專(zhuān)利名稱(chēng)：一種干擾素聚乳酸－羥乙酸共聚物plga微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物活性藥物的生物可降解控釋微球的制備方法，屬于生物醫(yī)用高分子材料與生物活性藥物控釋制劑的交叉研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的高速發(fā)展，越來(lái)越多的多肽、蛋白質(zhì)藥物被研制出來(lái)，并在臨床應(yīng)用中表現(xiàn)出許多獨(dú)特的療效，例如胰島素、乙肝疫苗、干擾素等。但由于多肽和蛋白類(lèi)藥物生物半衰期短，穩(wěn)定性差，易被體內(nèi)酶代謝，且難以在胃腸道內(nèi)吸收，所以需要長(zhǎng)期、頻繁地注射給藥，阻礙了其在臨床上方便、廣泛和有效的使用。
基因重組人干擾素-α是采用生物高科技制備的產(chǎn)品，由帶有人干擾素基因的工程菌經(jīng)高效表達(dá)，并高度純化、冷凍干燥制成的乳白色粉末，其具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能，能抑制腫瘤增殖、抗病毒、和增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的作用。主要用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、病毒性疾病。由于干擾素口服失活，需要注射給藥，且在血液中的半衰期短、穩(wěn)定性差，易被體內(nèi)酶代謝，注射后很快就被清除或降解，為了達(dá)到療效，需要頻繁、大劑量及長(zhǎng)時(shí)間給藥，通常用法為每天肌內(nèi)注射50-200萬(wàn)IU，3個(gè)月為一療程。
利用生物降解聚合物微粒系統(tǒng)來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)藥物是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)主要方法，有報(bào)道，以聚乳酸-羥乙酸共聚物為載體的人生長(zhǎng)激素微球制劑，其藥效較每天注射一次，連續(xù)注射28天的效果更好。將干擾素制成聚乳酸微球，可達(dá)到提高藥物穩(wěn)定性，延長(zhǎng)作用時(shí)間，和使用方便的目的。國(guó)外在二十世紀(jì)九十年即有干擾素微球制劑的報(bào)道，其載體材料有白蛋白、明膠、和聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)等，PLGA微球因釋藥時(shí)間長(zhǎng)而較理想。
目前，國(guó)內(nèi)外科學(xué)家在研制緩釋微球制劑時(shí)，使用最多的生物降解高分子材料是聚乳酸-羥乙酸共聚物，因其具有良好的生物降解性、相容性和可吸收性，已被FDA批準(zhǔn)為藥用輔料。而且促黃體激素釋放激素、亮丙瑞林等聚乳酸緩釋微球產(chǎn)品已在國(guó)外正式上市。由于聚乳酸-羥乙酸共聚物作為藥用材料在國(guó)內(nèi)還沒(méi)有生產(chǎn)，而基因重組人干擾素-α在我國(guó)有多家廠(chǎng)家生產(chǎn)，價(jià)格適宜，如果將干擾素-α制成聚乳酸-羥乙酸共聚物緩釋微球制劑，將大大提高其附加值，不僅可以推動(dòng)生物技術(shù)藥物的開(kāi)發(fā)，而且還可以促進(jìn)藥用輔料的產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于采用聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)為載體，將干擾素-α制成微球制劑，達(dá)到增加藥物穩(wěn)定性，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，減少注射次數(shù)和用量，提高藥物療效與經(jīng)濟(jì)效益的目的，并提供干擾素微球的制備方法。
本發(fā)明的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)微球制備方法，是采用復(fù)乳-溶劑蒸發(fā)法。將聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)溶于有機(jī)溶媒中，將凍干注射用重組人干擾素溶解于含一定量穩(wěn)定劑的PBS溶液中形成內(nèi)水相，再將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中，攪拌乳化成初乳(W/O)。然后將初乳在攪拌的條件下加到PVA水溶液(外水相)中，乳化成復(fù)乳(W/O/W)。再在氯化鈉溶液中低速攪拌一定時(shí)間，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全。離心、洗滌、收集微球，冷凍干燥即得干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)微球粉末。
干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)微球制備方法，其特征在于制備方法包括以下步驟(1)聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)溶液的配制將聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)溶解于二氯甲烷中形成有機(jī)相，PLGA的濃度1％～60％(g/ml)；(2)干擾素PBS溶液的配制將凍干注射用重組人干擾素α溶解于含一定量穩(wěn)定劑的PBS(pH7.4磷酸鹽緩沖液)溶液中形成內(nèi)水相，干擾素的濃度為0.1％～10％(g/ml)，穩(wěn)定劑的濃度為1％～60％(g/ml)；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中形成初乳(W/O)，乳化速度為1000～10000rpm，乳化時(shí)間為1～10分鐘，有機(jī)相與內(nèi)水相的體積比為2∶1至50∶1；(4)復(fù)乳的制備把初乳在攪拌的情況下加到一定濃度的PVA(聚乙烯醇)和NaCl水溶液(外水相)中，乳化成復(fù)乳(W/O/W)，初乳與外水相的體積比為1∶5至1∶600；復(fù)乳形成的攪拌速度為1000～2900rpm，PVA溶液的濃度為0.2～10％(g/ml)，NaCl溶液的濃度為0.2～10％(g/ml)，乳化時(shí)間為5～20分鐘。
(5)微球的形成將復(fù)乳溶液轉(zhuǎn)移到NaCl水溶液中，低速攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，離心、洗滌后收集微球。NaCl濃度為0.2～10％(g/ml)，體積為復(fù)乳的2-6倍，攪拌速度為200～2000rpm，離心速度為500～8000rpm，離心時(shí)間為10-30分鐘，洗滌次數(shù)為2～6次。
(6)冷凍干燥本發(fā)明的積極效果是本發(fā)明采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備出的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)微球，微球制備工藝穩(wěn)定、可行，微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動(dòng)性好，粒度分布均勻，平均粒徑為30μm，載藥量為8％以上，包封率為40％左右，其體外釋藥性能符合長(zhǎng)效制劑特征。將干擾素-α制成緩釋微球制劑，可延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，提高藥物療效與經(jīng)濟(jì)效益。
附圖及說(shuō)明

圖1采用本發(fā)明制備的干擾素PLGA微球的光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡照片，觀(guān)察表面形態(tài)。
圖2為PLGA空白微球(1)、干擾素PLGA載藥微球(2)的DSC曲線(xiàn)。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 干擾素聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球的制備(1)聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)溶液的配制將400mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)溶解于2ml二氯甲烷中形成有機(jī)相(20％g/ml)。
(2)干擾素PBS溶液的配制將40mg凍干注射用重組人干擾素-α溶解于300μl 1％(g/ml)濃度的明膠溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中，在9000rpm條件下攪拌乳化1分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復(fù)乳的制備把初乳在2000rpm攪拌的情況下加到300ml含1％(g/ml)PVA和1％(g/ml)NaCl溶液(外水相)中，乳化10分鐘，乳化成復(fù)乳(W/O/W)；(5)微球的形成將復(fù)乳溶液轉(zhuǎn)移到3倍量1％(g/ml)NaCl水溶液中，1000rpm低速攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，1500rpm離心15分鐘，用蒸餾水洗滌3次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為冷凍干燥的條件為-40℃，4h；-25℃，10h；-10℃，20h；-4℃，48h。
將所制微球進(jìn)行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀干擾素聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球。
所得干擾素微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動(dòng)性好，粒度分布均勻，平均粒徑為10.71μm，載藥量為6.96％，包封率為32.90％，體外釋藥性能符合長(zhǎng)效制劑特征。
實(shí)施例2 干擾素聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球的制備(1)聚乳酸-羥乙酸共聚物(PLGA)溶液的配制將600mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)溶解于2ml二氯甲烷中形成有機(jī)相(30％g/ml)。
(2)干擾素PBS溶液的配制將60mg凍干注射用重組人干擾素-α溶解于300μl 30％PEG400溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中，在1000rpm條件下攪拌乳化3分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復(fù)乳的制備把初乳在1600rpm攪拌的情況下加到200ml含3％(g/ml)PVA和0.5％(g/ml)NaCl溶液(外水相)中，乳化20分鐘，乳化成復(fù)乳(W/O/W)；(5)微球的形成將復(fù)乳溶液轉(zhuǎn)移到2倍量1％(g/ml)NaCl水溶液中，1000rpm低速攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，1200rpm離心20分鐘，用蒸餾水洗滌3次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為冷凍干燥的條件為-40℃，4h；-25℃，10h；-10℃，20h；-4℃，48h。
將所制微球進(jìn)行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀干擾素聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球。
所得干擾素微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動(dòng)性好，粒度分布均勻，平均粒徑為12.36μm，載藥量為6.06％，包封率為36.80％，體外釋藥性能符合長(zhǎng)效制劑特征。
權(quán)利要求
1.一種干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物微球的制備方法，按以下步驟進(jìn)行將聚乳酸-羥乙酸共聚物溶于有機(jī)溶媒中；將凍干注射用重組人干擾素溶解于含穩(wěn)定劑的PBS溶液中形成內(nèi)水相；再將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中，攪拌乳化成初乳(W/O)；然后將初乳在攪拌的條件下加到PVA水溶液(外水相)中，乳化成復(fù)乳(W/O/W)；再在含電解質(zhì)的溶液中低速攪拌，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全；離心、洗滌、收集微球，冷凍干燥即得干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物PLGA微球粉末。
2.如權(quán)利要求1所述的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物微球制備方法，其特征在于制備方法包括以下步驟(1)聚乳酸-羥乙酸共聚物PLGA溶液的配制將聚乳酸-羥基乙酸共聚物PLGA溶解于有機(jī)溶劑中形成有機(jī)相，PLGA的濃度1％～60％(g/ml)；(2)干擾素PBS溶液的配制將凍干注射用重組人干擾素α溶解于含一定量穩(wěn)定劑的PBS溶液中形成內(nèi)水相，干擾素的濃度為3％～90％(g/ml)，穩(wěn)定劑的濃度為1％～60％(g/ml)；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進(jìn)有機(jī)相中形成初乳(W/O)，乳化速度為1000～10000rpm，乳化時(shí)間為1～10分鐘，有機(jī)相與內(nèi)水相的體積比為2∶1至50∶1；(4)復(fù)乳的制備把初乳在攪拌的情況下加到一定濃度的PVA和NaCl水溶液(外水相)中，乳化成復(fù)乳(W/O/W)；復(fù)乳形成的攪拌速度為1000～2900rpm，PVA溶液的濃度為0.2～10％(g/ml)，NaCl溶液的濃度為0.2～10％(g/ml)，乳化時(shí)間為5～20分鐘，初乳與外水相的體積比為1∶5至1∶600；(5)微球的形成將復(fù)乳溶液轉(zhuǎn)移到NaCl水溶液中，低速攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，離心、洗滌后收集微球；NaCl溶液的濃度為0.2～10％(g/ml)，體積為復(fù)乳的2-6倍，攪拌速度為200～2000rpm，離心速度為500～8000rpm，離心時(shí)間為10-30分鐘，洗滌次數(shù)為2～6次；(6)冷凍干燥
3.如權(quán)利要求1或2所述的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物微球制備方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
4.如權(quán)利要求1或2所述的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物微球制備方法，其特征在于所述的干擾素的穩(wěn)定劑為明膠或者PEG400。
5.如權(quán)利要求1或2所述的干擾素聚乳酸-羥乙酸共聚物微球制備方法，其特征在于將所制微球進(jìn)行冷凍干燥的條件為-40℃，4h；-25℃，10h；-10℃，20h；-4℃，48h。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種干擾素聚乳酸－羥乙酸共聚物(PLGA)微球的制備方法，其特征在于采用復(fù)乳－溶劑揮發(fā)法制備，聚乳酸－羥乙酸共聚物(PLGA)為微球載體，凍干注射用重組人干擾素－α為包裹對(duì)象，所制得的干擾素微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，粒徑分布在30微米以下，載藥量可達(dá)8％以上，包封率在40％左右，體外釋藥性能符合長(zhǎng)效制劑特征。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1660412SQ20041007762
公開(kāi)日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月27日
發(fā)明者徐安龍, 楊帆, 高建萍, 趙耀明, 王磊, 董美玲 申請(qǐng)人:中山大學(xué)