專(zhuān)利名稱(chēng)：虎眼萬(wàn)年青提取物及其制備方法、藥物組合物以及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種虎眼萬(wàn)年青提取物，其制備方法，含有此提取物的藥物組合物，以及這種提取物和含有此提取物的藥物組合物的用途，尤其涉及在治療膽囊炎及膽囊炎相關(guān)疾病中的用途。
背景技術(shù)：
虎眼萬(wàn)年青(Omithogalum Caudatum Ait.)原產(chǎn)非洲南部，為百合科觀賞植物(《中國(guó)種子植物科屬詞典》)。在我國(guó)北方有盆栽，主產(chǎn)于吉林省長(zhǎng)白朝鮮族自治縣，為朝鮮傳入，未見(jiàn)歷代草本收載。
1992年日本科學(xué)家Sashida從桑德西萬(wàn)年青(Ornithogalumsaundersiae)中分離到具有強(qiáng)抗癌作用的虎眼萬(wàn)年青皂甙類(lèi)化合物—虎眼萬(wàn)年青皂甙OSW-1。它對(duì)多種癌細(xì)胞的毒性比現(xiàn)有臨床用藥高100倍以上，對(duì)正常細(xì)胞卻毒性很小。從此人們開(kāi)始研究虎眼萬(wàn)年青的藥用作用，但主要集中在它的抗癌作用上，例如本發(fā)明人的中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)CN 1085439號(hào)、CN 1352986號(hào)和CN 1354011號(hào)。
研究表明虎眼萬(wàn)年青味甘、微寒，歸肝、脾經(jīng)。具有清熱解毒，消堅(jiān)散結(jié)的功能。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該植物內(nèi)含虎眼萬(wàn)年青皂甙，見(jiàn)表1、生物堿、黃酮、多糖、多種氨基酸，見(jiàn)表2、大量微量元素，見(jiàn)表3。此外，還含有高級(jí)烷烴混合物、香豆素、苯甲酸、單糖、低聚糖等。
其中虎眼萬(wàn)年青皂甙、生物堿、黃酮既是抗腫瘤的藥效成分，又有較強(qiáng)的抗炎作用；多糖組分能增強(qiáng)人體體液免疫和細(xì)胞免疫功能，與人參皂甙Rg1相近；微量元素中硒(Se)的含量達(dá)42.361μg/g，比人參要高，是黃芪的2.5倍(“虎眼萬(wàn)年青氨基酸及無(wú)機(jī)元素的含量測(cè)定”，《特產(chǎn)研究》1996第5期)，硒在藥理學(xué)、生理學(xué)等方面具有極其重要的作用(“硒的藥理學(xué)研究”，《中國(guó)醫(yī)藥報(bào)》2003.9.9)。
膽囊炎在臨床上分為急性膽囊炎和慢性膽囊炎。急性膽囊炎是膽囊的急性炎癥，80％伴有膽囊結(jié)石，多因膽管阻塞、創(chuàng)傷感染及胰液返流等因素，造成膽囊壁充血水腫、膽管擴(kuò)張，嚴(yán)重時(shí)甚至化膿壞死，是臨床常見(jiàn)的急腹癥之一。慢性膽囊炎，多因膽囊運(yùn)動(dòng)功能障礙、感染創(chuàng)傷、膽固醇代謝失常以及膽囊壁血管病變，導(dǎo)致膽囊粘膜損害，造成粘膜扁平、萎縮、膽囊壁增厚且纖維化。上述病癥都突出表現(xiàn)為右上腹疼痛，伴有惡心、嘔吐、消化不良。在中醫(yī)學(xué)中屬于痛證—脅痛范疇。主要病因一為氣積久郁，氣滯血瘀，膽腑氣阻絡(luò)痹；二為濕熱久蘊(yùn)，交蒸肝膽，膽腑疏泄不利；三為膽汁久滯，熱邪煎熬成石，膽道痹阻；四為濕熱熾盛，膽汁滯而不通而致脅痛。
依據(jù)本發(fā)明的研究，本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物以及含有此提取物的藥物組合物可用于治療膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)的疾病?；⒀廴f(wàn)年青提取物與虎眼萬(wàn)年青全草入藥相比，用藥量降低，吸收加快。到目前為止，還沒(méi)有關(guān)于虎眼萬(wàn)年青提取物治療膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的報(bào)道。
表1虎眼萬(wàn)年青皂甙的結(jié)構(gòu)式

表2虎眼萬(wàn)年青中氨基酸的含量(％)

表3虎眼萬(wàn)年青中微量元素的含量(％)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有藥用價(jià)值的虎眼萬(wàn)年青的提取物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供從虎眼萬(wàn)年青中提取這種提取物的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供一種可以治療膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的含有此提取物的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供上述提取物和組合物在制備治療膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的藥物方面的用途。
本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物，其至少含有虎眼萬(wàn)年青皂甙1-44wt％生物堿1-44wt％黃酮 1-12.5wt％。
優(yōu)選含有虎眼萬(wàn)年青皂甙37.5wt％生物堿50wt％黃酮 12.5wt％并進(jìn)一步含有多糖、氨基酸、微量元素、低聚糖等。
本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物的制備方法，依次包括A.用有機(jī)溶劑提取虎眼萬(wàn)年青，過(guò)濾沉淀，回收濾液中的有機(jī)溶劑，得到提取液。所述有機(jī)溶劑優(yōu)選甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、丙酮、氯仿；更優(yōu)選為相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青1至10重量倍的乙醇，最優(yōu)選為相當(dāng)于新鮮虎眼萬(wàn)年青1至2重量倍的乙醇；B.對(duì)A步驟的濾渣用水提取，得到提取液。優(yōu)選用相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青的1至12重量倍的水煎煮1至4次；更優(yōu)選用水煎煮兩次，第一次加相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青8重量倍的水，煎煮2小時(shí)，第二次加相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青7重量倍的水，煎煮1小時(shí)。
C.合并A和B步驟得到的提取液；D.對(duì)C步驟的提取液進(jìn)行濃縮。優(yōu)選在20～90℃的溫度下進(jìn)行濃縮，更優(yōu)選在80℃的溫度下進(jìn)行減壓濃縮。
這種提取方法生物堿的收率可達(dá)到0.60％，高于現(xiàn)在使用的方法的收率0.47％(見(jiàn)本發(fā)明人的中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)CN 1354011號(hào))。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述虎眼萬(wàn)年青提取物，其他具有活血化瘀、舒肝利膽功能的中草藥，還可以含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
上文所述具有活血化瘀、舒肝利膽功能的中草藥可以是活血化瘀、舒肝利膽類(lèi)中藥是白花蛇舌草、半枝蓮、丹參、虎杖、溫郁金、人參、北黃芪、東亞鉗蝎、少棘巨蜈蚣或其結(jié)合。
上文所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等、填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如纖維素衍生物、明膠等；濕潤(rùn)劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂等。另外還可以在組合物中加入其他輔劑如矯味劑等。
本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、膠囊劑、丸劑等，制成液體制劑如水和油混懸劑或其他液體制劑如糖漿，乳劑等，用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油性混懸劑等。優(yōu)選的形式是注射劑、片劑、膠囊劑。
本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物和含有此提取物的藥物組合物可以用于制備治療急、慢性膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的藥物，這種藥物用量小、吸收快、療效明顯而確切。
本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物和含有此提取物的藥物組合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出明顯的抗炎作用。它們比目前在慢性膽囊炎的保守治療中藥效最好的消炎利膽片相比抗炎作用更好。
本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物和含有此提取物的藥物組合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出優(yōu)異的促膽汁分泌作用。它們比上述消炎利膽片效果顯著。
本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物和含有此提取物的藥物組合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出良好的鎮(zhèn)痛作用。它們比上述消炎利膽片效果顯著。
本發(fā)明人還通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的虎眼萬(wàn)年青提取物毒性甚低，服用安全。
對(duì)應(yīng)制劑的收率折算，本發(fā)明的含有虎眼萬(wàn)年青提取物的藥物組合物的口服、注射劑量為0.10-0.15g生藥/kg體重/天，和全草入藥(相比用藥量為其1/5或更少。
虎眼萬(wàn)年青提取物作為一種天然藥物成分，對(duì)膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病具有良好的療效，制備成藥物組合物，具有毒性小、作用強(qiáng)、安全有效等優(yōu)點(diǎn)，為膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的治療開(kāi)辟新的途徑，具有重要的社會(huì)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方法和效果，并不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1用浸膏提取法提取虎眼萬(wàn)年青(1)將本發(fā)明藥物以生藥量(水分14％，下同)8倍的80％乙醇回流2小時(shí)，濾過(guò)；(2)藥渣加生藥量8倍的30％乙醇回流2小時(shí)，濾過(guò)；(3)合并兩次濾液，減壓回收乙醇后備用；(4)藥渣加生藥量8倍水煎煮2小時(shí)，濾過(guò)；(5)藥渣再加入生藥量7倍水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，棄去藥渣。
(6)合并兩次水提濾液與回收乙醇后的藥液，減壓濃縮至相對(duì)密度約1.10(80℃)時(shí)，精濾此濃縮液。
如此得到的提取物中含有虎眼萬(wàn)年青皂甙0.45％生物堿0.6％黃酮 0.15％多糖 68％其余為氨基酸、微量元素、蛋白質(zhì)、高級(jí)烷烴、低聚糖等。
實(shí)施例2單組分分離提取法提取虎眼萬(wàn)年青(1)弱生物堿提取取干燥恒重的本品60.0g稱(chēng)定，粉成60目，以85％乙醇回流2小時(shí)(200ml×3)，濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇至干。用50ml水溶解，乙醚萃取(30ml×2)，棄去乙醚層，水層用氯仿萃取(30ml×5)，回收氯仿至干，得弱生物堿提取物約230mg。
(2)強(qiáng)生物堿提取取干燥恒重的本品60.0g稱(chēng)定，粉成60目，以0.5％鹽酸—乙醇回流2小時(shí)(300ml×2)，濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇至干，用100ml水溶解，以氯仿萃取(50ml×3)。水層調(diào)節(jié)pH達(dá)到11后，再用氯仿萃取(50ml×5)，回收氯仿至干得強(qiáng)生物堿約130mg。
(3)總虎眼萬(wàn)年青皂甙提取按(2)法，第一次氯仿萃取所得水層，用正丁醇萃取(50ml×3)，減壓回收正丁醇至干，得總虎眼萬(wàn)年青皂甙約300mg。
(4)多糖組分及黃酮提取取本品(水分14％)，以生藥量10、8、7倍水煎煮，時(shí)間依次為3、2、1小時(shí)，濾過(guò)，合并3次濾液，經(jīng)醇沉淀得多糖組分與蛋白質(zhì)混合物，再除去蛋白質(zhì)，得多糖組分液，收率(以干膏汁)約68％，另含黃酮約占0.18％。
如此得到的提取物中含有虎眼萬(wàn)年青皂甙 0.43％生物堿 0.57％黃酮0.14％其余為氨基酸、微量元素、高級(jí)烷烴混合物、低聚糖等。
上述各提取物分別以柱析、超濾、丙酮萃取等精制后，配以載體可制成針劑。
實(shí)施例3含有虎眼萬(wàn)年青提取物的膠囊劑的制備方法原料虎眼萬(wàn)年青334g、白花蛇舌草150g、半枝蓮150g、丹參75g、虎杖67g、溫郁金75g、人參75g、北黃芪150g、東亞鉗蝎30g、少棘巨蜈蚣30g計(jì)十味組方。
制備方法取虎眼萬(wàn)年青，用實(shí)施例1的方法得到提取物，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成細(xì)粉備用；東亞鉗蝎、少棘巨蜈蚣三味粉碎成細(xì)粉備用；溫郁金酌予碎斷，置揮發(fā)油提取器中提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油另器收集備用；提取揮發(fā)油后的溫郁金與白花蛇舌草等六味加水8、8、6倍量煎煮3次，依次為3、2、1小時(shí)。濾過(guò)，合并3次濾液，濃縮至相對(duì)密度約1.12-1.18(80℃)，與上述細(xì)粉混勻，制粒，干燥，整粒，噴入溫郁金揮發(fā)油，裝入膠囊，即得本品。每粒裝0.35-0.4g。
實(shí)施例4虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)大鼠角叉菜膠足腫脹抗炎實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠150-220g，購(gòu)于中國(guó)人民解放軍208醫(yī)院，合格證號(hào)10-1010。
實(shí)驗(yàn)藥物實(shí)施例1制得的虎眼萬(wàn)年青提取物，進(jìn)一步制成細(xì)粉，含8.5％的水，陽(yáng)性對(duì)照藥物是消炎利膽片，廣東怡康制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)040306規(guī)格0.3g/片。
2.實(shí)驗(yàn)方法取SD大鼠50只，隨機(jī)分組，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.13g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物高劑量組(2.40g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物中劑量組(1.20g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物低劑量組(0.60g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，每天1次，于末次給藥1小時(shí)后，于每只鼠右后足腱膜下注射0.05％角叉菜膠0.15ml。預(yù)先測(cè)量每只鼠右后足的周長(zhǎng)，于注射0.05％角叉菜膠后1、2、3、4、6小時(shí)測(cè)量其足腫脹值，并以其與正常值的差作為腫脹程度，經(jīng)t檢查，結(jié)果見(jiàn)表4表4對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹的影響X±SD

注與對(duì)照組比較*p＜0.05**p＜0.01以下同。
由表4可以看出虎眼萬(wàn)年青提取物具有明顯的抗炎作用，并能持續(xù)4小時(shí)以上。
實(shí)施例5虎眼萬(wàn)年青膠囊對(duì)大鼠角叉菜膠足腫脹抗炎實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠150-220g，取自12中國(guó)人民解放軍208醫(yī)院，合格證號(hào)10-1010。
實(shí)驗(yàn)藥物虎眼萬(wàn)年青膠囊由實(shí)施例3制得。陽(yáng)性對(duì)照藥消炎利膽片，廣東怡康制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)040306規(guī)格0.3g/片。
2、方法及結(jié)果取SD大鼠50只，隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.20/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊高劑量組(1.8g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊中劑量組(0.9g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊低劑量組(0.45g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，每天1次。于末次給藥1小時(shí)后，于每只鼠右后足腱膜下注射0.05％角叉菜膠0.15ml。預(yù)先測(cè)量每只鼠右后足的周長(zhǎng)，于注入0.05％角叉菜膠后1、2、3、4、6小時(shí)測(cè)量其足腫脹值，并以其與正常值的差作為腫脹程度，經(jīng)t檢查，結(jié)果見(jiàn)表5表5對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹的影響X±SD

由表5可知虎眼萬(wàn)年青膠囊具有明顯的抗炎作用，并能持續(xù)4小時(shí)以上。
實(shí)施例6虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)大鼠膽汁分泌的影響1.實(shí)驗(yàn)材料同實(shí)施例4。
2.實(shí)驗(yàn)方法取大鼠50只，隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組，陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.13g/kg)，虎眼萬(wàn)年青提取物高劑量組(2.40g/kg)，虎眼萬(wàn)年青提取物中劑量組(1.20g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物低劑量組(0.60g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，每天一次。實(shí)驗(yàn)前將大鼠饑餓12小時(shí)，腹腔注射烏拉坦(1g/kg)麻醉，固定在手術(shù)臺(tái)上，膽總管用直徑為0.6mm的聚乙烯管插入，引流膽汁出腹腔，用10ml的離心管收集膽汁。術(shù)后用止血鉗夾閉腹壁創(chuàng)口，并用鹽水紗布覆蓋。待穩(wěn)定15min后，先收集1小時(shí)膽汁，然后各組大鼠分別由十二指腸注入不同劑量的藥物，再分別收集給藥后不同時(shí)間的膽汁，結(jié)果見(jiàn)表6表6對(duì)大鼠膽汁分泌的影響X±SD

表6結(jié)果表明虎眼萬(wàn)年青提取物可明顯地促進(jìn)膽汁流量。
實(shí)施例7虎眼萬(wàn)年青膠囊對(duì)大鼠膽汁分泌的影響1、實(shí)驗(yàn)材料同實(shí)施例5。
2、實(shí)驗(yàn)方法取大鼠50只，隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.20g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊高劑量組(1.8g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊中劑量組(0.9g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊低劑量組(0.45g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天，每天1次。實(shí)驗(yàn)前將大鼠饑餓12小時(shí)，腹腔注射烏拉坦(1g/kg)麻醉，固定在手術(shù)臺(tái)上，膽總管用直徑為0.6mm的聚乙烯管插入，引流膽汁出腹腔，用10ml的離心管收集膽汁。術(shù)后用止血鉗夾閉腹壁創(chuàng)口，并用鹽水紗布覆蓋。待穩(wěn)定15-20min后，先收集1小時(shí)膽汁，然后各組大鼠分別由十二指腸注入不同劑量的藥物，再分別收集給藥后不同時(shí)間的膽汁，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7對(duì)大鼠膽汁分泌的影響X±SD

表7結(jié)果表明虎眼萬(wàn)年青膠囊可明顯地促進(jìn)膽汁流量。
實(shí)施例8虎眼萬(wàn)年青提取物的鎮(zhèn)痛作用1.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠18-22g(購(gòu)于長(zhǎng)春生物制品所，合格證號(hào)SCXK-2003-0008)實(shí)驗(yàn)藥物同實(shí)施例4。
2.實(shí)驗(yàn)方法(1).對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響取小鼠50只，隨機(jī)分組，分別設(shè)為對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.40g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物高劑量組(3.50g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物中劑量組(1.75g/kg)、虎眼萬(wàn)年青提取物低劑組(0.90g/kg)。連續(xù)灌胃給藥5天。末次給藥1小時(shí)后腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，記錄15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。其結(jié)果各組分別是為33.2±15.6、20.4±8.6(P＜0.05)、15.2±7.2(P＜0.01)、16.8±6.6(P＜0.01)、20.8±9.7(P＜0.05)。
上述結(jié)果表明了虎眼萬(wàn)年青提取物具有較明顯的鎮(zhèn)痛作用。
(2)對(duì)熱板所致小鼠疼痛影響取小鼠50只，分組及給藥方法均同上述方法(1)。末次給藥1小時(shí)后，用熱板儀，測(cè)定給藥后1、3、5小時(shí)小鼠在1min后舔后足的次數(shù)，測(cè)前預(yù)選痛閾在10-60min內(nèi)的小鼠，結(jié)果見(jiàn)表8表8對(duì)熱板所致小鼠疼痛的影響X±SD

由表8可見(jiàn)虎眼萬(wàn)年青提取物可明顯降低熱板所致小鼠舔后足的次數(shù)，提示本發(fā)明具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
實(shí)施例9虎眼萬(wàn)年青膠囊的鎮(zhèn)痛作用。
1、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠18-22g，取自長(zhǎng)春生物制品所，合格證號(hào)SCXK-2002-0001。
實(shí)驗(yàn)藥物同實(shí)施例5。
2、實(shí)驗(yàn)方法(1)對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響取小鼠50只，隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.70g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊高劑量組(2.6g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊中劑量組(1.3g/kg)、虎眼萬(wàn)年青膠囊低劑量組(0.65g/kg)。連續(xù)給藥5天。末次給藥1小時(shí)后，腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，記錄15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。其結(jié)果各組分別為33.3±15.7、20.8±8.7(P＜0.05)、14.8±6.1(P＜0.01)、16.8±6.5(P＜0.01)、19.8±9.7(P＜0.05)。
上述結(jié)果表明了虎眼萬(wàn)年青膠囊具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
(2)對(duì)熱板所致小鼠疼痛影響取小鼠50只，分組及給藥方法均同上述方法(1)。末次給藥1小時(shí)后，用熱板儀，測(cè)定給藥后1、3、5小時(shí)小鼠在1min后舔后足的次數(shù)，測(cè)試前預(yù)選痛閾在10-60min內(nèi)的小鼠，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9對(duì)熱板所致小鼠疼痛的影響X±SD

由表9可見(jiàn)虎眼萬(wàn)年青膠囊可明顯降低熱板所致小鼠舔后足的次數(shù)，提示本發(fā)明具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
實(shí)施例10虎眼萬(wàn)年青提取物毒性試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠18-22g(購(gòu)于長(zhǎng)春生物制品所，合格證號(hào)SCXK-2002-0003)實(shí)驗(yàn)藥物實(shí)施例4制得的虎眼萬(wàn)年青提取物細(xì)粉。
2、實(shí)驗(yàn)方法取小鼠20只，于禁食24小時(shí)后，將虎眼萬(wàn)年青提取物細(xì)粉配制成30％的懸浮液，按0.2ml/10g體重劑量，于24小時(shí)內(nèi)給藥四次(1、2、3次間隔4小時(shí)，3-4次間隔10小時(shí))，連續(xù)灌胃給藥七日，觀察藥物的毒性反應(yīng)及受試動(dòng)物的死亡數(shù)。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠服藥后，由于給藥次數(shù)增加，僅表現(xiàn)安靜狀態(tài)。觀察七日，無(wú)一死亡。測(cè)得小鼠灌胃給藥劑量達(dá)24.0g/kg體重時(shí)，相當(dāng)于成人日服劑量0.15g/kg體重(人體重按60kg計(jì))的160倍。因限于給藥的濃度和體積無(wú)法再增加，故末求出LD50。
上述試驗(yàn)說(shuō)明了本發(fā)明的藥物毒性甚低，服用安全。
權(quán)利要求
1.一種虎眼萬(wàn)年青提取物，其至少含有虎眼萬(wàn)年青皂甙1-44wt％生物堿1-44wt％黃酮 1-12.5wt％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎眼萬(wàn)年青提取物，其特征在于至少含有虎眼萬(wàn)年青皂甙37.5wt％生物堿50wt％黃酮 12.5wt％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的虎眼萬(wàn)年青提取物，其特征在于還可進(jìn)一步含有多糖、氨基酸、微量元素、低聚糖等中的一種或幾種。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的虎眼萬(wàn)年青提取物在制備治療急、慢性膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的藥物中的用途。
5.一種提取權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的虎眼萬(wàn)年青提取物的方法，依次包括A.用有機(jī)溶劑提取虎眼萬(wàn)年青，過(guò)濾沉淀，除去有機(jī)溶劑，得到提取液；B.對(duì)A步驟的濾渣用水提取，得到提取液；C.合并A和B步驟得到的提取液；D.對(duì)C步驟的提取液進(jìn)行濃縮。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、丙酮、氯仿中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑為相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青1至10重量倍的乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述乙醇的用量為相當(dāng)于新鮮虎眼萬(wàn)年青1至2重量倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述水提取為用相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青的1至12重量倍的水煎煮1至4次。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于用水煎煮兩次，第一次加相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青8重量倍的水，煎煮2小時(shí)，第二次加相當(dāng)于虎眼萬(wàn)年青7重量倍的水，煎煮1小時(shí)。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于得到所有的提取液后，在20～90℃的溫度下進(jìn)行濃縮。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于濃縮是在80℃的溫度下進(jìn)行的減壓濃縮。
13.根據(jù)權(quán)利要求5至12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于可進(jìn)一步包含除去多糖的步驟。
14.一種可治療急、慢性膽囊炎及與膽囊炎相關(guān)疾病的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的虎眼萬(wàn)年青提取物、和藥學(xué)上可接受的載體。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物是以注射劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液、懸浮劑、乳劑的形式使用。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其特征在于還可以含有活血化瘀、舒肝利膽類(lèi)中藥。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其特征在于所述活血化瘀、舒肝利膽類(lèi)中藥是白花蛇舌草、半枝蓮、丹參、虎杖、溫郁金、人參、北黃芪、東亞鉗蝎、少棘巨蜈蚣或其結(jié)合。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至17中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的給藥途徑包括口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉。
19.根據(jù)權(quán)利要求14至18中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物的口服、注射劑量對(duì)應(yīng)制劑的收率以0.10-0.15g虎眼萬(wàn)年青/Kg體重/天為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種虎眼萬(wàn)年青提取物及其制備方法，含有治療有效量的此提取物的藥物組合物，以及它們?cè)谥委熂?、慢性膽囊炎及膽囊炎相關(guān)疾病中的用途。這種藥物組合物具有毒性小、作用強(qiáng)、安全有效等優(yōu)點(diǎn)，為膽囊炎及膽囊炎相關(guān)疾病的治療開(kāi)辟新的途徑，具有重要的社會(huì)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1672728SQ20041007413
公開(kāi)日2005年9月28日 申請(qǐng)日期2004年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月31日
發(fā)明者呂新波, 韓忠旭 申請(qǐng)人:呂新波, 韓忠旭