胰島素受體功能低下?tīng)顟B(tài)的老年鼠可以使之受體結(jié)合能力上調(diào)，因此，本發(fā)明可作為胰島素受體調(diào)節(jié)劑而應(yīng)試于臨床。
表II本發(fā)明對(duì)不同齡小鼠骨髓細(xì)胞胰島素的作用分組 受點(diǎn)數(shù)目(一點(diǎn)法10nM) P陰性對(duì)照 693±392陽(yáng)性對(duì)照 839±198 ＞0.056月齡本發(fā)明(低)910±466 ＞0.05本發(fā)明(高)899±446 ＞0.05陰性對(duì)照 383±230陽(yáng)性對(duì)照 1027±441 ＜0.0118月齡本發(fā)明(低)1130±430 ＜0.01本發(fā)明(高)1240±340 ＜0.01表III本發(fā)明對(duì)腎上腺皮脂激素受體的作用組別r kd(m)Bmax fmol mg protI III III II1.1×陰性對(duì)照0.89 0.95 12×1028911010陽(yáng)性對(duì)照0.87 0.85 1.13.1130102本發(fā)明(低) 0.88 0.87 1.02.9120100本發(fā)明(高) 0.87 0.86 0.92.111096I糖皮質(zhì)激素受體II鹽皮質(zhì)激素受體五、本發(fā)明對(duì)人體胚肺二倍體成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)及PAS反應(yīng)的影響材料與方法一、細(xì)胞培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞(2BS細(xì)胞)由北京生物制品研究所提供，傳代壽命為55±10代。從液氮中復(fù)蘇人胚肺成纖維細(xì)胞40代齡，用含10％小牛血清的EagleMEM培養(yǎng)液，10％NaHCO3，調(diào)PH為7.2-7.4，加2ml-谷氨酰胺，37℃溫箱孵育，待細(xì)胞生長(zhǎng)匯合成單層后，用0.25％胰蛋白酶消化2分鐘，棄胰酶加培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，以1∶2的比率傳代培養(yǎng)備實(shí)驗(yàn)用。
二、藥品的配制本發(fā)明取10g溶于200ml重蒸水中，經(jīng)磁力攪拌24小時(shí)，濾除不溶解顆粒，濾過(guò)液加MEM培養(yǎng)基干粉，溶解后G6濾器抽濾滅菌，調(diào)成含10％小牛血清，PH＝7.2，濾過(guò)液為本發(fā)明水溶性部分，原液濃度為50mg/ml。
三、方法與分組(一)急性毒性實(shí)驗(yàn) 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的40代齡2BS細(xì)胞數(shù)瓶，經(jīng)0.25％胰蛋白酶消化，棄胰酶加10ml培養(yǎng)液吹打，制備成細(xì)胞懸液，經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)，稀釋成細(xì)胞濃度為20萬(wàn)/ml懸液，取30瓶底面積為13.8cm2接種瓶，每瓶接種1ml細(xì)胞懸液，3ml含藥品培養(yǎng)基，對(duì)照組3瓶，加藥組每個(gè)濃度3瓶共33瓶，加藥組以37.5mg/ml為起始濃度，以下各濃度均按1∶0∶7比率稀釋，經(jīng)37℃溫箱孵育4小時(shí)，細(xì)胞計(jì)數(shù)，所得結(jié)果經(jīng)計(jì)算機(jī)處理，求出藥物對(duì)細(xì)胞帖壁率影響的半數(shù)有效量(EDx)。
(二)本發(fā)明對(duì)2BS細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞懸液的制備均同急性毒性實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以毒性實(shí)驗(yàn)中不影響細(xì)胞帖壁率的濃度為本發(fā)明對(duì)2BS細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)的第一個(gè)劑量，濃度為1050μg/ml，以下濃度按1∶0.5比率稀釋，取24瓶底面積為13.8cm2的小方瓶，3瓶為一組，一組對(duì)照，實(shí)驗(yàn)各組均加1ml細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)PAS反應(yīng)下降，說(shuō)明了細(xì)胞內(nèi)合成多糖能力降低或者分解代謝增強(qiáng)，從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，本發(fā)明可以顯著增加晚代細(xì)胞內(nèi)多糖類的含量，此點(diǎn)在調(diào)節(jié)糖代謝方面對(duì)機(jī)體是有益的本實(shí)驗(yàn)也表明，本發(fā)明可以在細(xì)胞水平直接對(duì)糖代謝發(fā)生影響。此點(diǎn)結(jié)合前文本發(fā)明在整體水平對(duì)胰島素受體的作用可以相互印證。
下述實(shí)施例為進(jìn)一步公開(kāi)本發(fā)明，需要說(shuō)明的是這些實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方式，并不限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1人參皂苷6重量份 黃芪124重量份 地黃186重量份麥冬62重量份 天花粉62重量份枸杞124重量份五味子62重量份山藥62重量份 覆盆子31重量份茯苓62重量份 澤瀉62重量份。
山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清二次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.30(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為60％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻或干燥，混勻，加入羧基纖維素鈉適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含人參皂苷Re0.1mg。
(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl、10μl，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含黃芪甲苷0.02mg。
實(shí)施例2人參皂苷4重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清1次，每次3小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.30(55-60℃)的稠膏，五味子用70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為60％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并或干燥，加藥用乳糖、蛋白糖適量干法制粒，包裝，既得。
測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓恳浦?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含人參皂苷Re1.0mg。
(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；
對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl、10μl，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含黃芪甲苷0.1mg。
實(shí)施例3人參皂苷8重量份 黃芪80重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清1次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為70％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻或干燥，加藥用焦糖適量，混勻制粒，裝膠囊，包裝，即得。
實(shí)施例4人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃150重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，五味子用60％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為75％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并或干燥，加適量淀粉，泛制成丸，即得丸劑。
實(shí)施例5人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬45重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份麥冬用溫水浸清1次，每次3小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為70％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，人參莖葉皂甙用乙醇溶解，加入規(guī)定濃度的乙醇，攪拌，過(guò)濾，即得酊劑。
實(shí)施例6人參皂苷8重量份 黃芪150重量份地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉40重量份 枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清3次，每次1小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為70％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，干燥，將基質(zhì)加熱熔融，加入干燥藥粉，混勻，傾入涂有脫模劑的栓模中，冷卻，取出，即得栓劑。
實(shí)施例7人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞80重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份麥冬用溫水浸清2次，每次1小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10(55-60℃)的稠膏，五味子用60％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙與麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，另取蔗糖制成糖漿，與上述浸膏合并，加水制全量，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得合劑。
實(shí)施例8人參皂苷8重量份 黃芪150重量份地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份 枸杞160重量份五味子40重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.25(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為75％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，干燥成細(xì)粉，過(guò)篩，即得散劑。
實(shí)施例9人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥40重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清1次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，五味子用55％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，干燥，制顆粒，干燥，壓片，即得片劑。
實(shí)施例10人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子20重量份茯苓80重量份 澤瀉80重量份將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10(55-60℃)的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為75％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，干燥，取PVA加蒸餾水浸泡，加熱溶解，再加入干浸膏粉，攪拌溶解，再加入甘油、吐溫-80，攪勻，靜置除去氣泡，涂布在玻板上制膜，80℃脫膜，剪成適當(dāng)大小，密封，即得膜劑。
實(shí)施例11人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓40重量份 澤瀉80重量份山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次0.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，五味子用45％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮4次，每次0.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為65％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，干燥，取聚乙二醇加熱熔融，加入干粉，滴制成丸，包裝，即得滴丸劑。
實(shí)施例12人參皂苷8重量份 黃芪150重量份 地黃250重量份麥冬80重量份 天花粉80重量份枸杞160重量份五味子80重量份山藥80重量份 覆盆子50重量份茯苓80重量份 澤瀉40重量份。
麥冬用溫水浸清1次，每次3小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.30(55-60℃)的稠膏，五味子用70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30(55-60℃)稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮1次，3小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(55-60℃)的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(55-60℃)，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓等浸膏合并，加10倍量水，加入人參莖葉皂甙，冷沉48小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮，至調(diào)節(jié)PH至8，加0.1％活性炭，加熱煮沸30分鐘，過(guò)濾，加注射用水至全量，過(guò)濾，精濾，灌封滅菌，檢驗(yàn)，即得注射液。
實(shí)施例13人參皂苷2重量份黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉120重量份枸杞250重量份五味子120重量份山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉120重量份。
麥冬用溫水浸清2次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10-1.20的稠膏，五味子用40％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮4次，每次0.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為70％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏合并，取人參莖葉皂甙加水溶解與浸膏合并，加10倍量水，冷沉48小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮，至調(diào)節(jié)PH至7.5，加0.1％活性炭，加熱煮沸30分鐘，過(guò)濾，加注射用水至全量，過(guò)濾，精濾，冷凍干燥無(wú)菌分裝，檢驗(yàn)，即得粉針。
實(shí)施例14人參皂苷15重量份 黃芪40重量份 地黃300重量份麥冬120重量份天花粉120重量份 枸杞250重量份五味子120重量份 山藥120重量份覆盆子100重量份茯苓150重量份澤瀉120重量份。
麥冬用溫水浸清3次，每次0.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.20-1.30的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為75％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏合并，取人參莖葉皂甙加水溶解與浸膏合并，加10倍量水，冷沉48小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮，至調(diào)節(jié)PH至7，加0.1％活性炭，加熱煮沸30分鐘，過(guò)濾，加注射用水至全量，過(guò)濾，精濾，灌封滅菌檢驗(yàn)，即得輸液。
實(shí)施例15人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃80重量份麥冬120重量份天花粉120重量份枸杞250重量份五味子120重量份 山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份澤瀉120重量份。
麥冬用溫水浸清2次，每次2.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.15的稠膏，五味子用60％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為60％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏合并，人參莖葉皂甙乙醇溶解，合并，加入規(guī)定濃度的乙醇，攪拌，過(guò)濾，即得酊劑。
實(shí)施例16人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬20重量份 天花粉120重量份枸杞250重量份五味子120重量份山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉120重量份。
麥冬用溫水浸清2次，每次2小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.18的稠膏，五味子用50％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為50％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30，將上述人參莖葉皂甙與麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏合并，另取蔗糖加水適量加熱煮沸，溶解，過(guò)濾，濃縮制成糖漿，與上述濃縮液混勻，煮沸，放冷，加入防腐劑和香精，加水稀釋，即得糖漿劑。
實(shí)施例17人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉20重量份枸杞250重量份五味子120重量份山藥120重量份覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉120重量份。
麥冬用溫水浸清2次，每次1小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.1的稠膏，五味子用55％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為40％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙與麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏合并，另取蔗糖制成糖漿，與上述藥液合并，加水制全量，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得合劑。
實(shí)施例18人參皂苷15重量份 黃芪250重量份地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉120重量份 枸杞40重量份五味子120重量份山藥120重量份覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉120重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入PVC適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含人參皂苷Re 5.0mg。
(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl、10μl，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含黃芪甲苷0.08mg。
實(shí)施例19人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份天花粉120重量份枸杞250重量份五味子20重量份 山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份澤瀉120重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入甲基纖維素適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含人參皂苷Re 0.5mg。
(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl、10μl，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含黃芪甲苷0.04mg。
實(shí)施例20人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉120重量份枸杞250重量份五味子120重量份山藥20重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉120重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入阿拉伯膠適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
實(shí)施例21人參皂苷15重量份 黃芪250重量份地黃300重量份麥冬120重量份天花粉120重量份 枸杞250重量份五味子120重量份 山藥120重量份覆盆子15重量份茯苓150重量份澤瀉120重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入西黃芪膠適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
實(shí)施例22人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉120重量份 枸杞250重量份五味子120重量份山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓20重量份 澤瀉120重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入海藻酸鈉或海藻酸鉀適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
實(shí)施例23人參皂苷15重量份 黃芪250重量份 地黃300重量份麥冬120重量份 天花粉120重量份枸杞250重量份五味子120重量份山藥120重量份 覆盆子100重量份茯苓150重量份 澤瀉20重量份。
將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸清2次，每次1.5小時(shí)，合并浸濾過(guò)，濾液濃縮后相對(duì)密度為1.10的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮2次，每次2.5小時(shí)，合并煎液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為55％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并，混勻，加入糊精適量，制粒，干燥整粒，分裝即得。
測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；
供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含人參皂苷Re10mg。
(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈-水-四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl、10μl，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測(cè)定每克顆粒含黃芪甲苷0.5mg。
權(quán)利要求
1.一種治療糖尿病的中藥組合物，其特征在于它是由下述原料制備而成的人參皂苷4-8重量份黃芪80-150重量份地黃150-250重量份麥冬45-80重量份 天花粉40-80重量份 枸杞80-160重量份五味子40-80重量份山藥40-80重量份 覆盆子20-50重量份茯苓40-80重量份 澤瀉40-80重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于各原料的配比為人參皂苷6重量份 黃芪124重量份 地黃186重量份麥冬62重量份 天花粉62重量份 枸杞124重量份五味子62重量份 山藥62重量份覆盆子31重量份茯苓62重量份 澤瀉62重量份。
3.如述權(quán)利要求1或2所述組合物，其特征在于該藥物組合物加入賦形劑制成臨床可接受的各種劑型。
4.如權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于其劑型優(yōu)選為顆粒劑。
5.如權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于每克顆粒含人參皂苷Re0.1-10mg。
6.如權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于每克顆粒含黃芪甲苷0.02-0.5mg。
7.如權(quán)利要求5或6所述的有效成分，其特征在于測(cè)定方法為(1)人參皂苷Re的測(cè)定方法為對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含人參皂苷Re0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約1克，加氯仿20ml，水浴回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去氯仿，殘?jiān)鼡]干溶劑，殘?jiān)B同濾紙置于同一具賽錐形瓶中，加正丁醇飽和的水2ml潤(rùn)濕，精密加入用水飽和正丁醇50ml超聲提取30min，精密量取上清液25ml，加氨試液三倍量，搖勻，放置，分取上層溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定量移?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為99∶400的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定；(2)黃芪甲苷的測(cè)定方法為色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；流動(dòng)相比例為33∶67∶4的乙腈—水—四氫呋喃；對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研勻，精密稱取約10克，加水50ml溶解，濾過(guò)，濾液用石油醚脫脂2次，水飽和的正丁醇振搖提取4次(每次50ml)，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨試液，用正丁醇飽和的水40ml洗，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)經(jīng)1.5cm，長(zhǎng)18cm)，以水100mL洗脫，棄去水液，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得。
8.如權(quán)利要求5所述的中藥組合物，其特征在于其制備方法為將山藥、天花粉、覆盆子、茯苓四味粉碎成細(xì)粉，麥冬用溫水浸提1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并浸提液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03-1.40的稠膏，五味子用40-70％乙醇滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度約為1.10-1.40稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉用水煎煮1-4次，每次0.5-3小時(shí)，合并煎煮液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為40％-80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.1-1.40，將上述人參莖葉皂甙、山藥等到四味細(xì)粉、麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉等浸膏合并或干燥，加藥用輔料按常規(guī)制劑工藝制成臨床所需劑型。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于之中還加入助懸劑如乙基羥乙基纖維素、甲殼素、甲基纖維素、西黃芪膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、海藻酸鉀、海藻酸鈣、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、糊精。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法可用下法代替麥冬用溫水浸提1-3次，每次0.5-3小時(shí)，合并浸提液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03-1.40的稠膏，五味子用40-70％乙醇，滲漉、滲漉液回收乙醇，濃縮至稠膏，枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥、天花粉、覆盆子、茯苓用水煎煮1-4次，每次0.5-3小時(shí)，合并煎煮液、濾過(guò)、濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20的稠膏，放冷，加入乙醇使含醇量為40％-80％，靜置、濾取上清液，回收乙醇，濃縮，將上述麥冬、五味子、枸杞子、黃芪、地黃、澤瀉、山藥等浸膏人參皂甙合并或干燥后再與人參皂甙，加藥用輔料按常規(guī)制劑工藝制成臨床所需劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療糖尿病的中藥組合物，是由人參(莖葉)皂苷、黃芪、地黃、麥冬、天花粉、枸杞、五味子、山藥、覆盆子、茯苓、澤瀉十一味藥為原料，根據(jù)每味中藥效應(yīng)成分的不同理化性質(zhì)，分別以不同的物理或化學(xué)方法處理后制備而成的有效制劑。本發(fā)明配方獨(dú)特，臨床上用于治療糖尿病效果顯著。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1616014SQ200410073959
公開(kāi)日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2004年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月17日
發(fā)明者趙志全 申請(qǐng)人:魯南制藥股份有限公司