專利名稱：枳實(shí)總黃酮及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種單味中藥有效部位及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法，特別是涉及枳實(shí)總黃酮及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
消化不良包括功能性和器質(zhì)性消化不良兩類。無(wú)組織結(jié)構(gòu)和生化改變的消化不良可以認(rèn)為是功能性消化不良，臨床表現(xiàn)可見(jiàn)到上腹不適、飽脹、隱痛、燒心、噯氣、早飽或餐后飽脹加重等，癥狀持續(xù)時(shí)間超過(guò)4周。消化不良在成年人很常見(jiàn)，且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，患者常多次就診，耗費(fèi)巨大，在國(guó)、內(nèi)外均已引起密切關(guān)注。各國(guó)報(bào)道的消化不良的患病率在20％～49％之間。目前，促動(dòng)力藥是主要的治療藥物。其中，除多潘立酮外，其余的藥物均因存在的副作用而使其使用受到限制。
近年來(lái)，中藥治療功能性消化不良的研究報(bào)道甚多，顯示了中藥對(duì)該病良好的治療效果，而且通過(guò)對(duì)枳實(shí)消痞丸進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)體現(xiàn)消導(dǎo)之法的藥物(枳實(shí)、厚樸、麥芽)促進(jìn)胃排空的作用最為明顯。通過(guò)查閱《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部、原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑1～20冊(cè)、新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)1～16冊(cè)和《中華人民共和國(guó)藥典》1995年版增補(bǔ)本、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心編輯的新藥數(shù)據(jù)庫(kù)，有132種用于消化不良的中成藥，但未見(jiàn)有明確用于功能性消化不良的中成藥。而且，市售的枳實(shí)藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為柚皮苷含量的高低，無(wú)法保證枳實(shí)藥材中新橙皮苷有較高含量。
因此，從枳實(shí)中提取得到枳實(shí)總苷并制成臨床可接受的劑型，并提供能保證有效成分含量更高的質(zhì)量控制方法，用于運(yùn)動(dòng)障礙型功能性消化不良的治療，可以填補(bǔ)這個(gè)空白，具有有良好的開(kāi)發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種枳實(shí)總黃酮的制備方法；本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種枳實(shí)總黃酮的質(zhì)量控制方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種枳實(shí)總黃酮片劑的制備方法；本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供一種枳實(shí)總黃酮在促進(jìn)胃腸動(dòng)力方面的用途。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
枳實(shí)總黃酮的制備方法為取枳實(shí)做成枳實(shí)藥材粗粉，加5～7倍量60％～80％的乙醇，回流提取2～4次，每次1～3小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入5～8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲ尤?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入6～8倍量95％～100％的乙醇，回流提取2小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入4～10倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮原料。
本發(fā)明枳實(shí)總黃酮的含量測(cè)定方法為A.照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)測(cè)定。
對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測(cè)定法取供試品溶液，以甲醇為空白，在283nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；枳實(shí)總黃酮原料含總黃酮以柚皮苷計(jì)，應(yīng)在60％～80％間。
B.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；30～40∶60～70的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成對(duì)照品混合溶液，濃度分別為0.1mg/ml和0.3mg/ml；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉0.02g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；枳實(shí)總黃酮原料柚皮苷含量應(yīng)在10％～13％范圍內(nèi)。
按藥劑學(xué)方法，可將本發(fā)明枳實(shí)總黃酮作為原料，按常規(guī)藥劑學(xué)方法，制備成各種臨床可接受的劑型，包括但不限于如下劑型當(dāng)中的一種片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑等。
取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉，加入適量低取代羥丙基纖維素、可溶性淀粉，混勻，60％～80％乙醇制粒，干燥，過(guò)篩，加入1％硬脂酸鎂，壓片，薄膜包衣，即得本發(fā)明片劑，0.3克/片，每日三次，每次兩片。
用本發(fā)明枳實(shí)總黃酮制成的各種制劑如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑等，可按如上所述枳實(shí)總黃酮原料的含量測(cè)定方法對(duì)枳實(shí)總黃酮各種制劑進(jìn)行測(cè)定，樣品量可按本發(fā)明片劑的日服用量折合為其他制劑的日服用量取樣。經(jīng)測(cè)定，本發(fā)明片劑總黃酮含量以柚皮苷計(jì)，為135～150mg/片；本發(fā)明片劑柚皮苷為18～22mg/片。
已有報(bào)道中，枳實(shí)有效部位總提物的含量在30％左右，還沒(méi)有針對(duì)本發(fā)明中主要兩個(gè)黃酮成分柚皮苷、新橙皮苷的提取工藝報(bào)道，我們對(duì)本發(fā)明工藝進(jìn)行了進(jìn)一步水洗-醇沉純化，新橙皮苷含量可以達(dá)到90％純度，本發(fā)明制劑采用了兩種方法測(cè)量總黃酮紫外分光光度法、高效液相色譜法測(cè)定柚皮苷、新橙皮苷，含量均在50％以上，可控性好。
而且，枳實(shí)總黃酮的制備工藝簡(jiǎn)單，適合大生產(chǎn)，每噸加工成本(包括藥材)僅為2萬(wàn)元，所用試劑還可回收，所用標(biāo)準(zhǔn)品已有成熟的制備方法。而且本發(fā)明枳實(shí)總黃酮的質(zhì)量控制方法，把枳實(shí)總黃酮原料中枳實(shí)總黃酮含量控制在60％～80％間，柚皮苷含量控制在10％～13％間，新橙皮苷含量控制在50％～70％范圍內(nèi)，使枳實(shí)總黃酮原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具備了可控性。
由本發(fā)明枳實(shí)總黃酮制備而成的片劑，其服藥量較一般的復(fù)方制劑要少，服用方便，而且能嚴(yán)格地控制產(chǎn)品質(zhì)量。再加之患病人群之眾，當(dāng)有良好的市場(chǎng)前景，不僅可帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益，而且通過(guò)改善癥狀，提高患者的生活質(zhì)量而能發(fā)揮出一定的社會(huì)效益。
同時(shí)，采用室溫條件下留樣觀察的方法，對(duì)按本發(fā)明制備工藝制備的三批枳實(shí)總黃酮原料，三批本發(fā)明枳實(shí)總黃酮片劑進(jìn)行穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明本發(fā)明原料和制劑均質(zhì)量穩(wěn)定，基本無(wú)變化。
經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)，本發(fā)明枳實(shí)總黃酮能提高小鼠小腸推進(jìn)率，促進(jìn)正常小鼠小腸運(yùn)動(dòng)及拮抗阿托品所致的小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能的抑制，對(duì)新斯的明所致的小鼠小腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)無(wú)明顯的影響；枳實(shí)總黃酮能明顯促進(jìn)胃的排空。枳實(shí)總黃酮高、低劑量對(duì)0.6％醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)無(wú)明顯影響，說(shuō)明其無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用；枳實(shí)總黃酮低、高劑量對(duì)于胃酸、胃蛋白酶的影響不明顯；對(duì)于25％乙醇+20mmol/L水楊酸所致的大鼠實(shí)驗(yàn)性胃炎無(wú)明顯的影響；枳實(shí)總黃酮對(duì)于家兔離體腸平滑肌的收縮有抑制作用，可明顯減少其收縮力，既能使乙酰膽堿所致過(guò)度亢進(jìn)的兔腸肌抑制，又能使阿托品所致過(guò)度抑制的兔腸肌興奮，說(shuō)明其有雙向調(diào)節(jié)作用。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明但不限于本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1枳實(shí)總黃酮提取純化工藝技術(shù)條件優(yōu)選研究(1)乙醇濃度初選 濃度分別為50％、60％、70％、80％，提取2次，2小時(shí)/次。藥液經(jīng)紗布過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮成稠膏，減壓真空干燥。比較其出膏率和有效成分的提取率(以新橙皮苷和柚皮苷總量為指標(biāo))的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1不同濃度乙醇提取結(jié)果

根據(jù)上述結(jié)果，選用較高濃度的乙醇提取，其浸膏黃酮苷含量較高，易于凈化處理。
(2)醇提工藝優(yōu)選為了研究枳實(shí)醇提的最佳工藝，我們對(duì)醇提工藝采用正交試驗(yàn)法，在藥材等量的前提下，以乙醇為溶媒，提取凈化工藝以多提取、少破壞、時(shí)間短、消耗小、質(zhì)量好為原則進(jìn)行優(yōu)選，比較其不同加醇量、回流時(shí)間、回流次數(shù)以及不同的醇提濃度對(duì)其出膏率和有效成份(以新橙皮苷和柚皮苷總量為指標(biāo))提取率的影響。
根據(jù)初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選提取工藝，以不同加醇量、回流時(shí)間、回流次數(shù)、醇提濃度4因素3水平，采用L9(34)正交表，進(jìn)行正交試驗(yàn)見(jiàn)表2～表6。
表2醇提工藝正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

按照L9(34)正交表安排9次試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3表3醇提工藝正交試驗(yàn)、L9(34)計(jì)算表

表4方差分析表

F1-0.01(2，∞)＝4.61 F1-0.05(2，∞)＝3.0 F1-0.10(2，∞)＝2.3從試驗(yàn)結(jié)果和方差分析表上看，因素D、B、A對(duì)結(jié)果有非常顯著的影響，C對(duì)結(jié)果影響較小，影響順序?yàn)镈＞B＞A＞C。
表5、L9(34)計(jì)算表

表6方差分析表

F1-0.01(2，∞)＝4.61 F1-0.05(2，∞)＝3.0 F1-0.10(2，∞)＝2.3從試驗(yàn)結(jié)果和方差分析表上看，因素A、D對(duì)結(jié)果有非常顯著的影響，B和C對(duì)結(jié)果有一定影響，影響順序?yàn)镈＞A＞B＞C。
由上述兩方差結(jié)果可以看出，提取次數(shù)和醇濃度為出膏量及總苷提取量的主要影響因素，取其最佳條件為60％乙醇，提取時(shí)間、乙醇用量在設(shè)定選擇范圍內(nèi)，影響較小，考慮到實(shí)際生產(chǎn)的需要，選擇加醇量6倍，每次2小時(shí)。
在其他最佳工藝條件基礎(chǔ)上，進(jìn)一步考察提取次數(shù)(1、2、3、4)，確立最佳提取次數(shù)，見(jiàn)表7。
表7醇提工藝最佳提取次數(shù)考察

由上表可見(jiàn)，在醇濃度、醇用量、提取時(shí)間最佳工藝條件下，提取2次，黃酮苷提取轉(zhuǎn)移率已達(dá)到92.8％，從節(jié)能角度考慮，選擇提取次數(shù)為2次。綜合考慮，選擇最后的最佳工藝為A1B2C2D2。
(3)黃酮類的分離純化根據(jù)枳實(shí)黃酮類成分水溶性較小的特點(diǎn)，采用水沉(第一次)-高濃度醇提-水沉工藝(第二次)去除水溶性較大的雜質(zhì)成分，并分別采用稠膏直接加水沉淀(I)、稠膏加淀粉-干燥-水洗(II)、稠膏加微粉硅膠-干燥-水洗(III)、稠膏加水分散-食鹽鹽析(IV)、干膏細(xì)粉直接水洗(V)、干膏細(xì)粉水分散-食鹽鹽析(VI)、稠膏堿溶-酸沉(VII)等純化工藝進(jìn)行了比較，以去除藥材殘?jiān)退苄噪s質(zhì)，其工藝優(yōu)選結(jié)果見(jiàn)表8。
表8枳實(shí)醇提取物純化工藝研究

研究表明，由于枳實(shí)中含有大量的果膠，使得第一次水沉工藝(果膠含量高時(shí))易產(chǎn)生沉淀溶膠分散現(xiàn)象，黃酮類成分不易下沉，給生產(chǎn)帶來(lái)困難。通過(guò)采用工藝VII，沉淀明顯，易工業(yè)化生產(chǎn)，且食鹽可回收，經(jīng)兩次水洗，沉淀物中黃酮即可達(dá)到新藥要求，且除去了食鹽，操作步驟簡(jiǎn)單。
在此基礎(chǔ)上，對(duì)工藝VII進(jìn)行了優(yōu)化篩選1.水沉鹽析工藝稀醇提取后的干膏，其中含有大量的水溶性雜質(zhì)成分，其總黃酮苷含量約為10％，沒(méi)有達(dá)到技術(shù)要求，因此采取水洗沉方法去除水溶性雜質(zhì)。不同加水量試驗(yàn)結(jié)果如下表9表9第一次水沉工藝考察

考慮到黃酮苷有一定的水溶性，為了在保證溶解、凈化的基礎(chǔ)上，盡量減少黃酮苷的損失，而且在后面還有一步水洗除鹽、凈化過(guò)程，因此在第一次水沉?xí)r，在保證干粉充分溶散的基礎(chǔ)上，盡量減少加水量，故選用加5倍量的水洗沉。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)，常溫條件下，在水中加入1/5重量的的食鹽即能出現(xiàn)飽和現(xiàn)象(20℃時(shí)氯化鈉固體在水中的溶解度36g)，考慮到水沉液密度較大，且為了方便后續(xù)鹽的凈化，不宜在鹽析時(shí)沉淀過(guò)多的鹽，因此確立該工藝的加鹽量為水量的1/5。通過(guò)鹽析來(lái)減小枳實(shí)黃酮的溶解度、加快沉降過(guò)程。
2.醇提凈化工藝2.1乙醇濃度選擇20℃時(shí)氯化鈉固體在100％乙醇中的溶解度為0.07g。
100℃時(shí)氯化鈉固體在水中的溶解度為40g。
因此選用高濃度的乙醇(95％)提取作為除鹽的第一道工序，并實(shí)現(xiàn)了第二步純化。
2.2乙醇用量比較取等量的鹽析后稠膏100ml，分別加入6倍、8倍量的95％乙醇回流2小時(shí)，結(jié)果提取后的干膏量分別為18.5g、19.4g，從省時(shí)、節(jié)能考慮，選用加入6倍量95％乙醇。
3.水沉工藝在經(jīng)過(guò)前兩步次的凈化后，仍有少量食鹽未除去，需進(jìn)一步純化處理，因此增加第二次水洗沉工藝，并對(duì)加水量進(jìn)行了考察，結(jié)果如下表所示表10第二次水沉工藝考察

上述結(jié)果顯示，經(jīng)前兩次純化后，黃酮苷在第二次水洗時(shí)易沉降。經(jīng)10倍量水洗沉，黃酮苷含量達(dá)到了中藥新藥的要求，有效部位含量大于50％，因此第二次水洗沉選用加入10倍量水。
實(shí)驗(yàn)例2枳實(shí)總黃酮苷紫外分光光度法測(cè)定的方法學(xué)考察精密稱取柚皮苷2.47mg，用甲醇超聲定容于5ml容量瓶中，即得0.494mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。
取枳實(shí)總黃酮20mg精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
準(zhǔn)確量取0.10，0.20，0.30，0.40，0.50ml對(duì)照品儲(chǔ)備液分別置于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得系列對(duì)照品溶液。以甲醇為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VA)在283nm處測(cè)定吸收度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(見(jiàn)

圖1)。
1.線性關(guān)系考察表11線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

其回歸方程為A＝34.995 Cx-1.17491 r＝0..99972.精密度的測(cè)定將同一濃度的柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，用上述方法重復(fù)檢測(cè)5次。結(jié)果見(jiàn)表12表12精密度測(cè)定結(jié)果

3.再現(xiàn)性試驗(yàn)將批號(hào)為20020523的枳實(shí)總黃酮樣品液用上述方法重復(fù)操作5次，并測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表13表13再現(xiàn)性測(cè)定結(jié)果

4.樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為20020523的樣品溶液，放置3、6、9、12小時(shí)后，經(jīng)分光光度法測(cè)定，其總黃酮含量變化不大，說(shuō)明樣品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見(jiàn)表14。
表14穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

5.加樣回收率試驗(yàn)取批號(hào)20020523樣品5份，每份2.5mg，用甲醇定容于25mL容量瓶中，超聲20min，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液1mL于10mL容量瓶中，加入對(duì)照品儲(chǔ)備液150μL，甲醇定容。按上述方法測(cè)定加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表15。
表15加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

6.樣品測(cè)定取三批枳實(shí)總黃酮干粉約20mg，精密稱定，按上述方法制備樣品液，將樣品液在283nm處測(cè)定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算枳實(shí)藥材中總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表16。
表16樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，枳實(shí)總黃酮限度范圍確定為含總黃酮以柚皮苷計(jì)60％～80％。
實(shí)驗(yàn)例3枳實(shí)總黃酮苷高效液相色譜法測(cè)定的方法學(xué)考察1、儀器和色譜條件及試藥1.1儀器 Waters 600 controller；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器(40KHz，500W)；UV-265紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。
1.2色譜條件 色譜柱采用Kromasil C18(150×4.6mm，5um)，流動(dòng)相為甲醇-水＝34∶66，檢測(cè)波長(zhǎng)λ＝285nm，流速為1ml/min，柱溫為室溫，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
1.3試藥 柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，批號(hào)0722-9805新橙皮苷對(duì)照品(首都師范大學(xué)分析測(cè)試中心提供)所用試劑甲醇，韋斯實(shí)驗(yàn)用品有限公司；水為超重過(guò)濾水。
1.4對(duì)照品來(lái)源及純度柚皮苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)0722-9805。新橙皮苷對(duì)照品由首都師范大學(xué)分析測(cè)試中心提供，純度99.9％。
2、方法學(xué)考察2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品做了紫外掃描，從光譜圖可以看出柚皮苷和新橙皮苷在285處有最大吸收值，故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為285nm。
2.2提取溶劑的確定試驗(yàn)中考察了提取溶劑的影響，用甲醇、50％甲醇及30％甲醇可以將柚皮苷和新橙皮苷從樣品中提取出來(lái)，但用50％甲醇及30％甲醇提取率低，故選擇提取溶劑為甲醇。
2.3提取時(shí)間的確定試驗(yàn)中考察了提取時(shí)間的影響，精密稱取樣品0.01g，加入甲醇超聲處理，取不同時(shí)間段的提取液進(jìn)行HPLC分析，記錄峰面積積分值。結(jié)果見(jiàn)表17表17提取時(shí)間考察結(jié)果

由測(cè)定數(shù)據(jù)看出，樣品超聲處理20分鐘，峰面積積分值已基本穩(wěn)定，選擇超聲處理20分鐘。
2.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對(duì)照品0.58mg，新橙皮苷對(duì)照品1.56mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成對(duì)照品混合溶液，分別為0.116mg/mL和0.312mg/mL。
供試品溶液的制備 取本品粉末，精密稱取約0.02g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，超聲處理(功率100W，頻率40KHZ)20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。
分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
分析色譜圖可知對(duì)照品、供試品中柚皮苷和新橙皮苷峰的保留時(shí)間基本一致，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不少于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算不少于1500。
2.5線性關(guān)系考察精密吸取上述對(duì)照品混合溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL，進(jìn)行HPLC測(cè)定，記錄色譜圖；以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖2、圖3)，并進(jìn)行回歸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。
表17-1柚皮苷線性關(guān)系考察結(jié)果

經(jīng)計(jì)算，回歸方程為Y＝2212410X-45121.7 R＝0.99938；結(jié)果表明柚皮苷進(jìn)樣量在0.464～2.320ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
表17-2新橙皮苷線性關(guān)系考察結(jié)果

經(jīng)計(jì)算，回歸方程為Y＝2122810X-64763.5 R＝0.99994；結(jié)果表明新橙皮苷進(jìn)樣量在1.248～6.240ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品，按供試品溶液制備方法制備后，分別在0、1、3、5、8小時(shí)測(cè)定，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表18表18穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果知，在八小時(shí)之內(nèi)信號(hào)基本穩(wěn)定。
2.7精密度試驗(yàn)取對(duì)照品混合溶液，照含量測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定五次，數(shù)據(jù)見(jiàn)表19表19精密度試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度和操作精密度較好。
2.8重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一樣品(約0.01g)5份，按供試品溶液的制備方法制備后，進(jìn)行HPLC測(cè)定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表20表20重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

試驗(yàn)結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
2.9回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同批號(hào)樣品5份，分別加入已知濃度的對(duì)照品混合溶液300ul(即含柚皮苷0.061mg、新橙皮苷0.154mg)，按供試品溶液制備方法制備后，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，以下式計(jì)算回收率，數(shù)據(jù)見(jiàn)表21、表22回收率％＝(測(cè)出總量-樣品中含量)×100％/加入對(duì)照品量表21柚皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算平均回收率為96.50％，RSD％＝1.402％表22新橙皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算平均回收率為97.59％，RSD％＝1.825％2.10樣品測(cè)定結(jié)果精密稱取三批樣品，每批3份，每份約0.01g，按供試品溶液的制備方法制備后，進(jìn)行HPLC測(cè)定，記錄芍藥苷峰面積積分值，計(jì)算柚皮苷和新橙皮苷含量，結(jié)果見(jiàn)表23
表23樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果和國(guó)家《藥品注冊(cè)管理辦法》中中藥、天然藥物第五類原料的有關(guān)規(guī)定，確立本原料總黃酮含量不得低于70％，柚皮苷含量不得低于12％，新橙皮苷含量不得低于38％。
實(shí)驗(yàn)例4本發(fā)明片劑制備工藝的研究根據(jù)出膏率和制劑經(jīng)驗(yàn)，在本發(fā)明片劑成型工藝中，選用低取代羥丙基纖維素、可溶性淀粉(1∶1)作為輔料，對(duì)潤(rùn)濕劑乙醇濃度(60％，70％，80％)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，用70％濕潤(rùn)(干粉∶乙醇＝5∶1)，18目篩擠壓制粒，70℃烘1h，20目篩除去大顆粒，60目篩去小顆粒，整粒后，細(xì)粉少、顆粒整齊、硬度合適，成型后不易碎；加入1％硬脂酸鎂，壓片成型，其崩解時(shí)限在40分鐘左右，符合片劑要求。
實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明片劑照紫外分光光度法測(cè)定的試驗(yàn)條件及方法學(xué)考察1.空白試驗(yàn) 按處方量比例稱取微晶纖維素和微粉硅膠，用甲醇溶解，用與原料總黃酮相同的測(cè)定方法測(cè)定其吸收度。
2.再現(xiàn)性試驗(yàn) 以技術(shù)方案中所述的總黃酮測(cè)定方法對(duì)同一批樣品(批號(hào)20020620)進(jìn)行再現(xiàn)性試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表24。
表24再現(xiàn)性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

3.回收率試驗(yàn) 取批號(hào)20020620樣品5份，每份15mg，用甲醇定容于100mL容量瓶中，超聲20min，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液1mL于10mL容量瓶中，加入對(duì)照品儲(chǔ)備液150μL，甲醇定容。按技術(shù)方案所述方法測(cè)定加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表25。
表25回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

4.樣品測(cè)定 取本發(fā)明片劑即理氣消痞片約30mg，精密稱定，按技術(shù)方案所述方法制備樣品液，將樣品液在283nm處測(cè)定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算枳實(shí)藥材中總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表26。
表26樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，確定1片含總黃酮以柚皮苷計(jì)為105mg。
實(shí)驗(yàn)例6本發(fā)明片劑照高效液相色譜法測(cè)定的方法學(xué)考察1.測(cè)定波長(zhǎng)的選擇在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品做了紫外掃描，從光譜圖可以看出柚皮苷和新橙皮苷在285處有最大吸收值，故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為285nm。
2.提取溶劑的確定試驗(yàn)中考察了提取溶劑的影響，用甲醇、50％甲醇及30％甲醇可以將柚皮苷從樣品中提取出來(lái)，但用50％甲醇及30％甲醇提取率低，故選擇提取溶劑為甲醇。
3.提取時(shí)間的確定試驗(yàn)中考察了提取時(shí)間的影響，精密稱取樣品0.015g，加入甲醇超聲處理，取不同時(shí)間段的提取液進(jìn)行HPLC分析，記錄峰面積積分值。結(jié)果見(jiàn)表27表27提取時(shí)間考察結(jié)果

由測(cè)定數(shù)據(jù)看出，樣品超聲處理20分鐘，峰面積積分值已基本穩(wěn)定，選擇超聲處理20分鐘。
4.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)對(duì)照品溶液的制備精密稱取柚皮苷對(duì)照品0.58mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成對(duì)照品混合溶液，分別為0.116mg/mL和0.312mg/mL。
供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約0.015g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，超聲處理(功率100W，頻率40KHZ)20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。
分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
分析色譜圖可知對(duì)照品、供試品柚皮苷的保留時(shí)間基本一致，理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不得少于1500。
5.線性關(guān)系考察精密吸取上述對(duì)照品混合溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，進(jìn)行HPLC測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表28；以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖4)，并進(jìn)行回歸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。
表28柚皮苷線性關(guān)系考察結(jié)果

經(jīng)計(jì)算，回歸方程為Y＝2231800X-44440.8 R＝0.99982；結(jié)果表明柚皮苷進(jìn)樣量在0.232～1.160ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
6.穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品，按供試品溶液制備方法制備后，分別在1、2、3、5、8小時(shí)測(cè)定，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表29表29穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果知，在八小時(shí)之內(nèi)信號(hào)基本穩(wěn)定。
7.精密度試驗(yàn)取處理后的同一樣品，照技術(shù)方案所述方法重復(fù)測(cè)定五次，數(shù)據(jù)見(jiàn)表30表30精密度試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度和操作精密度較好。
8.重現(xiàn)性試驗(yàn)精密稱取同一樣品(約0.15g)5份，按供試品溶液的制備方法制備后，進(jìn)行HPLC測(cè)定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表31表31重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

試驗(yàn)結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。
9.回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同批號(hào)樣品5份，分別加入已知濃度的對(duì)照品混合溶液300ul(即含柚皮苷0.064mg)，按供試品溶液制備方法制備后，照技術(shù)方案所述方法測(cè)定含量，以下式計(jì)算回收率，數(shù)據(jù)見(jiàn)表32回收率％＝(測(cè)出總量-樣品中含量)×100％/加入對(duì)照品量表32柚皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算平均回收率為99.07％，RSD％＝0.908％10.樣品測(cè)定結(jié)果按技術(shù)方案所述方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表33表33樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)上述三批中試產(chǎn)品的測(cè)定結(jié)果，確立本發(fā)明片劑中柚皮苷標(biāo)示量，限度范圍為標(biāo)示量的90％～110％。
實(shí)驗(yàn)例7枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響(墨汁法)將小鼠按體重隨機(jī)分為8組，每組10只，即枳實(shí)總黃酮多劑量組(4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg)，莫沙必利組和生理鹽水組。
取禁食24小時(shí)的小鼠分別灌服八種墨汁液混懸液20ml/kg，給藥后15分鐘脫頸椎處死，打開(kāi)腹腔，分離腸系膜，剪取上端至幽門，下端至回盲部，置于托盤(pán)上，輕輕將小腸拉成直線，測(cè)定總長(zhǎng)度，量出從幽門至墨汁前沿的距離作為腸內(nèi)推進(jìn)距離。墨汁推進(jìn)率＝墨汁在小腸中的推進(jìn)距離/小腸全長(zhǎng)×100％。結(jié)果見(jiàn)表34
表34枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
從表34可看出，與生理鹽水組比較，枳實(shí)總黃酮4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg組和莫沙必利組均能明顯提高小鼠小腸推進(jìn)率，表明有促進(jìn)小腸運(yùn)動(dòng)的作用。
實(shí)驗(yàn)例8枳實(shí)總黃酮對(duì)阿托品所致小鼠腸道推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響將小鼠隨機(jī)分為9組，每組10只，即枳實(shí)總黃酮多劑量組(4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg)，阿托品組(1.5mg/Kg)、莫沙必利組和生理鹽水組，以上藥物均含有10％炭末。
取禁食24小時(shí)的各組小鼠，空白組(生理鹽水組)、模型組灌胃給以生理鹽水、其余分別灌服各不同濃度的藥物，給藥容量為20ml/Kg，給藥前10min空白組im生理鹽水、其余各組分別im1.5mg/Kg硫酸阿托品注射液，給藥容量為5ml/Kg，給藥后15分鐘脫頸椎處死，立即打開(kāi)腹腔，將消化道自幽門至直腸末端完整摘出，不加牽引平鋪于玻璃板上，測(cè)其全長(zhǎng)并記錄炭末前沿互幽門的距離作為腸內(nèi)推進(jìn)距離。炭末推進(jìn)率＝炭末在全腸中的推進(jìn)距離/全腸總長(zhǎng)×100％。結(jié)果見(jiàn)表35表35枳實(shí)總黃酮對(duì)阿托品所致小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)抑制的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；與模型組比較，△P＜0.05△△P＜0.01。
從表35可看出，與生理鹽水組比較，阿托品組小鼠腸推進(jìn)率明顯減少(P＜0.001)，枳實(shí)總黃酮?jiǎng)┝?g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg組均能明顯提高阿托品所至小鼠腸運(yùn)動(dòng)功能抑制推進(jìn)率，表明對(duì)于阿托品所致的小鼠推進(jìn)運(yùn)動(dòng)抑制有促進(jìn)的作用。
實(shí)驗(yàn)例9枳實(shí)總黃酮對(duì)新斯的明所致小鼠小腸推進(jìn)功能亢進(jìn)的影響將小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，即枳實(shí)總黃酮多劑量組(4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg)，莫沙必利組、新期的明組(0.08mg/Kg)和生理鹽水組，以上藥物均含有10％炭末。
取禁食24小時(shí)的各組小鼠，空白組(生理鹽水組)、模型組灌胃給以生理鹽水、其余分別灌服各不同濃度的藥物，給藥容量為20ml/Kg，給藥前10min空白組im生理鹽水、其余各組分別im0.08mg/Kg甲基硫酸新斯的明注射液，給藥容量為5ml/Kg，給藥后15分鐘脫頸椎處死，立即打開(kāi)腹腔，將消化道自幽門至小腸末端完整摘出，不加牽引平鋪于玻璃板上，測(cè)其全長(zhǎng)并記錄炭末前沿互幽門的距離作為腸內(nèi)推進(jìn)距離。炭末推進(jìn)率＝炭末在小腸中的推進(jìn)距離/小腸全長(zhǎng)×100％。結(jié)果見(jiàn)表36表36枳實(shí)總黃酮對(duì)新斯的明所致小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；從表36可看出，與生理鹽水組比較，新斯的明組小腸推進(jìn)率增加，說(shuō)明新斯的明可促進(jìn)小腸運(yùn)動(dòng)，而與新斯的明組比較，枳實(shí)總黃酮各組、莫沙必利組對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率無(wú)明顯差別，表明枳實(shí)總黃酮對(duì)新斯的明所致的小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能亢進(jìn)無(wú)明顯的作用。
實(shí)驗(yàn)例10枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用(扭體法)將小鼠動(dòng)物隨機(jī)分為9組，每組10只，即枳實(shí)總黃酮各劑量組，杜冷丁組、模型組和對(duì)照組。
除杜冷丁組，各組均灌胃給藥，容量為20ml/Kg；杜冷丁組腹腔注射，給藥60分鐘后，各鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，觀察10分鐘內(nèi)各組出現(xiàn)扭體反應(yīng)小鼠只數(shù)(腹部?jī)?nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高)和次數(shù)，計(jì)算各藥鎮(zhèn)痛百分率，結(jié)果見(jiàn)表37。
表37枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛百分率的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
從表37可看出，除杜冷丁組外，其他各藥對(duì)醋酸所致小鼠疼痛(扭體反應(yīng))無(wú)抑制效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)例11枳實(shí)總黃酮對(duì)大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影響取SD大鼠50只，單籠禁食24小時(shí)，自由飲水，隨機(jī)均分五組空白組、枳實(shí)總黃酮低劑量組(0.5g/kg)、枳實(shí)總黃酮中劑量組(1g/kg)、枳實(shí)總黃酮高劑量組(2g/kg)和雷尼替丁組(30mg/kg)。用乙醚輕度麻醉動(dòng)物，剪去腹部的毛，常規(guī)消毒皮膚，于劍突下沿腹白線開(kāi)一個(gè)約2.5cm長(zhǎng)的切口，小心提起胃，在幽門與十二指腸結(jié)合部用縫線結(jié)扎，小心避開(kāi)血管。立即十二指腸注入各對(duì)應(yīng)不同濃度的藥液10ml/kg，空白組動(dòng)物同法給予等容量的生理鹽水蒸氣溶液?？p合后送回籠中，術(shù)后禁食禁水，4小時(shí)后脫臼處死動(dòng)物，取出胃，收集胃液于刻度離心管，以2000rpm離心10分鐘，吸取上清液計(jì)算胃液量，并進(jìn)行胃液分析。
(1)胃酸測(cè)定①取清晰胃液2ml置小燒杯中，加入托佛氏及酚酞指示劑各2滴，含游離酸時(shí)呈櫻紅色，如呈黃色則指示無(wú)游離酸。②用滴定管慢慢用0.01mol/L氫氧化鈉滴定，同時(shí)不斷搖動(dòng)，恰至紅色消失，出現(xiàn)姜黃色為止，即為游離酸滴定終點(diǎn)，記錄消耗0.01mol/L氫氧化鈉溶液的ml數(shù)。③繼續(xù)用氫氧化鈉滴定直至微紅色不退為止，即為總酸度滴定終點(diǎn)，記錄兩次滴定所消耗的0.02mol/L氫氧化鈉總毫升數(shù)。④結(jié)果計(jì)算游離酸(mEq/L)＝游離酸滴定終點(diǎn)消耗的氫氧化鈉溶液毫升數(shù)×10；總酸度(mEq/L)＝兩次滴定消耗的氫氧化鈉溶液毫升數(shù)×10；總酸排出量(μEq/h)＝總酸度×每小時(shí)的胃液量。
(2)胃蛋白酶測(cè)定采用麥特氏毛細(xì)玻管測(cè)定法，將內(nèi)徑1～2mm粗細(xì)均勻的毛細(xì)玻管裁成10cm長(zhǎng)，洗凈烤干。用雞蛋一枚，取其蛋清充分打勻后用紗布過(guò)濾，將上述毛細(xì)玻管利用虹吸作用，灌滿蛋清(注意管內(nèi)應(yīng)無(wú)氣泡)。然后放在85℃熱水中使蛋白固定，貯冰箱中備用。試驗(yàn)時(shí)取胃液1ml放入100ml的試劑瓶中，加0.05mol/L鹽酸溶液15ml搖勻，放進(jìn)蛋白管二根，蓋好瓶口，在37℃恒溫箱中孵育24小時(shí)，取出蛋白管，用尺測(cè)量?jī)啥送该鞑糠值拈L(zhǎng)度(mm)，以四端之值求其平均值。胃蛋白酶活性單位＝平均值2×16；胃蛋白酶排出量(活性單位/h)＝胃蛋白酶活性單位×每小時(shí)的胃液量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表38、39。
表38枳實(shí)總黃酮對(duì)大鼠胃酸的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
表39枳實(shí)總黃酮對(duì)大鼠胃蛋白酶的影響

采用t’檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
試驗(yàn)結(jié)果顯示枳實(shí)總黃酮高、中、低劑量對(duì)于胃酸、胃蛋白酶無(wú)明顯的影響。
實(shí)驗(yàn)例12枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠胃排空的影響取KM種小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)均分八組即枳實(shí)總黃酮多個(gè)劑量組(4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg)，莫沙必利組和生理鹽水組。
空白組灌胃20ml/kg生理鹽水，其余各組小鼠分別灌胃等容量各對(duì)應(yīng)不同濃度的藥液，連續(xù)給藥兩次，末次給藥后40分鐘，每只小鼠口服0.2ml0.1％的甲基橙溶液，20分鐘后脫臼處死小鼠，剖腹摘取胃置于小燒杯里，加入10ml蒸餾水，用小剪刀沿胃大彎剪開(kāi)胃，將胃內(nèi)容物充分洗于蒸餾水中，用NaCO3溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0～6.5，倒入刻度離心管，以2000rpm離心10分鐘，取上清液用721型分光光度計(jì)(波長(zhǎng)420nm)比色，用蒸餾水調(diào)零，測(cè)量溶液的光密度，測(cè)得的光密度為胃中甲基橙光密度。并以0.1％甲基橙0.2ml加入10ml蒸餾水搖勻后測(cè)量其光密度作為基數(shù)甲基橙光密度，并按下列公式計(jì)算甲基橙胃殘留率。甲基橙胃殘留率的高低可反映胃排空的快慢。

基數(shù)甲基橙光密度為0.256
表40枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠胃排空作用的影響

采用t檢驗(yàn)，與生理鹽水組比較，△P＜0.05。
試驗(yàn)結(jié)果顯示枳實(shí)總黃酮0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg均明顯促進(jìn)胃的排空，與空白組比較，均有顯著性差異。
實(shí)驗(yàn)例13對(duì)乙醇加水楊酸所致胃炎模型的影響取SD小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)均分五組即枳實(shí)總黃酮組(4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg)，雷尼替丁組和模型組。
模型組ig生理鹽水、枳實(shí)總黃酮組ig枳實(shí)總黃酮溶液，雷尼替丁組動(dòng)物ig30mg/ml雷尼替丁10ml/kg，30分鐘后各組分別灌胃乙醇+水楊酸溶液1ml/100g，拉脫頸椎處死大鼠，3.45mmlo/L甲醛固定15分鐘后取胃，肉眼觀察胃炎的發(fā)生情況，結(jié)果見(jiàn)表41。
病變判斷標(biāo)準(zhǔn)如下“-”無(wú)胃炎發(fā)生；“+”局部充血，輕度炎癥充血；“++”局部炎癥明顯；“+++”全胃彌漫性炎癥表41枳實(shí)總黃酮對(duì)小鼠胃排空作用的影響

采用t檢驗(yàn)，與模型組比較，P＞0.05；采用卡方檢驗(yàn)，與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
從上表可看出，枳實(shí)總黃酮對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃炎無(wú)明顯作用，既不能減輕炎癥癥狀，對(duì)于胃潰瘍也無(wú)改善作用。
實(shí)驗(yàn)例14枳實(shí)總黃酮對(duì)正常離體兔腸平滑肌的影響藥物及制劑枳實(shí)總黃酮混懸液1號(hào)20g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(1g/ml)；2號(hào)10g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.5g/ml)；3號(hào)5g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.25g/ml)；4號(hào)2.5g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.125g/ml)；5號(hào)1.25g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0625g/ml)；6號(hào)0.625g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0313g/ml)；7號(hào)0.313g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0156g/ml)；8號(hào)0.156g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0078g/ml)；9號(hào)0.078g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0039g/ml)；10號(hào)0.039g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.00195g/ml)；試驗(yàn)方法與結(jié)果(1)調(diào)節(jié)電子水浴鍋，保持恒溫，麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)的臺(tái)氏液30ml，保持37±0.5℃；(2)調(diào)整張力換能器，氧氣發(fā)生器、BL-410生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)；(3)離體腸平滑肌的制備取2Kg左右的家兔一只，用空氣栓塞處死，立即剖開(kāi)腹腔，取出回腸，置入盛有冷的臺(tái)式液中。沿腸壁分離腸系膜，用臺(tái)式液將腸內(nèi)容物沖洗干凈，將腸管剪成2-2.5cm的腸段。將腸管兩端穿線結(jié)扎，一端系于通氣鉤上，另一端系于肌張力換能器上，連接記錄儀。通氣調(diào)節(jié)速度為1-2個(gè)氣泡/s，不能影響腸肌的自主舒縮運(yùn)動(dòng)；(4)觀察正常腸肌運(yùn)動(dòng)，待舒縮穩(wěn)定后，描記一段腸肌的正常曲線，然后依次向浴槽中加入各種藥液0.3ml。每次加藥液前均不沖洗而計(jì)算累積藥物濃度，描記舒縮曲線；(5)藥液由低到高累加，枳實(shí)總黃酮組做10個(gè)標(biāo)本，全部加完后再?zèng)_洗一次，觀察腸肌能否恢復(fù)到給藥前，電腦自動(dòng)分析結(jié)果，并打印出描記曲線；
(6)結(jié)果見(jiàn)表42表42枳實(shí)總黃酮混懸液對(duì)離體腸平滑肌的影響

結(jié)果采用t檢驗(yàn)，與給藥前組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
從上表可看出，隨著藥物濃度的遞增，對(duì)離體腸平滑肌收縮頻率明顯增加，林0.6028g/L開(kāi)始，作用有顯著性差異；而枳實(shí)總黃酮在收縮力方面，隨著濃度增加，最大收縮力明顯降低，從0.1365g開(kāi)始，收縮力的降低呈現(xiàn)出顯著性差異；在最大舒張力方面，枳實(shí)總黃酮從0.1365g開(kāi)始呈增加的趨勢(shì)，但經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異。
實(shí)驗(yàn)例15枳實(shí)總黃酮對(duì)乙酰膽堿和阿托品所致離體兔腸平滑肌的影響藥物及制劑枳實(shí)總黃酮混懸液1號(hào)1.25g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0625g/ml)；2號(hào)0.625g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0313g/ml)；3號(hào)0.313g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0156g/ml)；4號(hào)0.156g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0078g/ml)；5號(hào)0.078g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.0039g/ml)；6號(hào)0.039g浸膏加臺(tái)氏液至20ml(0.00195g/ml)；試驗(yàn)方法與結(jié)果
(1)試驗(yàn)方法同上，待舒縮穩(wěn)定后，描記一段腸肌的正常曲線，然后依次向浴槽中加入乙酰膽堿或阿托品，描記舒縮曲線。再依次向浴槽中加入各種藥液0.3ml。每次加藥液前均不沖洗而計(jì)算累積藥物濃度，描記舒縮曲線；(2)藥液由低到高累加，每組做6個(gè)標(biāo)本，全部加完后再?zèng)_洗一次，觀察腸肌能否恢復(fù)到給藥前，電腦自動(dòng)分析結(jié)果，并打印出描記曲線；(3)結(jié)果見(jiàn)表43、44表43枳實(shí)總黃酮混懸液對(duì)乙酰膽堿所致離體腸平滑肌亢進(jìn)的影響

結(jié)果采用t檢驗(yàn)，與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。與乙酰膽堿組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；表44枳實(shí)總黃酮混懸液對(duì)阿托品所致離體腸平滑肌抑制的影響

結(jié)果采用t檢驗(yàn)，與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。與阿托品組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；從表43、表44可看出，乙酰膽堿對(duì)兔離體腸平滑肌有明顯的興奮作用，收縮頻率非常明顯加快，腸肌處于收縮痙攣狀態(tài)，而枳實(shí)總黃酮在較低劑量時(shí)能抑制乙酰膽堿的作用，使收縮痙攣的腸肌收縮頻率和幅度均明顯下降；阿托品對(duì)兔離體腸平滑肌有明顯的抑制作用，腸肌最大收縮力明顯下降，以上說(shuō)明枳實(shí)總黃酮對(duì)兔離體腸肌有雙向調(diào)節(jié)作用，既能使過(guò)度亢進(jìn)的腸肌抑制，又能使過(guò)度抑制的腸肌興奮。
說(shuō)明書(shū)附1柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3新橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖4柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)施例1枳實(shí)總黃酮的制備取枳實(shí)33kg做成粗粉，加6倍量60％的乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、60℃(0.1mpa)減壓干燥12小時(shí)至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入5倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，加?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入6倍量95％的乙醇，回流提取2小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、65℃(0.1mpa)減壓干燥8小時(shí)至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入10倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，70℃(0.1mpa)減壓干燥4小時(shí)至干，即得枳實(shí)總黃酮。
實(shí)施例2本發(fā)明片劑(理氣消痞片)的制備取枳實(shí)60kg，按實(shí)施例1制備枳實(shí)總黃酮，加入輔料低取代羥丙基纖維素0.5kg和可溶性淀粉0.5kg，混勻，用70％乙醇(干粉∶乙醇＝5∶1)濕潤(rùn)，18目篩擠壓制粒，70℃烘1小時(shí)，20目篩除去大顆粒，60目篩除去小顆粒，加入1％硬脂酸鎂0.03kg，壓片，薄膜包衣，得9615片，0.3克/片，每日三次，每次兩片。
實(shí)施例3本發(fā)明枳實(shí)總黃酮的質(zhì)量控制方法含量測(cè)定A.紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取枳實(shí)總黃酮20mg精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測(cè)定法取枳實(shí)總黃酮20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲處理20分鐘，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以甲醇為空白，在283nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；
枳實(shí)總黃酮原料含總黃酮以柚皮苷計(jì)，應(yīng)在60％～80％間；B.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；34∶66的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇適量制成對(duì)照品混合溶液，濃度分別為0.1mg/mL和0.3mg/mL；供試品溶液的制備取枳實(shí)總黃酮約0.02g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，以功率100W，頻率40KHZ的超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；枳實(shí)總黃酮原料柚皮苷含量應(yīng)在10％～13％范圍內(nèi)。
實(shí)施例4本發(fā)明片劑(理氣消痞片)的質(zhì)量控制方法含量測(cè)定A.照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明片劑20mg精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測(cè)定法取本發(fā)明片劑20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲處理20分鐘，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以甲醇為空白，在283nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；本發(fā)明片劑總黃酮含量以柚皮苷計(jì)，標(biāo)示量為150mg/片，限度范圍為標(biāo)示量的90％～110％；
B.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以34∶66甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇適量制成對(duì)照品混合溶液，濃度分別為0.1mg/mL和0.3mg/Ml；供試品溶液的制備取本發(fā)明片劑約0.015g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，以功率100W，頻率40KHZ的超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本發(fā)明片劑柚皮苷標(biāo)示量為20mg/片，限度范圍為標(biāo)示量的90％～110％。
實(shí)施例5枳實(shí)總黃酮的制備取枳實(shí)50kg做成枳實(shí)藥材粗粉，加5倍量80％的乙醇，回流提取4次，每次1小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，加?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入8倍量95％的乙醇，回流提取4小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入4倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
按實(shí)施例3所述的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含總黃酮72.28％，含柚皮苷12.49％。
實(shí)施例6枳實(shí)總黃酮的制備取枳實(shí)70kg做成枳實(shí)藥材粗粉，加7倍量75％的乙醇，回流提取2次，每次3小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入6倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲ尤?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置36小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入7倍量100％的乙醇，回流提取3小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲo置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
按實(shí)施例3所述的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含總黃酮72.35％，含柚皮苷12.89％。
實(shí)施例7理氣消痞片的制備取按實(shí)施例2制備的枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉70g，加入低取代羥丙基纖維素、可溶性淀粉，二者比例為1∶1，混勻，80％乙醇制粒，干燥，過(guò)篩，加入1％硬脂酸鎂，壓片，薄膜包衣，得500片，0.3克/片，每日三次，每次兩片。
按實(shí)施例4所述的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含總黃酮為154.55mg/片，含柚皮苷為21.72mg/片。
實(shí)施例8理氣消痞片的制備取按實(shí)施例3制備的枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉140g，加入低取代羥丙基纖維素、可溶性淀粉，混勻，60％乙醇制粒，干燥，過(guò)篩，加入1％硬脂酸鎂，壓片，薄膜包衣，得1000片，0.3克/片，每日三次，每次兩片。
按實(shí)施例4所述的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含總黃酮為154.56mg/片，含柚皮苷為21.54mg/片。
實(shí)施例9本發(fā)明片劑的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉140g，加入輔料，按常規(guī)制備方法，制成1000片，0.3克/片，3次/日，2片/次。
按實(shí)施例4所述的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含總黃酮為154.50mg/片，含柚皮苷為21.56mg/片。
實(shí)施例10本發(fā)明膠囊劑的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉1400克，加入1/3糊精輔料，按常規(guī)制備方法，制成膠囊劑。
實(shí)施例11本發(fā)明丸劑的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉1000克，加入輔料，按常規(guī)制備方法，制成丸劑。
實(shí)施例12本發(fā)明顆粒劑的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉700克，加入糊精輔料，按常規(guī)制備方法，制成顆粒劑。
實(shí)施例13本發(fā)明滴丸的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉900克，加入輔料，按常規(guī)制備方法，制成滴丸。
實(shí)施例14本發(fā)明口服液體制劑的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉800克，加入輔料，按常規(guī)制備方法，制成口服液體制劑。
實(shí)施例15本發(fā)明混懸液的制備取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉1200克，加入輔料，按常規(guī)制備方法，制成混懸液制劑。
權(quán)利要求
1.一種枳實(shí)總黃酮的制備方法，其特征在于該方法為取枳實(shí)做成粗粉，加5～7倍量60％～80％的乙醇，回流提取2～4次，每次1～3小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入5～8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，加?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢瑁洳仂o置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入6～8倍量95％～100％的乙醇，回流提取2小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入4～10倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
2.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮的制備方法，其特征在于該方法為取枳實(shí)做成粗粉，加6倍量60％的乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入5倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，加?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入6倍量95％的乙醇，回流提取2小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入10倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲo置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
3.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮的制備方法，其特征在于該方法為取枳實(shí)做成粗粉，加5倍量80％的乙醇，回流提取4次，每次1小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲ尤?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢瑁洳仂o置24小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入8倍量95％的乙醇，回流提取4小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入4倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
4.如權(quán)利要求1所述的枳實(shí)總黃酮的制備方法，其特征在于該方法為取枳實(shí)做成粗粉，加7倍量75％的乙醇，回流提取2次，每次3小時(shí)；醇溶液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入6倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌ⅲ尤?/5水量的食鹽，充分?jǐn)嚢?，冷藏靜置36小時(shí)；棄去上清液，取沉淀，加入7倍量100％的乙醇，回流提取3小時(shí)，靜置，取上清液，回收乙醇并進(jìn)一步濃縮、減壓干燥至干，干膏粉碎成細(xì)粉，加入8倍量水，充分?jǐn)嚢枞苌?，靜置過(guò)夜，棄去上清液，取沉淀，減壓干燥至干，即得枳實(shí)總黃酮。
5.一種枳實(shí)總黃酮的含量測(cè)定方法，其特征在于該方法為如下方法中的一種或幾種A、照紫外分光光度法測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測(cè)定法取供試品溶液，以甲醇為空白，在283nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；枳實(shí)總黃酮原料含總黃酮以柚皮苷計(jì)，應(yīng)在60％～80％間；B、照高效液相色譜法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；30～40∶60～70的甲醇—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成對(duì)照品混合溶液，濃度分別為0.1mg/ml和0.3mg/ml；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉0.02g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；枳實(shí)總黃酮原料柚皮苷含量應(yīng)在10％～13％范圍內(nèi)。
6.如權(quán)利要求5所述的一種枳實(shí)總黃酮的含量測(cè)定方法，其特征在于該方法為如下方法中的一種或幾種A、照紫外分光光度法測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20分鐘，搖勻，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測(cè)定法取供試品溶液，以甲醇為空白，在283nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；枳實(shí)總黃酮原料含總黃酮以柚皮苷計(jì)，應(yīng)在60％～80％間；B、照高效液相色譜法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；34∶66的甲醇—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，按新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的柚皮苷和新橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成對(duì)照品混合溶液，濃度分別為0.1mg/ml和0.3mg/ml；供試品溶液的制備稱取枳實(shí)總黃酮細(xì)粉0.02g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；枳實(shí)總黃酮原料柚皮苷含量應(yīng)在10％～13％范圍內(nèi)。
7.一種枳實(shí)總黃酮片劑的制備方法，其特征在于該方法為取枳實(shí)總黃酮原料細(xì)粉，加入輔料低取代羥丙基纖維素、可溶性淀粉，混勻，60％～80％乙醇制粒，干燥，過(guò)篩，加入1％硬脂酸鎂，壓片，薄膜包衣，即得。
8.枳實(shí)總黃酮在制備具有促進(jìn)胃腸動(dòng)力作用的藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的促進(jìn)胃腸動(dòng)力是指提高小腸推進(jìn)率，促進(jìn)小腸運(yùn)動(dòng)。
10.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的促進(jìn)胃腸動(dòng)力是指促進(jìn)胃的排空。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種枳實(shí)總黃酮及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法，制備方法是將枳實(shí)藥材先經(jīng)乙醇回流提取、減壓干燥得干膏細(xì)粉后，再經(jīng)水沉鹽析工藝對(duì)黃酮類成分進(jìn)行分離純化，再用高濃度的乙醇凈化、干燥得到枳實(shí)總黃酮；然后以枳實(shí)總黃酮為原料按常規(guī)方法制備成臨床可接受的各種制劑。本發(fā)明所采用的質(zhì)量控制方法是用照紫外分光光度法和照高效液相色譜法分別對(duì)枳實(shí)總黃酮原料及其制劑中的總黃酮、柚皮柑的含量進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明還公開(kāi)了枳實(shí)總黃酮具有促進(jìn)胃腸動(dòng)力方面的用途，可用于運(yùn)動(dòng)障礙型功能性消化不良的治療，具有有良好的開(kāi)發(fā)前景。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1748740SQ20041007790
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2004年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月17日
發(fā)明者王英鋒 申請(qǐng)人:王英鋒